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植物的组织培养方法植物组织培养是一种无性繁殖技术，通过培养植物的各种器官组织，包括种子、茎、叶和根的细胞和组织，使其在适当的条件下进行生长和分化，从而产生新的植株。
这项技术已被广泛应用于农业、园艺、林业和植物学研究中。
以下是植物组织培养的一般步骤和方法：1. 材料准备：首先，选择适合的植物作为材料，常用的包括水果、蔬菜和花卉植物。
收集新鲜的种子、茎、叶或根，并进行消毒处理，以防止细菌、真菌和其他病原体的污染。
2. 植物组织的分离：将植物材料切成小块或将细胞分离开来。
对于植物的种子，可以直接将种子表面进行消毒处理后，在培养基上进行培养；对于茎、叶和根等组织，则需要进行切割处理。
3. 培养基的准备：制备适当的培养基是进行植物组织培养的重要步骤。
培养基通常由无机盐和有机添加剂组成，以提供植物生长所需的营养物质。
根据组织的不同类型，可以使用不同种类和浓度的培养基。
4. 培养基的调整：将分离的组织放入培养基上，可以将培养基涂覆在组织表面上，或者将组织植入培养基中。
然后，在无细菌的条件下，将组织培养在适当的温度、湿度和光照条件下。
5. 激素的添加：植物生长激素是控制植物生长和分化的关键因素。
在组织培养中，可以根据实验的需要添加适量的激素来促进细胞分裂和分化。
常用的激素有生长素、细胞分裂素和愈伤组织生成素等。
6. 愈伤组织的诱导：愈伤组织是植物组织培养中产生的一种可分化细胞。
通过搅拌、震荡或辐射等途径，诱导组织分化成愈伤组织，然后将其继续培养。
7. 植株的再生：通过培养基中激素的平衡调节，可以使愈伤组织再生为整个植株。
在培养基中，植株的幼苗养分丰富，需要的培养基成分和激素浓度可能与之前的不同。
8. 培养环境的控制：为了使植物组织正常生长和分化，需要控制培养环境的参数。
例如，可以调节培养基的pH值、光照强度、温度和湿度等因素。
9. 组织转化：经过培养，植物组织中可以引入外源基因，使其具有某种特定的性状，这被称为转基因。
《植物组织培养技术》教学设计一、教学目标1、知识与技能目标（1）学生能够理解植物组织培养的基本原理。
（2）学生能够掌握植物组织培养的操作流程，包括外植体的选择、消毒、接种、培养等环节。
（3）学生能够识别植物组织培养过程中常见的问题，并提出相应的解决措施。
2、过程与方法目标（1）通过实验操作，培养学生的动手能力和实践操作能力。
（2）通过小组合作，培养学生的团队协作能力和沟通交流能力。
（3）通过观察分析，培养学生的观察能力和问题解决能力。
3、情感态度与价值观目标（1）激发学生对生物技术的兴趣，培养学生的创新意识和探索精神。
（2）培养学生严谨的科学态度和实事求是的精神。
（3）增强学生对植物生命的尊重和保护意识。
二、教学重难点1、教学重点（1）植物组织培养的基本原理和操作流程。
（2）外植体的消毒和接种方法。
2、教学难点（1）植物激素在组织培养中的作用和调节。
（2）无菌操作技术的掌握和应用。
三、教学方法1、讲授法讲解植物组织培养的基本概念、原理和操作流程，让学生对植物组织培养有初步的了解。
2、演示法通过教师的现场演示，让学生更直观地了解外植体的消毒、接种等操作步骤和注意事项。
3、实验法组织学生进行植物组织培养的实验操作，让学生在实践中掌握植物组织培养的技术和方法。
4、讨论法针对实验过程中出现的问题和现象，组织学生进行讨论，培养学生的分析问题和解决问题的能力。
四、教学准备1、实验材料准备新鲜的植物材料（如胡萝卜、菊花等）、MS 培养基、植物激素、无菌水、75%酒精、01%氯化汞、无菌培养皿、无菌镊子、无菌剪刀等。
2、实验设备准备超净工作台、高压灭菌锅、光照培养箱等。
3、多媒体教学资源制作 PPT 课件，展示植物组织培养的原理、操作流程、实验结果等，辅助教学。
五、教学过程1、导入新课通过展示一些植物组织培养的成果图片（如花卉、蔬菜的组培苗），引起学生的兴趣，提问学生是否了解这些植物是如何培育出来的，从而引出植物组织培养的课题。
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第五章组织培养技术第一节植物组织培养所谓植物组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织. 器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义上是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也包括在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植株。
一、概述（一）概念1. 植物组织培养：是指通过无菌操作，把植物的外植体接种于人工配置的培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其成为完整植株的方法。
2. 外植体：是指用于植物组织培养的接种材料，它包括植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。
3. 愈伤组织（Callus ）:原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
（二）组织培养类型1. 根据接种的外植体不同分：胚胎培养；器官培养；3组织培养；细胞培养；原生质体培养；2. 根据培养基态相不同分：固体培养；液体培养；3. 根据培养过程不同分：初代培养；继代培养；（三）植物组织培养历史植物组织培养是20 世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的。
有以下过程：思想准备阶段；理论奠基阶段；技术建立阶段；形态发生阶段；应用研究阶段；1902 年德国植物学家Haberlandt 提出了细胞全能性概念。
1939 年White 报道了烟草组培成功。
并提出植物细胞全能性学说。
同年，Gautheret 与Nobecourt 培养胡萝卜成功。
三人被誉为植物组培奠基人。
罗士韦是我国植物组织和细胞培养研究的开拓者和奠基人之一（四）植物组织培养的应用1•植物的快速繁殖：⑴园艺、花卉植物的大规模快速繁殖；⑵抢救濒危珍稀植物⑶进行某些植物的种质资源保存2•培育无病毒的植物，如脱病毒草莓等；3•制造人工种子。
4 突变体的筛选培育5 药用植物的工厂化生产6 花药培养和花粉单倍体育种7 基因工程的应用等二、实验室设计和设备（一）实验室设计一般具有：1. 准备室器皿洗涤，培养基配制、分装、高压灭菌，植物材料的预处理，重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析等各种操作都要在此室中进行2. 缓冲室进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。
植物组织培养的方法植物组织培养（Plant tissue culture）是指利用无菌条件下培养植物细胞或组织，以实现繁殖、繁育新品种、生物合成化合物、环境污染处理等目的的技术。
其不仅可以大幅度提高植物材料的品质和数量，还可以在无限制地产生同一种植物。
方法一：赤潮法（Embryogenesis）这一方法是利用赤潮细胞发生器官（如胚性板）的细胞分化，诱导植物组织的胚胎发生，进而实现植物再生。
该方法适用于很多种植物，如玉米、大麦、水稻等。
步骤为：1. 准备培养基：含有赤潮素、氨基酸、维生素、植物激素和适当的糖类和盐类的基础培养基。
2. 处理材料：将植物的姿态板或种子材料在高温（35-40C）下进行消毒，使其无菌。
3. 材料分离：将消毒材料放入无菌条件下进行材料分离。
4. 培养细胞：将细胞或组织放入含有培养基的无菌培养皿中，保持恒定的温度、湿度和光照条件，促进发生素感应化。
5. 发生胚胎体：促进胚胎形成，通过培养发生胚胎胶囊或胚胎体。
6. 块茎冷藏：利用低温存储胚胎体或胚胎胶囊。
方法二：组织培养（Organogenesis）组织培养方法是通过培养植物的基本组织如叶片、茎尖、芽分根进而再生整个植株。
步骤为：1. 材料处理：对种子或植株进行表层消毒处理。
2. 制备组织片：将消毒好的植株切成组织片段，如茎尖、叶片等。
3. 培养基准备：准备无菌的培养基，其中含有植物的必需胰凡陈列如糖类、氨基酸、维生素、生长因子和植物激素等。
4. 组织分化：将组织片段放入含有培养基的培养皿中，使其分化成根、茎、叶等。
5. 干涸与移栽：将培养的加上适量水后，移栽到含有生长素适量的培养基中，促进植物以正常生长的形式营养。
方法三：悬浮细胞培养（Suspension Culture）在此方法中，使用悬浮培养细胞进行植物细胞或组织的生物合成和生物转化。
步骤为：1. 培养基准备：通常使用植物基础培养基加入氨基酸、维生素和植物激素等。
2. 细胞处理：将细胞分散在含有培养基的匀浆器中，使其悬浮在培养基中。
植物组织培养技术植物组织培养技术是一种在无菌条件下培养和再生植物细胞、组织和器官的方法。
该技术被广泛应用于植物生物学研究、种质资源保护和利用、植物育种以及生物工程等领域。
本文将为您介绍植物组织培养技术的原理、步骤以及在不同应用领域的具体应用。
一、植物组织培养技术的原理植物组织培养技术的原理是基于植物的无限生长能力和组织再生能力。
在无菌培养条件下，植物细胞、组织被分离、培养，通过提供适宜的培养基、光照、温度和激素等环境因素，可以促进细胞分裂和再分化，最终形成新的植物器官或整株植株。
二、植物组织培养技术的步骤1. 材料准备：收集植物组织样品，如叶片、茎段、花器官等，并进行表面消毒处理。
2. 培养基配制：根据具体需求配制适宜的培养基，培养基包括基础盐、有机添加物、糖类、维生素和激素等成分。
3. 组织切割和培养：将材料切割成适当大小的小块，接种到含有培养基的培养器皿中，置于恒温、恒湿条件下进行培养。
4. 培养条件管理：根据不同材料的需求，调节光照强度、温度、湿度以及培养基中激素和营养物质的浓度等条件。
5. 组织再分化和生长：培养的初期，细胞和组织会发生再分化现象，形成愈伤组织；随后，再生出新的植株。
6. 生根和移栽：对于培养的植株，进行生根处理，并移栽到土壤中进行进一步生长。
三、植物组织培养技术的应用领域1. 种质资源保护与利用：植物组织培养技术可以使濒危植物得到有效保护和大量繁殖，并为种质资源的利用提供便利。
2. 植物育种：通过植物组织培养技术，可以繁殖无性系、获得遗传变异体、加速杂交育种过程等，从而提高育种效率和品种纯度。
3. 生物工程：植物组织培养可以用于基因转导、基因工程以及体外合成药物等生物工程领域。
4. 药用植物生物学研究：利用植物组织培养技术，可以大量繁殖药用植物，并提取有效成分，用于药物研发和生产。
5. 植物组织培养的教学与科普：植物组织培养技术作为现代生物学的重要实验内容，被广泛应用于高等教育和科普教育。
植物组织培养技术(国培)训练方案一、主要训练内容1. 组培实验室和组培工厂的设计；2. 母液的配制（大量元素、钙盐、微量元素、铁盐、有机物）；3. 培养基的配制（配制流程、定容、调节PH值、分装、封口、灭菌）；4. 外植体灭菌(取材与处理、灭菌)；5. 无菌接种技术；6. 液体培养技术;7. 常见问题的处理（诱导培养、分化、增殖培养、生根培养等出现问题与解决措施）；8. 驯化移栽技术。
二、训练时间安排7月18日上午：1. 组织培养技术流程简介；2. 组培实验室和组培工厂的设计；3. 母液的配制；7月18日下午：4. 培养基的配制；7月19日上午：5. 外植体灭菌；7月19日下午：6. 无菌接种技术；7月20日上午：7. 液体培养技术;8. 常见问题的处理；7月20下午：9. 驯化移栽技术。
三、主要训练内容要点（一）植物组织培养技术流程简介植物组织培养是指分离一个或数个体细胞或植物体的一部分在无菌条件下培养的技术。
通常我们所说的广义的组织培养，是指在无菌条件下，将离体的植物器官（根、茎、叶、花、果实等）、组织（形成层、花药组织、皮层、胚乳等）、细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体（即外植体），培养在人工配制的培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其长成完整的植株。
狭义概念：指对植物体组织或由植物器官培养产生的愈伤组织进行培养直至生成完整植株。
广义概念：无菌操作分离植物体一部分（即外植体）接种到培养基上，在人工条件下培养直至形成完整植株。
植物组织培养的理论基础是细胞全能性。
所谓细胞全能性是指一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息。
即：细胞具有形成完整植株的潜在能力，给其适宜的条件就能形成一个完整的植株。
特定条件：①不受母株控制的完整离体细胞；②特定的培养条件，包括营养、激素、光、温、气、湿等因子。
植物体愈伤组织脱分化再分化完整植株不定器官或体细胞胚1. 选择要培养的植物，查找相关资料，制定培养方案；2. 准备培养基以及相关器材、灭菌材料等；3. 外植体处理与灭菌---获得无菌材料；4. 初代培养（诱导培养）；5. 继代培养（增殖培养）或分化培养；6. 生根培养；7. 驯化移栽。
（二）实验室设计实验室设置的基本原则：科学、高效、经济和实用。
必须满足3个基本的需要：实验准备（培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌）、无菌操作和控制培养。
总体要求是保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。
实验室的建设均需考虑两个方面的问题：一是所从事的实验的性质，即是生产性的还是研究性的。
由洗涤室、准备室、接种室、培养室等组成。
需要明确1. 实验室建设目标；2. 主要功能；3. 需要购置的仪器设备；4. 驯化车间。
（三）母液的配制根据表分别配制MS各种母液：每种母液各种元素分别称取并分别溶解然后混合。
MS培养基母液的配制铁盐：分别溶解冷却后，将铁加入EDTA中，反之易沉淀。
各种母液的每种药品分别溶解后混合、定容。
（四）培养基的配制固体培养基是以琼脂做支持材料，90度以上溶解，40度下变成凝胶。
在凝固前加MS的各种母液及激素等，配成MS培养基。
方法步骤：（1）按做1升培养基计，先倒入2/3左右的水，加热，称取5、5克琼脂入锅加热熔解，近开锅时，加入称好的30克蔗糖、肌醇，待琼脂溶化后，加母液(不断搅拌，防止糊底)[在加热时量取母液，然后按表，用量筒移取大量元素母液20ml，钙盐20ml，用专一对应的移液管分别吸取微量元素母液10ml、铁盐母液10ml、有机物母液5ml【母液量取时先在容器中加入适量的纯净水，防治药品之间发生反应】。
]搅拌均匀——MS0{基本培养基}。
然后加激素[按下表添加]。
（2）培养基配好后，要调整pH值。
用0．1M的KOH、NaOH或HCl液调成5．8pH值左右。
在培养基配方不大变动的情况下可用经验法。
可以将连续三次测定所加入的酸或碱液的平均值作为以后调整的用量值。
调后注意一定要搅拌均匀，还要注意酸或碱液不要放置时间太久。
（3）分装30ml/瓶左右，封口并标记。
（4）灭菌（121度，20分钟）MS+BA0.3（月季初代培养专用，每人至少3瓶）MS+BA0.5+NAA0.1；MS+BA0.5+NAA0.2；MS+BA1.0+NAA0.1。
单位：mg/L(五)外植体灭菌（以月季为例）月季茎段材料的选取，保存、处理、灭菌流程，切割、接种。
选取开花近凋零的月季花枝（此时花下第3 节[具有5片小叶的叶片]的腋芽比较饱满，待萌发）或者腋芽饱满的枝条，放入干净的塑料袋中，迅速带回室内放入冰箱保存或直接处理。
去掉枝条上的叶片，剪成单芽茎段或5cm左右长，流水冲洗10min或者纯净水洗刷干净，进入超静工作台，先用70%酒精浸泡10-20秒，再用0.1%氯化汞灭菌7—8分钟（加1-2滴土温），无菌水冲洗5次，每次1分钟；切去两端伤口，上端平口，下端斜口，正放接种到预先配制的培养基上（MS+BA0.3），每瓶放一块材料（视情况最多放3块），放入培养室，光照培养。
（侧芽萌发1cm高后，能看到节间，即可接入生根培养基1/2MS+ NAA0.5，或进行增殖培养MS+BA1-2+NAA0.01-0.1，然后生根培养，根长0.5cm可以驯化移栽。
（六）无菌操作（接种）技术提前打开超静工作台（紫外灯、风机）15-20分钟。
(1) 洗净双手，换好实验服；(2) 上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。
然后擦拭工作台面；(3) 整理台面接种工具和用品等；(4)工具放入95%酒精中浸泡；(5)点燃酒精灯，灼烧接种工具；(6)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；(7)（强调：所有操作靠近酒精灯）（8）接种完毕后清理干净工作台；接种流程：先解开包口纸，将培养瓶几乎水平拿着，使瓶口靠近酒精灯火焰，并将瓶口在火焰上方转动，使瓶口里外灼烧数秒钟。
然后用镊子夹取一块切好的外植体送人瓶内，轻轻插入培养基上。
接完种后，将瓶口在火焰上再灼烧数秒钟。
封口，封口膜里面也要过火。
（七）液体培养技术培养基中不加固化剂（培养基的支撑材料，如琼脂、马铃薯、魔芋粉、卡拉胶等）的培养方法。
其他成分和培养基制备等完全与固体培养基相同。
优点：培养基的成分均匀，培养材料能充分接触和利用培养基中的养料，长势好、快，成本低。
缺点：不均匀，长势不一，交叉污染重，非静置培养时设备成本高等。
用途：用于增殖和生根时的培养【注：诱导培养一般用固体培养基】。
如马铃薯等快速增殖时可固体培养与液体培养交叉进行。
如：马铃薯液体浅层静置培养。
去掉顶芽和根基部，剪成大段5cm左右，大苗可剪成2段【根据试管苗的大小】，平放在培养基中。
放入培养架上静置培养。
（八）常见问题的处理1.组培苗观察的内容与方法2.观察培养物内部组织细胞变化通过化学试验和显微照相、镜检等手段，检查培养物的生长分化是否正常，有无变异等。
3.填写试管苗调查统计表4.针对培养过程中存在的问题提出解决措施。
组培苗观察记录与常见问题及解决措施初始培养阶段常见问题及调控措施增殖培养阶段常见问题及调控措施生根阶段常见问题及调控措施组培苗观察记录表-1（初代培养）接种人或小组： 外植体： 接种瓶数： 每瓶接种数： 接种时间： 诱导培养基： 分化培养基 增殖培养基生根培养基：组培苗观察记录表-2（增殖培养）接种人或小组： 外植体： 接种瓶数： 每瓶接种数： 接种时间： 诱导培养基： 分化培养基 增殖培养基生根培养基：组培苗观察记录表-3（生根培养）接种人或小组： 外植体： 接种瓶数： 每瓶接种数： 接种时间： 诱导培养基： 分化培养基 增殖培养基 生根培养基：（九）驯化移栽试管苗移栽是组织培养过程的重要环节，这个工作环节做不好，就会造成前功尽弃。
为了做好试管苗的移栽，应该选择合适的基质，并配合以相应的管理措施，才能确保整个组织培养工作的顺利完成。
试管苗由于是在无菌、有营养供给、适宜光照和温度近100％的相对湿度环境条件下生长的，因此，在生理、形态等方面都与自然条件生长的正常小苗有着很大的差异。
所以必须通过炼苗，例如通过控水、减肥、增光、降温等措施，使它们逐渐地适应外界环境，从而使生理、形态、组织上发生相应的变化，使之更适合于自然环境，只有这样才能保证试管苗顺利移栽成功。
从叶片上看，试管苗的角质层不发达，叶片通常没有表皮毛，或仅有较少表皮毛，甚至叶片上出现了大量的水孔，而且，气孔的数量、大小也往往超过普通苗。
由此可知，试管苗更适合于高湿的环境生长，当将它们移栽到试管外环境时，试管苗失水率会很高，非常容易死亡。
因此，为了改善试管苗的上述不良生理、形态特点，则必须经过与外界相适应的驯化处理，通常采取的措施有：对外界要增加湿度、减弱光照；对试管内要通透气体、逐步降低空气湿度等。
另外，对栽培驯化基质要进行灭菌是因为试管苗在无菌的环境中生长，对外界细菌、真菌的抵御能力极差。
1．移栽用基质和容器适合于栽种试管苗的基质要具备透气性、保湿性和一定的肥力，容易灭菌处理，并不利于杂菌滋生的特点，一般可选用珍珠岩、蛭石、草炭、腐殖土等。
配时需按比例搭配，一般用珍珠岩，蛭石，草炭土或腐殖土比例为1：1：2。
也可用砂子：草炭土或腐殖土为1：1。
这些介质在使用前应高压灭菌。
或用至少3h烘烤来消灭其中的微生物。
要根据不同植物的栽培习性来进行配制，这样才能获得满意的栽培效果。
以下介绍几种常见的试管苗栽培基质。
(1)河砂河砂的特点是排水性强，但保水蓄肥能力较差，一般不单独用来直接栽种试管苗。
（2）草炭土草炭土是由沉积在沼泽中的植物残骸经过长时间的腐烂所形成，其保水性好，蓄肥能力强，呈中性或微酸性反应。
（3）腐殖土腐殖土是由植物落叶经腐烂所形成。
一种是自然形成，一种是人为造成，人工制造时可将秋季的落叶收集起来，然后埋人坑中，灌水压实令其腐烂。
第二年春季将其取出置于空气中，在经常喷水保湿的条件下使其风化，然后过筛即可获得。
（4）容器栽培容器可用6X 6Cm-10XlOcm的软塑料钵，也可用育苗盘。
前者占地大，耗用大量基质，但幼苗不用再移，后者需要二次移苗，但省空间、省基质。
2．移栽前的练苗移栽前可将培养物不开口移到自然光照下锻炼2-3d，让试管苗接受强光的照射，使其长得壮实起来，然后再开口练苗1-2d，经受较低湿度的处理，以适应将来自然湿度的条件。
3．移栽和幼苗的管理从试管中取出发根的小苗，用自来水洗掉根部粘着的培养基，要全部除去，以防残留培养基滋生杂菌。
但要轻轻除去，应避免造成伤根。
栽植时用一个筷子粗的竹签在基质中插一小孔，然后将小苗插入，注意幼苗较嫩，防止弄伤，栽后把苗周围基质压实，栽前基质要喷水成潮湿状态。
栽后喷洒杀菌剂，保证空气湿度达90％以上。
(1)保持小苗的水分供需平衡。
