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腺病毒表达系统PPT

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腺病毒载体构建ppt课件

腺病毒载体构建ppt课件

精品
2
腺病毒 是一种大分子线性双链无包膜DNA病毒。它 通过 受体介导的内吞作用进入细胞内，然后腺病 毒基因组转移至细胞核内，保持在染色体外，不整 合进入宿主细胞基因组中.
精品
3
腺病毒的基因及其功能
ITR Ψ E1a/E1b E2 E3 E4 ITR
腺病毒基因组编码数十个腺病毒的结构和功能蛋白，分为早期表达和晚 期表达。
重组腺病毒的构建
精品Leabharlann 1腺病毒•腺病毒 Adenovirus 最初由人类腺样增殖体组织培养中分 离得到的，此病毒名称也由此而来。质粒是直径约70毫微米 的正二十面体，各顶点具有突起。结构亚基总数为252个。 核酸是双链DNA，分子量20—25×106。无包膜。在被感染的细 胞核中增殖，病毒蛋白在细胞质内合成，再输送到细胞核。 •腺病毒可见于人、鸡、牛、狗、鼠、猪和猴中，并各自具 有严格的寄主特异性，不感染他种动物。对人类可引起感冒 症状、呼吸系统不适等。
重组系统由2种质粒
构成：一、包含全
部（或右侧大部分）
腺病毒基因组DNA
的大质粒，即骨架
质粒
精品
6
二、小的穿梭质粒，其带有
目的基因的表达盒以及表达
盒两侧的与大质粒上的目的
基因拟插入部位同源序列
（左右臂）
精品
7
精品
8
AdEasy腺病毒载体系统
稳定 性高
腺病毒粒子相对稳定，插入外源基因的病毒基因组在 连续传代中保持不变，易于用重组DNA技术操作。
早期表达的蛋白是功能蛋白，晚期表达的有功能蛋白也有结构蛋白，并 且早期的功能蛋白能够调控晚期蛋白的表达。
早期表达的E1区蛋白（甚至包括E2区蛋白）是腺病毒基因组复制、病毒

腺病毒载体构建PPT课件

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包装和其他蛋白表达翻译所必须的，但其对细胞毒性也是很强的。
E2蛋白涉及AdDNA复制
E3蛋白对抗宿主的抗病毒防御系统
E4蛋白调节有效的晚期基因转录
.
4
腺病毒分类
第一代腺病毒载体：一般将E1或E3基因缺失的腺病毒载体成为一代
载体。此类型载体在未纯化时可引发机体产生较 强的炎症反应和免疫反应，纯化后可安全使用， 体内表达周期可达4周。（科研、临床应用最广泛 ，一般常用Ad5型腺病毒）
第二代腺病毒载体：一般将E2A或E4基因缺失的腺病毒载体成为二代
载体。产生的免疫反应较弱，其安全性和载体容 量有所改进，但病毒包装难度和出毒滴度下降厉 害，应用局限。
第三代腺病毒载体：缺失了全部的（无病毒载体等）或大部分腺病毒
基因，仅保留ITR和包装信号序列。这一载体系 统需要一个腺病毒突变体作为辅助病毒。
.
5
腺病毒载体大多以5型（Ad5）、2型（Ad2）为基础
重组系统由2种质粒
构成：一、包含全
部（或右侧大部分）
腺病毒基因组DNA
的大质粒，即骨架
质粒
.
6
二、小的穿梭质粒，其带有
目的基因的表达盒以及表达
盒两侧的与大质粒上的目的
基因拟插入部位同源序列
（左右臂）
.
7
.
8
AdEasy腺病毒载体系统
稳定 性高
.
3
腺病毒的基因及其功能
ITR Ψ E1a/E1b E2 E3 E4 ITR
腺病毒基因组编码数十个腺病毒的结构和功能蛋白，分为早期表达和晚 期表达。
早期表达的蛋白是功能蛋白，晚期表达的有功能蛋白也有结构蛋白，并 且早期的功能蛋白能够调控晚期蛋白的表达。

腺病毒ppt课件

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16
个人预防
1.了解防控知识，正确认识疾病，提高防范意识 2.尽量避免到人群聚集性场所，避免接触流感症状的患者 3.注意日常个人卫生，养成良好的卫生习惯 4.注意防寒保暖，提高免疫力 5.一旦出现发热、咳嗽、咽痛等异常症状，应及时报告班、排长，在采取有效防护
措施的情况下及时到卫生队就诊；
具体措施
20
疑似病例的诊断标准
1、发病前8天内与腺病毒感染确诊病例有过密切接触史，并出现发热、干咳等临床 症状
2、发病前8天内曾到过腺病毒感染流行地区，并出现发热、干咳等临床症状
疑似病例需进行医学隔离，隔离期一般为一周
21
发热、咳嗽不一定是腺病毒感染
发热、咳嗽是最常见的上呼吸道感染症状，引起发热咳嗽的病因有很多，如病毒、 细菌、支原体、衣原体、真菌等感染均可导致发热、咳嗽，因此出现这两种症状 并非就是腺病毒感染，不必草木皆兵
1、避患者：由于腺病毒主要通过飞沫传播，与患者说话距离应在1.8米以上，尽量 避免触摸患者接触过的物体。如衣物、门把手、钱币和扶手等
2、少摸脸：尽量少用手摸脸，防止病毒通过眼鼻口侵入体内;
3、勤洗手：经常使用肥皂和流水洗手，尤其在咳嗽或打喷嚏后、触碰过患者的污染 物后
4、戴口罩：作为一种以呼吸道传播为主的传染 防护措施
6
腺病毒是如何传播的？ 患者和隐性感染者腺病毒感染的主要传染源，主要通过呼吸道飞沫近距离 传播，在相对密闭，通风不畅的场所容易发生传播。
7
部队具有集中居住、集中训练等特点，本身是呼吸道传染病高发人群。由 于新兵来自不同地区，可能携带不同病毒进入军营。特别是新兵防病意识相 对缺乏，入营后训练强度较大，生活作息紧张，对驻地气候条件及环境不适 应，容易导致个体抵抗力降低。因此，营区一旦出现腺病毒感染病例，容易 引起暴发流行。

腺病毒感染科普讲座PPT课件

腺病毒感染科普讲座PPT课件

01
优先选择具有明确抗病毒效果的药物，如阿昔洛韦等，但需关
Hale Waihona Puke 注药物副作用。对症治疗药物
02
针对发热、咳嗽等症状选用合适的药物，如解热镇痛药、止咳
药等。
免疫调节药物
03
对于免疫低下患者，可适当使用免疫调节药物，但需遵医嘱。
康复期患者管理建议
定期随访
康复期患者应定期进行随访，以便及时发现并处 理潜在问题。
腺病毒感染科普讲座
汇报人：xxx 2023-1-26
contents
目录
• 腺病毒基本知识 • 腺病毒感染临床表现与诊断方法 • 腺病毒感染预防与控制措施 • 治疗方法与康复管理 • 心理干预与社会支持网络构建 • 总结回顾与展望未来进展方向
01 腺病毒基本知识
腺病毒定义与分类
腺病毒定义
腺病毒是一种无包膜的双链DNA病 毒，具有多种血清型，可引起人类和 动物感染。
生活调整
保持规律作息，合理饮食，适当锻炼，增强免疫 力。
心理疏导
关注患者心理状况，必要时进行心理疏导，帮助 患者积极面对康复过程。
05 心理干预与社会支持网络 构建
患者心理变化特点分析
焦虑和恐惧
患者可能对疾病的治疗和预后感到不确定，导致焦虑和恐惧情绪 。
抑郁和失落
腺病毒感染可能给患者带来身体和心理上的痛苦，导致抑郁和失 落情绪。
易感人群
儿童、老年人、免疫力低下人群等是腺病毒的易感人群。
危害程度
腺病毒感染可引起多种疾病，如呼吸道感染、结膜炎、胃肠 炎等，严重时可导致死亡。不同血清型腺病毒的致病力和危 害程度有所差异。
02 腺病毒感染临床表现与诊 断方法
临床表现及分型

腺病毒PPT课件

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19
五、病毒感染的结果及其免疫性
所致疾病：胃肠炎与腹泻。“3岁”以上儿童。 免疫性：感染后获得中和抗体，对同型病 毒的感染有保护作用，免疫力持久。
20
21
——具有日程表的病毒
1
因该病毒最初来自腺体，故命名为腺 病毒 (Adenovirus)。
是一群分布十分广泛，能引起呼吸道、肠粘 膜上皮细胞溶解性感染；可在淋巴样和腺样细胞 中引起潜伏感染，在啮齿动物细胞中引起转化感 染。少数几种腺病毒对实验动物→致癌（12、18 型），有潜在致癌性。
2
型别多，约110个血清型，根据宿主可分鸟腺病毒 属和哺乳类腺病毒,其中至少42个血清型能引起人 类疾病。
目前，把人腺病毒的42个血清型分为A-F 6个组： A-E组：各型病毒均能在人的组织细胞 (如肾细胞) 常规培养中增殖，称为普通腺病毒； F组（40和41型）：是从粪便中发现，用常规细胞 培养不能增殖的腺病毒，称为肠道腺病毒。
在基因治疗的实验研究中常用腺病毒作为基 因载体。
3
+ 腺病毒(adenovirus, Ad)作为基因表达载体的 研制起始于20世纪60年代初，当时病毒学 家观察到腺病毒基因组可与猴类病毒40 （SV40）基因组杂交，说明腺病毒基因组 可承载异源性基因。 此后腺病毒逐步发展 成一种重要的载体系统，并成功地用于基 因治疗的体内外实验和临床试验。 目前运 用最广的腺病毒载体。是血清5型腺病毒。
病毒基因独立、高效复制 “以量取胜”
毒复制所用的引物为蛋白质引物。 可从任一末端开始
15
16
+ 3、原料（操纵蛋白和核苷酸）
腺病毒在感染宿主细胞后即产生一 种蛋白（E1A蛋白），使感染细胞从 “休息状态”进入到DNA复制周期，为 病毒复制储备原料。

腺病毒感染科普讲座PPT课件

腺病毒感染科普讲座PPT课件

腺病毒易感人群
01
02
03
儿童
儿童是腺病毒感染的主要 易感人群，尤其是5岁以 下儿童。
免疫功能低下者
免疫功能低下的人群，如 艾滋病患者、器官移植受 者等，容易感染腺病毒。
密切接触者
与腺病毒感染者有密切接 触的人群，如家庭成员、 医护人员等，感染风险较 高。
02 腺病毒感染临床表现
潜伏期与症状特点
预防措施建议
加强个人卫生
勤洗手、勤通风、避免去人群密集场所。
增强免疫力
保持规律作息、均衡饮食、适当锻炼等。
接种疫苗
按照国家规定接种相关疫苗，降低感染风险。
05 日常生活护理与康复管理
患者日常生活护理要点
休息与活动
保持充足休息，避免剧烈运动 ，以免加重病情。
饮食调节
保持清淡饮食，多吃蔬菜水果 ，避免油腻、辛辣等刺激性食 物。
抗病毒药物研发
针对腺病毒感染的抗病毒药物研发将持续推进， 以期为患者提供更有效的治疗手段。
跨学科合作与研究
加强跨学科合作，结合流行病学、病毒学、免疫 学等多学科知识，深入研究腺病毒感染的发病机 制与传播规律，为制定更有效的防控策略提供科 学依据。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
本次科普讲座重点内容回顾
腺病毒基本知识
详细介绍了腺病毒的结构、传播方式、感染症状及潜伏期 等特点。
感染途径与高危人群
分析了腺病毒的感染途径，包括呼吸道、消化道和眼结膜 等，并指出了高危人群，如儿童、老年人和免疫功能低下 者。
预防措施与治疗方法
总结了预防腺病毒感染的措施，如勤洗手、戴口罩、避免 接触患者等，并介绍了治疗方法，包括对症治疗、免疫调 节治疗和抗病毒治疗等。

腺病毒载体构建ppt课件


安全性好 无需整合进宿主细胞基因组中，目的基因在宿主细胞
基因组外游离状态下表整达理版，课整件合突变致癌可能性小。
9
几种病毒载体的区别
整理版课件
10
整理版课件
11
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
整理版课件
5
腺病毒载体大多以5型（Ad5）、2型（Ad2）为基础
整理版课件
重组系统由2种质粒 构成：一、包含全
部（或右侧大部分） 腺病毒基因组DNA 的大质粒，即骨架 质粒
6
二、小的穿梭质粒，其带有
目的基因的表达盒以及表达
盒两侧的与大质粒上的目的
基因拟插入部位同源序列
（左右臂）
整理版课件
7
整理版课件
包装和其他蛋白表达翻译所必须的，但其对细胞毒性也是很强的。
E2蛋白涉及AdDNA复制
E3蛋白对抗宿主的抗病毒防御系统
E4蛋白调节有效的晚期基因转录
整理版课件
4
腺病毒分类
第一代腺病毒载体：一般将E1或E3基因缺失的腺病毒载体成为一代
载体。此类型载体在未纯化时可引发机体产生较 强的炎症反应和免疫反应，纯化后可安全使用， 体内表达周期可达4周。（科研、临床应用最广泛 ，一般常用Ad5型腺病毒）
第二代腺病毒载体：一般将E2A或E4基因缺失的腺病毒载体成为二代
载体。产生的免疫反应较弱，其安全性和载体容 量有所改进，但病毒包装难度和出毒滴度下降厉 害，应用局限。
第三代腺病毒载体：缺失了全部的（无病毒载体等）或大部分腺病毒
基因，仅保留ITR和包装信号序列。这一载体系 统需要一个腺病毒突变体作为辅助病毒。
•腺病毒可见于人、鸡、牛、狗、鼠、猪和猴中，并各自具 有严格的寄主特异性，不感染他种动物。对人类可引起感冒 症状、呼吸系统不适等。

腺病毒载体构建(共10张PPT)

第二第页二页，，共共101页0。页。
பைடு நூலகம்
腺病毒 是一种大分子线性双链无包膜DNA病毒。它通过 受体介导的内吞作用进入(jìnrù)细胞内，然后腺病毒基 因组转移至细胞核内，保持在染色体外，不整合进入 (jìnrù)宿主细胞基因组中.
第三第页三页，，共共101页0。页。
腺病毒的基因(jīyīn)及其功能
二早期、表小达的的穿E梭1区质蛋粒腺白，（病其甚带至毒有包括基目E的2因区基蛋因组白的编）表是达码腺盒病数以毒及十基(因y个ǐ组jí)复表腺制达、病盒病两毒毒侧包的的装与和结大其构质他蛋粒和白上表功的达目能翻的译蛋基所因必白拟须，插的，入分但部其位为对同细早源胞序期毒列性表（(dú左达x右ìn和ɡ臂)也）晚是很期强表的。达。
二、小的穿梭质粒，其带有 目的基因的表达盒以及(yǐjí) 表达盒两侧的与大质粒上的 目的基因拟插入部位同源序 列（左右臂）
第第七七页页，，共共1100页页。。
第八第八页页，，共共110页0页。 。
AdEasy腺病毒载体(zàitǐ)系统
稳定性 高
腺病毒粒子相对稳定，插入外源基因的病毒基因组在 连续传代中保持不变，易于用重组DNA技术操作。
体内表达周期可早达期4表周。达的蛋白是功能蛋白，晚期表达的有功能蛋白也有结构蛋白，并且早期的功能蛋白能够调控晚期蛋白的 载体。 表达。
体内表达周期可达4周。
它 组 早期通中表.过达受的必体E须1介区早的导蛋期，的白表但（内达甚其吞的至作对包E用细1括进区胞E入2蛋毒区(j白性蛋ìnr白（(ùd)）ú甚细是x胞至ì腺n内包ɡ病)，括也毒然E基是后2因很区腺组强蛋病复的白制毒。、）基病因是毒组腺包转病装移毒和至其基细他因胞蛋组核白复内表制达，翻、保译病持所在毒必染包须色装的体和，外但其，其他不对蛋细整白胞合表毒进性达入(d(翻júìn译xrìùn所)ɡ宿)也主是细很胞强基的因。

(2021)腺病毒载体构建完美版PPT


AdEasy腺病毒载体系统
稳定 性高
腺病毒粒子相对稳定，插入外源基因的病毒基因组在 连续传代中保持不变，易于用重组DNA技术操作。
宿主范 可转入分裂后的非分裂细胞中发挥作用，可以感染处
围广
于分裂状态的细胞。
感染 性
强
可经不同途量 改建腺病毒基因部分缺失载体的克隆容量可达10kb， 大 腺病毒基因完全缺失载体克隆容量可达37kb。
腺病毒载体大多以5型（Ad5）、2型（Ad2）为基础
重组系统由2种质粒 构成：一、包含全 部（或右侧大部分） 腺病毒基因组DNA 的大质粒，即骨架 质粒
二、小的穿梭质粒，其带有 目的基因的表达盒以及表达 盒两侧的与大质粒上的目的 基因拟插入部位同源序列 （左右臂）
ITR Ψ E1a/E1b E2 E3 E4 ITR 统需要一个腺病毒突变体作为辅助病毒。 ，一般常用Ad5型腺病毒） E4蛋白调节有效的晚期基因转录
E2蛋白涉及AdDNA复制 E3蛋白对抗宿主的抗病毒防御系统 E4蛋白调节有效的晚期基因转录
腺病毒分类
第一代腺病毒载体：一般将E1或E3基因缺失的腺病毒载体成为一代
载体。此类型载体在未纯化时可引发机体产生较 强的炎症反应和免疫反应，纯化后可安全使用， 体内表达周期可达4周。（科研、临床应用最广 泛 ，一般常用Ad5型腺病毒）
•腺病毒可见于人、鸡、牛、狗、鼠、猪和猴中，并各自具 有严格的寄主特异性，不感染他种动物。对人类可引起感冒 症状、呼吸系统不适等。
腺病毒 是一种大分子线性双链无包膜DNA病毒。它 通过 受体介导的内吞作用进入细胞内，然后腺病 毒基因组转移至细胞核内，保持在染色体外，不整 合进入宿主细胞基因组中.
腺病毒的基因及其功能
ITR Ψ E1a/E1b E2 E3 E4 ITR

最新腺病毒相关知识.ppt

精品文档
什么季节容易感染腺病毒
1、冬春季节气温较低，病毒存活时间更长 2、冬季人群常在室内聚集活动，居所大多通风
不佳，易于病毒传播
冬春季容易出现腺病毒感染的暴发流行
精品文档
典型临床表现
发热、干咳、咽痛等上呼吸道感染症状为主，部 分伴有头痛、乏力、恶心、食欲缺乏等不适感，大便 每天2-4次，呈稀水样或糊状。
1、发病前8天内与腺病毒感染确诊病例有过密切接触史， 并出现发热、干咳等临床症状
2、发病前8天内曾到过腺病毒感染流行地区，并出现发 热、干咳等临床症状
疑似病例需进行医学隔离，隔离期一般为一周
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发热、咳嗽不一定是腺病毒感染
发热、咳嗽是最常见的上呼吸道感染症状，引起 发热咳嗽的病因有很多，如病毒、细菌、支原体、衣 原体、真菌等感染均可导致发热、咳嗽，因此出现这 两种症状并非就是腺病毒感染，不必草木皆兵
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疫情发生期间的卫生措施
（1）专人负责消毒。用含氯制剂擦拭桌面门窗地面，宿舍走廊 采用过氧化氢或含氯消毒剂喷洒，注意餐具消毒 （2）要求宿舍每天早中晚各通风1次，每次不少于30分钟。门 窗要同时打开，形成对流 （3）启动营区“日监测”“日报告”制度，做好登记统计和上 报工作 （4）由医务人员专职接送发热患者，由专职人员对发热患者居 所及时进行消毒 （5）营区独立设立隔离区，严防隔离观察对象随意流动 （6）积极开展健康教育和心理疏导，编印、下发腺病毒防控知 识宣传页 （7）根据各单位情况，组织集体预防性用药
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消化系统感染
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流行性角膜结膜炎
结膜充血，有异物感、烧灼感、怕光、流泪及轻度 视力障碍。
精品文档
腺病毒感染引起的并发症
腺病毒呼吸道感染绝大多数为轻症病例，一般710天可自行好转；只有少数发展为重症病例。在免疫 稳定的人群中很少导致死亡，但在新生儿、婴幼儿和 免疫低下人群中可导致严重腺病毒肺炎或致死性腺病 毒感染。
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tetR： Tc抑制因子
VP16：转录激活亚基 tTA： Tc应答转录激活因子
RevTet-Off Gene Expression Syv
tetR
VP16
pTet Off
TRE Pmincmv
Gene of Interest
pTRE2
rtetR： 反Tc抑制因子
VP16：转录激活亚基
逆转录病毒表达系统
逆转录病毒载体的构建和改造
• Env、pol、gag为RNA病
毒中控制复制和表达外
膜蛋白的基因。 • 重新构建的反转录病毒 载体将去除gag、pol、 env基因，并将它们整 合到包装细胞株的基因 组中。 • +是RNA病毒包装时的 识别序列，保留在反转 录病毒载体中。
逆转录病毒的 包装过程
逆转录病毒表达系统
• 长期、稳定的基因表达，可 以遗传 • 只能侵染分裂期的寄主细胞 • 中度的蛋白表达水平
• 单一载体操作
• 病毒效价达 106 pfu/ml • 平均可插入6.5kb的外源片段
• 病毒的效价可达 1012 pfu/ml
• 平均可插入8kb的外源片段
Retroviral Expression System
病毒载体疫苗
重组腺病毒的作用
在哺乳动物细胞中，AdV已被成功应用于表达各种病毒
和细胞的基因，腺病毒表达载体系统表达出蛋白的生 物化学特性，可用于商业价值的开发，它可用来生产 亚单位疫苗，和新型诊断试剂盒的开发。
AdV可以通过转染细胞来表达蛋白，除基因治疗的相关
实验外还可用做体内特性研究。
纯化腺病毒的电子显微照片
更为流行的方法采用了穿梭载体与腺病毒质粒转化一种特殊的菌株(BJ
5183)。然后从细菌中收集重组腺病毒，用其感染HEK 293细胞。
Adeno-X Expression System
Adeno-X Expression System
构建重组腺病毒不同方法比较
同源重组 Viral DNA 制备穿梭载体和 腺病毒载体 目的基因从穿梭 载体克隆到腺病 毒载体 7-14天 -Plasmid-based 7-14天 0-15天 2-3天 4天 体外连接法
泛嗜性逆转录病毒 表达系统
宿主范围广
为什么泛嗜性逆转录病毒的宿主范围如此广？
外膜蛋白识别宿主细胞表面的受体



VSV-G外膜蛋白不需识别宿主细胞表面的受体
Package cell line GP2-293整合有gag-pol 基 因 pVSV-G 载体与pLXRN 载体共转化

pVSV-G
Package Cell Line GP-293
结合分子模拟腺病毒纤突衣壳蛋白,使载体选择性靶
向相应细胞,减少载体的非特异性感染及免疫反应。
提高腺病毒载体的靶向特异性
另一种改造策略：
改造腺病毒的基因结构,置换上针对癌细胞的特
异型启动子。如装上AFP启动子,使载体特异性感 染肝癌细胞。
第三代腺病毒载体
宿主的免疫反应仍然是获得转基因长期表达和重复使用 腺病毒载体的主要障碍。大量研究已证实,具有感染性的腺病 毒载体本身就足以引起免疫反应。 更为“复杂”的腺病毒载体就是第三代腺病毒载体,在其 构建时去除了某些病毒基因,甚至是去除了全部的病毒基因。
胞、骨细胞、血管、肌肉、脑、中枢神经系统等。
重组腺病毒表达系统
通过对本体蛋白的同样的翻译后的修饰，在细胞 中表达真核蛋白。 一系列腺病毒转换因素允许产生高水平的异种蛋 白。重组蛋白代表了整个细胞蛋白的最丰富的多 肽（20%-30%）。 在较好的条件下，表达系统在数升的293细胞悬浮 培养液中可以按比例地增加，产量可达90mg/L。
第二代腺病毒载体
第二代腺病毒载体是病毒基因组的E2A区缺失,并突 变或缺失E4区基因。这种载体装载容量有所增加 (可达11kb) ,细胞毒性和免疫原性有所减弱,而目 的基因的表达时间更长。
提高腺病毒载体的靶向特异性
一种研究方向： 改造腺病毒囊膜表面五邻体纤维蛋白的结构。根据 Adv5纤突蛋白结节区的结构特征,去除病毒与受体 (CAR,柯萨奇2腺病毒受体)的亲和性,经特异性细胞
被注射Ad5.CMV-LacZ的大鼠脊髓
被注射Ad5.CMV-GFP的大鼠纹状体的切片
用AdV转染基因的优点
速度快，简单，不需要任何特殊的装备。 相对其它方法，它非常容易被接受。事实上，这种感
染后细胞生存率几乎为100%。因此，AdV有向细胞内 转染遗传物质而忽视毒性作用的能力。
许多细胞类型均可被转染。
pLXRN
Pantropic Retroviral Expression System
Pantropic Retroviral Expression Vector
泛嗜性逆转录病毒载体
带GFP报告基因的 逆转录病毒载体
RevTet-On & Off Gene Expression System
第三代腺病毒载体不但可容纳较大的外源基因
(32kb) ,而且较容易获得高滴度( 109pfu /ml) 。
Adeno-X VS Retrovirus Expression System 腺病毒表达系统
• 腺病毒在寄主细胞中呈游离 态，基因瞬时表达 • 可侵染处于分裂期或非分裂 期的寄主细胞 • 高水平的蛋白质表达 • 双载体系统的操作
获得重组腺病毒 噬斑纯化
总计
14-21天 5-10天
26-45天
17-22天 0-5天
24-56天
4-7天 -10-17天
Ad5腺病毒可感染的寄主
人体各类组织的细胞，除造血细胞外
多种哺乳动物细胞：
Species Chicken Dog Monkey Mouse Pig Rabbit Rat Sheep Reference Fisher & Watanable, 1996 Fang et al., 1996 Bout et al., 1994 Lee et al., 1996; Stratford-Perricaudet et al., 1990 French et al., 1994 Donahue, et al., 1998; Riew et al., 1998 Mastrangeil et al., 1993 Hoizinger et al., 1995
Add HRP conj. secondary
Adeno-XTM Rapid Titration Kit 的特点
• 简单的免疫染色方法 • 整个过程只需48小时. 而传统繁琐的方法需要2个星期
才能完成
• 对所有重组的Ad5病毒能实现准确而快速的滴度测定
Adeno-XTM Rapid Adenoviral purification System
Retro-X Retroviral Expression Vectors
LRCX Retroviral Expression Vectors
MSCV Retroviral Expression System
小鼠干细胞病毒表达载体
• 造血细胞 • 胚胎干细胞 • 胚胎性癌细胞
Pantropic Retroviral Expression System

HEK 293 cells have been engineered to include Adenovirus E1a/E1b genes E1a/E1b genes (integrated into 293 genome) allow replication and transcription of Adenovirus
rtTA： 反Tc调控的转录因子
RevTet-On Gene Expression System Pcmv r tetR
VP16
： Dox
pTet On
TRE Pmincmv
Gene of Interest
pTRE2
RevTet-Off & On Gene Expression System

在各种细胞系中建立可调控的基因表达系统 Tc 或 Dox 诱导所需的剂量远小于细胞毒素的水平，不会影响细胞 的生长。 外源基因表达为激活方式，容易控制。 表达水平相比其他组成型的真核强启动子要高几十倍。

基因表达受到严谨的调控，可以表达毒性基因等
谢 谢
系统, E4调节有效的晚期基因转录。
病毒的受体与入侵细胞的过程
腺病毒感染细胞的第一步是通过纤突蛋白与细胞表面柯萨奇 病毒和腺病毒受体(CAR)结合。腺病毒粘附后,五邻体蛋白 上的精氨酸-谷氨酸-天门冬氨酸（ＲＧＤ)与细胞表面的整 合素αｖβ3和αｖβ5结合并相互作用使病毒进入细胞。
第一代腺病毒载体
腺病毒基因组编码数十个腺病毒的结构和功能蛋白,分为早
期表达和晚期表达。早期表达的蛋白是功能蛋白、晚期表达的有 功能蛋白和结构蛋白,并且早期的功能蛋白调控晚期蛋白的表达。
早期表达的Ｅ1区蛋白(甚至包括Ｅ2区蛋白)是腺病毒基因组复制、
病毒包装和其他蛋白表达翻译所必需的,但其对细胞的毒性也是 很强的。E2蛋白涉及AdDNA复制, E3蛋白对抗宿主的抗病毒防御
腺病毒表达系统
真核生物细胞常用的表达载体
质粒型表达载体
病毒型表达载体
• 腺病毒表达载体 • 逆转录病毒表达载体
• 昆虫杆状病毒表达载体
病毒表达系统的特点

高转染效率 高蛋白表达水平
对转染效率很低的细胞进行高效转染 (原
代细胞等) 稳定,可遗传的表达 (逆转录病毒) 可控制拷贝数

如何选择合适的病毒表达载体？
Adeno-XTM Rapid Titration Kit
Hexon proteins expressed Fix Infect cells w/ virus dilutions