植物类黄酮(Flavonoid)试剂盒说明书

植物类黄酮检测试剂盒(微板法)简介：类黄酮(Flavonoids)是植物重要的一类次生代谢产物，它以结合态（黄酮苷）或自由态（黄酮苷元）形式存在于水果、蔬菜、豆类和茶叶等许多食源性植物中。

Leagene 植物类黄酮检测试剂盒(微板法)检测原理是类黄酮溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提类黄酮，根据提取液的吸收光谱特性，可利用酶标仪在特定波长(325nm)处测定其吸光度，通过与标准曲线比较，计算出类黄酮含量，主要用于植物组织或果实中类黄酮的提取以及定量检测类黄酮含量。

该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、类黄酮提取：①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于4℃预冷的研钵或匀浆器。

②加入4℃预冷的Flavonoids Assay buffer，充分研磨或匀浆后转入10ml 离心管中。

用Flavonoids Assay buffer 冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管中，补加Flavonoids Assay buffer 至。

③4℃避光静置20min，期间摇动2~3次，然后用滤纸或纱布过滤至离心管中，滤液即为类黄酮粗提液。

2、稀释Flavonoids 标准溶液：取适量的Flavonoids 标准(1mg/ml)，按下表进行稀释：加入物(μl)123456Flavonoids 标准(1mg/ml)306090120150300蒸馏水2702402101801500Flavonoids 浓度(mg/ml)0.10.20.30.40.513、加样：取96孔板，按照下表设置空白孔、对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。

如果样品中的类黄酮活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

样品的检测最好能设置2平行孔，求平均值。

编号名称TP1111100T Storage试剂(A):Flavonoids 标准(1mg/ml) 1.5ml 4℃避光试剂(B):Flavonoids Assay buffer 2×500mlRT 避光使用说明书1份加入物(μl)空白孔标准孔测定孔Flavonoids Assay buffer200——系列Flavonoids标准(1~6号孔)—200—类黄酮粗提液——2004、测定：以酶标仪，以空白调零，测定系列标准孔、测定孔在325nm处吸光度。

植物类黄酮（Flavonoid）试剂盒使用说明分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1330规格：50管/24样产品内容：提取液：60%乙醇，自备。

试剂一：液体3mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体3mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。

产品说明：类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。

在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在502nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在502nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。

自备实验用品及仪器天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

操作步骤：一、类黄酮提取将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入2.5mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，破碎5s，间歇8s，60℃，提取30min。

10000g，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至2.5mL，待测。

二、测定操作表对照管测定管样本待测液（μL）200200试剂一（μL）5050混匀，25℃静置5min试剂二（μL）50混匀，25℃静置5min试剂三（μL）40040060%乙醇（μL）350350。

混匀，25℃静置15min，对照管调零，1mL玻璃比色皿，测定A502三、类黄酮含量计算公式标准曲线：y=6.2096x+0.0008，R2=0.9996类黄酮含量（mg/g）=（A502-0.0008）÷6.2096×V反总÷(V样÷V样总×W)=2.013×A502÷WV样总：加入提取液体积，2.5mL；V反总：反应总体积，1mL；V样：反应中样品体积，0.2mL；W：样品质量，g注意事项：1、吸光值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书微量法货号:UPLC-MS-4269规格:100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体×1瓶（自备）4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存溶液的配制：提取液：自备80%丙酮，将丙酮:蒸馏水（V:V）=4:1混合待用，提供一个125mL空瓶。

产品简介：类胡萝卜素(carotenoid)是一类重要的天然色素的总称，普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类的黄色、橙红色或红色的色素之中。

类胡萝卜素是体内维生素A的前体，同时还具有抗氧化、免疫调节、抗癌、减轻心血管疾病及着色剂等作用。

植物的类胡萝卜素存在于各种黄色质体或有色质体内；如黄叶，黄色花卉，黄色和红色的果实和黄色块根等组织，样本通过溶剂萃取，分离提取类胡萝卜素，在440±10nm处有特殊吸收峰。

大部分高等植物和藻类微生物的叶绿体内也含有类胡萝卜素，类胡萝卜素主要吸收蓝紫光，而叶绿素a和叶绿素b既吸收红光又可吸收蓝紫光。

所以针对含叶绿体的组织，为排除叶绿素a和叶绿素b对类胡萝卜素的干扰，根据经验公式先计算出叶绿素a和叶绿素b的含量，再进一步得出类胡萝卜素的含量；针对不含叶绿素的组织可以直接根据类胡萝卜素的经验消光系数进行计算。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材质）、天平、可调式移液枪、研钵/匀浆器、10mL离心管/试管、蒸馏水和丙酮。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、新鲜植物叶片（去掉中脉）或其他组织用蒸馏水洗干净，然后吸干表面水分，称取约0.1g，剪碎放入研钵或匀浆器中。

2、加入1mL蒸馏水，少量试剂一（约10mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入10mL离心管或试管中。

植物查尔酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物查尔酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A缩合反应系统中释放出巯基辅酶A，使用Ellman试剂后，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定植物裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适合于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等查尔酮合成酶的活性检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景查尔酮合成酶（chalcone synthase；CHS；EC2.3.1.74）是聚酮体合成酶（polyketide synthase；PKS）大家属中的一员，是启动类黄酮（flavonoid）化合物合成通路中第一步关键酶，形成植物系统性获得性抗性（systematic acquired resistance；SAR）的基础。

查尔酮合成酶存在于细菌、植物和真菌中。

在所有裸子植物（gymnosperm）和被子植物（angiosperm）的各种不同发育阶段中的不同组织中表达。

查尔酮合成酶为同源二聚体，分子量为40至4000Kd，由环境压力，包括UV照射、伤口、病原菌袭击等诱导，通过丙二酰辅酶A脱羧基反应（decarboxylation）、与香豆酰辅酶缩合、聚酮体链延展（chain elongation）、中间产物环状化（cyclization）和芳构化（aromatization）产生查尔酮，一种类黄酮化合物前体，作为化学信使，由此生成各种后续继发性代谢化合物，参与抗病原微生物例如异黄酮植物保护素（isoflavonoid phytoalexin）、花青素花色素化、抵御环境压力（UV光保护）、花粉育性（pollen fertility）、抗氧化、共生根系结瘤（symbiotic root nodulation），以及作为抗生素、免疫抑制剂、抗肿瘤和抗真菌的药物作用。

类黄酮糖基转移酶（UFGT）试剂盒说明书紫外分光光度法：50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：类黄酮是植物次生代谢产物，糖基化是类黄酮基本结构形成的最主要的修饰反应之一，提高了类黄酮苷元的化学稳定性，这一过程主要由类黄酮糖基转移酶催化的，使类黄酮-OH与UDPG反应，是黄酮合成途径中的关键酶。

测定原理：类黄酮糖基转移酶催化花青素与尿苷二磷酸葡萄糖反应产生花青苷，主要以矢车菊素3-葡萄糖苷（C3G）形式存在，用HPLC检测产物可反映类黄酮糖基转移酶的酶活性。

自备实验用品及仪器：天平、研砵、离心机、恒温水浴锅、100目筛、高校液相色谱、针头过滤器（水系、0.22μm）、滤膜（水系、0.45μm）、耐水C18柱（4.6×250mm）、样品瓶、甲酸、甲醇（色谱级）、超纯水试剂组成和配制：提取液：液体50m L×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加全部试剂三溶解。

试剂二：液体5m L×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体8m L×1瓶，4℃保存。

标准品：标准品×1支，-20℃保存。

样本处理：组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：2~5的比例（建议称取约0.5g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

实验前的准备工作：1、检测产物制备对照管测定管样本（μL）100 100试剂二（μL）100试剂一（μL）150充分混匀，30℃反应30min试剂一（μL）150试剂二（μL）100 充分混匀，10000g，4℃，离心10min，取上清过0.45μm水系滤头，待检测。

2、将500 mL超纯水和500 mL甲醇用0.45 μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。

（注：蒸馏水用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。

3、流动相的配制：流动相A为1.6%甲酸水溶液；流动相B为1.6%甲酸甲醇溶液。

黄酮类化合物（flavonoid）是广泛存在于自然界的一大类化合物，是具有色酮环与苯环为基本结构的一类化合物的总称，其数量列为天然酚类化合物之首，大多数具有颜色[1]。

在高等植物体中常以游离态或与糖成苷的形式存在，在花、叶、果实等组织中多为苷类，而在木质部组织中则多为游离的苷元[2]。

可以分类为黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类、黄烷酮类等。

广义的范围还包括查耳酮、嗅酮、异黄烷酮及茶多酚，是一类生物活性很强的化合物,具有降低心肌耗氧量、防治血管硬化等作用；同时也是一种天然抗氧化剂,具有抗衰老、增强机体免疫力、抗癌防癌的功效,在医药、食品等领域具有广阔的应用前景。

1 黄酮类化合物的基本结构与生理功能黄酮类化合物是植物合成的一类次生代谢产物，基本结构中的两个芳香环（C6）由1个C3单位联结成15碳化合物。

在自然界中，黄酮类化合物大多数以苷类的形式存在，由于糖的种类、连接位置、苷元等不同，可形成各种各样的黄酮苷。

种类不同的黄酮苷在基团上被进一步修饰后产生了自然界中种类繁多的黄酮类化合物[3]。

黄酮类化合物的生理功能多种多样。

黄酮类化合物对高血压引起的头痛、头晕、耳鸣等症状有明显的疗效,尤以缓解头痛为显著。

黄杞总黄酮具有一定的活血化瘀、降血脂、降血糖和提高免疫功能的作用；山楂叶总黄酮可有效防治心血疾病、清除氧自由基、降脂、利尿和增强黄酮类化合物的提取方法与功能应用研究张晓荣 杨 蓉（西北农林科技大学测试中心 陕西 杨凌 712100）摘　要：介绍了黄酮类化合物的提取方法、生理功能及在医药、保健食品等方面的应用研究，预测了黄酮类化合物的开发应用前景，旨在为黄酮类化合物的深入研究提供参考。

关键词：黄酮类化合物 提取方法 生理功能作者简介：张晓荣（1976-），女，陕西富平人，讲师，博士研究生，主要从事食品营养与安全研究与教学工作。

E-mail:******************。

耐缺氧能力等。

大豆（Glycine max）异黄酮有类雌激素及防治骨质疏松的作用,并对多种肿瘤具有抗癌作用[4-5]。