DNA凝胶回收操作流程

DNA纯化回收的方法

1.低熔点胶法

低熔点胶是向普通琼脂糖的多糖链上引入羟乙基形成的，这一变化会使凝胶的熔化点与凝固点均降低。低熔点胶在30℃时凝结、65℃时熔化，这一温度尚不足以使DNA分子变性。操作时可先灌一块普通的胶，然后用低熔点胶取代其中的回收部分。割下的胶加入TE后于65℃保温促使凝胶熔化，再加入等体积的酚抽提去除凝胶。低熔点胶的另一个特点是电泳回收后可以立即进行酶切连接、标记等酶反应，因为这类胶中不含有普通琼脂糖中抑制酶活性的硫酸盐等杂质，并且收集的胶条能在酶反应的合适温度(37℃)始终保持液体状态。

2.玻璃粉(乳)法

将胶条割下加入NaI溶液浸泡，剧烈振荡数分钟促使溶胶。向胶液中加入经酸净化处理的极细玻璃粉(乳)，室温反复倒转离心管使DNA吸附于其上。离心收集玻璃粉后加入TE并于37℃保温，洗脱吸附于玻璃粉上DNA，再次离心收集含DNA的上清液即可。玻璃粉法适用于回收0.4～1kb的小分子片段，均有80％的回收率。

3.QIAgen胶回收试剂盒

由于凝胶溶于含NaI的溶胶液，DNA能专一地与离心柱中纤维素结合。结合后的DNA经洗涤除去杂质，最后在低盐缓冲液中经离心从纤维素上洗脱下来。

4.冻融法

靠反复冻融破坏凝胶结构从而释放出DNA

5 其他试剂盒

本实验采用的是北京塞百盛生物技术公司的PCR产物回收试剂盒。基本原理是，在高盐状态下，纯化树脂专一性地吸附DNA；而在低盐或水溶液状态下，DNA被洗脱下来。此法简便快捷，可在几分钟内从PCR反应液，或十几分钟内从普通琼脂糖凝胶中回收高纯度的PCR产物，用于DNA测序及其它酶促反应。其回收率分别为85%和70%左右。该系统不仅用于纯化PCR产物，还可以从反应液或普通琼脂糖凝胶中回收各种类型的DNA片段，适用范围从150bp到十几kb。

其他方法：

Glassmilk法，sanPrep回收试剂盒

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（离心柱型）QC标准操作流程

1. 实验试剂和耗材

1.2 实验试剂

1.3 耗材

2. 实验操作流程

胶回收试剂盒的检测须进行两个实验验证，第一个实验为GelRed染色法，第二个实验为EB染色法。

2.1 GelRed染色法

2.1.1 1.5%琼脂糖凝胶的制备

（1）准确称取1.5g琼脂糖置于250ml三角锥形瓶中，添加125ml 1×TAE溶液。

（2）轻微混匀后将其置于微波炉中，高火加热6min至溶液沸腾，取出锥形瓶放置室温2min。

（3）添加1×TAE溶液至110ml，再次于微波炉中高火加热3min至溶液沸腾。

（4）室温放置10min后将溶液倒入插有梳子的胶槽内，待胶块凝固后使用。

2.1.2 胶回收实验

（1）取6个2ml离心管，依次编号为1-6号，使用分析天平准确称取空离心管的重量。

（2）用干净锋利的手术刀片切下不含核酸染料的1.5%琼脂糖凝胶胶块，放入已称重的2ml离心管中，称取胶块与离心管总重，计算凝胶块的重量。要求胶块重量不超过200mg为宜。

（3）添加溶胶液Binding Solution B，要求1、2号管中每100mg琼脂糖凝胶加入200ul

Binding Solution B，3、4号管中每100mg琼脂糖凝胶加入300ul Binding Solution B，5、6号管中每100mg琼脂糖凝胶加入400ul Binding Solution B.

（4）每管中添加50ul DL2502，混匀后置于60℃水浴5min，期间间断混合，直至凝胶块完全融化。

【注意事项】观察各管内溶胶液溶解胶块的快慢程度。

（5）将上述混合液转移至套放于2ml收集管的GenClean柱中，室温放置2min，10000rpm室温离心1min，取出GenClean 柱，并倒掉收集管中废液。

（6）将GenClean 柱重新放回收集管中，加入500ul Wash Solution，于12000rpm，室温离心1min，倒掉收集管中废液。

dna凝胶回收原理

DNA凝胶回收是一种将DNA物质从凝胶中提取出来的技术，其原理主要涉及DNA凝胶的消化、电泳分离和提取等步骤。

首先，需要将含有DNA样品的凝胶切割成小片或小块。这可以通过将凝胶放在紫外线灯下照射，使其出现亮蓝色荧光，并用刀、剪刀或专用切割工具进行切割。

然后，将DNA凝胶片放入一个离心管或离心管盒中，并加入几倍体积的溶剂（例如Tris-HCl缓冲液）。随后，将离心管置于37°C的温水浴中，使凝胶片中的DNA溶解。

接下来，通过离心将溶解后的DNA凝胶物质与溶剂分离。在离心过程中，DNA分子被推到溶剂中，而凝胶片被离心力推到离心管的底部。

最后，将上清液转移到一个新的离心管中，这个上清液即为含有DNA物质的溶液。这样，DNA物质就从凝胶中回收提取出来了。

需要注意的是，在DNA凝胶回收的过程中，凝胶溶解液的选取和温度控制非常关键。溶解液的成分和浓度应该适合DNA的溶解，同时温度的控制也要符合DNA的稳定性，以避免DNA的降解或损伤。

胶回收目的基因

一、平衡柱子 1. 取一个新的Hibind DNA 结合柱装在收集管中，吸取合适体积的Buffer GPS 平衡缓冲液（具体见下表）至柱子中；

小量提取 200ul 中量提取 1ml 大量提取 3ml 2. 室温放置3-5min。

3. 室温下，12,000转离心2min或3,000转离心5min。

4. 倒弃收集管中滤液，将Hibind DNA 柱子重新装在收集管中；加入700ul（Minicolum），4ml（Midi column）或10ml（Maxicolumn）灭菌水至柱子中。

5. 室温下，按上述条件离心；

6. 倒弃收集管中滤液，将Hibind DNA 柱子重新装在收集管中；这就是已经平衡好的柱子，

按试剂盒说明书进行操作。该流程处理过的柱子，可室温放置1-2周。 二、胶回收目的基因 1.琼脂凝胶电泳回收DNA目的片段时，使用新鲜的TBE电泳缓冲液，重复使用影响PH值

和回收产量。 2.小心切除目的片段。

3.将目的片段称重后放入1.5ml离心管中，凝胶重为0.1g，其体积可视为100ul，添加与等体积的绑定缓冲区(XP2)。孵化混合物在55 - 60摄氏度7分钟或直到凝胶完全融化。混合摇动或倒置管每2 - 3分钟。离心管收集所有液体到试管底部。

注意：pH值影响完全溶凝胶后的凝胶/绑定缓冲混合物。DNA产量将明显降低pH值>8时。如果混合物的颜

色变成橙色或红色,加上5ul 5m的醋酸钠；pH值为5.2时,将pH值下降。调整后, 凝胶/绑定缓冲区混合物的颜

色是淡黄色。

4. 将Hibind DNA 结合柱装在合适的收集管中（2ml）； 5. 向HiBind®DNA结合柱加入700ul的DNA/agarose solution（DNA /琼脂糖溶液）,在室温10,000转离心1min；

6.倒弃收集管中的废液，HiBind®DNA结合柱容量超过700ul，可以收集25ug左右的DNA,如量多可