第二十章经典液相色谱法
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第二十章高效液相色谱法思考题和习题1.简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。
相同点:均为高效、高速、高选择性的色谱方法,兼具分离和分析功能,均可以在线检测不同点:2.何谓化学键合相?常用的化学键合相有哪几种类型?分别用于哪些液相色谱法中?采用化学反应的方法将固定液键合在载体表面上,所形成的填料称为化学键合相。
优点是使用过程不流失,化学性能稳定,热稳定性好,适于作梯度淋洗。
目前常用的Si-O-Si-C型键合相,按极性分为非极性,中等极性与极性三类。
①非极性键合相:常见如ODS键合相,既有分配又有吸附作用,用途非常广泛,用于分析非极性或弱极性化合物;②中等圾性键合相:常见的有醚基键合相,这种键合相可作正相或反相色谱的固定相,视流动相的极性而定:③极性键合相:常用氨基、氰基键合相,用作正相色谱的固定相,氨基键合相还是分离糖类最常用的固定相。
3.什么叫正相色谱?什么叫反相色谱?各适用于分离哪些化合物?正相色谱法:流动相极性小于固定相极性的色谱法。
用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质,用于含有不同官能团物质的分离。
反相色谱法:流动相极性大于固定相极性的色谱法。
用于分离非极性至中等极性的分子型化合物。
4.简述反相键合相色谱法的分离机制。
典型的反相键合色谱法是用非极性固定相和极性流动相组成的色谱体系。
固定相,常用十八烷基(ODS或C18)键合相;流动相常用甲醇-水或乙腈-水。
非典型反相色谱系统,用弱极性或中等极性的键合相和极性大于固定相的流动相组成。
反相键合相表面具有非极性烷基官能团,及未被取代的硅醇基。
硅醇基具有吸附性能,剩余硅醇基的多寡,视覆盖率而定。
对于反相色谱的分离机制目前,保留机制还没有一致的看法,大致有两种观点,一种认为属于分配色谱,另一种认为属于吸附色谱。
分配色谱的作用机制是假设混合溶剂(水十有机溶剂)中极性弱的有机溶剂吸附于非极性烷基配合基表面,组分分子在流动相中与被非极性烷基配合基所吸附的液相中进行分配。
第二十章 高效液相色谱法思考题和习题1.简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。
2.何谓化学键合相?常用的化学键合相有哪几种类型?分别用于哪些液相色谱法中?3.什么叫正相色谱?什么叫反相色谱?各适用于分离哪些化合物?4.简述反相键合相色谱法的分离机制。
5.离子色谱法、反相离子对色谱法与离子抑制色谱法的原理及应用范围有何区别?6.亲合色谱的分离机制是什么?有何特点?7.速率理论方程式在HPLC 中与在GC 中有何异同?如何指导HPLC 实验条件的选择?8.试讨论影响HPLC 分离度的各种因素,如何提高分离度?9.试讨论反相HPLC 的分离条件的选择。
10.在正、反相HPLC 中流动相的强度是否相同?11.什么叫梯度洗脱?它与GC 的程序升温有何异同?12.蒸发光散射检测器的原理及特点是什么?13.常用的HPLC 定量分析方法是什么?哪些方法需要用校正因子校正峰面积?哪些方法可以不用校正因子?14.指出苯、萘、蒽在反相色谱中的洗脱顺序并说明原因。
15.宜用何种HPLC 方法分离下列物质?(1)乙醇和丁醇;(2)Ba 2+和Sr 2+;(3)正戊酸和正丁酸;(4)高摩尔质量的葡糖苷。
16.欲测定二甲苯的混合试样中的对-二甲苯的含量。
称取该试样110.0 mg ,加入对-二甲苯的对照品30.0 mg ,用反相色谱法测定。
加入对照品前后的色谱峰面积(mm 2)值为,对-二甲苯:对A 40.0,'对A 104.2;间-二甲苯:间A 141.8,'间A 156.2。
试计算对-二甲苯的百分含量。
(20.0%)17.计算例2中炔雌醇的校正因子及含量。
(3.02, 0.0369mg/片)18.测定黄芩颗粒中的黄芩素的含量,实验方法同例1。
测得对照品溶液(5.98µg/ml )和供试品溶液的峰面积分别为:706436和458932,求黄芩颗粒中黄芩素的含量。
(1.55%)19.测定生物碱试样中黄连碱和小檗碱的含量,称取内标物、黄连碱和小檗碱对照品各0.2000g 配成混合溶液。