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微量BCA蛋白定量试剂盒

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北京雷根生物技术有限公司
微量 BCA 蛋白定量试剂盒
简介：
微量 BCA 蛋白定量检测法与传统方法相比，更简单、更稳定、更灵敏度，BCA 法测定 蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，对于 5%以内的 SDS、Triton X-100、Tween 20、 Tween 80 具有很好的兼容性。微量 BCA 蛋白定量检测法是基于 Bicinchoninic Acid 研制而成，其检测原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽键结构能与 Cu2+离子生成络合物，同时将 Cu2+还原成 Cu+，BCA 可敏感的特异的与 Cu+结合，形成稳 定的有色化合物，在 562nm 处有高的吸光度值，颜色的深浅与蛋白质浓度呈正比，可根据 吸光度值的大小来测定蛋白质的含量。Micro BCA Protein Assay Kit 在 10～200μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系， 其最小检出量为 2.5μg/ml。
组成：
编号 名称 试剂(A): Micro BCA 试剂 A 试剂(B): Micro BCA 试剂 B 试剂(C): Micro BCA 试剂 C 试剂(D): 蛋白标准(BSA) 试剂(E): 蛋白标准配制液 使用说明书
PT0006 PT0006
250T
500T
Storage
25ml
50ml RT
北京雷根生物技术有限公司
出样品的蛋白浓度。
注意事项：
1、 蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防 腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存。
2、 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待 测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
25ml
50ml RT 避光
1.5ml
3ml RT
20mg 20mg RT
5ml
10ml RT
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 取 1ml 蛋白标准配制液加入到蛋白标准(BSA)(20mg)中，充分溶解后配制成 20mg/ml 的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。
2、 根据样品数量，按试剂(A):试剂(B):试剂(C)=26:25:1 的比例配制 Micro BCA 工作液， 充分混匀。例如取 2.6ml BCA 试剂 A、2.5ml BCA 试剂 B 和 0.1ml BCA 试剂 C，配制 成 5.2ml Micro BCA 工作液。Micro BCA 工作液室温 24 小时内稳定。
5、 为了加快 BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当加热，但是切勿过热，否则易失效。 6、 BCA 法检测中样本中不应含有 EGTA，否则影响检测结果。
有效期： 12 个月有效。蛋白标准配制成溶液后应-20℃冻存。
3、 建议每次测定时都做标准曲线。因为 BCA 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深， 并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则 如需精确测定宜每次都做标准曲线。
4、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的最小检 测体积。应按比例适当加大 BCA 工作液的用量使总体积不小于最小检测体积，样 品和标准品的用量亦相应按比例放大。
3、 将标准品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl 加到 96 孔板的标准品孔，加稀释液补足至 20μl。 4、 加适当体积待测蛋白样本到 96 孔板的样品孔中，加稀释液补足至 20μl。如果标准品稀
释液与溶解待测蛋白样本的溶液不同，应在待测蛋白样本孔中加入 20μl 稀释液；如果 标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液相同，无需在待测蛋白样本孔中加入 20μl 稀 释液。 5、 各孔加入 200μl 配置好的 Micro BCA 工作液, 60℃孵育 60min。 6、 测定 562nm 波长处的吸光度(OD 值)，540～595nm 之间的波长也可。 7、 各孔 OD 值减去用未加标准品的孔的 OD 值调零，作出标准曲线，根据标准曲线计算

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30302 BCA蛋白定量试剂盒说明书

30302 BCA蛋白定量试剂盒说明书

BCA蛋白定量试剂盒货号: 30302规格: 500微孔仅供研究使用FOR RESEARCH USE ONLY北京华肽先锋生物科技有限公司BEIJING SINOPEPT BIOTECH CO.,LTDBCA 蛋白定量试剂盒货 号：30302 产品规格：微板法500T产品简介：BCA 蛋白定量法原理是在碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu +,Cu+与BCA 试剂形成紫色络合物，其吸光值与蛋白浓度成正比。

测定在562nm 处的吸收值，做标准曲线并计算待测蛋白的浓度。

本试剂盒检测灵敏度高，对不同种类蛋白质检测变异系数小，操作简单。

产品组成：1. 稀释标准品：用与样品相同缓冲体系的稀释液按下表稀释标准品（建议稀2. 配置BCA 工作液：根据标准品和样品的数量，将试剂A 和试剂B 以50︰1的体积比混匀。

3. 试管检测（线性范围：20-2000μg/ml ）1） 将0.1ml 样品与稀释好的标准品分别添加于试管中；2） 向各试管中加入2ml BCA 工作液，37℃水浴中孵育30min 或者RT 孵育2h （样品：BCA 工作液=1︰20）； 3） 37℃冷却至室温；4） 用分光光度计测定562nm 处的吸光值（若无562nm 滤光片可以选择接近波长的滤光片进行测定，比如560nm 或者570nm ）； 5） 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度；6） 如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品至BCA 线性范围内进行再次测定。

4. 微孔板检测 (线性范围：20-2000μg/ml)1） 将25μl 样品与稀释好的标准品分别添加于96孔板的微孔中； 2） 各孔中加入200μl BCA 工作液，充分混匀（样品：BCA 工作液=1︰8） 3） 盖上96孔板盖，37℃孵育30分钟或者室温孵育2h ； 4） 37℃孵育的样品需要冷却至室温；5） 用酶标仪测定562nm 处的吸光值（若无562nm 滤光片可以选择接近波长的滤光片进行测定，比如560nm 或者570nm ）； 6） 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度；7） 如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品至BCA 线性范围内进行再次测定。

BCA蛋白定量

BCA蛋白定量

BCA蛋白定量试剂盒配制及内部操作SOP一、BCA试剂盒配制流程1、标准品配制：配制2mg/ml的BSA标准品，以50ml为例，各成分加入量如下表：原料浓度加入量（mg）厂家货号牛血清白蛋白（BSA）0.2%100北京（二楼生产部提供）YSCW2500氯化钠（NaCl）0.9%450国药集团化学试剂有限公司10019308叠氮化钠0.05%25成都金山化学试剂有限公司/注意：为了确保检测的准确性，应用微量天平精准称量100mg，然后定容至50ml，1ml/管分装，4℃保存。

2、工作液配制由于A液和B液加入比例为50:1，因此配制工作液时A液各成分加入量按照1000ml配制量加入，B液成分按照25ml配制量加入。

原料浓度加入量（g）厂家货号A液（1000ml）二喹啉甲酸（BCA）1％10aladdin B107658无水碳酸钠2％20天津博迪化工股份有限公司/碳酸氢钠0.95%9.5国药集团化学试剂有限公司10018960酒石酸钠0.16% 1.6国药集团化学试剂有限公司30169818氢氧化钠0.4％4国药集团化学试剂有限公司10019762B液（25ml）硫酸铜4％1国药集团化学试剂有限公司81005261备注：A液各成分混合之后，调节PH至11.25。

二、BCA法蛋白定量操作SOP1、标准品稀释按照下表制备一组蛋白质标准品。

将一安瓿的牛血清白蛋白标准品（BSA）稀释到几个干净的小瓶中，最好使用与待测样品相同的缓冲液。

每一个1mL安瓿的2mg/mL牛血清白蛋白标准品足够用于制备下表中所列出的任意一组稀释范围的标准品；每个稀释浓度的标准品的体积足够用于3次重复检测。

用于标准方案的稀释方法（检测范围=20-2,000ug/mL）如下：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A03002000B125375ul的A1500C325325ul的A1000D175175ul的B750E325325ul的C500F325325ul的E250G325325ul的F125H400100ul的G25I40000用于试管增强方案的稀释方法如下（检测范围=5–250ug/mL）：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A700100250B400400ul的A125C450300ul的B50D400400ul的C25E400100ul的D5F400002.样品稀释：根据需要，将样品用用PBS或者与待测样品缓冲液相同的溶液稀释至线性范围内（所用稀释液与标准品稀释液应保持一致）。

BCA微量蛋白浓度测定试剂盒使用说明

BCA微量蛋白浓度测定试剂盒使用说明

BCA微量蛋白浓度测定试剂盒货号：PC0050规格：500微孔(500T)/1000微孔(1000T)/2000微孔（2000T）保质期：本试剂盒自订购之日起一年内有效。

产品内容：包装500微孔1000微孔2000微孔保存BCA试剂100ml2×100ml4×100ml室温Cu试剂3ml6ml12ml室温PBS稀释液30ml60ml120ml室温BSA蛋白标准0.3ml0.5ml1ml-20℃(5mg/ml BSA)产品简介：碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。

实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

操作说明：一.微孔酶标仪法1.配制工作液:根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。

BCA工作液室温24小时内稳定。

2.稀释标准品：先用PBS将BSA标准品稀释至终浓度为0.8mg/ml备用。

再依次稀释至80、40、20、10、5、2.5ug/ml.。

3.高浓度蛋白可将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

4.各孔加入200微升BCA工作液和40ul稀释后的蛋白或标准品溶液，对照孔加入PBS稀释液。

37℃放置4小时。

用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。

使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

二.分光光度计法如没有酶标仪，在离心管中混匀样品后加入比色皿，用分光光度计比色。

BCA蛋白定量试剂盒使用说明书

BCA蛋白定量试剂盒使用说明书

产品使用说明书BCA 蛋白定量试剂盒试剂盒简介以下货号试剂盒可参照此说明书操作：建议同时参考本说明书英文原文（说明书编号TB380）。

BCA Protein Assay Kit ：500 / 2500 rxn 货号71285-3BCA 蛋白定量方法是基于双缩脲反应，即在碱性溶液中蛋白将Cu 2+ 还原成Cu 1+，而根据检测到的单价Cu 离子的浓度可以检测体系中对应蛋白的量。

Bicinchoninic acid 是一种显色剂，可以螯合被还原的铜离子，产生一种在562nm 有强吸收的紫色复合物。

Novagen 的BCA 试剂盒可以用于测定浓度在20-2,000µg/ml 范围内的蛋白的浓度，根据样品量分为标准型和微型两种形式进行测定。

试剂盒提供的组分足够用于500次标准型反应（50µl 蛋白样品加上1ml 反应试剂）或2,500次微型测定（25µl 蛋白样品加上200µl 反应试剂，可以在96孔板中进行高通量定量）。

试剂盒中提供的BSA （牛血清白蛋白，2mg/ml ）为用户制作标准浓度曲线提供了便利。

Novagen 的BCA 试剂盒准确度高，兼容性好，能与各种化学试剂和表面活性剂兼容，可以方便地配合默克Novagen 的BugBuster ®，PopCulture ®，CytoBuster™，Reportasol™和Insect PopCulture 抽提蛋白的细胞裂解试剂一起使用。

有些化学成分，例如螯合剂，强酸、强碱、还原剂等，可能会干扰BCA 法采用的还原及螯合定量过程，详细情况请看说明书后附列表。

试剂盒提供的组分500ml BCA 反应液（0.1M NaOH 缓冲的bicinchoninic acid ，碳酸钠，酒石酸钠，碳酸氢钠，pH11.25） 15ml 4% 硫酸铜3×1ml BSA 标准品（2mg/ml ）储存室温存放。