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饲料和鸡肉中利巴韦林的测定--超高效液相色谱-串联质谱法刘凯;王丽娜;李建忠【摘要】本研究建立了饲料和鸡肉中利巴韦林的UPLC-MS/MS分析方法。
样品经三氯乙酸-乙腈溶液提取，离心后提取液经PBA固相萃取小柱净化，0.1 mol/L 甲酸水溶液溶解，进行UPLC-MS/MS分析。
结果显示，利巴韦林在10.0～500.0 g/L浓度范围内线性关系良好，r2=0.9991。
以浓缩饲料、配合饲料、预混料和鸡肉等为添加基质，其回收率在90.0%～114.5%，检出限为25.0 g/kg，定量限为50.0 g/kg。
表明本方法灵敏度高、专属性好、操作简单、结果可靠，可满足饲料和鸡肉中利巴韦林的分析检测。
%A method of Ultra Performance Liquid Chromatography-Tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS) for determination of ribavirin in feeds and chicken was developed. The drugs were extracted with acetonitrile/trichloroacetic acid from analyte, then cleaned up with PBA cartridges. The elu-ent was assayed by UPLC-MS/MS. The detection and quantification limits were 25.0 µg/kg and 50.0 µg/kg respectively. The average recoveries were 90.0%~114.5%. The real sample tests showed this meth-od can be used for the sensitive and accurate determination of ribavirin in feeds and chicken.【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】5页(P15-19)【关键词】利巴韦林;饲料;鸡肉;UPLC-MS/MS【作者】刘凯;王丽娜;李建忠【作者单位】辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心，辽宁沈阳 110016;辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心，辽宁沈阳 110016;安捷伦科技中国有限公司，北京 100102【正文语种】中文【中图分类】R927.2利巴韦林为广谱抗病毒药，体外具有抑制呼吸道合胞病毒、流感病毒、甲肝病毒、腺病毒等多种病毒生长的作用。
超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中的利巴韦林和金刚烷胺云环;崔凤云;严华;刘鑫;何悦;张朝晖【摘要】A method for the determination of ribavirin and amantadine in chicken has been developed by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS).After extracted by 1％ (volume percentage) trichloroacetic acid solution-acetonitrile (1:1,v/v) and purified by a Supelco LC-SCX cartridge,the samples were loaded onto an Acquity UPLC BEH Hillic column (150 mm × 2.1 mm,1.7 μm)and separated with gradient elution.The electrospray was operated in the positive mode and the samples were monitored by the multiple reaction monitoring (MRM) mode.The limits of quantification (LOQs,S/N=10)of ribavirin and amantadine were 4.0 μg/kg.The calibration curves showed good linearity in the range of 10.0-100.0 μg/L,and the correlation coefficients (r2) were not lower than 0.99.When the spiked levels were 4.0,8.0 and 20.0 μg/kg,the recoveries of ribavirin and amantadine in chicken ranged from 78％ to 102.5％,with the relative standard deviations (RSDs) of 2.2％-7.6％.The results indicate that the method is simple,rapid,sensitive and suitable for the qualitative and quantitative analyses of ribavirin and amantadine in chicken samples.%建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定鸡肉中利巴韦林和金刚烷胺的分析方法.样品用1％(体积分数)三氯乙酸溶液-乙腈(1∶1,v/v)溶液提取,经Supelco LC-SCX固相萃取柱净化后用Acquity UPLC BEH HiUic柱(150mm×2.1 mm,1.7 μm)分离,以甲醇和0.1％(体积分数)甲酸作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式进行检测.结果表明,利巴韦林和金刚烷胺在10.0～100.0 μg/L范围内线性关系良好(r2≥0.99).方法的定量限(信噪比为10)为4.0 pg/kg,在4.0、8.0、20.0 μg/kg添加水平的回收率为78％～ 102.5％,相对标准偏差(n=6)在2.2％～7.6％之间.该方法快速、灵敏、准确,适合于鸡肉中利巴韦林和金刚烷胺的同时、快速、高灵敏度的分析检测.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2013(031)008【总页数】5页(P724-728)【关键词】超高效液相色谱-串联质谱;利巴韦林;金刚烷胺;鸡肉【作者】云环;崔凤云;严华;刘鑫;何悦;张朝晖【作者单位】北京出入境检验检疫局技术中心,北京100026;北京出入境检验检疫局技术中心,北京100026;北京出入境检验检疫局技术中心,北京100026;北京出入境检验检疫局技术中心,北京100026;北京出入境检验检疫局技术中心,北京100026;北京出入境检验检疫局技术中心,北京100026【正文语种】中文【中图分类】O6582012年12月我国爆发“速生鸡”事件，曝光鸡在饲养过程中被违规喂食利巴韦林、金刚烷胺等抗病毒药物。
鸡肉中利巴韦林的检测（SPE-LC/MS ）
使用200mg 3mL HyperCarb 固相萃取柱 (部件号：60106-301)
提取
取2g 鸡肉，加入15mL 水，涡旋混匀，超声提取10min ，6000rmp 离心5min ，取3mL 上清液进行固相萃取。
净化活化
1mL 乙腈，1mL 甲醇上样
3mL 上清液，1mL/min 流速洗脱
500µL20%乙腈-水溶液，2次，合并洗脱液，直接进样分析
结果
1.鸡肉空白添加1ppb 的利巴韦林和同位素的LC/MS 图
离子对参数见下表：
LC/MS 方法色谱柱
Hypercarb 5µm 2.1×100mm 货号
35005-102130流动相
A:水+5mM 乙酸铵B:乙腈梯度方法
时间/min %A %B 0 90 101 90 102 40 605 40 606 90 10
8 90 10流速0.2mL/min 柱温25℃进样量10µL MS 条件
电喷雾电离源（HESI ），正离子模式选择反应监控（SRM ）扫描模式喷雾电压3700V 毛细管温度350
℃
化合物母离子子离子碰撞能量透镜电压利巴韦林利巴韦林同位素内标
245.1
245.1249.9249.9
96.2113.295.9112.9
43144314
80806464
2.添加50ppb 的加样回收率为121.8%，重现性良好。
食品安全应用
65。
AB SCIEX针对畜产品中利巴韦林和金刚烷的快速检测方案作者：暂无来源：《食品安全导刊》 2013年第3期□ 上海爱博才思分析仪器贸易有限公司供稿近日，国内某肉鸡生产企业爆出非法使用某些饲料添加剂事件，在肉鸡饲养中非法添加多种兽用药物。
众所周知，目前抗生素滥用状况比较突出。
而且食源性抗生素几乎百分之百来自于动物源性食品的摄入，如被曝光的利巴韦林和金刚烷。
目前，相关部门尚未发行针对利巴韦林和金刚烷胺在动物源食品中的检测技术方法和国家标准，所以在媒体报道鸡肉中检测出利巴韦林和金刚烷成分后，AB SCIEX公司亚太应用支持中心上海实验室迅速开发了以畜产品为基质的样品中利巴韦林和金刚烷的检测方法。
公司在最短的时间内开发出快速、准确、灵敏、高效的检测方法，并开设多场技术讲座，为用户提供详细的技术讲解和应用培训。
除此之外，还为用户提供β-内酰胺类，大环内酯类，磺胺类，四环素等多种抗生素的检测方法，为客户提供全套的技术支持。
实验内容1.仪器设备和试剂AB SCIEX公司5500 QTRAP系统配岛津UFLC液相，安捷伦公司Poroshell 120EC-C18，2.1mmx150mm，2.7μm色谱柱。
利巴韦林标准物质（纯品）、金刚烷标准物质（纯品）、乙腈（色谱纯）、三氯乙酸（分析纯）、去离子水（Millipor超纯水，电阻≥18.2MΩ?cm）。
2.色谱条件流动相A：含0.1%甲酸水溶液(含5mM甲酸铵)，流动相B：乙腈/水（v/v，95:5）溶液，流速、梯度洗脱见表1；柱温：40℃；进样量：10μL。
3.质谱条件(1)离子源参数电离模式为ESI+；碰撞气CAD设置6（Medium）；气帘气Curtain Gas设置30Psi；雾化气Gas1/Gas2设置60/60Psi；喷雾电压IS设置5500V；离子源温度TEM设置650℃。
(2)化合物参数化合物质谱参数见表2。
4.标准溶液的配制两种标准物质用乙腈稀释到1000mg/mL的标准储备液，将利巴韦林稀释为到0.2、0.5、1、2、5、10ng/mL，金刚烷稀释到0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10ng/mL的混合标准工作浓度。
安捷伦科技针对”速成鸡”中抗病毒药物利巴韦林和金刚烷胺的整体解决方案李建中,吴翠玲,陆予菲,于明武,陈伟,张之旭（安捷伦科技(中国)有限公司,北京,100102）近日,央视曝光山东等地部分养殖户在肉鸡饲养过程中大量滥用抗生素,激素和抗病毒类药物,违规喂食金刚烷胺、利巴韦林等抗病毒药品的“速成鸡”流入上海百盛旗下餐饮机构一事，美国快餐业巨头肯德基和麦当劳在中国被卷入“速成鸡”风波，引发沪上人士和全国消费者的广泛关注和担忧！农业部对此事件高度重视，及时责成山东有关部门去调查处理这件事情，也派出了专家组奔赴山东。
现在已经关闭了有关的养鸡企业和加工企业，包括一些养鸡户，正在紧锣密鼓的查处之中。
此次事件中首次被曝光的抗病毒类药物利巴韦林和金刚烷胺目前国家尚无相应的检测技术标准和方法，这为相关政府执法检测部门，生产企业和第三方实验室迅速开展监督检查带来了技术上的困难。
安捷伦科技作为分析仪器业界知名品牌，多年来一直致力于为食品安全领域提供强有力的产品、技术解决方案。
为应对此次食品安全突发事件，安捷伦科技为广大分析工作者提供了分析检测鸡肉中抗病毒类药物利巴韦林和金刚烷胺的完整解决方案。
1 实验部分1.1 仪器与试剂安捷伦科技有限公司6460 QQQ质谱仪；安捷伦科技有限公司1290 Infinity UHPLC。
乙腈，甲醇，异丙醇，乙酸铵，氨水，甲酸，去离子水，三氯乙酸。
Poroshell120 EC-C18 3.0x100 mm, 2.7 µm:P/N 695975-302，ZORBAX SB-Aq RRHT 100*3.0mm，1.8 μm P/N.828975-314。
1.2 样品前处理条件1.2.1鸡肉中利巴韦林的前处理方法准确称取鸡肉样品( 2g± 0. 02) g 于15mL具塞离心管中, 加入已知浓度的标准品，5 mL 的乙腈∶1%三氯乙酸溶液（7:3）, 加盖后涡旋1min, 10000r/min离心10 min, 吸取上清液于15mL离心管中；再向残渣中再加入5 mL的乙腈∶1%三氯乙酸溶液（7:3）, 重复上述操作, 合并两次上清液；涡旋混匀，用氨水调节提取液pH 值为8.5± 0.1,再10000r /min离心10 min，取全部上清液过柱净化。
超高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肉中金刚烷胺药物残留研究作者：曹骞王磊代立勤来源：《现代农业科技》2020年第10期摘要; ; 本文建立了鸡肉中金刚烷胺药物残留检测方法。
样品经过1%乙酸乙腈提取，C18柱净化，以及经超高效液相色谱-串联质谱检测分析，优化了质谱的分离参数。
结果表明，金刚烷胺在1～100 μg/mL范围内线性满足要求，相关系数r为0.998，定量限为1.0 μg/kg。
该方法简单、灵敏度高、稳定性好，能够满足鸡肉中金刚烷胺药物残留检测要求，为鸡肉中金刚烷胺药物检测提供一定技术参考。
关键词; ; 金刚烷胺;鸡肉;超高效液相色谱-串联质谱法;药物残留金刚烷胺可用于亚洲甲-Ⅱ型流感的预防和治疗，畜牧养殖业中金刚烷胺主要用于鸡禽流感的预防和早期治疗，但其具有致精神异常的副作用。
流感耐药性日益增强，长时间超量食用这些药物则会导致动物中毒、免疫抑制以及药物残留，重则可能会使病毒发生变异，为预防和控制带来很大难题，对动物源性食品的消费者存在较大安全隐患[1-3]。
2005年，我国农业部也曾经发出《关于清查金刚院胺等抗病毒药物的紧急通知》，禁止金刚烷胺等抗病毒兽药的生产和使用。
由于金刚烷胺在禽类养殖中仍有非法使用，因而对于禽类食品中金刚烷胺残留含量的检测方法研究具有重要的现实意义。
本文旨在建立高效液相色谱-串联质谱法，同时探讨鸡肉中金刚烷胺的残留检测方法，为开展鸡肉中金刚烷胺药物的残留检测提供一定的参考。
1; ; 材料与方法1.1; ; 仪器与试剂试验仪器：Waters ACQUITY UPLC H-Class Xevo TQD 超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪，美国Waters公司;高速冷冻离心机，湖南湘仪公司;涡旋混合器，德国IKA公司;氮吹仪，上海安谱公司;百分之一电子天平，德国赛多利斯公司。
试剂：乙腈、甲醇、正己烷、甲酸（HPLC级，上海安谱公司）;试验用水为屈臣氏蒸馏水;C18固相萃取柱（60 mg/3 mL）购自上海安谱公司;金刚烷胺、金刚烷胺-D15购自德国Dr公司。
金刚烷胺和利巴韦林联合使用体外抗AIV-H9N2效果观察胡永峰,赵立红,乔 健,金继昌,田 勇,侯海燕,赵慧颖(中国农业大学动物医学院,北京海淀100094)中图分类号:S859.79 文献标识码:B 文章编号:0529-6005(2007)05-0010-02 禽流感(Av ian influenza,AI)是由A型流感病毒引起的一种禽类传染性疾病。
AIVH9N2亚型主要引起禽类上呼吸道感染、产蛋率下降,个别毒株可引起较高的死亡率,并造成宿主免疫抑制和继发感染。
最近研究证实,禽流感病毒H9N2能直接感染人,并且可能成为下一次流感大流行的潜在病毒株[1,2]。
目前,控制流感的主要措施包括接种疫苗和使用抗病毒药物。
由于禽流感病毒亚型多,易变异,限制了疫苗的使用。
因此,寻求有效的抗AIV药物和组合尤显重要。
本研究对体外联合使用金刚烷胺和利巴韦林的抗AIV-H9N2效果进行了观察,旨在为临床治疗AIV-H9N2感染的合理用药提供试验基础。
1 材料与方法1.1 材料 病毒:A/chicken/Hebei/20/2000 (H9N2),本室保存。
效价5.25log10PFU/0.2ml。
盐酸金刚烷胺和利巴韦林:购于Alfa Aesar.A Jo hnso n M atthey Co mpany,生理盐水分别配制成20 mg/m l和100mg/ml,过滤除菌,4℃保存。
M DCK细胞:中国科学院微生物所提供。
其他试剂略。
1.2 金刚烷胺和利巴韦林的细胞毒性试验[3] 维收稿日期:2007-01-11作者简介:胡永峰(1980-),男,硕士生,从事病毒学研究通讯作者:赵立红,E-mail:zhlhong@ 持液分别将金刚烷胺和利巴韦林梯度稀释(2-2～2-10),加入96孔板单层细胞,每个药物稀释度4孔,对照4孔。
37℃,5%CO2培养箱培养72h,每孔加入25 l M T T溶液(5mg/ml),温育2h,倾去孔内液体,每孔加入50 l DMSO,振荡,酶标仪在570nm 波长处测定OD值。
AB SCIEX针对畜产品中利巴韦林和金刚烷的快速检测方案上海爱博才思分析仪器贸易有限公司
【期刊名称】《食品安全导刊》
【年(卷),期】2013(000)003
【总页数】2页(P26-27)
【作者】上海爱博才思分析仪器贸易有限公司
【作者单位】
【正文语种】中文
【相关文献】
1.AB SCIEX针对白酒中塑化剂的最新检测解决方案 [J], 上海爱博才思分析仪器贸易有限公司
2.AB SCIEX快速检测乳制品中双氰胺的解决方案 [J], 上海爱博才思分析仪器贸易有限公司
3.AB SCIEX公司检测葡萄酒中多菌灵和甲霜灵的整体解决方案 [J], AB SCIEX亚太应用支持中心
4.针对羊奶中掺牛奶的快速检测方案 [J], 拜发分析系统销售(北京)有限公司
5.美国AB SCIEX公司关于动物源食品中的兽药残留盐酸克伦特罗(瘦肉精)的解决方案 [J], AB SCIEX公司
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内标法测定鸡肉中金刚烷胺含量方法的优化--高效液相色谱-串联质谱法
金刚烷胺是一种重要的抗菌剂，由于其疗效稳定、抗菌作用全面，因此被广泛
应用于兽医药领域。
为了精确测定其在鸡肉中的含量，研究者在不断优化方法的基础上，提出了利用高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中金刚烷胺含量的方法。
首先，采用Classic L-column柱色谱，在80%甲苯-0.5%甲醛溶剂组合中以
0.5mL/min流速进行分离。
通过调节柱温度、流速和流量，可以提高样品的灵敏度
和稳定性，避免非特异性偏离波现象的出现。
分离完成后，采用MS/MS技术，利用温度端控即可进行鉴定，该技术可以克服分子相互间的结合和避免峰的失效，实现精准风准的检测目标。
此外，还研究了各种条件，包括柱温、ELUTION溶剂、流速和流量，以及使用MS/MS技术进行定性和定量。
结果表明，在测定条件下，该方法可以有效识别和定
量金刚烷胺，且质谱峰强度稳定，重复性和精密度良好。
使用高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中金刚烷胺含量的方法具有以下优点：首先，可以实现高灵敏性和精确性的检测；其次，能够同时实现定量和定性；最后，条件的优化能够有效地解决准精安等检测困难。
总而言之，使用高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中金刚烷胺含量的方法实
现了快速精准的金刚烷胺测定，为优质的兽医制造提供了可靠的测量依据。
