凝胶中回收DNA汇总

DNA纯化回收的方法

1.低熔点胶法

低熔点胶是向普通琼脂糖的多糖链上引入羟乙基形成的，这一变化会使凝胶的熔化点与凝固点均降低。低熔点胶在30℃时凝结、65℃时熔化，这一温度尚不足以使DNA分子变性。操作时可先灌一块普通的胶，然后用低熔点胶取代其中的回收部分。割下的胶加入TE后于65℃保温促使凝胶熔化，再加入等体积的酚抽提去除凝胶。低熔点胶的另一个特点是电泳回收后可以立即进行酶切连接、标记等酶反应，因为这类胶中不含有普通琼脂糖中抑制酶活性的硫酸盐等杂质，并且收集的胶条能在酶反应的合适温度(37℃)始终保持液体状态。

2.玻璃粉(乳)法

将胶条割下加入NaI溶液浸泡，剧烈振荡数分钟促使溶胶。向胶液中加入经酸净化处理的极细玻璃粉(乳)，室温反复倒转离心管使DNA吸附于其上。离心收集玻璃粉后加入TE并于37℃保温，洗脱吸附于玻璃粉上DNA，再次离心收集含DNA的上清液即可。玻璃粉法适用于回收0.4～1kb的小分子片段，均有80％的回收率。

3.QIAgen胶回收试剂盒

由于凝胶溶于含NaI的溶胶液，DNA能专一地与离心柱中纤维素结合。结合后的DNA经洗涤除去杂质，最后在低盐缓冲液中经离心从纤维素上洗脱下来。

4.冻融法

靠反复冻融破坏凝胶结构从而释放出DNA

5 其他试剂盒

本实验采用的是北京塞百盛生物技术公司的PCR产物回收试剂盒。基本原理是，在高盐状态下，纯化树脂专一性地吸附DNA；而在低盐或水溶液状态下，DNA被洗脱下来。此法简便快捷，可在几分钟内从PCR反应液，或十几分钟内从普通琼脂糖凝胶中回收高纯度的PCR产物，用于DNA测序及其它酶促反应。其回收率分别为85%和70%左右。该系统不仅用于纯化PCR产物，还可以从反应液或普通琼脂糖凝胶中回收各种类型的DNA片段，适用范围从150bp到十几kb。

其他方法：

Glassmilk法，sanPrep回收试剂盒

dna凝胶回收原理

DNA凝胶回收是一种将DNA物质从凝胶中提取出来的技术，其原理主要涉及DNA凝胶的消化、电泳分离和提取等步骤。

首先，需要将含有DNA样品的凝胶切割成小片或小块。这可以通过将凝胶放在紫外线灯下照射，使其出现亮蓝色荧光，并用刀、剪刀或专用切割工具进行切割。

然后，将DNA凝胶片放入一个离心管或离心管盒中，并加入几倍体积的溶剂（例如Tris-HCl缓冲液）。随后，将离心管置于37°C的温水浴中，使凝胶片中的DNA溶解。

接下来，通过离心将溶解后的DNA凝胶物质与溶剂分离。在离心过程中，DNA分子被推到溶剂中，而凝胶片被离心力推到离心管的底部。

最后，将上清液转移到一个新的离心管中，这个上清液即为含有DNA物质的溶液。这样，DNA物质就从凝胶中回收提取出来了。

需要注意的是，在DNA凝胶回收的过程中，凝胶溶解液的选取和温度控制非常关键。溶解液的成分和浓度应该适合DNA的溶解，同时温度的控制也要符合DNA的稳定性，以避免DNA的降解或损伤。

1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。 2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。此时应注意 尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。 注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。 3. 切碎胶块。胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。 4. 称量胶块重量，计算胶块体积。计算胶块体积时，以1 mg=1 ul进行计算。 5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer。DR-I Buffer的加量如下表： 6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。 注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。 7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。 8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。 9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。 注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。 10. 将500 ul的Rinse A加入Spin

Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。 11. 将700 ul的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。 12. 重复操作步骤11。 13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入25 ul 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。 注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。 14.

实验七 琼脂糖凝胶中DNA片段的回收

一．原理

从琼脂糖凝胶中回收DNA片段．可得到大小一致的DNA片段。有多种方法可用于琼脂糖凝胶中DNA片段的回收。例如低融点琼脂糖法、洗脱法等。本实验方法是先使凝胶被NaI溶解，然后DNA与玻璃粉结合，再从玻璃粉中洗脱出DNA片段。

二．方法

1．在琼脂糖凝胶小电泳分离DNA片段，当DNA片段完全分开后，停止电泳。

2．在长波长紫外灯下观察凝胶，切下含所需的琼脂糖部分。将胶放人预称重的微离心管中。

3．称含凝胶的离心管重量，每0.1g凝胶加200μl NaI溶液。

4．于50℃温育微离心管，每5min颠倒几次离心管混匀离心管，直到琼脂糖完全融解。

5. 每μg DNA加入5μl玻璃粉悬液。轻轻颠倒使之混匀，于冰上放置10min，使DNA结

合在玻璃粉上。

6．于室温离心5秒，收集结合有DNA的玻璃粉。

7．倒掉上清。加700μl -20℃预冷的清洗缓冲液，轻轻地抽吸，使玻璃粉重悬浮。冰上放置5min。

8．重复第6与7步两次，于室温离心10秒，使玻璃粉沉淀下来。倒掉上清，重复离心，

小心除去全部残存液体。

9．加入30～50μ1 TE，轻轻吹打使玻璃粉重悬浮。于50℃温育10min，将DNA洗脱下来。

10．于室温离心l0秒，使玻璃粉沉淀下来。将上清转移到另一管中。小心，不要吸人玻璃粉，因为它可抑制许多酶的活性。

三．试剂

1.玻璃粉

(1)取30g玻璃粉（Sigma 325目二氧化硅）悬于200ml蒸馏水的烧杯中。搅拌混匀后，静置9min。

(2)将上清转移到离心管中．于6000g离心10min，沉淀玻璃粉。

(3)倒掉上清，将玻璃粉重悬于50ml 25％硝酸中，室温放置过夜。

(4)于6000g沉淀玻璃，用无菌双蒸水洗涤，沉淀玻璃粉4一6次，直到pH值至中性。

(5)用无菌水重悬沉淀，配成10％的浆液。