利用通用引物检测天然宠物饲料中的动物源性成分

养殖与饲料2020年第06期鸡肉粉中猪源性成分的检测分析张文刚姜芹孙冰清张妤顾欣上海市动物疫病预防控制中心，上海201103摘要本研究建立了一种基于实时荧光聚合酶链式反应的鸡肉粉中猪源性成分含量测定方法，以期了解市场上饲料原料鸡肉粉中猪源性成分的含量及其污染情况。

利用该方法对从上海、山东、广东、四川等地收集的61份鸡肉粉样品进行猪源性成分检测。

检测结果显示，61批样品中检出含有猪源性成分的样品15批，检出率为24.6%。

由检测结果可知，市场上鸡肉粉中含有猪源性成分的比例较高，需要加强对饲料原料鸡肉粉中猪源性成分的监管。

关键词鸡肉粉；猪源性成分；PCR收稿日期：2020-03-24张文刚，男，1979年生，硕士，高级畜牧师。

近2年来，由于非洲猪瘟的影响导致鸡肉粉原料中掺假、掺杂猪肉粉现象频发，不仅严重侵害了饲料生产厂家的利益，而且也给非洲猪瘟的防控带来了很大安全隐患。

为切实掌握饲料生产企业鸡肉粉原料中猪源性成分的污染情况，本文对来自宠物食品生产企业、饲料检测机构、企业内部质量检测机构及第三方饲料检测机构提供的61个产品进行了猪源性成分检测分析。

目前，现有的动物源性成分鉴别方法一般只是开展定性检测，结果以阴性或阳性的形式报告，这类检测结果无法区分是污染还是故意掺假所致，无法有效甄别是否存在掺假行为及其严重程度。

因此，开展定量检测技术研究来量化鉴别某一动物源性成分含量十分必要[1-3]。

本研究通过在鸡肉粉中添加不同比例的猪肉粉制作猪源性成分的含量标准曲线，通过标准曲线来确定样品中猪源性成分含量，基本实现了猪源成分的量化鉴别。

1材料与方法1.1材料与试剂检测样品来源于宠物食品生产企业、鸡肉粉生产、销售企业及检测机构；无水乙醇，国药集团试剂有限公司；DNA 提取试剂盒，天根生化科技（北京）有限公司；猪源性检测试剂盒，广州维伯鑫生物科技股份有限公司。

1.2仪器与设备Light Cycler 96型实时荧光PCR 仪，瑞士Roche 公司；涡旋仪，德国Heidolph 公司；AB135-S/FACT 电子分析天平，梅特勒托利多仪器上海有限公司；离心机，美国Thermo Scientific 公司；Nan-odrop 分光光度计，美国Thermo Scientific 公司。

核酸提取试剂盒对饲料中牛羊源性成分检测的影响
李泰;朱英才;骆璐;彭强;凌洪权;廖星杰;王钦;张承双
【期刊名称】《粮食与饲料工业》
【年(卷),期】2024()1
【摘要】实时荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)是目前饲料中牛羊源性成分的定性检测中常用方法之一。

为了熟练操作和掌握这个方法,使得实验室工作人员在做饲料中牛羊源性成分定性这类检测时能有一个清晰的认识,通过核酸提取试剂盒的选取及平行实验比对,对此进行了阐释。

【总页数】2页(P70-71)
【作者】李泰;朱英才;骆璐;彭强;凌洪权;廖星杰;王钦;张承双
【作者单位】重庆市动物疫病预防控制中心
【正文语种】中文
【中图分类】S816.17
【相关文献】
1.牛羊源性成分核酸检测（PCR-荧光探针法）
2.新疆反刍动物饲料和动物源性饲料中牛羊源成分检测
3.陕西省反刍动物饲料产品和动物源性饲料中牛羊源成分检测
4.用分子生物学方法鉴别检测动物源性饲料中的牛羊源性成分
5.肉及肉制品牛源性成分核酸检测试剂盒评价技术的研究
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专利名称：一种鉴别8种动物源性成分的PCR引物及试剂盒专利类型：发明专利
发明人：薛超波,管峰,顾佳瑛,黄朱梁,林昕,徐爱春
申请号：CN201510443899.9
申请日：20150725
公开号：CN104946788A
公开日：
20150930
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供一种鉴别8种动物源性成分的PCR引物及试剂盒，可以在一次PCR中同时鉴定山羊、绵羊、水牛、家牛、猪、鹿、骆驼和牦牛共8种动物源性成分。

本发明的引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。

本发明引物的特异性强，设备要求不高，能在一次PCR中同时检测8种动物源性成分，能用于肉类及其产制品的掺假检测和动物源性成分的溯源鉴定，方法简单，提高了检测效率。

申请人：舟山市食品药品检验检测研究院,中国计量学院
地址：316021 浙江省舟山市新城区千岛路257号
国籍：CN
代理机构：北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：汤东凤
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动物源鉴别技术一、引言动物源鉴别技术是指通过科学手段对动物及其产品的来源进行鉴别的一种技术。

随着人们对食品安全和环境保护的关注度日益提高，动物源鉴别技术的重要性逐渐凸显。

本文将介绍动物源鉴别技术的原理、方法和应用。

二、动物源鉴别技术的原理动物源鉴别技术的原理主要基于动物个体之间的遗传差异和生物化学差异。

通过对DNA序列、蛋白质组学、微生物组学等方面的研究，可以确定动物个体的种属和亲缘关系，从而实现对动物源的鉴别。

1. DNA序列鉴别技术DNA序列鉴别技术是目前应用最广泛的动物源鉴别技术之一。

通过对动物个体的DNA序列进行比对和分析，可以确定其种属和亲缘关系。

常用的DNA序列鉴别技术包括PCR-RFLP、DNA条形码和SNP分析等。

2. 蛋白质组学鉴别技术蛋白质组学鉴别技术是通过对动物个体的蛋白质组进行分析，确定其种属和亲缘关系。

这种技术主要利用质谱仪等仪器对蛋白质进行检测和鉴定，从而实现对动物源的鉴别。

3. 微生物组学鉴别技术微生物组学鉴别技术是通过对动物个体的微生物群落进行分析，确定其种属和亲缘关系。

这种技术主要利用高通量测序技术对微生物DNA进行测序，从而实现对动物源的鉴别。

三、动物源鉴别技术的方法动物源鉴别技术的方法主要包括样品采集、DNA提取、PCR扩增、测序和数据分析等步骤。

1. 样品采集样品采集是动物源鉴别技术的第一步，需要选择适当的样品来进行分析。

常用的样品包括动物组织、血液、毛发、鳞片等。

采集样品时要注意避免污染和交叉污染。

2. DNA提取DNA提取是动物源鉴别技术的关键步骤，需要将样品中的DNA分离和纯化。

常用的DNA提取方法包括酚氯仿法、磁珠法和商用DNA提取试剂盒法等。

3. PCR扩增PCR扩增是动物源鉴别技术的核心步骤，通过特定的引物选择性地扩增目标DNA片段。

常用的PCR扩增方法包括常规PCR、实时荧光PCR和多重PCR等。

4. 测序和数据分析测序是动物源鉴别技术的关键步骤，需要将扩增的DNA片段进行测序。

饲料中动物源性成分检测技术研究进展摘要:饲料安全与动物生产、环境污染和人类健康密切相关。

动物废弃物进入饲料行业曾经弥补了蛋白质饲料不足的缺口,但却带来了新的问题。

饲料中动物源性成分的定性或定量检测技术已成为国内外的研究热点，适用于各种样品、基于各种原理的方法和技术被开发出来。

本文以组织学特征为基础的显微镜分析方法、以蛋白质和DNA为基础的免疫学和PCR分析方法、高效液相色谱法和近红外光谱法在动物源性饲料组分中的研究应用进展等方面做了综述,并对其发展趋势进行讨论。

饲料安全已与动物生产、环境污染和人类健康密切相关。

动物源性副产品因富含蛋白质、钙、磷等营养成分而被应用于畜禽饲料中, 但现有的证据表明, 在动物饲料中添加未经加热处理牛源性饲料或感染过痒病因子的牛( 羊) 肉/ 肉骨粉( MBM) 后能够引发和传播疯牛病( BSE)。

我国于1999、2001和2004年先后下发了关于对动物源性饲料生产和管理的相关条例, 主要对反刍动物源性饲料组分、MBM、肉粉、骨粉、血粉、动物内脏干粉和动物废弃物等使用做了严格的规定。

目前关于饲料中动物源性成分检测主要以样品的组织学特性和品种特异性的生物标记物( 如蛋白质、DNA和其他生物大分子等) 为对象, 其中PCR技术发展迅速, 已逐步被世界各国采用。

但由于动物源性饲料组成上的复杂性, 单一的PCR技术仍不能克服耗时、效率低和假阳性等问题。

因此,研究并建立一种( 套) 快速、灵敏、可靠的动物源性饲料检测技术, 对于提高饲料质量、防止饲料掺假、控制进口饲料安全和制订相关饲料法规等均具有重要意义。

本文中动物源性成分是指动物组织以及蛋和奶，包括肉类及其制品(含动物脏器)、水生动物产品等，检测技术是指上述成分中蛋白质和DNA等具有种间特异性物质的物种鉴定和含量分析技术。

该技术已成为保护消费者权益和安全的重要技术手段。

动物源性成分检测技术通常建立在对样品蛋白质、DNA、脂肪酸等分子结构、序列或组成特异性分析的基础上。

PCR－核酸试纸条法快速检测鸽子源性成分田卓;曹际娟;崔妍;赵良娟;李宗梦【摘要】Objective] In order to improve the efficiency of detecting ingredients of animal origin, the PCR-nucleic acid strip rapid detection technology system was established.[ Method] In view of the species specific DNA sequences, primers were designed and marked;the PCR re-action system was established and optimized; the results were interpretated by the nucleic acid strip.[ Result] The results showed that: the PCR-nucleic acid strip is high specificity;absolute sensitivity is 0.001 3ng/μL;the actual sensitivity in mixed samples is 0.01%;the actual sensitivity in processing sample is 0.1%;the detection rate of minimum detection limit is 100%, the stability is good.[Conclusion] To sum up, the high sensitivity as PCR and high specfticity as immunology made the PCR-chromatography strip valuable for the rapid detection method.%[目的]提高动物源性成分检测效率，建立PCR－核酸试纸条快速检测技术体系。

饲料中牛、羊、猪、鸡源性成分的PCR检测方法及其应用罗家琴;王加启;卜登攀;李旦;王丽;魏宏阳;周凌云【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2008(041)007【摘要】[目的]建立鉴定饲料中牛、羊、猪、鸡源性成分的PCR方法,进一步完善现有的动物源性饲料检测方法.[方法]根据牛、羊、猪、鸡、鱼以及马的mtDNA的16S rRNA基因序列选用了一对通用引物,初步检测出含有动物源性成分的样品;然后针对牛、羊、猪,鸡4种动物线粒体mtDNA中的保守序列,分别选用了4对特异性引物对检测出的样品进行PCR扩增,扩增的目的片段大小分别为271、274、149和266 bp.[结果]通过利用通用引物、优化PCR反应体系及其条件,建立了从未知样品中简便而快速的检测出是否含有动物源性成分的PCR方法;利用所选的针对不同动物的特异性引物,建立了鉴定牛、羊、猪、鸡这4种动物源性成分的方法,此方法最低检测限可达0.1%.[结论]建立的检测饲料中动物源性成分的方法操作简便,价格低廉,结果准确,可靠,可作为饲料中动物源性成分的鉴定方法之一.【总页数】8页(P2112-2119)【作者】罗家琴;王加启;卜登攀;李旦;王丽;魏宏阳;周凌云【作者单位】中国农业科学研究院北京畜牧兽医研究所恸物营养学国家重点实验室/侬业部奶及奶制品质量监督检测测试中心,北京100094;中国农业科学研究院北京畜牧兽医研究所恸物营养学国家重点实验室/侬业部奶及奶制品质量监督检测测试中心,北京100094;中国农业科学研究院北京畜牧兽医研究所恸物营养学国家重点实验室/侬业部奶及奶制品质量监督检测测试中心,北京100094;中国农业科学研究院北京畜牧兽医研究所恸物营养学国家重点实验室/侬业部奶及奶制品质量监督检测测试中心,北京100094;中国农业科学研究院北京畜牧兽医研究所恸物营养学国家重点实验室/侬业部奶及奶制品质量监督检测测试中心,北京100094;中国农业科学研究院北京畜牧兽医研究所恸物营养学国家重点实验室/侬业部奶及奶制品质量监督检测测试中心,北京100094;中国农业科学研究院北京畜牧兽医研究所恸物营养学国家重点实验室/侬业部奶及奶制品质量监督检测测试中心,北京100094【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.进口饲料中牛、羊源成分的PCR同时检测方法 [J], 闻伟刚;赵秀玲;贺水山;杜华宏;黄绍棠2.种属特异性PCR法鉴别罐头食品中猪、牛、羊、鸡、鸭源性成分 [J], 张媛媛;孟镇;仇凯;东思源;武竹英;郭新光;钟其顶3.应用两种PCR方法检测饲料中牛、羊源性成分 [J], 金凌艳;顾欣;蔡金华;刘雅妮4.动物源性饲料中牛源和羊源性成分的检测方法 [J], 冯秀燕;董红霞;魏秀莲;杨宝良;王有月5.动物产品及饲料中牛源和羊源性成分PCR检测方法的优化 [J], 邵碧英;张体银;杨婕;陈文炳;郑腾因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。