人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体的构建及鉴定

孤儿核受体Nurr1腺病毒过表达载体的构建摘要】目的：构建Nurr1腺病毒表达载体。

方法：设计带有酶切位点的Nurr1引物，采用PCR法从Nurr1基因载体中扩增目的基因，经限制性酶切后与pHBAd-EF1-MCS-GFP连接，转化感受态细胞。

验证后，与骨架质粒pHBAd-BHG共同转染293细胞，通过反复冻融传代提高病毒载体滴度。

结果：成功构建具有目的基因NURR1的过表达腺病毒载体。

【关键词】NURR1；过表达；载体【中图分类号】R373.9 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）29-0126-02Nurr1属于孤儿核受体NR4A亚家族成员之一，被认为是生物体内调控发育、代谢、炎症和免疫等生物作用的转录因子，是迅速的早期反应基因，其表达水平很大程度上决定其转录活性。

一般认为，Nurr1能以单体形式与NGFI-B反应元件（NBRE，AAAGGTCA）结合，或以同二聚体形式与NR4A1反应元件结合，或以异二聚体形式与维甲类X受体（RXR）反应元件结合激活DNA的转录[1，2]。

研究表明Nurr1在细胞水平主要与增殖、凋亡和分化有关[3，4]。

本研究从Nurr1载体中扩增Nurr1表达序列，构建腺病毒过表达载体，为深入研究该基因在动脉粥样硬化中的调控机理打下基础。

1.材料方法1.1 材料HEK293细胞株（人胚肾细胞系）由购自国家实验平台共享服务平台；Nurr1基因载体购自上海恒大生物科技有限公司，载体pHBAd-EF1-MCS-GFP购自Hanbio，大肠埃希菌株DH5α购自Invitrogen，限制性内切酶和DNA ladder Marker购自Fermentas Inc.，One Step Cloning Kit购自南京诺唯赞生物科技有限公司，小量以及大量质粒核糖核酸提取试剂盒购自康为世纪，凝胶回收试剂盒购自Axygen Inc.，琼脂粉，高级琼脂糖等购自上海生工。

DMEM 购于Hyclone公司；LipofiterTM转染试剂购自汉恒生物；胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶-EDTA购于Hyclone公司；60mm细胞培养皿、10cm细胞培养皿、96微孔培养板、一次性移液管（5ml和10ml）、15ml及50ml离心管均购自NEST公司；双抗购自invitrogen公司；滤膜滤器购自Millipore Inc。

骨形态发生蛋白15基因与绵羊繁殖性能关系的研究进展程俐芬;姬爱国;王清祥【摘要】为促进国内绵羊繁殖性能选育水平的进一步优化和提高,作者选择近年来研究者较为关注的影响繁殖性状的骨形态发生蛋白15(bone morphogeneticprotein 15,BMP15)基因,对其研究进展进行梳理,分析整理其研究方向和路径.通过对该基因的信号传导、作用机理,以及其对绵羊繁殖性能影响和在国内绵羊育种生产研究实践的讨论发现,国内该基因的研究无论在作用机理,还是在标记辅助选择应用方面都还不够深入,有待更多的学者参与相关研究,并为国内该基因的研究和绵羊标记辅助选择提供参考.%To further optimize and promote the reproductive performance of the domestic level on sheep breeding,this paper focus on bone morphogenetic protein 15(BMP15)gene,which is a major gene of reproductive traits in recent research,and combing its research progress,direction and pathway.In this paper,its signal transduction,mechanism,performance of sheep breeding and effect of production research in domestic practice were discussed.Totally,the domestic research of BMP15 gene is not deep enough in the mechanism of action,or in the marker assisted selection of applications filed that needs more research scholars to participate in this work.Meanwhile to provide reference of the research of BMP15 gene and marker assisted selection of domestic sheep.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2017(044)008【总页数】6页(P2392-2397)【关键词】BMP15基因;绵羊;繁殖性能【作者】程俐芬;姬爱国;王清祥【作者单位】山西省畜禽繁育工作站,太原 030001;晋城职业技术学院,晋城048026;晋城市动物疫病预防控制中心,晋城 048000【正文语种】中文【中图分类】S813.3多数品种的绵羊在自然状况下多为单胎，但经过长期的自然选择和人工选育，许多多胎绵羊品种在世界各地相继出现。

mTORC1/2双重抑制剂OSI -027抑制高氧诱导的肺成纤维细胞增殖和分化*吴黎虹， 唐坤， 党红星△， 符跃强， 刘成军， 李静， 许峰（重庆医科大学附属儿童医院重症医学科，国家儿童健康与疾病临床医学研究中心，儿童发育疾病研究教育部重点实验室，儿科学重庆市重点实验室，重庆 400014）［摘要］ 目的：分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin ， mTOR ）复合物1/2（mTORcomplex 1/2， mTORC1/2）双重抑制剂OSI -027对高体积分数氧（高氧）所致人胚肺成纤维细胞增殖和分化的抑制作用。

方法：高氧（95% O 2）处理人胚肺成纤维细胞MRC -5建立增殖分化模型，分为对照组、高氧组、高氧+OSI -027组和高氧+雷帕霉素组。

Western blot 检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin ， α-SMA ）、I 型胶原蛋白（collagen type I ， Col I ）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen ， PCNA ）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、RhoA 、Rho 相关含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rho -associated coiled -coil -containing protein kinase 1， ROCK1）、蛋白激酶B （protein kinase B ， PKB/AKT ）、p -AKT 和mTOR 的表达； CCK -8实验检测细胞活力；流式细胞术检测细胞周期。

结果：与对照组相比，PCNA 、cyclin D1、Col I 和α-SMA 表达随高氧处理时间增加而增加（P <0.05）。

与高氧组相比，OSI -027及雷帕霉素干预后，细胞活力下降，细胞周期被抑制在G 1期（P <0.05）。

口腔医学2021年1月第41卷第1期•83・Prx\+骨骼干细胞的研究进展曾毓璐，唐国华［摘要］配对相关同源基因1(paired related homeobox1,Prx1/Prrx1/MHox)在胚胎肢芽和颅面发育中高表达，成体中的Prx1*细胞分布在长骨的骨膜、骨髓和颅骨的骨缝中，表现出间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)或骨骼干细胞(skeletal stem cells,SSCs)的特征。

近期的研究显示，表达Pml基因的骨骼干细胞(Prxl*skeletal stem cells,Prx广SSCs)参与了骨骼的创伤愈合和对机械应力的应答反应。

同时，牙周膜中P"广细胞在牙周组织正常发育和缺损修复中发挥的作用也受到关注。

该文回顾Pel基因和P々广细胞的特征和功能，总结Prx1+SSCs对骨骼改建或修复的作用，有助于SSCs在调控颅面骨生长、促进牙槽骨再生中的深入研究。

［关键词］骨骼干细胞;Prxl;颅面部;骨改建;机械力［中图分类号］R349.6［文献标识码］A［文章编号］1003-9872(2021)01-0083-05［doi］10.13591/ki.kqyx.2021.01.016Research progress of PrxV skeletal stem cellsZENG Yulu,TANG Guohua.(Department of Orthodontics,Ninth People，s Hospital,Shanghai Jiao Tong University School of Medicine；National Clinical Research Center far Oral Diseases；Shanghai Key Laboratory of Stomatology；Shanghai Institute of Stomatology, Shanghai200011,China)Abstract:The paired related homeobox gene Prx\is highly expressed during embryonic lib formation and craniofacial development. Postnatal Prx1+cells located in periosteum,bone marrow or calvarial sutures display the characteristics of mesenchymal stem cells (MSCs)or skeletal stem cells(SSCs).Recent research has shown that Prx1+SSCs participate in fraclure healing and respond to nie-chanical forces in bone.At the same time,Prx1+cells in the periodontal ligament are noticed for its contribution to the normal develop­ment and defect repair of periodontal tissues.This paper reviews the characteristics and function of Prx\gene and Prx1+cells and gives a summary of the role Prx1+SSCs play in bone remodeling and repair,which is helpful for the further studies of SSCs in regulating or­chestrate craniofacial growth and promoting the regeneration of alveolar bones.Key words:skeletal stem cells；Prx}；craniofacial；bone remodeling；mechanical forceStomatology,2021,41(1)：83-86,96颅颌面创伤或发育畸形严重损害患者的身心健康，基于干细胞的再生治疗技术为其临床治疗带来了新的希望。

整合素α2β1与药物性牙龈增生相关性的研究进展康颖竹;郭淑娟;刘程程;丁一【摘要】Drug-induced gingival overgrowth (DIGO) is characterized by fibrous gingival hyperplasia and increased gin-gival volume. DIGO is histologically associated with proliferation of cells and deposition of extracellular matrices, particularly collagen. Integrin α2β1 is related to collagen phagocytosis and involved in the occurrence and progression of DIGO. This paper reviews the progress of research on the relationship between integrin α2β1 and DIGO.%药物性牙龈增生（DIGO）是指长期服用某些药物而引起的牙龈组织的纤维性增生和体积增大。

牙龈细胞增多与胞外基质尤其是胶原蛋白的大量沉积是其主要病理表现。

近年来研究表明，整合素α2β1与胶原吞噬作用密切相关，在DIGO的发生发展中发挥了重要作用。

本文就整合素α2β1与DIGO相关性的研究进展进行综述。

【期刊名称】《华西口腔医学杂志》【年(卷),期】2017(035)001【总页数】5页(P99-103)【关键词】药物性牙龈增生;整合素α2β1;胶原代谢;胶原吞噬【作者】康颖竹;郭淑娟;刘程程;丁一【作者单位】口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院牙周病科四川大学，成都 610041;口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院牙周病科四川大学，成都610041;口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院牙周病科四川大学，成都610041;口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院牙周病科四川大学，成都610041【正文语种】中文【中图分类】R781.4药物性牙龈增生（drug-induced gingival overgrowth，DIGO）是指长期服用某些药物而引起的牙龈组织纤维性增生和体积增大，临床表现为牙龈外形的肥大[1]。

SDF-1信号在骨关节炎中的作用邓纯博【期刊名称】《《沈阳医学院学报》》【年(卷),期】2019(021)006【总页数】6页(P554-558,564)【关键词】骨关节炎; 基质细胞衍生因子-1; CXCR4; 软骨; 软骨下骨【作者】邓纯博【作者单位】沈阳医学院附属中心医院运动创伤骨科辽宁沈阳 110024【正文语种】中文【中图分类】R684.3骨关节炎（osteoarthritis，OA）是世界上最常见的关节疾病，是老年人致残的主要原因之一，给社会经济带来了巨大的挑战［1］。

衰老、肥胖、性别、吸烟、遗传、炎症等原因，以及生物学或生物力学的变化参与或者加速了OA的发生［2］。

软骨变性曾被认为是OA的主要病理改变，但越来越多的研究表明，OA的病理改变累及整个关节，不仅涉及软骨，还累及软骨下骨、骨髓、半月板、韧带、肌肉［3-4］。

众多研究结果表明，多种生长因子和细胞因子在关节软骨的发育和维持中起着重要的作用，但在OA发展中的作用仍未完全阐明［5-6］。

基质细胞衍生因子-1（SDF-1）又称趋化因子12（CXCL12），是CXC趋化因子家族的成员。

SDF-1及其同源CXC受体4（CXCR4）在各种组织中有基础性表达［7］。

近年来，SDF-1参与OA和类风湿关节炎（RA）的病理机制受到广泛关注。

许多研究表明，SDF-1信号通路可能是OA中关节软骨破坏的代谢调节剂［8-9］。

SDF-1还参与OA软骨下骨的病理变化［10］。

也有研究表明，SDF-1能够协同骨形态发生蛋白2（BMP2）诱导间充质干细胞向软骨细胞分化，促进软骨细胞增殖和成熟［11-12］。

向关节腔内注射人半月板干细胞（hMeSPC）可在SDF-1/CXCR4信号通路作用下促进半月板修复，延缓OA的发展［13］。

这些研究表明，SDF-1在OA的长期复杂病理学中的作用仍然存在争议，需要深入研究。

本文综述了SDF-1信号通路在OA病理过程中对关节软骨和软骨下骨的调节机制，以及SDF-1在软骨修复中的作用机制。

慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因转染促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化周桢杰;李强;李诗鹏;陶旋;马跃刚【摘要】背景:骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)和血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF-165)均为骨修复过程中必不可少的细胞因子,利用慢病毒转染干细胞研究双因子作用下细胞的生物学改变具有重要意义.目的:探讨慢病毒介导人BMP-2和人VEGF-165双基因转染(2次转染)骨髓间充质干细胞的可行性以及转染后细胞的诱导成骨性能.方法:将骨髓间充质干细胞分为4组:①未转染组;②空载组:通过2次相同感染复数的空载慢病毒转染细胞;③BMP-2组:转染了单个目的基因的细胞(Lv-BMP-2/GFP);④BMP-2/VEGF-165组:通过2次转染后携带双目的基因的细胞(Lv-BMP-2/GFP,Lv-VEGH-165/RFP).转染后不同时间点Western Blot检测目的蛋白表达,MTT法检测各组细胞增殖活性,转染后14 d检测各组细胞碱性磷酸酶活性.结果与结论:①空载组、BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组在荧光显微镜下均可见相应的绿色及红色荧光蛋白表达;②转染后3 d,BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组均有相应目的蛋白高表达;转染后7,14,21 d,目的蛋白检测无明显变化(P>0.05);③BMP-2/VEGF-165组增殖稍快于BMP-2组(P<0.05),BMP-2组明显快于未转染组、空载组(P<0.05);④BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组碱性磷酸酶活力明显高于未转染组、空载组;⑤结果表明,慢病毒介导的hBMP-2和hVEGF-165双基因经2次转染成功转入兔骨髓间充质干细胞内,并长期稳定表达,该双因子的表达能通过刺激细胞碱性磷酸酶生成促使细胞更好的向成骨细胞分化.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)025【总页数】6页(P3950-3955)【关键词】骨髓间充质干细胞;骨形态发生蛋白2;血管内皮生长因子165;慢病毒;基因转染;细胞增殖;碱性磷酸酶;干细胞;国家自然科学基金【作者】周桢杰;李强;李诗鹏;陶旋;马跃刚【作者单位】桂林医学院附属医院,广西壮族自治区桂林市 541001;桂林医学院附属医院,广西壮族自治区桂林市 541001;桂林医学院附属医院,广西壮族自治区桂林市 541001;桂林医学院附属医院,广西壮族自治区桂林市 541001;桂林医学院附属医院,广西壮族自治区桂林市 541001【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章快速阅读：文题释义：慢病毒载体：是以人类免疫缺陷Ⅰ型病毒为基础发展起来的基因治疗载体，其对分裂细胞和非分裂细胞均具有较强的感染能力。