蛹虫草培养基中虫草素的几种提取方法比较

蛹虫草虫草素研究进展蛹虫草，又称冬虫夏草，是一种珍贵的中药材，被誉为“软黄金”。

在现代医学研究中，蛹虫草已被发现含有多种生物活性成分，具有抗肿瘤、抗衰老、免疫调节等多种药理作用。

蛹虫草虫草素是蛹虫草中的一种重要成分，其研究进展备受关注。

本文将对蛹虫草虫草素的研究进展进行详细介绍，以期为蛹虫草的科学研究提供参考。

一、蛹虫草虫草素的提取方法蛹虫草虫草素是从蛹虫草中提取得到的一种生物活性成分，其提取方法对其质量和药效具有重要影响。

当前，主要的蛹虫草虫草素提取方法包括超声波提取、超临界流体提取、微波辅助提取等多种技术手段。

超声波提取是将蛹虫草粉末与溶剂放入超声波提取仪中，在超声波的作用下，促进溶剂与蛹虫草中的有效成分迅速混合，加速提取速度和提取效率。

超临界流体提取是利用超临界流体作为提取介质，通过调节温度和压力等条件，将蛹虫草中的虫草素迅速提取出来。

而微波辅助提取则是利用微波辐射加热来加速蛹虫草中虫草素的溶解和扩散，提高提取效率。

这些新型的提取方法在提高蛹虫草虫草素提取效率和药效方面发挥了积极作用。

蛹虫草虫草素是一种复杂的生物活性成分，其主要化学成分包括多种多糖、蛋白质、核苷酸、氨基酸等。

多糖是蛹虫草虫草素的主要成分之一，具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用。

蛋白质是蛹虫草虫草素的重要组成部分，具有抗菌、抗病毒、促进细胞再生等作用。

蛹虫草虫草素中还含有丰富的核苷酸和氨基酸，对人体健康具有重要作用。

研究蛹虫草虫草素的化学成分，有助于深入了解其药理作用和药效特点。

蛹虫草虫草素具有多种重要的药理作用，在现代医学研究中备受关注。

蛹虫草虫草素具有抗肿瘤作用。

研究表明，蛹虫草虫草素可以通过调节肿瘤细胞的生长周期、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞的增殖等多种途径发挥抗肿瘤作用。

蛹虫草虫草素具有抗炎作用。

实验研究表明，蛹虫草虫草素可以抑制体内炎症介质的分泌，减轻炎症反应，对炎症性疾病具有一定的防治作用。

蛹虫草虫草素还具有抗氧化、免疫调节、抗衰老等多种药理作用，为人体健康提供了全面的保护。

2019年第2020年第专dible 虫草素学名为3'-脱氧腺苷，分子式为C 10H 13N 5O 3，可以溶于水、乙醇、甲醇，但不溶于苯、乙醚等溶剂，属于嘌呤类生物碱。

1951年，CUNNINGHAM 等[1]从蛹虫草的培养滤液中，用离子交换树脂柱和活性炭柱层析法首次分离虫草素。

虫草素具有抑菌[2]、抗病毒[3-4]、调节机体免疫力[5]、抗恶性肿瘤[6]与治疗白血病[7]等多种功效。

虫草素的研究已成为生物医药及保健食品等领域中一个热点，尤其在临床抗肿瘤方面更为突出。

YOSHIKAWA 等[8]深入研究了虫草素对接种B16-BL6黑色素瘤细胞小鼠的影响，结果表明，将15mg /kg 的虫草素通过灌胃给药，可以有效抑制瘤块的生长，抑制率高达36%，而且并未在体内引发毒性反应，说明虫草素作为肿瘤药物制剂很安全。

丁蔚等[9]对40只小鼠做了对照试验，结果表明，虫草素可能通过PI3K/AKT/mTOR 通路有效抑制炎症反应，对亚硝基二乙基胺诱导的小鼠出现的原发性肝癌现象表现出了明显的防护作用。

LEE 等[10]进行了虫草素对促进人类结肠癌细胞凋亡的研究，结果显示，在虫草素治疗后的18h ，p53、Bax 、DR3、caspase-8、caspase -1、裂解的caspase-3、裂解的PARP 表达增加，表明虫草素可以诱导人类结肠癌细胞HT-29凋亡。

目前，虫草素主要通过以下几个方面获取：一是从蛹虫草或九州虫草等天然虫草的菌虫复合体中直接提取[11]；二是从固体或液体发酵培养物中提取[12]；三是人工化学合成，但化学合成工艺复杂，且投入的设备和化学试剂等成本相对昂贵[13]，产率也比较低[14]，所以很难实现大规模生产。

虫草素的广泛应用及在现代医药学上的卓著功效，使之价格越来越高。

当前，市场价格已达上千元每克（纯度98%以上）。

正因虫草素的贵而稀，其提取和分离纯化的研究成为当今的热点。

1虫草素的提取方法目前，虫草素较好的提取方法有微波辅助法、超声辅助法、超临界萃取法和加速溶剂萃取法等。

虫草素的检测提纯方法及药用价值提纯方法：1、虫草素的提取方法：以蛹虫草为材料采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4 种提取方法选择虫草素*提取方法,用正交试验方法考察水热回流法中提取温度、提取次数、提取时间、料液比4个因素对虫草素提取效率的影响,确定水热回流法是提取虫草素的*提取方法，其*工艺条件为：用10倍量的水于80℃热回流提取3次每次90 min。

2、虫草素的分离纯化方法：车振明等[26]经过对蛹虫草子实体及培养基的粉碎、石油醚脱脂、80℃～85℃水浴12 h、调节等电点沉淀、732-NH4离子交换树脂的分离、浓缩、4℃下低温结晶，得到一定纯度的虫草素晶体。

陈顺志等[27]以蛹虫草人工培养后的发酵物为原料，采用超临界技术萃取核苷类有效成分，并以乙醇等作为夹带剂减压分离获得核苷多组份及单体。

Cunnigham等[4]将虫草菌培养液经过滤后用活性炭吸附，再经过洗脱液洗脱和浓缩，得到虫草素晶体。

虫草素的检测方法：1、薄层层析法（TLC）雷帮星等将待虫草素待测样品与标准品点于已活化的薄层板上（1lO℃活化0．5 h ），待溶剂挥干后，在展开剂（氧仿:乙酸乙酯:异丙醇:水=8:2:6:0．3）中展开。

挥干展层剂，将其置紫外线分析仪上，254nm显色,计算标准品和样品中各点的相对迁移率Rf。

2、液相色谱法（HPLC）张嘉等以HPLC测定虫草素含量，其色谱条件：Symmetry C18（5 um,4．6×150 mm）色谱柱，流动相：磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（ph=6．8，加1％四氢呋喃），流速1．8 ml／min，检测波长：260 nm，进样量10 ul，灵敏度1．000AUFS，室温。

药用价值：1、免疫调节作用近年来，研究人员发现虫草素具有免疫调节作用。

它能够极大地提高了人外周血液单核细胞IL-10的分泌和IL-10mRNA的表达，同时，虫草素对诱导产生IL-2的植物血球凝集素和外周血液单核细胞扩增都有抑制作用，抗IL-10中性抗体也不能完全阻止虫草素对IL-2产生的抑制作用。

蛹虫草主要成分虫草素、腺苷提取方法对比作者：马麦艳张相锋焦子伟来源：《现代农业科技》2019年第05期摘要利用前期加速溶剂萃取法提取腺苷、虫草素的优化结果，分别挑选最优处理进行试验，即提取腺苷最适条件为温度70C、时间10min、乙醇含量20%、循环2次，提取虫草素最适条件为温度1009C、时间15min、乙醇含量0%.循环2次。

并将该方法与水热回流法、醇热回流法、超声水提法、超声醇提法4种传统方法进行比较，结果表明，加速溶剂萃取法明显优于其他传统4种方法，各个方法之间差异达显著水平（P<0.05）;加速溶剂荜取法提取腺苷效果最好，提取量为2118.07μg/g，提取效果最差的是超声波醇提法，提取量仅有180.72μg/g;加速溶剂萃取法提取的虫草素量为19678.70μg/g，超声波醇提法提取虫草素效果最差，提取量仅有4108.27μg/g;加速溶剂萃取法有其明显的优势，操作简单、方便快捷。

关键词蛹虫草;加速溶剂萃取法;虫草素;腺苷;成分提取中图分类号 TS264.3文献标识码 A文章编号 1007-5739（2019）05-0220-03虫草素（Cordycepin），全称3’一脱氧腺苷，分子式为C.gH3N，O3，是核苷类的一种，pH值偏碱性，常温下是固态晶体，性状为片状或针状，其熔点为230～231C"，溶于水、热乙醇和甲醇，不溶于苯、乙醚和氯仿等有机溶剂，紫外光最大吸收波长为259nm！2。

腺苷也是核苷类的一种，具有抑制中枢神经递质的释放、改善心脑血液循环等作用34。

一般提取虫草素的方法都能一并获得腺苷，已报道的传统提取方法有浸提法、超声法、索氏提取法、回流法、渗漉提取法等15日。

钟艳梅等叫以人工蛹虫草固定培养残基为原料，采用索式提取法提取虫草素，结果表明，水比乙醇更利于提取虫草素。

王英娟等8也采用超声法、回流法与提取溶剂水.乙醇组合的4种提取方法获得虫草素，结果表明，水热回流法效果最佳。

介绍虫草素提取途径与方法一、前言：虫草素(cordycepin)又称冬虫夏草素、虫草菌素、蛹虫草菌素，是冬虫夏草和蛹虫草中(尤其是核苷类)主要活性成分，也是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗生素。

虫草素一种天然来源的药物，具有中医医理中冬虫夏草一样的阴阳同补和双向调节人体平衡的功能;它在护肝、保肾、润肺方面由于成分更纯效果更好，而且大补气血，能消除现在不能治愈的痛经、偏头痛、颈椎增生等疾病。

从西医医理角度看虫草素具有抗肿瘤、抗衰老、抗菌、抗病毒、免疫调节、改善新陈代谢、清除自由基等多种药理作用，有良好的临床应用前景。

目前虫草素的研究现正成为药物化学、抗衰老、美容、保健品领域中一个极其活跃的领域。

二、虫草素药用价值：1、免疫调节作用近年来，研究人员发现虫草素具有免疫调节作用。

它能够极大地提高了人外周血液单核细胞IL-10的分泌和IL-10mRNA的表达，同时，虫草素对诱导产生IL-2的植物血球凝集素和外周血液单核细胞扩增都有抑制作用，抗IL-10中性抗体也不能完全阻止虫草素对IL-2产生的抑制作用。

在虫草素作用下，成熟树突状细胞能诱导调节性T细胞增殖，而且还能抑制细胞分裂，促进细胞的分化，改变胞膜上物质结构分布，对T淋巴细胞转化有促进作用，它还可以提高机体单核巨噬细胞系统的吞噬功能,激活巨噬细胞产生细胞毒素直接杀伤癌细胞。

2 、虫草素的抗肿瘤作用虫草素对肿瘤的抑制作用一直是广大科学家们关注的热点。

研究发现，用虫草素皮下注射接种了艾氏腹水癌的小鼠，可使小鼠中位生存期延长到60 d，而对照组仅为19 d，这说明虫草素对小鼠艾氏腹水癌有明显的抑制作用，能明显延长接种艾氏腹水癌小鼠的存活时间。

还有研究表明，虫草素对人鼻咽癌KB细胞和人宫颈癌HeLa细胞等皆具有明显的抑制作用。

科学家推测虫草素可能有3种抑制肿瘤的机制：一是虫草素的游离羟基可以渗入瘤细胞DNA中而发生作用；二是抑制核苷或核苷酸的磷酸化而生成二磷酸盐和三磷酸盐的衍生物,从而抑制瘤细胞的核酸的合成；三是阻断黄苷酸胺化形成鸟苷酸的过程。

蛹虫草虫草素研究进展一、蛹虫草素的提取方法蛹虫草素是从蛹虫草中提取的一种活性成分，具有明显的药用价值。

在过去的研究中，蛹虫草素的提取方法主要包括传统的水煎提取和现代的超声波提取、超临界流体提取等。

传统的水煎提取方法操作简单，但提取效率低，且对活性成分的破坏较大；而现代的超声波提取、超临界流体提取等方法能够提高提取效率，并减少对活性成分的破坏，因此在蛹虫草素的提取研究中得到了广泛的应用。

二、蛹虫草素的化学成分蛹虫草素是一类天然的活性化合物，其化学成分十分复杂，主要包括多糖类、蛋白质、氨基酸、核苷酸、甾醇类、萜类等。

多糖类、蛋白质和甾醇类是蛹虫草素中的主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、免疫调节等多种生物活性。

研究表明，蛹虫草素中的多糖类能够刺激机体免疫系统的活性，增强抗病能力；蛋白质具有促进组织修复和细胞再生的作用；甾醇类对肝脏、肾脏等器官具有保护作用，能够改善机体的代谢功能。

三、蛹虫草素的药理作用蛹虫草素具有多种药理作用，已被广泛应用于临床医学和保健品领域。

蛹虫草素具有明显的抗氧化和抗炎作用，能够清除体内的自由基，减少氧化损伤，防止炎症反应的发生。

蛹虫草素具有免疫调节作用，能够提高机体的免疫功能，增强抗病能力，对于调节免疫功能失调的疾病具有一定的辅助治疗作用。

蛹虫草素还具有抗肿瘤、抗衰老、保护肝肾等多种生物活性，为疾病的治疗和预防提供了新的思路和方法。

五、蛹虫草素的研究进展和展望近年来，随着科学技术的不断进步和研究者对蛹虫草素的重视，蛹虫草素的研究取得了长足的进展。

在蛹虫草素的提取方法方面，传统的水煎提取方法已不再能满足对蛹虫草素提取效率和质量的要求，现代的超声波提取、超临界流体提取等方法在提取效率和质量上具有明显优势，成为蛹虫草素提取的主要方法。

在蛹虫草素的化学成分和药理作用方面，研究者对蛹虫草素的活性成分和生物活性进行了深入研究，揭示了其丰富的化学成分和多种药理作用，为蛹虫草素的应用提供了更多的科学依据。

蛹虫草培养基中虫草素分离提取的工艺综述摘要：查阅了相关文献，对蛹虫草的化学成分及其药理作用、蛹虫草培养基的配制及蛹虫草的栽培作了简介。

对虫草素的物化性质及生理活性作了详细综述，并对虫草素分离提纯在国内外研究动态进行了介绍，从而为从蛹虫草培养基中分离虫草素的新工艺提供了分析资料。

关键词：蛹虫草培养基；虫草素；分离提取一、蛹虫草（一）蛹虫草的化学成分蛹虫草又名北冬虫夏草，与我国名贵中药材冬虫夏草为同属异种，属于真菌界子囊菌门麦角菌科虫草属。

在我国主要分布于吉林、河北、四川、湖南、湖北及山西等省。

北方民间曾把它当作冬虫夏草应用，《新华本草纲要》记载其“性平，味甘，有益肺肾，补精髓，止血化痰”。

用于肺结核、老人虚弱和贫血等症状，为珍贵的中药材。

国内外学者对其化学成分、生理活性进行了较系统的研究，也从中分得了大量单体化合物。

姜泓等从其子实体中分离出7个化合物，分别鉴定为3ˊ-脱氧腺苷，腺苷、N6-甲基腺苷、O5-乙酰基虫草素、N6-[β-（乙酰胺甲酰）氧乙基]腺苷、虫草环肽A和麦角甾醇过氧化物。

实体中还包括虫草酸（D-甘露醇）、虫草多糖等多种有效成分，其中Zn/Cu=4.3，为人参的1.4倍，为黄芪等补益药的2.8倍。

核苷类衍生物是蛹虫草重要的活性成分，虫草素是虫草最重要的活性成分之一，是虫草中的一种腺苷类结构类似物，具有显著的药理作用。

（二）蛹虫草的药理作用蛹虫草由虫草属真菌寄生在鳞翅目、鞘翅目及双翅目的一些昆虫的蛹或幼虫体上，使虫体僵死，抽生出子座而形成的。

对它的药理作用方面，2006年文庭池进行了比较详细的概述，认为蛹虫草具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老等作用。

中医认为，虫草入肺肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，阳痿遗精，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，劳咳痰血，自汗盗汗等，是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。

蛹虫草含有8种维生素，具有调节神经系统的作用，对植物神经系统具有外周抗胆碱作用，能降低副交感神经兴奋性。

高效液相法对蛹虫草中虫草素的提取及含量测定
赵宇英
【期刊名称】《中国新技术新产品》
【年(卷),期】2022()14
【摘要】该文主要建立高效液相色谱法测定蛹虫草样品中虫草素的分析方法。

样品先使用15mL的20%乙醇水溶液,在40℃条件下超声提取3h后,再定容至20mL,最后通过高效液相色谱仪经由Sunfire C18色谱柱分离、外标法进项定量。

结果显示,这3种培养基质培养的蛹虫草样品中,虫草素线性范围为
5.0μg/mL~100.0μg/mL,方法相关性好(R^(2)=0.999834),方法检出限为
7.5mg/kg,定量限为22.5mg/kg,相对标准系数(relative standard deviation,RSD)为0.31%~0.42%,回收率范围为97.64%~98.40%(n=12)。

该方法的准确度高、线性良好、操作简单、检出限低,测试样品的精密度和回收率符合要求,能有效测定蛹虫草中虫草素的含量。

【总页数】3页(P85-87)
【作者】赵宇英
【作者单位】厦门市食品药品质量检验研究院
【正文语种】中文
【中图分类】O657
【相关文献】
1.高效液相色谱法同时测定蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量
2.反相高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷和虫草素的含量
3.固相萃取-高效液相色谱法测定蛹虫草中虫草素的含量
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5.蛹虫草培养残基中虫草素的水热回流提取及含量测定
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蛹虫草废弃培养残基中虫草素的提取工艺研究李辰;吴盼盼;卿宁;梁硕;黄俊添【摘要】优化并比较了微波辅助和超声波辅助提取蛹虫草培养残基中虫草素的工艺方法.采用L 9（34）正交试验设计,考察了料液比（g：mL）、乙醇含量（%）、微波功率（微波法）或提取温度（超声波法）、提取时间等4个因素对虫草素提取率的影响.结果表明：微波提取以25倍料液比、40%乙醇、240 W下微波提取1.5 min,提取2次为最佳工艺,该条件下浸膏得率为28.33%,虫草素含量为0.378 mg/g;超声波提取在45 kHz功率下,以25倍料液比、40%乙醇、60℃下超声提取30 min,提取2次为最佳工艺,该条件下浸膏得率为38.24%,虫草素含量为0.362 mg/g.比较了超声波提取2次、微波提取2次、微波—超声波联合提取以及超声—微波联合提取等方式对虫草素的提取效率,最终确定微波提取2次为最佳工艺,该工艺适用于蛹虫草培养残基中虫草素的快速高效提取.%Microwave-assisted extraction （MAE） extracting cordycepin from deserted solid medium and ultrasonic-assisted extraction （UAE） for of Cordyceps were optimized and compared. The solvent quantum to solid medium （g：mL）, ethanol content （%）, microwave power （W）（in MAE） or extraction temperature （~C）（in UAE） and extraction time （rain）, etc, were reviewed using the L9（34） orthogonal design test. The extraction conditions of MAE and UAE method were both optimized. The results showed that the optimum process conditions were as follows： adding 25 folds of 40% ethanol, extracting for 1.5 min under 240 W power in MAE, two times, the extraction yield of cordycepin from the deserted solid medium was 0.378 mg/g with extractum yield at 28.33% in this process;adding 25folds of 40% ethanol, extracting for 30 min at 60 ~C in UAE, two times, the extraction yield of cordycepin from the deserted solid medium was 0.362 mg/g with extractum yield at 38.24% in this process. The MAE, UAE and eombined extraction of MAE and UAE were all developed and compared, and MAE was confirmed and chosen as the optimal method for more efficient, simpler and faster extraction of cordycepin. This developed technology is proper for the rapid and efficient extraction of cordycepin from discarded solid medium of cuhured Cordyceps.【期刊名称】《五邑大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(026)003【总页数】7页(P35-41)【关键词】蛹虫草;培养残基;虫草素;微波;超声波【作者】李辰;吴盼盼;卿宁;梁硕;黄俊添【作者单位】广东工业大学轻工化工学院,广东广州510006 五邑大学化学与环境工程学院,广东江门529020;广东工业大学轻工化工学院,广东广州510006;五邑大学化学与环境工程学院,广东江门529020;江门市新会区现代农业发展有限公司,广东江门529100;江门市新会区现代农业发展有限公司,广东江门529100【正文语种】中文【中图分类】R914.4;O657.7虫草是我国的一种名贵传统药用真菌，冬虫夏草因生境特殊、寄主专一而难以人工培养，但蛹虫草较易进行人工发酵培养. 虫草活性成分包括虫草素、腺苷、多糖、氨基酸等，其中虫草素具有抑菌、抗肿瘤、抑制病毒、增强免疫等多种生物活性[1-2]. 由于虫草素的合成路线较复杂、成本高[3]，目前虫草素仍主要由人工蛹虫草子实体中提取而来. 然而，虫草素在天然及人工培养的虫草体内的含量很低，仅为0.02%～0.3%[4]，因此，从蛹虫草或其培养残基中提取虫草素、腺苷等有效成分制备高附加值精细化学品的提取分离技术便成为近年来的研究热点之一[5-6]. 目前，虫草素的提取方法有水热回流法[7]、醇热回流法、微波提取法[8]、超声波提取法[9]、微波—超声波协同提取法[10]、超临界流体提取法[11]等. 由于虫草子实体生产成本高、产量低，导致虫草素价格昂贵，目前子实体价格在每千克600.00元以上. 虫草培养残基除少量用作饲料外，大部分被废弃，其价格约为子实体成本的1%，因此尽管虫草培养残基中虫草素的含量低于或相当于子实体中虫草素的含量，但从培养残基中提取虫草素的研究愈来愈多[12-13]. 本文旨在研究从虫草培养残基中快速高效提取虫草素的工艺条件，以促进蛹虫草副产品资源的开发利用.Finnigan Surveyor高效液相色谱仪（美国Thermo Scientific公司），WBFY 201型微波反应器（巩义市科瑞仪器有限公司），KQ-300VDV型双频数控超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司），BZF50型真空干燥箱（上海博迅实业有限公司），旋转蒸发仪RE-52A型（巩义市英峪予华仪器厂），SHZ-D（Ⅲ）循环式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂），EL204电子天平（梅特勒-托利多），QE-200万能粉碎机（浙江屹立工贸有限责任公司）.蛹虫草大米培养残基（广东新会农业基地提供），虫草素对照品（批号858—200202，中国药品生物制品检定所).甲醇（色谱纯，美国Burdick & Jackson公司），无水乙醇（分析纯，广州化学试剂二厂），石油醚（分析纯，60～90℃，汕头西陇化工股份有限公司），液相色谱用水由Millipore公司的Simplicity超纯水仪制备.2.1.1 虫草培养残基预处理将虫草大米培养残基样品进行真空干燥（60 ℃），经万能粉碎机粉碎，过筛，选60～100目的颗粒，加入60～90℃石油醚回流脱酯处理2 h，将脱脂后的样品过滤、风干.2.1.2 微波和超声波提取正交试验设计为得到最大的提取效率，在单因素试验的基础上，用正交试验分别考察微波和超声波提取两种工艺方法. 采用L9(34)正交试验设计，考察了影响提取效率的料液比（g:mL）、乙醇含量（%）、微波功率（微波法）或提取温度（超声波法）、提取时间等4个因素，因素水平设计见表1.2.1.3 微波提取准确称取处理后的样品2.000 0 g放入250 mL具塞三角瓶中，加入50 mL 40%乙醇水溶液，再置于微波反应器中，240 W下微波提取1.5 min，提取2次. 减压抽滤，合并两次提取滤液，将滤液减压浓缩定容至50 mL.2.1.4 超声波提取准确称取处理后的样品2.000 0 g放入250 mL具塞三角瓶中，加入50 mL 40%乙醇水溶液，超声频率45 kHz、温度60℃下超声提取30 min，提取2次. 减压抽滤，合并两次提取滤液，将滤液减压浓缩定容至50 mL.2.1.5 微波、超声波联合提取法考察微波和超声波联用后的提取效果，其中一组实验先以微波提取后再以超声波提取，另一组实验先以超声波提取后再以微波提取，微波提取方法按2.1.3进行，超声波提取方法按2.1.4进行，比较两组实验与单独微波提取2次或单独超声波提取2次的提取效率.标准曲线制作：准确称取2.2 mg虫草素标准品，以纯水溶解并定容于10 mL容量瓶，虫草素储备液浓度为0.22 mg/mL，于4℃冰箱中放置，使用前，以纯水稀释至所需标准溶液质量浓度. 以虫草素质量浓度（mg/mL）为横坐标、峰面积为纵坐标作图，得到虫草素标准曲线，值为0.999 5. 将定容后的提取液过0.45 µm的微孔滤膜后进行HPLC分析.HPLC分析条件如下：Eclipse XDB-CN色谱柱，规格150 mm×4.6 mm，5 μm （Agilent公司）；柱温30℃；流动相中；流速为1.0 mL/min；DAD扫描范围200～400 nm，定量检测波长260 nm；进样量5 μL. 虫草素含量按式（1）计算.3.1.1 乙醇含量通过单因素试验发现，提取溶剂中乙醇含量对虫草素提取效果的影响较为显著. 在提取料液比为1:25、微波提取时间1.5 min、功率400 W不变条件下，考察乙醇体积分数20%、30%、40%、50%时对虫草素提取效率的影响，由2.2分析后按式（1）计算，虫草素含量分别为：0.313、0.358、0.392和0.345 mg/g，故提取液乙醇含量为40%时提取率较高，选择乙醇含量30%、40%、50%作正交试验的3个水平.3.1.2 料液比通过单因素试验可知虫草素含量随料液比的增加先增大后减小. 在提取溶剂为40%乙醇、微波提取时间1.5 min、功率400 W不变条件下，考察料液比为1:10、1:15、1:20、1:25、1:30时对虫草素提取效率的影响，经计算可知虫草素含量分别为：0.193、0.238、0.325、0.362、0.315 mg/g，故料液比为1:25时提取率较高，考虑到成本和后续处理难易程度，选择料液比1:15、1:20、1:25作正交试验的3个水平.3.1.3 正交提取试验按照表1设计方法进行正交试验，结果列于表2. 由表2中极差结果可知，各因素作用主次为，即提取料液比影响最大，提取溶剂中乙醇含量影响次之，而微波提取时间和微波功率影响较小. 由表3微波法方差分析结果可知，因素A的值为106.104(>19.0)，在4个影响因素中具有显著性差异；因素B的值为10.792，与因素C和D相比，B对提取结果的影响有一定的差异性. 实验结果表明为最优工艺条件，即以25倍料液比、40%乙醇于240 W下微波提取1.5 min.3.1.4 验证实验由于表2中没有A3B2C1D2最佳工艺条件的实验，因此须做该工艺条件下的验证性实验. 按该条件，平行微波提取3份样品，浸膏得率平均值为28.33%，培养残基样品中虫草素含量为0.378 mg/g. 实验表明：蛹虫草培养残基经微波提取2次后，其提取液中虫草素的含量已极低，考虑成本和时间，提取2次即可.3.2.1 单因素试验参考微波提取法正交试验结果，提取料液比和提取溶剂中乙醇含量可能为影响提取率的主要因素，故在超声频率45 kHz、超声时间40 min和超声提取温度50℃不变条件下，分别进行料液比（1:15、1:20、1:25）和提取溶剂中乙醇含量（20%、30%、40%、50%）的单因素试验. 结果发现料液比为1:25、乙醇含量为40%时虫草素提取率较高. 为便于同微波辅助提取法比较，亦选择1:15、1:20、1:25为提取料液比的3个水平，30%、40%、50%为提取液乙醇含量的3个水平进行正交试验.3.2.2 正交提取试验按照表1设计方法进行正交试验，结果列于表4. 由表4结果可知，溶剂中乙醇含量增加从某种程度上增加了虫草素的溶出度，40%乙醇提取剂与虫草素的极性相近，故提取率最高. 由分子热运动规律可知，在一定范围内，温度升高有利于虫草素的提取；然而，温度过高使得虫草素可能受热分解，因此继续增加温度至70℃后虫草素含量反而降低，故选择60℃为优化后的超声提取温度. 由于提取时间增加至30 min后提取率变化不大，考虑到虫草素含量和操作时间，选择超声提取30 min即可.由表4中极差结果可知，各因素作用主次为. 与微波提取相似，超声波提取法也是提取料液比影响最大，其次是提取液乙醇含量和提取温度，提取时间影响最小，最佳工艺组合为，即超声频率固定在45 kHz不变，以25倍料液比的40%乙醇水溶液，于60℃下超声提取30 min即可. 由表5超声波提取法方差分析结果可知，因素A和因素B的值大于19.0，与因素C和D相比，它们具有显著性差异.3.2.3 验证实验平行称取3份样品，按工艺水平进行超声波提取验证实验，结果提取浸膏得率平均值为38.24%，培养残基样品中虫草素含量为0.362 mg/g. 实验发现，蛹虫草培养残基经超声波提取2次后，提取液中虫草素含量已极低，考虑到成本和时间，提取2次即可.上述实验结果表明：微波辅助和超声波辅助提取虫草培养基中的虫草素均可获得较好的效果. 两种提取方法均采用25倍量的40%乙醇水溶液作为提取溶剂，故考虑将两种提取方法联用以考察虫草素提取率是否有提高.具体做法：称取经2.1.1预处理后的样品4份，每份2.000 0 g，分别置于250mL具塞三角瓶中，其中2份先微波提取后再以超声波提取，另外2份先超声波提取后再以微波辅助法提取，微波提取条件按3.1优化后的工艺条件，超声波提取条件按3.2优化后的工艺条件进行. 结果表明：先微波提取后超声波提取的虫草素含量为0.355 mg/g；先超声波提取后微波提取的为0.367 mg/g，与单独用微波提取2次（0.378 mg/g）或单独超声波提取2次（0.362 mg/g）的结果接近，无显著不同. 鉴于超声波提取一次需30 min，而微波提取一次仅需1.5 min，且微波提取浸膏中虫草素的含量更高，故选择微波提取2次为最佳提取方案. 本方法提取蛹虫草培养残基中虫草素的提取率与文献方法相当，但无需特殊设备如微波—超声波协同提取仪或超临界流体提取仪等，采用普通微波反应器即可（笔者曾以家用微波炉提取，发现提取效果近似）.通过正交试验分别优化了微波提取和超声波提取蛹虫草培养残基中虫草素的工艺条件，比较了微波提取2次、超声波提取2次、微波—超声波联合提取以及超声波—微波联合提取虫草素的结果，最终确定微波提取2次比其他提取方式更佳：用时仅数分钟，虫草素提取效率较高. 优化后的工艺条件：以25倍料液比的40%乙醇于240 W功率下微波提取1.5 min，提取2次. 该工艺操作简便、仪器易得、提取迅速，可作为蛹虫草及其培养残基中虫草素的快速高效提取方法，能为虫草系列产品的开发奠定一定基础.致谢感谢合作导师广东工业大学轻工化工学院张焜教授对本文工作给予的帮助和指导.【相关文献】[1] CHEN Ying, CHEN Yungchia, LIN Yentung, et al. Cordycepin induces apoptosis of CGTH W-2 thyroid carcinoma cells through the calcium−calpain−caspase 7-PARP pathway [J]. Journal of Agriculture and Food Chemistry, 2010, 58 (22): 11645–11652.[2] KIM H G, SHRESTHA B, LIM S Y, et al. Cordycepin inhibits lipopolysaccharide induced inflammation by the suppression of N F-kappa B through Akt and p38 inhibition in RAW 2647 macrophage cells [J]. European Journal of Pharmacology, 2006, 545(2-3): 192-199.[3] 涂红艳，李啸风，吕秀阳. 虫草素的化学合成进展[J]. 化工时刊，2006, 20(2): 66-69.[4] 刘艳芳，唐庆九，杨焱，等. 蛹虫草及其培养基中主要核苷类成分的分析比较[J]. 食品科学，2010, 31(4): 139-142.[5] 张丽艳，李盈盈，张凤梅，等. 阳离子树脂对蛹虫草废弃培养料中虫草素吸附特性研究[J]. 福建师范大学学报：自然科学版，2010, 26(4): 101-104.[6] NI He, ZHOU Xiaohong, LI Haihang, et al. Column chromatographic extraction and preparation of cordycepin from Cordyceps militaris waster medium[J]. 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蛹虫草中虫草素、虫草多糖综合提取工艺研究
王英娟;李多伟;王义潮;郑婷婷
【期刊名称】《西北植物学报》
【年(卷),期】2005(25)9
【摘要】以蛹虫草为材料,采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4种提取方法选择虫草素和虫草多糖的最优提取方法,并用正交试验方法考察水热回流法中提取温度、提取次数、提取时间、料液比4个因素对虫草素、虫草多糖综合提取效率的影响,以确定从蛹虫草中综合提取虫草素、虫草多糖最佳工艺.结果表明,水热回流法是提取虫草多糖和虫草素的最优提取方法,其最佳工艺条件为:用10倍量的水于80℃热回流提取3次,每次90 min.
【总页数】5页(P1863-1867)
【作者】王英娟;李多伟;王义潮;郑婷婷
【作者单位】西北大学,生命科学学院,西安,710069;西北大学,生命科学学院,西安,710069;西北大学,生命科学学院,西安,710069;西北大学,生命科学学院,西
安,710069
【正文语种】中文
【中图分类】Q949.325
【相关文献】
1.蛹虫草虫草素和虫草多糖综合提取工艺的研究 [J], 祁波
2.正交设计优选蛹草拟青霉中虫草素和虫草多糖的提取工艺 [J], 黄婷婷;马云淑;阳
丹;王维丽;谭麒冉
3.蛹虫草中虫草素、腺苷综合提取工艺研究 [J], 韩建华;杨淑芳;孙继红;任连富;吕贵仁
4.蛹虫草多糖及虫草素的综合提取工艺优化 [J], 吐尔尼散·吐地;张忠;严培兰;周帅;张勉;唐庆九
5.蛹虫草菌渣中虫草素、多糖、多肽综合提取分离的工艺研究 [J], 雷燕妮;张小斌;陈书存;刘长霞;李多伟
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蛹虫草虫草素研究进展蛹虫草（Cordyceps sinensis）是一种珍贵的药用真菌，世界自然保护联盟将其列为濒危物种。

蛹虫草寄生在高原冬虫夏草的干体上，由于其生长条件十分苛刻和寄生范围狭窄，导致其自然产量及采收十分有限，因此价格昂贵。

蛹虫草虫草素是蛹虫草的有效成分之一，具有多种生物活性，对生物的免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、降血糖等方面均有一定的作用。

近年来，蛹虫草虫草素的研究备受关注，本文将对其研究进展进行综述。

1. 蛹虫草虫草素的结构与生物学活性蛹虫草虫草素是一种高分子多糖，具有广谱的生物学活性。

其结构主要分为两大类，分别是α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖类多糖。

此外，蛹虫草虫草素中还含有丰富的氨基酸、三萜类化合物、生物碱等化学成分。

蛹虫草虫草素具有多种生物学活性，包括抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节等方面。

蛹虫草虫草素对肿瘤细胞具有明显的抗增殖作用，可诱导肿瘤细胞凋亡，同时还可抑制新生血管的形成，具有抗肿瘤的潜力。

此外，蛹虫草虫草素还可提高机体免疫力，促进巨噬细胞和T淋巴细胞的活性，有助于抵御病毒和细菌的侵袭。

目前，蛹虫草虫草素的制备与提取方法主要有两个途径，分别是：从天然蛹虫草中提取和通过发酵工艺生产。

从天然蛹虫草中提取蛹虫草虫草素，需要先将其干燥、粉碎成细粉，再使用水、酸、碱等溶剂进行提取。

其中，水提取得到的多糖含量最高，达到了30%左右，但需要较长的提取时间。

而酸、碱提取则可大大缩短提取时间，但会对多糖的结构和生物活性造成不同程度的损失。

通过发酵工艺生产蛹虫草虫草素，可以保证其品质和稳定性。

目前采用发酵生产蛹虫草虫草素的方法有很多，例如利用Aspergillus oryzae、Bacillus subtilis、Penicillium chrysogenum等微生物进行发酵。

不同的发酵条件和菌株会对产物的含量和生物活性产生不同的影响，因此需要对发酵条件进行优化和调整，以获得最佳的生产效果。

西北植物学报Κ2005Κ25;9ΓΠ1863—1867A ctaB ot.B orea l.-O cciden t.S in.文章编号Π100024025;2005Γ0921863205蛹虫草中虫草素、虫草多糖综合提取工艺研究Ξ王英娟Κ李多伟Κ王义潮Κ郑婷婷;西北大学生命科学学院Κ西安710069Γ摘　要Π以蛹虫草为材料Κ采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4种提取方法选择虫草素和虫草多糖的最优提取方法Κ并用正交试验方法考察水热回流法中提取温度、提取次数、提取时间、料液比4个因素对虫草素、虫草多糖综合提取效率的影响Κ以确定从蛹虫草中综合提取虫草素、虫草多糖最佳工艺Λ结果表明Κ水热回流法是提取虫草多糖和虫草素的最优提取方法Κ其最佳工艺条件为Π用10倍量的水于80℃热回流提取3次Κ每次90m inΛ关键词Π蛹虫草Μ虫草素Μ虫草多糖Μ提取工艺Μ正交试验法中图分类号ΠQ949.325 文献标识码ΠAI n tegra ted Extracti ng Technology of Cordycep i n andPolysacchar ides i n Cordycep s m ilita risW AN G Y ing2juanΚL ID uo2w eiΚW AN G Y i2chaoΚZH EN G T ing2ting;Co llege of L ife SciencesΚN o rthw est U niversityΚX iπan710069ΚCh inaΓAbstractΠSup erson ic w ater ex tracti onΚsuperson ic ethano l ex tracti onΚhydro ther m al reflux ing ex tracti on and ethano l ther m al reflux ing ex tracti on w ere screened w ith Cordy cep s m ilita ris to find ou t w h ich of them w ou ld be the op ti m al m ethod to ex tract co rdycep in and po lysaccharides and an o rthogonal experi m en t w as carried ou t to study the in tegrated effects of the tem peratu reΚnum berΚperi odΚraw m aterial2ex tracting so lu2 ti on rati o of hydro ther m al reflux ing ex tracti on on the ex tracting rates of co rdycep in and po lysaccharide and thu s find ou t the best in tegrated techno logy to ex tract co rdycep in and po lysaccharide from Cordy cep s m ili2 ta ris.T he resu lts show ed that hydro ther m al reflux ing ex tracti on w as the best ex tracti on m ethod of co rdy2 cep in and po lysaccharide and its op ti m al techno logical conditi on s w ere that the ex tracti on w ere run th ree ti m es w ith the raw m aterial2w ater rati o at1 10and it lasted90m inu tes each ti m e.Key wordsΠCordy cep s m ilita risΜco rdycep inΜpo lysaccharideΜex tracting techno logyΜo rthogonal experi m en t 蛹虫草[Cordy cep s m ilita ris;F r.ΓL ink.]Κ别名北虫草Κ属子囊菌亚门;A scom yxo tinaeΓ麦角菌科;C lavici p itaceaeΓ虫草属[1]Κ与冬虫夏草同属Κ是一种具有滋补作用的中药和营养品Κ其所含的虫草素、虫草多糖具有独特的药理及保健功效Π虫草素具有抗病毒、抑菌、明显抑制肿瘤生长Κ与环磷酰胺有明显的协同作用Κ并有降血糖的作用Μ虫草多糖具有提高机体免疫功能Κ抑制肿瘤作用[2～5]Λ近年来蛹虫草受到了广泛关注Κ并大面积地种植开发Κ已有大量药品、保健食品上市Λ为了更好地开发利用蛹虫草资源Κ本研究采用正交试验对蛹虫草中虫草素、虫草多糖综合提取工艺进行了深入研究Κ为进一步开发利Ξ收稿日期Π2004211205Μ修改稿收到日期Π2005208211基金项目Π陕西省科技攻关项目[2004ΚK2G12;7Γ]Μ西北大学校基金资助项目;2005ΚNW0036Γ作者简介Π王英娟;1971-ΓΚ女Κ陕西泾阳人Κ讲师Κ硕士研究生Κ从事生物技术研究工作Λ用提供有价值的参考数据Λ1　材料与方法1.1　材料和仪器 1525型高效液相色谱系统;美国W aters公司Γ由1525型液压恒波泵、2487双通道紫外检测器和B reeze系统软件组成Μ三用恒温水浴箱;北京ΓΜSH Z295型循环水真空泵;河南ΓΜUV2265型分光光度计;日本Sh i m adzu公司ΓΜR E252A型旋转薄膜蒸发器;上海ΓΜJA2003型电子天平;上海ΓΜH S3120型超声萃取器Λ蛹虫草由江苏虫草种植基地提供Κ样品均于70℃干燥后研成粉末待用Λ虫草素对照品为Sigm a公司产品Μ所有化学试剂均为分析纯Λ1.2　方　法1.2.1　分析测试方法　用H PL C法测虫草素含量[6]Κ用苯酚2硫酸法测虫草多糖含量[7]Λ1.2.2　单因素确定虫草素最佳提取方法　水热回流提取法Π取蛹虫草粉末2.50gΚ用50mL蒸馏水于95～100℃热回流提取2hΚ重复提取3次Κ合并滤液Κ用水定容至200mLΛ醇热回流提取法Π取蛹虫草粉末2.50gΚ用50 mL50%乙醇80℃热回流提取2hΚ重复提取3次Κ合并滤液Κ用50%乙醇定容至200mLΛ超声波水提法Π取蛹虫草粉末2.50gΚ用50mL 蒸馏水Κ超声波提取30m inΚ重复提取3次Κ合并滤液Κ用水定容至200mLΛ超声波醇提法Π取蛹虫草粉末2.50gΚ用50mL 50%乙醇Κ超声波提取30m inΚ重复提取3次Κ合并滤液Κ用50%乙醇定容至200mLΛ1.2.3　单因素确定虫草多糖最佳提取方法　水热回流提取法Π取蛹虫草粉末10.00g用10倍量蒸馏水95～100℃热回流提取2hΚ重复提取3次Κ合并滤液Κ减压浓缩至1∶1;w vΓΚ冷却后加入3倍量乙醇使其沉淀Κ浸出上清液Κ沉淀再加少量水溶解Κ加入2倍量使其沉淀Κ重复3次Κ将最后的沉淀物用蒸馏水溶解Κ并定容于50mL容量瓶中;用于测定虫草多糖ΓΛ所有乙醇上清液合并Κ并用水定容至200 mL;用于测定虫草素ΓΛ醇热回流提取法Π取蛹虫草粉末10.00gΚ用100mL50%乙醇80℃热回流提取2hΚ重复提取3次Κ合并滤液Κ以下同上Λ超声波水提法Π取蛹虫草粉末10.00gΚ用100 mL蒸馏水Κ超声波提取30m inΚ重复提取3次Κ合并滤液Κ以下同上Λ超声波醇提法Π取蛹虫草粉末10.00gΚ用100 mL50%乙醇Κ超声波提取30m inΚ重复提取3次Κ合并滤液Κ以下同上Λ1.2.4　虫草素、虫草多糖最佳提取条件　用正交试验法L9;34Γ对水热回流提取法中4个因素;提取温度A、提取次数B、提取时间C及料液比DΓΚ分别取3水平对虫草素、虫草多糖综合提取的影响Κ以确定最佳提取条件ΛL9;34Γ正交试验条件因素见表1Λ表1　正交试验条件因素T able1　T he conditi ons of the o rthogonal test水平编号L evel code A提取温度A Extracti ontemperature;℃ΓB提取次数B Extracti onnum berC提取时间C Extracti onperi od;m inΓD料液比D R ati o of raw m aterialto extracting so luti onraw;w vΓ1602601∶10 2803901∶20 310041201∶301.2.5　统计分析　超声波水提法、超声波醇提法、醇热回流提取法和水热回流提取法分别进行5次;n =5Γ平行实验Κ进行R SD分析Κ并对得率平均值进行相对比较Κ确定综合提取最佳方法Μ在最佳方法提取中以L9;34Γ正交试验的方差分析法Κ确定综合最佳提取条件Λ2　结果与分析2.1　4种提取方法结果比较 分别用4种方法对虫草素、虫草多糖最佳提取条件进行研究Κ结果见表2、表3Λ由表2可知Κ4种方法都可用于虫草素的提取Κ与其它3种方法相比Κ超声波醇提法略优Κ提取效率分别高出4.35%、7.25%、11.59%Κ说明4种方法对虫草素的提取效率基本一致Λ由表3可知Κ水热回流提取法对虫草多糖提取优于其它3种方法Κ提取效率比其它3种方法分别高出98.01%、77.86%、99.00%Κ说明超声波水提法、超声波醇提法和醇热回流提取法均不利于虫草多糖的提取Λ综合分析表2、表3结果Κ水热回流提取法既有利于虫草多糖的提取Κ又有利于虫4681西　北　植　物　学　报25卷草素的提取Κ故对蛹虫草虫草素、虫草多糖的综合提取应选择水热回流提取法Λ2.2　虫草素、虫草多糖综合提取条件选择用水热回流提取法进行L 9;34Γ正交试验Κ结果见表4Μ虫草素、虫草多糖得率直观分析结果分别见表5、表6Μ方差分析结果见表7、表8Λ56819期王英娟Κ等Π蛹虫草中虫草素、虫草多糖综合提取工艺研究表6　虫草多糖得率直观分析结果T able6　Po lysaccharide yields in the variance analysis数据来源D ata source A B C DK19.7710.5711.0211.02 K211.4911.1211.1511.12 K312.0611.6311.1511.18 k13.2566673.5233333.6733333.673333 k23.8300003.7066673.7166673.706667 k34.0200003.8766673.7166673.726667 K21+K22+K23372.9166370.6362370.0854370.0872 R124.3055123.5454123.3618123.3624 S0.9477890.1873560.0037560.004356表7　虫草素得率方差分析结果T able7　V ariance analysis of the co rdycep in yields方差来源V ariance source偏差平方和M ean deviati onsquare sum自由度D egree offreedom平均偏平方和M ean squareF值F valueA0.00039520.000197444.2533B4.42E20522.21E20549.753C8.89E20724.44E2071D1.62E20528.11E20618.25e8.89E20724.44E2071 注ΠF0.01≅2Ψ2Σ=99[F0.05≅2Ψ2Σ=19.0[F0.1≅2Ψ2Σ=9.0[e为误差[3为显著[33为极显著ΖN o tesΠF0.01≅2Ψ2Σ=99[F0.05≅2Ψ2Σ=19.0[F0.1≅2Ψ2Σ=9.0[e stands fo r erro rΜ3m eans significanceΜ33m eans extrem e significance.表8　虫草多糖得率方差分析结果T able8　Po lysaccharide yields in the variance analysis方差来源V ariance source偏差平方和M ean deviati onsquare sum自由度D egree offreedom平均偏平方和M eansquareF值F valueA0.94748920.473744252.2933 B0.18735620.09367849.893 C0.00375620.0018781D0.00435620.0021781.16 e0.00375620.0018781 从表5、7直观及方差分析结果可知ΠR值由大到小依次为A、B、D、C因素Κ其中A因素有极显著意义;FµF0.01ΓΚB因素有显著意义;F0.05<F< F0.01ΓΚC因素和D因素无显著性意义;F<F0.1ΓΛ说明对虫草素得率影响程度依次为提取温度、提取次数、提取时间及料液比Κ其中A、B因素为主效因素Λ根据各因素k的变化率可以看出各因素的最佳因素搭配为A2B2C1D3Λ从表6、8直观及方差分析结果可知Π和对虫草素得率影响一样ΚR值由大到小依次为A、B、D、C 因素ΜA因素有极显著意义;FµF0.01ΓΚB因素有显著意义;F0.05<F<F0.01ΓΚC因素和D因素无显著性意义;F<F0.1ΓΛ考查对虫草多糖得率影响时ΚA、B 因素仍为主效因素Κ即对虫草多糖得率影响最大的为提取温度、次数Κ提取时间及料液比则为次要因素Κ不同于对虫草素得率影响的是在次要因素水平上略有差异Λ根据各因素k的变化率选出影响虫草多糖得率最佳因素搭配为A2B2C2D2Λ在综合提取虫草素、虫草多糖时Κ从以上表及分析中可以看出影响虫草素、虫草多糖得率的主效因素是提取温度A、提取次数BΚ而提取时间C及料液比D影响较小Λ故综合提取时Κ考虑到提取效率以6681西　北　植　物　学　报25卷及经济可行Κ在保证主效因素水平时将提取时间C 及料液比D 分别选择水平2和1Λ所以其综合提取最佳条件为A 2B 2C 2D 1Κ即用10倍量的水于80℃热回流提取3次Κ每次90m in Λ3　结　论;1Γ虫草素、虫草多糖是蛹虫草中最主要的2种有效成分Κ在单项利用中应考虑其综合提取Κ以充分利用蛹虫草资源Κ减少不必要的损失Λ;2Γ水热回流提取法既有利于虫草多糖的提取Κ又有利于虫草素的提取Κ故对蛹虫草虫草素、虫草多糖的综合提取应选择水热回流提取法Λ由于50%乙醇不利于多糖的提取Μ虽然超声波提取具有加速植物中有效成分进入溶剂Κ增加提取率等诸多有利因素Κ但在实验中由于多糖提取温度是主要影响因子Κ而超声波所产生温度仅能达到50℃左右Κ这不利于多糖溶解Κ从而排除了超声波水提法、超声波醇提法和醇热回流提取法Λ;3Γ用水热回流提取法对蛹虫草虫草素、虫草多糖综合提取的最佳条件为10倍量的水于80℃热回流提取3次Κ每次90m in Λ后期实验结果表明此条件省时、节能和提取效率高Λ参考文献Π[1]　魏景超.真菌鉴定手册[M ].上海Π上海科学技术出版社Κ1979Π331-333.[2]　PEN G G P ;彭国平ΓΚL I H Y ;李红阳Γ.T he comparative components betw een aw eto and Cordy cep s m ilita ris L .ΜSp ΚPL [J ].T he J ou rna lof N anj ing U n iversity of T rad itiona l Ch inese M ed icine ;南京中医药大学学报ΓΚ1997Κ12;5ΓΠ26-27;in Ch inese Γ.[3]　CH EN G B ;陈桂宝Γ.Studies on the phar m aco logical 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