毛细管电泳法测定毛发中氨基酸

高效毛细管电泳法快速测定血清中游离氨基酸陈惜贞(广东省汕尾市人民医院检验科516600)=摘要>目的建立快速测定人血清中游离氨基酸的方法。

方法用高效毛细管电泳法对40例健康体检者及32例肾病患者血清氨基酸进行检测。

结果8min内分离16种氨基酸,线性范围在10~700L mo l/L,最低检出限为2.5~7.9L mol/L,回收率86.3%~107.4%,批内精密度2.8%~10.3%,批间精密度3.5%~11.6%。

对32例肾脏病患者血清中氨基酸测定结果与40例健康对照组氨基酸测定结果进行统计学分析。

结论高效毛细管电泳法具有快速、准确、灵敏等特点,为临床及科研工作中测定氨基酸提供了一种有效的方法。

=关键词>氨基酸;D-正白氨酸;2,4-二硝基氟苯;电泳中图分类号:R446.1文献标志码:A文章编号:1672-9455(2007)06-516-02氨基酸测定不仅对遗传代谢性疾病、肾病、肝病的诊断和治疗具有重要价值,而且在评价患者营养状况方面亦受到广泛重视。

为研究不同疾病状态下氨基酸的代谢情况,需要一种快速测定氨基酸的方法来满足大批量样品检测的需要,离子交换色谱法和反相高效液相色谱法因其成本高且费时而难以普及[1]。

相比之下,最新发展起来的高效毛细管电泳法以其快速、简便、准确、成本低等诸多优点备受青睐,为快速测定氨基酸提供了有效手段。

作者采用高效毛细管电泳法,建立快速检测人血清中游离氨基酸的方法,取得满意效果,现报道如下。

1资料与方法1.1一般资料缓冲液由0.03mo l/L pH9.8四硼酸钠缓冲液、异丙醇30%Brij35=825B150B25组成;开口石英毛细管总长度370mm,有效长度300mm,内径75L m;电压28kV;温度为15e;压力进样5s。

1.2仪器与试剂高效毛细管电泳仪为美国BECKM AN公司P/A CE5500;pH计为OR ION520A;石英毛细管为内径75 L m,河北永年光导纤维厂生产。

文章编号:1004-7964(2004)03-0039-05收稿日期:2003-11-05基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)经费资助,课题编号:2001AA647020四川大学青年基金,课题编号:H2002[9-057]第一作者简介:戴红,女,1966年出生,副教授。

主要研究方向:分析检验。

氨基酸分析的检测方法评述戴红,张宗才,张新申(皮革化学与工程教育部重点实验室(四川大学),四川成都610065)摘　要:对氨基酸分析常用的化学方法、电化学方法、分光光度法(包括可见光分光光度法,紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等检测方法进行综述,以期为提高氨基酸分析的灵敏度、准确性,为快速、高效的氨基酸分析方法的建立提供参考。

关键词:氨基酸;检测;分析中图分类号:Q517;Q503 文献标识码:ADetermination M ethods of Amino A cids A nalysisDA I Hong ,ZHA N G Zong 2cai ,ZHA N G Xi n 2shen (Key L aboratory of L eather Chemist ry and Engi neeri ng(S ichuan U niversity ),M i nist ry of Education ,Chengdu 610065,Chi na )Abstract :Determination methods for amino acids ,including chemistry determination ,elec 2tric 2chemistry determination ,spectrophotometer determination and conductivity detection method were reviewed for the sake of improving the analysis sensitivity and accuracy.The paper aimed at providing useful reference to building a fast and effective amino acids aualytic methods.K ey w ords :amino acid ;analysis ;determination 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质,氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义,广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析,并且用于皮革化学鞣革机理的研究中[1,2,3]。

毛细管电泳在氨基酸分析中的应用大连大学环境与化学工程学院化学112 刘纪程1.概述毛细管电泳（Capillary electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳（HPCE）或毛细管电分离法（CESM），是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。

毛细管电泳(CE)的应用包括很多内容。

已在生命科学、生物工程、医药、环境保护、食品检验等领域获得了广泛应用。

被分析的物质有离子、小分子、生物大分子乃至高分子和粒子的分析；分析对象从无机物、有机物、生物体系乃至活体单个细胞的分析；含量测定范围可从常量到微量乃至几个分子的测定电泳技术是蛋白质分离的重要手段，而毛细管电泳技术一经发明，就在多肽、蛋白质等生物活性物质的分离分析方面显示出了巨大的优越性。

1.2 CE 的分离模式CE 基于分离介质和分离原理的不同，常见的有以下几种分离模式[1， 2]：此外，还有毛细管矩阵电泳（CAE）、芯片式毛细管电泳（CCE）及非水毛细管电泳（CNACE）等，对于蛋白质和多肽的检测而言，应用最多的还是CZE和CIEF 这两种。

近年来，一些新型的电泳溶剂也得到了应用，如非水相的或者水相+ 有机相的电解液、等电点缓冲溶液，离子性液体也被用于电泳分离，这大大拓展了其应用范围[3]1.3 CE 的检测技术由于CE 进样量小的特性，对检测器的灵敏度要求很高，通常采用柱上检测。

在蛋白质和多肽的检测中，因为芳香类氨基酸有紫外吸收，故常用紫外检测器；在样品含量较低时，可采用荧光或者激光诱导荧光检测器；由于蛋白质溶液具有导电性，因此对毛细管进行改进以后，采用电导或安培电流也能检测出峰；另外，伴随蛋白质酶谱技术的发展，将CE 与质谱串联定性检测蛋白质水解后的多肽链的技术也得到了较快发展[4]。

2.氨基酸分析由于只有少数几种氨基酸在紫外范围内有吸收，所以对氨基酸分析的主要问题在于检测方式。

虽然也有报道用间接紫外、间接荧光、间接电化学、检测器测定未衍生化的氨基酸，但最灵敏的方法是采用荧光试剂将氨基酸衍生后再进行分离测定。

氨基酸检测方法1. 氨基酸色谱法氨基酸色谱法是一种常用的氨基酸检测方法。

该方法是利用氨基酸的特性，在具有特定氨基酸浓度梯度的柱子中流动时，各种氨基酸会按照一定的顺序在柱子中被分离出来。

利用这种分离技术加上不同的检测方法，可以精确地测量样品中各种氨基酸的含量。

该方法准确度高，响应灵敏，但需要高昂的仪器和耗材。

2. 离子交换色谱法离子交换色谱法也是一种常用的氨基酸检测方法。

该方法是在离子交换柱中，将混合的氨基酸样品与柱内的离子交换树脂进行交换，实现各种氨基酸的分离和测量。

该方法测量精度高，但某些疏水性氨基酸分离效果不佳。

3. 毛细管电泳法毛细管电泳法是一种高效而准确的氨基酸检测方法。

其基本原理是将氨基酸样品在带电的毛细管中进行分离，利用质量分析仪器对氨基酸进行检测。

毛细管电泳法能够在非常短的时间内对混合氨基酸进行快速、准确的测量。

4. 气相色谱法气相色谱法是一种相对快速而精确的氨基酸检测方法。

在气相色谱法中，氨基酸样品首先通过氨基酸衍生化反应使其变得易于气相分析，然后在气相色谱仪中将氨基酸进行分离和测量。

该方法准确度较高，同时也提供了氨基酸的结构信息。

5. 氢化技术法氢化技术法是一种经典的氨基酸检测方法。

该方法是将氨基酸样品加入到盛有氢气的高压釜中，加热反应，利用氢化反应将氨基酸转化为氨基酸替代物，然后对替代物进行定量测量。

该方法简单易行，但需要高压釜及氢气供应等耗材。

6. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种可靠的氨基酸检测方法。

其基本原理是使混合样品在高效液相色谱柱中分离，使各种氨基酸有序地流过柱中吸附剂，并使用各种检测方法获得氨基酸含量的定量信息。

该方法测量范围广，准确度高，但仍需要较昂贵的仪器和耗材。

7. 红外光谱法红外光谱法是一种非常方便和易行的氨基酸检测方法。

该方法利用分子中各个化学键的振动所导致特定波长的吸收光谱来区分各种氨基酸。

虽然红外光谱法不能直接定量测量氨基酸，但是可以通过特定的计算和数据分析方法来获得氨基酸的含量和结构信息。

1. 分光光度法氨基酸检测： 主要是利用氨基酸与衍生剂发生化学反应，产生蓝紫色化合物，该化合物在某一波长处有最大吸收峰，根据吸收值大小得到氨基酸含量。

常用的衍生剂为茚三酮。

分光光度法具有操作方便、仪器要求简单、成本低、应用范围广以及适用于芳香族氨基酸检测等特点。

2. 毛细管电泳法氨基酸检测： 根据分离原理的不同，可分为毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电电泳、毛细管等速电泳以及胶束电动力学毛细管电泳。

其中，毛细管区带电泳和胶束电动力学毛细管电泳可用于氨基酸检测。

毛细管电泳法具有分离效率高、分析时间短、溶剂用量少、无须梯度洗脱以及适用于氨基酸的手性分离等特点，但该方法分析结果重现性较差。

3. 近红外光谱法氨基酸检测： 利用有机化合物的含氢基团在特定波长区域跃迁，产生光谱的变化，结合统计学方法间接地实现氨基酸的定量检测。

近红外光谱法具有高效、无污染、无破坏性以及可同时检测多组分等特点。

4. 气相色谱法氨基酸检测：将氨基酸衍生化处理变为容易气化的物质，根据气态样品中各组分在流动相和固定相中的分配系数的不同，实现对氨基酸的定量分析。

GC法不仅能检测氨基酸含量，还可以发现新氨基酸，但缺点在于操作复杂、干扰因素多，专一性差。

5. 高效液相色谱法氨基酸检测： 是最常用的一种氨基酸检测方法。

由于大多数氨基酸本身没有紫外吸收和荧光反应，因此需要对样品进行衍生化处理将其转化为有紫外吸收和发射荧光的物质，衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。

1)柱前衍生：是样品在进入色谱柱之前，氨基酸经衍生化转变为适合反相高效液相色谱检测的物质，常用的衍生剂有丹酰氯、邻苯二甲醛、萘二甲醛等。

实验常用的色谱柱有C8柱、C18柱和CN柱，检测方法有HPLC-UV、HPLC-ELSD、HPLC-FLD、HPLC-MS等。

2)柱后衍生：是样品经离子交换柱分离，分离后的氨基酸再进行衍生化处理。

常用的柱后衍生化试剂有茚三酮和荧光胺，其中荧光胺的灵敏度比茚三酮高大约 3个数量级。

毛发水解氨基酸的分离与综合应用Separation and Comprehensive Applications of Hair Hydrolysis Amino Acids毛发中含有一些重要的氨基酸，如谷氨酸、苏氨酸、甘氨酸、琥珀酸、天冬氨酸等，它们可以把毛发水解变成氨基酸。

氨基酸的水解分离的原理，是利用前面提到的氨基酸的不同物理性质，其电荷性质，溶解性，亲水性，有机溶液以及溶剂的选择性等特点，利用不同的分离的条件来实现氨基酸的分离。

There are some important amino acids in hair, such as glycine, cysteine, proline, serine and threonine, which can hydrolyze hair into amino acids.The principle of hydrolysis and separation of amino acids is to use the different physical properties of the above mentioned amino acids, such as charge, solubility, hydrophilicity, organic solvent and selective solvents to realize the separation of amino acids.氨基酸的分离过程可以分为不同的步骤：1.预处理：这一步骤涉及氨基酸在粗提取后的准确测定，以及清洗毛细血管物质的溶解液；2.水解：首先将毛发放入含有氢氟酸的热温水溶液中，在加热蒸汽条件下进行水解，将有机化合物水解变为有机氨基酸；3.电泳分离：将水解产物通过电泳分离，分离出不同亲电性或疏电性的氨基酸；4.离子交换柱分离：用离子交换柱进一步将所有氨基酸进行分离，确保氨基酸的纯度；5.HPLC分离：最后，用HPLC对分离的氨基酸进行检查，以保证产品的质量。