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细胞色素Cppt课件

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细胞色素

细胞色素

细胞色素P450酶
细胞色素P450（cytochromeP450或CYP450, 简称CYP450）为一类亚铁血红素—硫醇盐 蛋白的超家族，它参与内源性物质和包括药物、 环境化合物在内的外源性物质的代谢。 广泛 分布于动物、植物和微生物等生物体内
P450蛋白与CO的结合在450nm处有特征吸收峰， 故将该酶系命名为细胞色素P45O酶系。
五、细胞色素P450酶与药 物代谢
• 在人体中，P450广泛分布于肝、肾、脑、皮肤
、肺、胃肠道及胎盘等组织器官，其氧化还原 反应发生在许多部位，主要在肝脏。
• 目前发现的人类细胞色素P450共有57种，约有
90%的临床药物都是经过这些细胞色素P450酶代 谢。其中最重要的是CYP3A4，约占全部药物的 50%
一、细胞色素P450简介
• 细胞色素P450（cytochromeP450或CYP450,简称CYP450）为一类
亚铁血红素—硫醇盐蛋白的超家族，它参与内源性物质和包括 药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢
• 细胞中，细胞色素P450主要分布在内质网和线粒体内膜上，作
为一种末端加氧酶，参与了生物体内的甾醇类激素合成等过程 。近年来，对细胞色素P450的结构、功能特别是对其在药物代 谢中的作用的研究有了较大的进展。最新研究表明细胞色素 P450还是药物代谢过程中的关键酶，而且对细胞因子和体温调 节都有重要影响。
• CYP在哺乳动物主要存在于微粒体和线粒体中。已发现几乎
1000种CYP广泛分布于各种生物机体内，在生理上有功能意义 的就有约50种，根据氨基酸序列的统一性分为17个家族和许多 亚家族。氨基酸序列有40%以上相同者划为同一家族，以阿拉 伯数字表示；同一家族内相同达55%以上者为一亚家族，在代 表家族的阿拉伯数字之后标以英文字母表示；在同一亚家族的 当同工酶则再以阿拉伯数字表示。

护理学基础药物过敏试验法ppt课件

护理学基础药物过敏试验法ppt课件

头孢菌素类(先锋霉素)
● 以每毫升含 500 ug的先锋霉素 等渗盐水溶液 为皮试液。
● 0.5g(1g)+NS2毫升(4毫升)~250mg/毫升 ● 取0﹒2毫升+NS0﹒9毫升~ 50 mg/毫升 ● 取0﹒1毫升+NS0﹒9毫升~ 5mg/毫升 ● 取0﹒1毫升+NS0﹒9毫升~ 500ug/毫升
●
更换批号，应重新做皮试
● 5.准确的判断实验结果（伪足、酒精）
● 6.不能空腹实验或用药(鉴别过敏反应）
● 7.用药中密切观察反应 20min
● 8.备好急救物品和药物
链霉素过敏试验
● 链霉素 可导致发生发热、皮疹、荨麻疹、血管性 水肿等较为常见的过敏反应
● 过敏性休克发生率虽较青霉素低，但死亡率很高， 故使用链霉素时，应做皮肤过敏性试验
碘过敏试验法
● 1、条件：首次用药。1-2天前 ● 2、方法： ● （1）口服法。5%-10%碘化钾5ml,每日3次共3
日 ● 口麻、头晕、心慌、恶心、呕吐、荨麻疹 ● （2）皮内注射法。0.1Ml，20分 ● 局部有红肿硬结，直径超过1cm ● （3）静脉注射法。1ml,缓慢iv，5-10分 ● 血压、脉搏、呼吸、面色改变。 ● 造影前，先皮下，再静注，阴性方可性 ● 少数阴性患者，注射时发生反应，备好急救药品
）做脱敏注射。
皮试结果判断标准
20min后判断皮试结果 ● 阴性：局部无红肿、无异常全身反应 ● 阳性：皮丘红肿，硬结直径大于1．5cm，红晕
范围直径超过4cm，可出现伪足或有痒感，全身 过敏性反应表现与青霉素过敏反应相类似，以 血清病型反应多见
脱敏注射法的基本原理
● 小剂量注射时变异原所致生物活性介质的释放 量少，不至于引起临床症状

植物的细胞色素

植物的细胞色素

01
提高作物产量
通过调控植物细胞色素基因，改 良作物光合作用效率，从而提高 作物产量。
增强抗逆性
02
03
改良作物品质
利用植物细胞色素参与逆境响应 的机制，培育抗逆性更强的作物 品种。
通过改变植物细胞色素的组成和 含量，改善作物的营养品质和口 感。
医学领域应用
01
02
03
药物研发
利用植物细胞色素与人体 细胞的相互作用，开发具 有靶向治疗作用的药物。
深入研究色素合成途径
随着基因组学和代谢组学等技术的发展，未来有望揭示更多参与 植物细胞色素合成的基因和代谢途径。
拓展应用领域
植物细胞色素在园艺、食品、医药等领域具有潜在应用价值，未来 研究将更加注重色素的应用与开发。
加强跨学科合作
植物细胞色素研究涉及生物学、化学、物理学等多个学科领域，未 来需要加强跨学科合作，推动相关领域的研究进展。
环境因素影响
光照条件
光照是植物细胞色素生物合成的 重要环境因素，光照强度和光质 都会影响植物细胞色素的合成和
积累。
温度条件
温度对植物细胞色素的生物合成 也有显著影响，过高或过低的温 度都会抑制植物细胞色素的合成
。
营养条件
植物体内的营养状况也会影响植 物细胞色素的生物合成，如氮、 磷、钾等营养元素的缺乏或过量 都会对植物细胞色素的合成产生
种类
根据吸收光的不同波长范围，细胞色素可分为叶绿素、类胡萝卜素和花青素等几大类。其中，叶绿素主要吸收红 光和蓝紫光，类胡萝卜素主要吸收蓝紫光，而花青素则能吸收多种波长的光。这些色素在植物体内相互协作，共 同完成对光能的吸收和转化。
02
植物细胞色素的结构与特性
结构组成

生物化学-细胞色素c

生物化学-细胞色素c

细胞色素c的高级结构
细胞色素c是什么？
细胞色素c是含一个血红素辅基的单链蛋白质，广泛存在
于所有需氧生物中，在线粒体的呼吸链中起着传递电子的 作用。
对细胞色素c的研究
在15亿多年的进化中，有26个氨基酸始终不变。（缓慢） 这些守恒残基是保证细胞色素c发挥电子传递功能的关键
部位。（保守） 其他可变的氨基酸残基，在不同物种之间，改变程度不一 样。（亲缘关系）
Q1:细胞色素c的一级结构是否会发生变异？ Q2:发生变异了会怎样？
随着生物的进化，其分子组成结构会出现一些变异，而 细胞色素C分子在呼吸电子传递链中有不可或缺的地位，细 胞色素C分子的很多变异可能导致生物体的电子传递出现问 题而导致死亡。
结论：细胞色素c的分子进化缓慢而保守
比较不同生物中细胞色素c的一级结构：
Hale Waihona Puke 结论：蛋白质的一级结构在一定程度上反映了物种的 亲缘关系。
专题内容：蛋白质的一级结构与功能的关系 团队成员： 完成时间：2018.09.09
蛋白质一级结构与功能的关系
◆一级结构相似的蛋白质往往会具有相同或相似的结构 ◆蛋白质的一级结构在一定程度上反应了物种的亲缘关系 ◆替换氨基酸的数量、种类、其在空间结构和功能中的地位 决定了其蛋白质功能的改变程度有关 ◆蛋白质一级结构的改变会导致其生物功能的下降或缺失 （蛋白质的一级结构：多肽链上各种氨基酸残基的排列顺序）

细胞色素P450ppt课件

细胞色素P450ppt课件
当然，也有例外的情况。如CYP6A1和CYP6B2这两个蛋白虽然其氨基酸 相似性小于40%，但由于其保守的半胱氨酸侧翼序列相似的缘故，它 们被归为同一家族。
同源性：两种核酸分子的核苷酸序列之间，或两种蛋白质分 子的氨基酸序列之间相同的程度。
.
4.细胞色素P450 功能
P450酶系是自然界中最具有催化作用的广谱生物催化剂。其功 能主要有两大类，一是催化内源性物质(如幽醇、脂肪酸及信 息激素等)的生物合成和降解，维持生物体的正常功能；二是 针对外源性物质包括人工合成的化学品（农药、致癌物、药物、 抗氧化剂、添味剂、溶剂、染料、麻醉剂、石油产品等）起到 解毒与活化的作用。
在医药工业中的应用
CPA:环磷酰胺
前药：是指经过生物体内转化后才具有药理作用的化合物。前体药物本身没有生物
.
活性或活性很低，经过体内代谢后变为有活性的物质。
在农业上的应用
1.害虫治理
许多害虫产生对杀虫剂的抗性是因为P450催化的杀虫剂代谢解毒作用增强， 因此P450的抑制剂是杀虫剂的有效增效剂。成功的抑制剂包括增效醚、增效菊 亚砜、莳萝油等。PBO是最为人熟知的增效剂。
.
根据细胞色素P450氧化酶在生物体中的分布可以分为两大类：
第一类是细菌/线粒体型，存在于细菌和真核细胞线粒体中
第二类是微粒体型，存在于真核细胞微粒体中
.
2.细胞色素P450的多样性
多数情况下, 微粒体是指在细胞匀浆和差速离心过程中获得的由破碎的内质网自 . 我融合形成的近似球形的膜囊泡状结构,它包含内质网膜和核糖体两种基本成分。
.
3.细胞色素P45O的命名
(1)以英文缩写CYP代表细胞色素P450(eytoehromeP450)，CYP后顺序 依次跟有数字、字母、数字，分别代表家族、亚家族、和同功酶。 如:CYP6A2，即表示该基因属于细胞色素P450第6家族中A亚族的第二 个基因；

医学生物化学课件-生化细胞色素PPT

医学生物化学课件-生化细胞色素PPT

3 细胞色素的定义和功
能
细胞色素是一类存在于细 胞内的色素，具有重要的 生物学功能。
细胞色素的分类和特征
不同类型的细胞色素
包括血红素、叶绿素、细胞 色素c等。
细胞色素的结构和功能
具有特的结构和功能，参 与呼吸、光合作用等生物过 程。
细胞色素的生物学角色
在细胞中发挥重要的催化和 传递作用。
细胞色素的生物合成和代谢
细胞色素在神经退行性疾病的病理过程中发挥 着重要作用。
1
细胞色素的合成途径
细胞色素通过一系列生物合成途径在细胞内合成。
2
细胞色素的降解途径
细胞色素在细胞内经过一定的降解途径进行代谢。
3
细胞色素的代谢调控
细胞色素的合成和降解受到一系列调控机制的影响。
细胞色素在疾病中的作用
细胞色素与癌症的关系
细胞色素与癌症发生、发展和治疗具有密切关 联。
细胞色素在神经退行性疾病中的作用
医学生物化学课件-生化 细胞色素PPT
这个课件介绍了生物化学领域中关于细胞色素的重要知识，包括细胞色素的 定义、功能、分类、结构、生物合成、代谢以及其在疾病中的作用。
绪论
1 生物化学概述
生物化学是研究生物体内 化学反应的科学。
2 细胞生物化学的重要
性
细胞是生命的基本单位， 细胞生物化学研究对于深 入理解生命活动具有重要 意义。

细胞色素P


细胞色素P450
细胞色素P450 的化学本质是蛋白质，它不是一种蛋白，而是分 子质量在46-60kDa的结构类似而又不尽相同，性质类似而又有差 异的一族蛋白质(血红素蛋白)。
在原核生物中，P450酶游离于胞质中，是一种可溶性蛋白；真 核生物中，作为一种膜结合蛋白，P450酶主要分布在内质网和线 粒体内膜上。
1.细胞色素P450酶系
酶系：在细胞内的某一代谢过程中，由几个酶形成的反应链体系。
细胞色素P450酶系，作为功能单位，由多种组分组成，目 前已知，细胞色素P450酶系主要包括两种细胞色素（细胞色素 P450 和细胞色素b5）和两种黄素蛋白（NADPH-细胞色素P450还原 酶和NADH-细胞色素b5 还原酶）和磷脂等。
6.细胞色素P450催化反应的类型
（1）烯烃环氧化、炔烃氧合作用
(2)N-脱烷基化、 S-脱烷基化、 O-脱烷基化
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（3）饱和烃的羟基化 (4)芳环环氧化、羟基化
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(5)N-羟基化、 N-氧化、 S-氧化 (6)氧化脱氨、氧化脱卤素
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（1）三价铁还原和HEM 结合氧气分子； 活性中心处的还原性黄素蛋白通过共轭平 面和肽链将其电子传递给HEM的三价铁， 将其还原为二价铁，此时的亚铁血红素易 与氧气分子结合形成氧合亚铁血红素复合 物 [P-Fe(III)＋O2＋e-→ P-Fe(II)-O2 ]
或者与过氧化氢反应通过捷径生成 Fe(III)-氢过氧化复合物[P-Fe(III)＋H2O2 → P-Fe(III)-O-OH＋H+]
(2) 形成Fe(III)-氢过氧化复合物；[PFe(II)-O2＋e-＋H+→ P-Fe(III)-O-OH＋H2O]

细胞色素


P450机理部分 P450机理部分
NO.1 P450在治疗肿瘤方面的主要原因和机理？ P450在治疗肿瘤方面的主要原因和机理？ 某些同工酶活性的改变对于癌的形成，肾上腺增生和帕金 森氏病有一定意义。吸烟者可增加CYP1A1（芳香族碳氢 森氏病有一定意义。吸烟者可增加CYP1A1（芳香族碳氢 化合物羟化酶）的活性，更易致发生肺癌。曾被证实个体 CYP1A1的遗传差异以致肺癌的危险性增加，含有特异性 CYP1A1的遗传差异以致肺癌的危险性增加，含有特异性 稀有等位基因纯合子的个体发生疾病的危险性较高。 乳腺癌病人其CYP1B1同工酶增加。因为它参与乳房 乳腺癌病人其CYP1B1同工酶增加。因为它参与乳房 内雌激素的代谢，提示在雌激素依赖性乳房肿瘤的病因中 CYP1B1起一定的作用。 CYP1B1起一定的作用。 在吸烟者，CYP2D6酶参与激活前致癌物，从而介导 在吸烟者，CYP2D6酶参与激活前致癌物，从而介导 致癌作用引起肺癌的发生。CYP2E1可催化苯胺（aniline） 致癌作用引起肺癌的发生。CYP2E1可催化苯胺（aniline） 氯化碳氢化合物和苯的代谢，引起前致癌物的形成。现提 出CYP2E1的遗传多态性对肝癌的发展可能起着重要作用。 CYP2E1的遗传多态性对肝癌的发展可能起着重要作用。
NO.2色素p450与肿瘤治疗 NO.2色素p450与肿瘤治疗 中提到的 前药是什么？有什么用途？
目的克隆细胞色素氧化酶P4503A4（CYP3A4）基因, 目的克隆细胞色素氧化酶P4503A4（CYP3A4）基因,构建真核表达 质粒并导入K562细胞进行表达,研究CYP3A4联合环磷酰胺（CPA） 质粒并导入K562细胞进行表达,研究CYP3A4联合环磷酰胺（CPA） 的体外抗肿瘤效应。方法利用RT-PCR从人肝细胞中克隆CYP3A4基 的体外抗肿瘤效应。方法利用RT-PCR从人肝细胞中克隆CYP3A4基 因,构建重组真核表达载体。脂质体法导入K562细胞,RT-PCR和 构建重组真核表达载体。脂质体法导入K562细胞,RT-PCR和 Western blot检测CYP3A4基因在K562细胞中的表达并筛选稳定转 blot检测CYP3A4基因在K562细胞中的表达并筛选稳定转 染的细胞克隆。MTT法检测CYP3A4联合CPA对肿瘤细胞的抑制作用。 染的细胞克隆。MTT法检测CYP3A4联合CPA对肿瘤细胞的抑制作用。 结果成功克隆CYP3A4基因并构建了真核表达质粒pcDNA3.1/myc结果成功克隆CYP3A4基因并构建了真核表达质粒pcDNA3.1/mycHisA（＋）-CYP3A4。RT-PCR和 HisA（＋）-CYP3A4。RT-PCR和Western blot分别显示转基因组 blot分别显示转基因组 的CYP3A4 mRNA和蛋白质表达水平均显著高于转空载体组和对照组。 mRNA和蛋白质表达水平均显著高于转空载体组和对照组。 MTT示转基因组IC50值为1.09016mmol/L,明显低于转空载体组和 MTT示转基因组IC50值为1.09016mmol/L,明显低于转空载体组和 对照组。酶诱导剂和抑制剂分别能够减低和增高转基因组IC50。结 对照组。酶诱导剂和抑制剂分别能够减低和增高转基因组IC50。结 论CYP3A4体外具有联合CPA的抗肿瘤作用,这种作用能够被CYP3A4 CYP3A4体外具有联合CPA的抗肿瘤作用,这种作用能够被CYP3A4 相应的诱导剂和抑制剂增强或减低。

中山大学细胞生物学课件(王金发)第8章 (PPTminimizer)

指叶绿素分子从被光激发至引起第一 个光化学反应为止的过程。包括光能的 吸收、传递和转换。即光能被聚光色素 分子吸收,并传递至作用中心,在作用中 心发生最初的光化学反应,使电荷分离从 而将光能转化为电能的过程。
38
8.3.1 原初反应
�光吸收色素 光 的 吸 收 是 靠 聚 光 色 素 (lightharvesting pigment)完成的。聚光色素 又 称 为 光 吸 收 色 素 (light-absorbing pigment),此类色素位于类囊体的膜上， 只具有吸收聚集光能的作用,而无光化学 活性, 故此又称为天线色素。
9
前 质 体、 质 体、 叶 绿 体
10
8.1.1 前质体、质体、叶绿体
�白色体(etioplast) 质体的一种，不含色素, 多存在于植 物的分生组织和储藏组织中,具有创造和 储藏淀粉、蛋白质和油脂的功能。 �叶绿体(chloroplast) 质体的一种, 含有叶绿素和胡萝卜素。 有基粒、类囊体结构。分布于叶及茎皮层 细胞中,其功能为进行光合作用,把光能转 变成化学能,创造碳水化合物。
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4
类囊体的结构
类囊体膜的化学组成
类囊体的膜在两个方面表现出独特的 性质∶类囊体膜上有伸向基质的柄状结 构，称为CF1颗粒；第二个特性是相互堆 积形成基粒。 类囊体的蛋白分为内在蛋白和外周蛋 白两类。外周蛋白在类囊体膜上朝向叶 绿体基质面的较多。内在蛋白镶嵌在脂 双层中,如质体兰素、细胞色素等。
7 8
8.1.1 前质体、质体、叶绿体
前 质 体 (proplastid) ∶ 直 径 约 为 1 μ m，或更小一些，它是由双层膜包被着未 分化的基质(stroma)所组成。植物中的 前质体随着在发育过程中所处的位置以 及接受光的多少程度，分化成功能各异 的质体(plastid),根据质体是否含有叶 绿素和功能的不同,将质体分为白色体、 叶绿体和有色体。

各种皮试液配制方ppt课件

(500ug/ml) 皮试时取0.1ml（即50ug/0.1ml） 皮试结果判断同青霉素。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP 管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
13、细胞色素C15mg/支/2ml
以上所需药物加生理盐水溶解至2ml； （250mg/ml）
取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（25 mg/ml） 取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（2.5mg/ml） 取上液0.2ml+生理盐水至1ml；（0.5mg/ml）
(500ug/ml) 皮试时取0.1ml（即50ug/0.1ml） 皮试结果判断同青霉素。
20分钟观察结果，如为阴性可一次性注射， 如为阳性者，则行脱敏疗法。
阴性：局部无红肿、无异常反应。
阳性：皮丘红肿，硬结直径大于1.5cm，红 晕范围直径超过4cm，有时出现伪足或有痒 感，全身过敏性反应同青霉素过敏反应大 致相同。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP 管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
取上液0.5ml+生理盐水至1ml；（40U/ml） 取上液0.1ml作皮试（即4U）
（肌注者需皮试；皮试结果判断同青霉素。）
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP 管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
17、结核菌素50U/支/ml
取上液0.1ml作皮试(5U/ ml) 皮试时于左手注入试敏液，右手注入生理
盐水作对照。48-72小时观察结果阴性：皮 肤硬结小于5mm 阳性：皮肤硬结5-10mm （+）皮肤硬结10-15mm(++) 皮肤硬1520mm(+++) 皮肤硬结大于20mm或局部 出现水疱或坏死者为（++++）应向病人解 释结素试验阳性仅表明曾有结核
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2.中和
用1mol/L的氨水调滤液PH=7.2-7.5，静置 20~30分钟，使沉淀沉下。 过滤除杂质，下部浑浊液离心（ 3000rpm,15min）。合并得到的红色清夜，测量 体积。
3.吸附与洗脱
• 吸附：加10％人造沸石—→磁力搅拌器搅拌吸附 1h—→蒸馏水洗3次—→0.2%NaCI 溶液洗3次— →蒸馏水洗3次—→滤出人造沸石待用
单击此处添加标题
氨水、PH6、过滤
硫酸、PH4
新鲜猪心
匀浆
提取液
滤液
氨水 PH7.2 过滤
沉淀物
பைடு நூலகம்
TCA沉淀、 离心
滤液
硫酸铵盐析
蒸馏水 细胞色素C 粗品溶液
洗脱 液
水、NaCl、硫酸铵
人造沸石
细胞色素C的制备和测定
材料与试剂
• • • • • • • • • • 新鲜（冷冻）猪心样品（200g） 1mol/L H2SO4 ：500mL 1mol/L NH4OH：500mL 12%BaCl2：250mL 25%(NH4)2SO4：500mL 0.2% NaCl：500mL 20% 三氯乙酸（TCA）：100mL 人造沸石：白色颗粒， 40-60目 联二亚硫酸钠 细胞色素C标准液（3mg/ml）
。
1.新鲜或冷冻猪心，除尽脂肪、血管和韧带，洗 尽积血，切成小快，放入绞肉机中绞碎（两遍） 。 2.称取猪心碎肉200克，加蒸馏水300毫升 3.用电磁搅拌器搅拌提取，再用1mol/L的硫酸调 PH=4.0，（需要不断调整）搅拌提取1.5小时。用 1mol/L的氨水调PH=6.0，停止搅拌。 4.四层纱布挤压过滤，收集滤液。
纯度检测 因为细胞色素C属蛋白质，所以利用聚丙烯酰胺 凝胶电泳来检测所的样品分子量大小以及纯度， 从而评价所的样品的质量。 具体操作： • 预先配置聚丙烯酰胺凝胶，样品和标准品分别 混合缓冲液点样，再点上标准屏，在恒定电压作 用下，达到分离的目的。后用考马斯亮蓝染液对 蛋白质进行染色，后同脱色液脱去多余染液，得 到电泳图。 •
仪器
绞肉机，电磁搅拌器，离心机，分光光度计， 烧杯（1000ml，500ml，200ml，50ml各若干）， 量筒，移液管，玻璃漏斗，玻璃棒， 纱布，滤纸，容量瓶，试管，离心管
步骤
1.猪心预处理与提取 步骤 2.中和 3.吸附与洗脱 4.盐析 5.TCA沉淀 6.标准曲线的制备
1.猪心预处理与提取
临床应用
细胞色素C是一种细胞呼吸激活剂。在临床上可以
纠正由于细胞呼吸障碍引起的一系列缺氧症状，使其物质 代谢、细胞呼吸恢复正常，病情得到缓解或痊愈。 如：一氧化碳中毒、催眠药中毒、新生儿窒息、严重 休克缺氧、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难、高山缺氧、 脑缺氧、心脏疾病引起的缺氧等。
基本原理
细胞色素C是易溶于酸性溶液, 故采用酸化水提取。
人造沸石为铝酸钠，它是一种阳离子交换剂，细胞色素C分子刚好进 入它的表面空隙。在pH7.5时细胞色素C 呈正电荷，它可与沸石分子上的 钠离子发生交换，从而被沸石吸附。 装入层析柱后，用25%硫酸铵洗脱，可将细胞色素C 交换下来。硫 酸铵主要是降低沸石对细胞色素C 的亲和力。硫酸铵盐析可明显提高细 胞色素C 纯度，主要为去除杂蛋白。 另外三氯乙酸可引起细胞色素C 变性和聚合，必须严格控制三氯乙酸 用量。
细胞色素C
细胞色素C：包括多种能够传递电子的含铁
蛋白质的总称。它广泛存在于各种动物、植物组 织和微生物中。细胞色素C是呼吸链中极重要的电 子传递体。它主要存在于线粒体中，需氧最多的 组织如心肌及酵母细胞中，细胞色素C含量丰富。
理化性质
细胞色素C：
分子质量约为13000，蛋白质部分由104个左右的 氨基酸残基组成，其中赖氨酸含量较高，为碱性蛋白。 等电点10.2-10.8，含铁量0.37-0.43%。
易溶于水，在酸性溶液中溶解度更大，故可用酸性 水溶液提取。
理化性质 细胞色素C的传递电子作用是由于细胞色素C
中的铁原子可以进行可逆的氧化和还原反应，故可分 为氧化性和还原性，前者水溶液呈深红色，后者水溶 液呈桃红色。细胞色素C对热，酸和碱都比较稳定， 但三氯乙酸和乙酸可使之变性，引起部分失活。
细胞色素C粗品是还原型和氧化型两种产品的混 合物, 在测定含量时, 要加入联二亚硫酸钠, 使混合物 中的氧化型转变为还原型，还原型细胞色素C水溶液 在波长520nm 处有最大吸收值。
5.TCA沉淀
• 按8%体积滴加TCA，边加边搅拌。此时细胞色素 带正电荷，与其结合生成可逆沉淀析出，立即离 心（3000rpm，15min）,收集沉淀（若上清液仍 为红色，倒出后再补加5%体积的TCA，再次离心 ，收集沉淀）。沉淀用少量去离子水溶解（体积 不超过10mL）。
6.标准曲线的制备
以细胞色素C的浓度（mg/ml）为横坐标，以吸光 度A520nm为纵坐标制作标准曲线，按表绘制细胞 色素C含量的标准曲线
• 洗脱：在柱中装人造沸石体积的三分之二蒸馏水 —→将沸石放入柱中—→装满25%硫酸铵溶液进 行洗脱，流速控制在2ml/min 以下, 收集红色的 洗脱液
4.盐析
• 为了进一步提纯细胞色素C，向洗脱液中缓慢加 入固体硫酸铵，（即100ml洗脱液加17g硫酸铵） 边加边搅拌，放置30分钟，杂蛋白沉淀析出，过 滤，收集红色透亮的细胞色素C滤液，测量体积 。