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高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇含量本文采用高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇含量。
测定条件: Hypersil ODS2-C18柱（4.6×250mm, 5μm）,流动相为甲醇：水( 40：60) ,检测波长: 303 nm，流速：1.0ml/min。
结果表明:白藜芦醇在0. 4~2. 0μg 范围内具良好的线性关系, 相关系数= 0. 9998,平均回收率为98. 19%（n=3）。
结论：本方法操作简便快速，结果准确可靠，适于虎杖提取物中自藜芦醇的测定。
标签：白藜芦醇；虎杖提取物；高效液相色谱法Determination Of resveratrol In Polygonum Cuspidatum ExtractBy High Performance Liquid ChromatographyLiu De-zhiZhejiang huisong Pharmaceutical Co. Ltd, Hangzhou 310018Abstract: In this paper, the determination of resveratrol in Polygonum cuspidatum extract by hplc. Determination of conditions: Hypersil ODS2-C18 column ( 4.6 × 250mm, 5 μ m ), mobile phase of methanol: water ( 40:60 ), the detection wavelength: 303nm, flow rate: 1.0ml·min. Results: resveratrol has good linear relationship in t he 0 4~2. 0 μg range, correlation coefficient = 0.9998, the average recovery rate was 98.19% ( n=3 ). Conclusion: the method is simple and rapid, accurate and reliable, and is suitable for determination of resveratrol from Polygonum cuspidatum extract.Key words: Resveratrol; Polygonum cuspidatum extract; High performance liquid chromatography虎杖提取物是由虎杖经一定的提取工艺提取而成。
![HPLC法测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量[1][1].孔改doc](https://img.taocdn.com/s1/m/2aab8cd7700abb68a982fbd0.png)
HPLC法测定降酶片中白藜芦醇和虎杖苷的含量刘德茂1史德胜2（1大连公安医院，辽宁大连116011 2天津丹溪国药研究所天津300061）降酶片由虎杖、白花舌蛇草、柴胡、茵陈等中药组成，具有疏肝理气，清热利湿的功效，临床主治慢性肝炎及早期肝硬化。
虎杖为其主药之一，白藜芦醇和虎杖苷为其中的主要有效成分，因此可选择白藜芦醇和虎杖苷作为其质量控制的定量指标。
本研究建立了HPLC法测定其主要有效成分白藜芦醇和虎杖苷含量的方法。
1.仪器与试剂LC—10A型高效液相色谱仪；SPD—10A紫外检测器；Anastar色谱工作站；乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂为分析纯。
虎杖苷对照品（批号11575-200301），白藜芦醇对照品（批号111535-200301）由中国药品生物制品检定所提供。
降酶片由本院制剂室提供，批号060820、060821、060822。
2.方法与结果2.1色谱分析条件：Irregular C18 柱（4.6×250mm 5μ）；流动相：乙腈：水（25：75）；流速：1.0ml·min-1；柱温：35℃；检测波长：306nm；进样量：20μl；理论塔板数以虎杖苷峰计不低于3000，以白藜芦醇峰计不低于3000。
2.2对照品溶液的制备：精密称取虎杖苷对照品8.04mg、白藜芦醇对照品6.12mg，分别置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。
各精密量取3ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3供试品溶液的制备：取本品20片，研细，取50mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理30分钟，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.4线性关系考察：分别精密量取虎杖苷对照品储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置10ml量瓶中，白藜芦醇对照品储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml 置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取20μl进样，记录峰面积。
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定一、本文概述本文旨在探讨虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法及其含量测定技术。
虎杖作为一种具有广泛药用价值的天然植物，其中含有的白藜芦醇和白藜芦醇苷是其主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，研究虎杖中这两种成分的有效提取和准确测定方法对于深入理解虎杖的药理作用以及优化其临床应用具有重要意义。
本文将综述当前虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取技术，包括溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取等，并评价其优缺点。
本文还将介绍含量测定的常用方法，如高效液相色谱法、紫外可见分光光度法等，并探讨其准确性和可靠性。
通过本文的综述，旨在为虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的深入研究和应用提供有益的参考。
二、虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法虎杖，作为一种具有丰富生物活性的中草药，被广泛用于传统医学中。
其内含的白藜芦醇和白藜芦醇苷具有显著的抗氧化、抗炎和抗肿瘤等生物活性，因此，对这两种成分的提取和含量测定具有重要的意义。
以下将详细介绍虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法。
我们需要新鲜的虎杖根茎，确保其来源清洁、无污染。
随后，将虎杖根茎进行清洗、干燥和粉碎，以便后续的提取操作。
由于白藜芦醇和白藜芦醇苷均具有一定的极性，因此，我们常选用极性溶剂如甲醇、乙醇等进行提取。
这些溶剂能够有效地溶解并提取出虎杖中的目标成分。
常用的提取方法包括浸泡提取、回流提取和超声波辅助提取等。
考虑到效率和提取效果，我们通常采用回流提取法。
具体操作如下：将粉碎后的虎杖粉末与提取溶剂混合，置于回流装置中，加热回流一定时间，使溶剂充分与原料接触，从而充分提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。
提取完成后，需要对提取液进行处理，以去除其中的杂质，提高目标成分的纯度。
常用的处理方法包括过滤、浓缩和干燥等。
通过以上步骤，我们可以有效地从虎杖中提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。
这为后续的含量测定和进一步研究提供了基础。
HPLC 法测定虎杖中白藜芦醇的含量朱鸿津(张家港市制药厂 215600)摘 要 本文采用高效液相色谱法测定虎杖白藜芦醇含量。
测定条件:ODS C 18柱,流动相为甲醇 水(35 65),检测波长:300nm 。
结果表明:白藜芦醇在0.4~2.0 g 范围内具良好的线性关系,相关系数 =0.9998,平均回收率为98.19%关键词 白藜芦醇;虎杖;HP LC虎杖为蓼科植物虎杖Polygonum cusp idatum Sieb.dt Zucc 的干燥根和根茎,主含蒽醌类和芪类化合物,其中芪类成分尤其是白藜芦醇(resveratrol)具有重要生理活性。
现代研究表明:白藜芦醇在癌的起始,促进和发展三个主要阶段均有化学抗癌活性,同时具有降血脂,抑制血小板凝聚及调节脂蛋白代谢等作用。
目前,有关虎杖中白藜芦醇含量测定方法的研究报告尚不多见,为此,本文对虎杖中白藜芦醇含量的HPLC 测定方法进行了研究。
1 仪器与试药岛津LC 6A 高效液相色谱仪,SPD 6AV 可见紫外检测器,CR 3A 数据处理机,色谱柱:ODSC 18(4.6 200mm )。
白藜芦对照品:自制。
经波谱和色谱鉴定为纯品。
虎杖购于安徽亳州药材市场。
2 方法与结果2.1 色谱分析条件:流动相:甲醇 水(35 65),色谱柱:ODSC 18柱(46 200mm ),流量:0.8ml/min,测定波长:300mm,进样量:20 l 。
2.2 溶液的配制白藜芦醇对照溶液:精密称取白藜芦醇对照品约5mg ,置25ml 容量瓶中,甲醇溶解并稀释到刻度,备用。
白藜芦醇HPLC 图谱见图1。
样品溶液:精密称取虎杖粉末(过40目筛)50g ,95%乙醇水浴回流提取三次,第一次用4倍量乙醇回流提3小时,第二、三次分别用3倍量乙醇回流提取各1小时,合并提取液,冷置,过滤,滤液减压浓缩至小体积,加蒸馏水200ml,水浴挥去残余乙醇,并保温15分钟,过滤,滤液上聚酰胺柱,大量水冲至无色后,用10%乙醇冲洗,色淡后用30%乙醇冲洗,收集30%乙醇冲洗液,减压浓缩并定容于100ml 容量瓶中,精密吸取上述溶液1ml,置10ml 容量瓶中,甲醇稀释至刻度。
叶秋雄,黄 苇3(华南农业大学食品学院,广东广州510642)摘 要:虎杖中有效成分白藜芦醇经提取、分离纯化后,用HP LC 法、一阶导数光谱法、紫外分光光度法测其含量。
结果表明:HP LC 法分离度好,测定结果稳定、准确,相对标准偏差小;样品未经分离纯化时,干扰组分较多,一阶导数光谱法、紫外分光光度法测定结果与HP LC 法相关性不显著,相对标准偏差较大;分离纯化可消除背景干扰,提高检测结果的准确性。
一阶导数光谱法操作简单,测定结果较紫外分光光度法准确;可替代HP LC 法用于白藜芦醇的测定。
关键词:白藜芦醇,超声波,HP LC 法,一阶导数光谱法,紫外分光光度法Com p a ra ti ve s tudy o n m e tho d s fo r de te r m i na ti o n o f re sve ra tr o l fr om po l ygo tnum cu sp i da tumY E Q i u -x i ong,HUANG W e i3(College of Food Science,South China Agricultural University ,Guangzhou 510642,China )Ab s trac t:Th re e a na lys is m e thod s w e re us e d i n th is s tud y to a na l yze the c on te n t of re s ve ra tro l a nd the e ffe c tive c om p one n tsi n p o lyg o tnumc usp id a tum ,name l y,HPLCm e thod,firs t -d e ri va ti vesp e c tra m e thoda ndUV -Sp e c trop ho tom e tric m e thod 1It i s s ug g e s te d tha t the HPLC m e thod ha d g ood s ep a ra tion e ffe c t a nd a c c u ra te m e a s u rem e n t 1The re s u lts s how e d tha t s om e i n te rfe ring c om p one n ts s e em e d p re s e n t i f the s am p le s ha d no t s ep a ra te d a ndp u rifie d 1B e c a us eofthes e ve reb ac kg roundi n te rfe re nc e,thete s t c ond uc te db ytheUV -Sp e c trop ho tom e tric m e thod s how e d a re s u lt h ig he r tha n the a c tua l va l ue 1The firs t -d e riva ti ve sp e c tra m e thod c ou ld e li m ina te the b a c kg round i n te rfe re nc e a nd a l s o ha d a n a d va n ta g e of s i m p lic ity a s w e ll a s a c c u ra c y 1Key wo rd s:re s ve ra tro l ;u ltra s on ic;HPLC m e thod;UV -sp e c trop ho tom e tric m e thod;firs t -d e riva tive sp e c tra m e thod中图分类号:TS20713 文献标识码:A 文章编号:1002-0306(2010)05-0359-04收稿日期:2009-05-15 3通讯联系人作者简介:叶秋雄(1983-),男,在读研究生,研究方向:食品加工、保藏与包装。
反相高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量白祖海，文刚，张艳（长沙市疾病预防控制中心，长沙410001）摘要：采用HPLC法测定虎杖中白藜芦醇含量。
以聚酰胺柱对样品进行预处理，排除其它成分的干扰，获得较好分离度和高回收率。
选用自填装ODS-C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5μm)，以乙醇-水(2：3,v/v)作流动相，流速为0.6 ml/min，紫外光检测波长304nm，柱温为25℃。
白藜芦酵在0.05-0.40μg/mL 范围内具有良好的线性关系。
r=0.9996，平均回收率为98.51%(n=5)。
结论：该方法简便、准确可靠，适合于中药材虎杖中白藜芦醇含量的测定。
关键词：白藜芦醇；虎杖；反相高效液相色谱法Determination of Resveratrol in the Polygonum Cuspidatum byReversed-Phase HPLCBAI Zu-hai, WEN Gang, ZHANG Yan(Changsha Municipal Center for Prevention and Control of Diseases, Changsha 410001,China)Abstract：A simple and sensitive Reversed-Phase HPLC method for the determination of resveratrol in the roots of Polygonum cuspidatum was described，including the pretreatment of samples by poamide colutah. The separation was performed on an ODS column(200 mm×4.6 mm，5μm)，with the mobile phase of CH3CH2OH-H2O (2：3,v/v).The flow rate 0.6 ml/min and the detection wavelengthwas 304 nm，the temperature of the pillar is indoor temperature. Resveratrol have good linear relationship in the range of 0.05-0.40μg (r=0.9996).The average recoveries(n=5)of resveratrol were98.51%..A simple，accurate and sensitive method with good reproduciability to determine resveratrol simultaneously in Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.is established．Keywords：Resveratrol；Polygonum cuspidatum；Reversed-Phase HPLC.虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc)是蓼科蓼属植物，广泛分布于华东、中南、辽陕甘川滇等地。
虎杖根茎中主要含有蒽醌类和芪类化合物，其中芪类成收稿日期：2011-09-28修订日期：2012-07-20作者简介：白祖海（1978—），男，湖南岳阳人，长沙市疾病预防控制中心，主管检验师，硕士学位分白藜芦醇(resveratro1)和白藜芦醇苷(piceid)，具有活血定痛、清热利湿、止咳化痰作用[1]。
白藜芦醇具有抗氧化、抗癌、抗血小板凝聚、抗菌、调节脂类代谢、保护心血管系统和神经系统等多种功能[2]，被列为抗心血管病、抗癌最有前途的药物之一。
虎杖中白藜芦醇含量最高[3]。
目前对白藜芦醇的测定方法不少[4,5]，主要有分光光度法[6]、胶束薄层色谱法[7]、电化学发光法[8]、高速逆流色谱法[8-9]、高效液相色谱法[10-11]等。
建立准确可靠和简便的测定虎杖中白藜芦醇的含量方法对于虎杖资源的充分开发利用产生重要的实际意义，为其研究开发提供科学的依据。
本研究对虎杖样品进行初步处理，以乙醇-水为流动相，建立了测定虎杖中白藜芦醇的反相高效液相色谱方法，该测定方法操作简单，测定结果稳定可靠。
1 实验部分1.1 仪器与试剂HLPC Pump装柱机（BT3020，德国）；高效液相色谱仪（安捷伦，1200系列，美国），RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；WF-4000微波系统（上海屹尧分析仪器有限公司）；高频数控超声波发生器(KQ－80TDB型, 昆山市超声仪器有限公司), FA2104型电子天平。
乙醇(色谱纯，湖南师大试剂厂)；乙醇(化学纯，湖南师大试剂厂)；乙酸乙酯（分析纯，和氏璧化工）；白藜芦醇对照品(美国Sigma公司，纯度99％)；虎杖药材购自湖南九芝堂药材公司。
1.2 溶液的制备1.2.1 对照品溶液的配制称取白藜芦醇2.5 mg，置25ml容量瓶中，乙醇溶解，并稀释至刻度。
摇匀，得含白藜芦醇0.10 mg/ml 的混合对照品储备液，冷藏备用。
1.2.2 虎杖的预处理根据虎杖中自藜芦醇、白藜芦醇苷和大黄素的结构和性质的差异，采用乙醇溶液超声提取，利用极性适中的乙酸乙酯再提取，三种组分的回收率比较高。
提取结果表明：采用乙醇超声初提取和乙酸乙酯二次提取比单独采用乙醇浸提或回流提取的回收率高。
如最后采用氯仿提取，乳化现象较严重，且结果与乙酸乙酯提取相比较差。
可以同时测定白藜芦醇、白藜芦醇苷和大黄素的含量，并防止白藜芦醇苷水解。
1.2.3 样品溶液的制备本实验采用常规的加热回流方法提取白藜芦醇来建立标准曲线：虎杖粉末过4 0目筛，精密称取虎杖粉末5 0 g，用95%乙醇水浴回流提取三次，第一次用250ml乙醇回流提取3h，第二、三次分别用200ml乙醇回流提取各lh，合并提取液,冷却,过滤,滤液减压浓缩至月50ml后加蒸馏水200 ml，水浴挥发去残余乙醇，保温30min后过滤。
滤液上聚酰胺柱，大量蒸馏水冲至无色后，用l0%乙醇冲洗，待颜色冲淡后用3 0%乙醇冲洗，收集3 0%乙醇冲洗液，减压蒸馏浓缩并定容于100 ml容量瓶中，精密吸取上述溶液l ml，置10ml容量瓶中，乙醇稀释至刻度。
为了对比常规的加热回流方法提取白藜芦醇提取率的不同，本文还采用微波法来提取白藜芦醇：虎杖粉末预处理后过4 0目筛，精密称取虎杖粉末5 0 g，用95%乙醇浸泡1h后，在功率600W下微波处理5次，每次1min，间歇时间为2min，使提取温度不超过30o C。
微波处理后余下的步骤与加热回流方法一致。
图1 白藜芦醇对照品和样品液相色谱图Fig. 1 HPLC chromatograms for standard resveratrol and extractionsolution of Polygonum cuspidatum2 结果与讨论2.1 色谱条件色谱柱：选用ODS-C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5μm)；流动相：乙醇-水(2:3，v/v)；流速：0.6 ml·min-1；检测波长：304 nm；柱温为室温；进样量l0μl。
在此条件下，作白藜芦醇对照品色谱图。
样品溶液以相同条件进样，根据对照品白藜芦醇的保留时间初步确定样品溶液中白藜芦醇的特征峰。
白藜芦醇的出峰时间为3.05min，与其他组分的色谱峰可以达到基线分离。
此条件下白藜芦醇的理论塔板数均不低于3000。
对照品及样品液相色谱图见图1。
2.2 标准曲线的绘制精密吸取混合对照品储备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，置10ml容量瓶中，乙醇稀释至刻度，制成不同浓度的混合对照品溶液。
按“2.2色谱条件”测定峰面积积分值，以峰面积积分值Y为纵坐标，对照品进样量X为横坐标绘制标准曲线，进行线性回归，计算回归方程。
白藜芦醇的线性回归方程及相关系数为：Y=9.464×10 -5X+ 0.225式中，X为白藜芦酸质量浓度，单位为μg/mL；Y为色谱峰面积，单位为mm2，线性回归系数r=0.9996，最小检出限为10ng/mL。
试验结果表明，白藜芦醇在0.05-0.40μg/ml 范围内呈良好的线性关系。
2.3 虎杖中白藜芦醇含量测定对同一批药材精密称取5份，按2.1溶液配制方法制备样品溶液。
将制备好的待测溶液按上述色谱条件进样，根据峰面积计算该样品溶液中白藜芦醇的含量。
计算公式为n=(a/b)×100%。
其中n为白藜芦醇的含量(g)；a为白藜芦醇质量(g)；b为虎杖粗粉的质量(g)。
计算平均值得到虎杖中白藜芦醇的含量为0.3500%（见表1）。
表1 虎杖中白藜芦醇含量的测定Tab. 1 Determination of Resveratrol in the Polygonum Cuspidatum序号加入量（g）白藜芦醇（%）1 20.0025 0.35012 20.0472 0.34963 20.0365 0.35024 19.9894 0.34985 20.0148 0.35042.4 加样加标回收试验依次配制白藜芦醇对照品溶液、样品溶液和样品加对照品溶液，按上述方法测定其含量。
将所得的5份供试品溶液按“色谱条件”项下进行测定，每份样品测定5次，计算加样回收率。
测得平均回收率为98.51%；相对误差（RSD）为0.2279%，回收效果很好(见表2)。
表2 回收率试验结果Tab. 2 Result of recovery ratio序号加入量（μg）测得量（μg）回收率（%）平均回收率相对误差1 3.20 3.16 98.7598.51% 0.2279%2 7.40 7.31 98.783 11.20 11.03 98.484 16.20 15.97 98.585 22.80 22.34 97.982.5 重复性试验精密称取样品5份，按上述方法制备样品溶液和做液相色谱检测，计算5个样品中虎杖中白藜芦醇的平均含量为0.3506%，相对误差RSD为2.56%。
实验结果见表3。
可以看出，检测结果表现出很好的重复性，实验误差在允许范围内。
据此认为可将此法用于实际样品分析。
表3 重复性试验结果Tab. 3 Results of repeatability test序号加入量（g）白藜芦醇（%）相对误差（RSD）1 20.0236 0.34852.560%2 20.0325 0.35483 19.9897 0.34934 20.0048 0.35095 20.0042 0.34952.6 稳定性试验及提取方法的影响2.6.1 对同一供试品溶液在8 h之内每隔1 h测定峰面积，试验结果表明。
