片形吸虫种类鉴定的分子生物学研究进展

2023-11-05contents •概述•病原学•诊断方法•防治策略•公共卫生和社会控制•研究和发展方向目录01概述定义牛肝片形吸虫病是由肝片形吸虫引起的一种寄生虫病，主要寄生在牛的肝脏和胆管中。

症状病牛会出现消瘦、贫血、黄疸、消化障碍等症状，严重时可能导致死亡。

定义和症状传播媒介该病通过淡水螺和荸荠等中间宿主传播。

感染途径病牛排出的粪便中的虫卵污染水源和草场，被淡水螺和荸荠等中间宿主吞食后，会孵化出毛蚴，再侵入牛的肝脏和胆管中。

传播途径该病对牛的健康和生产性能产生严重影响，导致经济损失。

影响病牛会出现消瘦、贫血、黄疸、消化障碍等症状，严重时可能导致死亡，给养殖业带来巨大的风险。

危害影响和危害02病原学牛肝片形吸虫的成虫呈扁平叶状，前端略凹，后端钝圆。

外观长度一般为10-28毫米，宽度一般为5-15毫米。

尺寸通常为淡红色或黄褐色。

颜色具有口吸盘和腹吸盘，口吸盘位于虫体前端，腹吸盘位于虫体后端。

结构生物特征牛肝片形吸虫的生活史包括卵、幼虫、成虫和囊蚴四个阶段。

生活史繁殖方式繁殖周期成虫在寄生部位产卵，卵孵化后成为幼虫，幼虫经过一段时间的生长和蜕皮，最终发育成为成虫。

牛肝片形吸虫的繁殖周期一般为3-4个月。

03生命周期和繁殖0201牛肝片形吸虫的感染途径主要是通过摄入含有囊蚴的水或草料。

感染途径囊蚴在牛体内孵化成幼虫，幼虫通过血流到达肝脏，最终发育成为成虫。

传播方式牛、羊等反刍动物对牛肝片形吸虫病易感。

易感动物感染和传播机制03诊断方法临床诊断观察临床症状牛肝片形吸虫病会导致牛出现食欲不振、精神萎靡、体温升高等症状。

检查体征病牛会出现肝脏肿大、黄疸、腹水等症状。

实验室诊断粪便检查通过显微镜观察粪便中的虫卵，如发现大量肝片吸虫的卵，则可确诊。

血液检查血液中嗜酸性粒细胞数量增加，提示可能存在肝片吸虫感染。

细菌性肝炎的肝脏肿大是急性炎症所致，伴有发热和白细胞增多等症状。

与营养不良的鉴别营养不良的肝脏肿大是缓慢发生的，同时伴有肌肉萎缩和生长缓慢等症状。

抗片形吸虫疫苗研究进展预防兽医学：莫秀玲学号：0634304014片形吸虫病是由肝片形吸虫(Fasciola hepatica)和大片形吸虫(F.g iganica )引起反刍动物的一种常见寄生虫病。

患病的动物生产能力降低,肉奶品质和产量下降,在世界范围内对畜牧业造成严重的经济损失。

据报道,每年全世界造成农业和商业的损失达20亿美元。

牛群感染率在非洲达30%～90%;泰国东部及北部多达85%以上,印度尼西亚达25%～90%。

我国各地区、各种动物感染率不同,高的可达90%～100%,低的也在8%～15%。

全世界除6亿动物被感染外,还有240万人被感染,1.8亿人受到此病的威胁[1]。

药物治疗是防治肝片吸虫病常用的方法, 但大量使用抗寄生虫药容易产生耐药性[2-3],并且往往有药物残留,严重影响了肉奶品质,因此在生产中迫切需求研制疫苗来防制片形吸虫病。

1987年以前,一般用粗制虫体提取物、虫体分泌蛋白的混合物或辐照致弱虫体免疫农畜以抵抗片形吸虫。

80年代以后的工作更多地集中于亚单元疫苗的研制。

大量试验证实一些候选疫苗分子具有实际的保护作用。

本文首先回顾候选抗原、疫苗分子的分子生物学研究结果，再介绍这些候选疫苗的生物学特性及可能的免疫机制。

1．疫苗战略和候选抗原用于鉴定肝片吸虫和大片吸虫候选疫苗分子的三个基本战略:交叉保护抗原,由曼氏血吸虫抗体交叉反应识别的肝片吸虫抗原,能对曼氏血吸虫感染产生交叉保护力。

这种标准抗原是脂肪酸结合蛋白(FABP)。

同源抗原,是以前保护动物免受曼氏血吸虫和日本血吸虫感染的肝片吸虫同源抗原分子。

这种标准抗原是谷胱苷肽巯基转移酶(GST)。

必需抗原,预测肝片吸虫感染或存活功能必需的分子抗原,这种标准抗原是L-型组织蛋白酶(GatL)和血红蛋白。

肝片吸虫(F·h)或大片吸虫(F·g)的4种候选抗原,已在牛和绵羊的接种试验中显示了有效性。

1.1交叉保护抗原脂肪酸结合蛋白(Fatty acid binding proteins,FABP)是疫苗发展路上的一个经典例子。

片形吸虫病(肝蛭病)片形吸虫病是由片形科(Fasciolidae)，片形属(Fasciola)的肝片形吸虫(Fasciola hepatica)和大片形吸虫(F.gigantica)寄生于牛、羊、鹿、骆驼等反刍动物的肝脏胆管中所引起，猪、马属动物及一些野生动物亦可寄生但较为少见，人亦有感染的报道。

本虫能引起肝炎和胆管炎，并伴有全身性中毒现象和营养障碍，危害相当严重，尤其对幼畜和绵羊，可引起大批死亡。

在其慢性病程中，使动物瘦弱，发育障碍，耕牛使役能力下降，乳牛产奶量减少，毛、肉产量减少和质量下降，病肝成为废弃物，给畜牧业经济带来巨大损失。

病原形态片形吸虫病的病原体主要有两种: (1)肝片形吸虫虫体背腹扁平如榆树叶状（图1），新鲜虫体呈棕红色，其大小随发育程度不同差别很大，一般成熟的虫体长约20～30mm，宽10～13mm，体表前端有小棘（图2），后部光滑。

虫体前部较后部宽，前端作短锥形，锥底突然变宽，呈双肩样突出（图3）。

口吸盘位于虫体的前端，直径约 1.0mm，腹吸盘在双肩样突出的中部，直径约1.8mm，与口吸盘相距很近。

具有咽和短的食道，下接两条具有盲端的肠干，每条肠干又分出很多侧枝。

雄性生殖器官以两组位于体中部前后纵列的分支状睾丸为特征。

输精管通入雄茎囊，其末端即雄茎，开口于腹吸盘前方的生殖孔，肉眼可见。

雌性生殖器官以位于腹吸盘下方右侧呈鹿角状的卵巢为特征。

卵模显著，位于睾丸前方虫体中线上。

卵模与腹吸盘之间为盘曲的子宫，内含虫卵。

无受精囊。

卵黄腺由许多点状小滤泡组成，布满于虫体的两侧，卵黄管左右横向汇合于卵模之下方，形成卵黄总管，即卵黄囊，然后再通向卵模。

[形态模式]虫卵椭圆形，金黄色。

卵壳较薄透明。

长107～158μm，宽70～100μm，前端较窄，有一个不明显的卵盖，(观察时在标本上滴加少许苛性钾液，即能清楚地看到卵盖)后端较钝，卵内充满卵黄细胞(中部常较稠密)和一个常偏于后端的卵胚细胞（图4）。

牛片形吸虫病的流行、诊断与治疗什么是牛片形吸虫病？牛片形吸虫病（Fascioliasis）是由牛片形吸虫（Fasciola hepatica）和宽片形吸虫（Fasciola gigantica）引起的疾病。

牛片形吸虫是寄生在动物的肝脏内的一种吸虫，可以侵袭人类和动物。

人类感染牛片形吸虫病的途径主要是通过食用感染该病的动物肝脏、植物或水果，而遭受感染；人类抵抗力差的人更容易患上牛片形吸虫病。

流行情况牛片形吸虫病主要分布在亚洲、非洲、南美洲和澳大利亚部分地区，全球约有2500万人感染。

在中国，牛片形吸虫病主要分布在华北、西北和西南省份，是一种较为常见的寄生虫疾病。

牛片形吸虫病多发生在农村地区，这与饮用不安全饮用水、奶制品不规范，以及人畜共栖等生活习惯有关。

预防牛片形吸虫病的重要措施就是加强公共卫生教育，提高公众的卫生意识。

诊断方法牛片形吸虫病的临床表现具有多样性，典型的症状包括上腹部不适、腹泻、食欲不振、体重减轻、贫血和低热等。

这些症状都不特异，容易与其他疾病混淆。

目前，临床上主要采用影像学、血清学、PCR等检测方法。

其中，当Fasciola hepatica成虫寄居在人体肝脏时，CT等影像学技术很容易探测到肝脏内部异常信号，辅助诊断牛片形吸虫病。

对于临床症状和检测结果均无法确认诊断的患者，可在病原学、免疫学和分子生物学方面进行深度检测。

治疗方法牛片形吸虫病治疗的选择通常会根据患者感染的严重程度和感染时间长短等客观条件制定镜；目前国内常用的治疗方法包括纤维蛋白酶、三氯乙烯、替硝唑等药物。

病程较长、临床表现严重或并发重要脏器病变者可考虑手术治疗。

值得注意的是，对于曾经感染牛片形吸虫病的患者，长期进行随访和关注是十分必要的，因为有极小部分患种可能会造成肝衰竭和胆囊乳头癌等恶性肿瘤。

一旦出现相关异常症状，应及时就医。

预防措施预防牛片形吸虫病的关键在于消灭牛片形吸虫的传播途径。

具体预防措施包括：1.加强饮食卫生。

牦牛大片吸虫的形态观察及PCR鉴定作者：孔祥颖,甘富斌,高兴,等来源：《湖北畜牧兽医》 2019年第1期孔祥颖1,甘富斌2,高兴3,张文华4,蔡金山5,李家奎6(1.青海省海北州畜牧兽医科学研究所,青海海晏 810299;2.西藏林芝市巴宜区农牧局兽防站,西藏林芝 860000;3.华中农业大学动物医学院,武汉 430070;4.青海夏华清真肉食品有限公司,青海海晏812200;5.青海省海北州动物疫病预防控制中心,青海海晏 812200;6.西藏农牧学院,西藏林芝860000)摘要:肝片吸虫病是一种由肝片吸虫和大片吸虫寄生于人和牛、羊等反刍动物的肝脏胆管所致的人畜共患寄生虫病。

于2017年在青海省海北州某屠宰场进行牦牛寄生虫病调查时,在患病牦牛肝脏采集到吸虫样本,经虫体形态学观察、PCR鉴定,查明该虫体为大片吸虫,该研究为首次报道牦牛大片吸虫,可为牦牛该病的防治提供依据。

关键词:牦牛;大片吸虫;形态观察;PCR鉴定中图分类号:S852.73+5文献标识码:A文章编号:1007-273X(2019)01-0005-02肝片形吸虫病是一种以肝片吸虫和大片吸虫为病原的重要的人畜共患寄生虫病,主要寄生于动物的肝脏、胆管、胆囊中,以破坏动物肝脏、胆管而引起急性、慢性肝炎和胆管炎[1],并使患病动物伴有贫血、水肿、食欲不振、全身性中毒等症状,轻者可导致患病动物消瘦,重者可导致患病动物大批死亡,给养殖业造成严重的经济损失[2,3]。

牦牛主要分布于我国的青藏高原及毗邻地区,适应高寒生态条件,耐粗、耐劳,善走陡坡险路、雪山沼泽,能游渡江河激流,有“高原之舟”之称[4,5]。

当牦牛采食沼泽、潮湿、坑洼等草地的牧草时,容易感染肝片吸虫病,造成牦牛大量死亡,给牧民带来较大的经济损失[6,7]。

笔者在青海患肝片吸虫病牦牛身上采集到虫体样本,经压片观察、PCR鉴定后,确认为牦牛大片吸虫,该研究将为牦牛大片吸虫病的诊断提供参考[2,8,9]。

SSR标记和SCAR标记对片形吸虫的分类鉴别研究的开题报告一、问题的提出片形吸虫是一类寄生虫，主要寄生在家禽、家畜等动物体内，引起口腔、肝、肺、肠等部位的疾病。

在诊断和治疗片形吸虫病时，需要准确地鉴别出病原体的种类。

传统的鉴别方法主要基于形态学和生物学特征，这种方法缺乏稳定可靠的标识，不能满足现代化、高效化诊断的需求，因此需要开展分子生物学研究。

二、研究现状分子生物学技术被广泛应用于片形吸虫的分类鉴别，其中 SSR（简单序列重复）标记和 SCAR（特异性扩增序列）标记被用于鉴别片形吸虫。

SSR标记可以从基因组DNA序列中选择特异性高、位点多、重复性强的核苷酸序列作为检测位点，是一种高度多态性的DNA标记。

SCAR标记则是针对已有的SSR标记，通过设计特异性引物扩增出特异性强、稳定的DNA片段作为鉴别标记。

SSR和SCAR标记的优势是具有高度特异性、重复性强、标记稳定等特点，能够提高片形吸虫种类的准确鉴别率，是目前最为理想的片形吸虫的分类鉴别方法。

三、研究目标和内容本研究旨在开展片形吸虫的分类鉴别方法研究，具体研究内容包括：1.品系筛选与DNA提取：从不同来源的片形吸虫进行筛选，选择高多态性且不同来源的品系进行研究，并提取其基因组DNA。

2.SSR标记筛选与优化：通过已有的片形吸虫基因组序列，筛选出具有优异特异性、多态性高的SSR标记，并设计引物进行PCR扩增。

3. SCAR标记验证与优化：在SSR标记的基础上，进一步优化SCAR标记的鉴别效果，通过实验检测验证其鉴别能力和稳定性。

4. 验证鉴别效果：将优化后的SSR和SCAR标记应用于已知种类的片形吸虫标本和未知样本的PCR扩增，验证其鉴别效果和稳定性。

四、意义和预期结果本研究以SSR和SCAR标记为基础，开展片形吸虫的分类鉴别方法研究，具有以下意义：1.研究更准确的流行病学特征：深入了解片形吸虫的种类分类，对制定科学可行的预防和控制措施具有指导意义。

肝片形吸虫种类鉴定PCR方法的建立罗洪林;钟晓艳;汤忠进;胡晓峰;聂奎【期刊名称】《西南师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2007(032)005【摘要】为了建立一种快速鉴定肝片吸虫种类的特异PCR方法,以肝片形吸虫基因组DNA为模板,以前后盘吸虫,胰阔盘吸虫,日本分体吸虫,牛弓首蛔虫、大片吸虫gDNA为对照,用肝片形吸虫特异性引物ITS-1、ITS-2进行PCR扩增,PCR产物经1. 0%琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪观察;用核酸蛋白测定仪测定肝片形吸虫gDNA 的浓度,然后将gDNA原液进行不同倍数的稀释,筛选最佳条件,进行敏感性检测.结果显示只有肝片吸虫样品有特异性条带,对照样品均呈阴性;可以检测到的最低DNA浓度分别为1.17 ng/μL、0.59 ng/μL.【总页数】5页(P86-90)【作者】罗洪林;钟晓艳;汤忠进;胡晓峰;聂奎【作者单位】西南大学,动物科技学院,重庆,400715;西南大学,动物科技学院,重庆,400715;柳州林业管理所,广西,柳州,545007;西南大学,动物科技学院,重庆,400715;西南大学,动物科技学院,重庆,400715【正文语种】中文【中图分类】S852.73+5【相关文献】1.肝片形吸虫与巨片形吸虫的DNA和氨基酸含量的分析 [J], 姚丽君2.肝片形吸虫和巨片形吸虫同工酶的分析 [J], 姚丽君3.片形吸虫种类鉴定的分子生物学研究进展 [J], 沈永林;胥全彬;张洪英4.河南中牟县奶牛片形吸虫感染情况调查及种类鉴定 [J], 刘复生5.海南省肝片形吸虫和巨片形吸虫感染报告 [J], 陈绩彰;徐凤翙;吴让庄;郭仁能;邢贻忠;黄定良;李善文;林绍雄;黄捷敏;刘姚若;陈冬燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

两种片形吸虫鉴别与比较
尹怀志
【期刊名称】《海峡预防医学杂志》
【年(卷),期】1995(1)1
【摘要】本文利用形态分类学方法、生活史培养、染色体和同工酶分析，系统地描述两种片形吸虫的可比特征。

提出在种类鉴别上较直观、不易混淆的分类特征。

肝片吸虫成虫的形态与巨片吸虫除大小不同外，更明显的不同是成虫的前部和后端吸虫体长宽比，腹吸盘直径与口吸盘直径比等方面。

生活史培养中各期虫体的形态与发育时间也表现出很大的不同。

染色体比较分析说明肝片吸虫与巨片吸虫为同源三倍体和同源二倍体。

同工酶分析显示两种吸虫的酯酶同工酶相同，过氧化物酶在种类鉴别上有意义。

【总页数】2页(P24-25)
【关键词】片形吸虫;肝片吸虫;虫体;同工酶分析;成虫;酯酶同工酶;三倍体;鉴别;前部;染色体
【作者】尹怀志
【作者单位】福建省寄生虫病防治研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R383.26;S852
【相关文献】
1.两种片形吸虫感染家兔的试验比较 [J], 黄维义;马丽;张为宇;刘福怀;吴文德
2.酶切图谱及序列分析虫体ITS2鉴别中国的片形吸虫 [J], 黄维义;何波
3.RAPD与形态学对片形吸虫种类鉴别的比较研究 [J], 沈永林;顾有方;等
4.两种片形吸虫感染山羊的对比试验 [J], 黄维义;张为宇;吴文德;王冬英;黄中邹
5.片形吸虫Cold-SSCP鉴别方法的建立 [J], 邓国祥;张汉云;陈蓓蓉;李秋燕;林瑞庆;马妮妮;朱兴全
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片吸虫核型的研究
尹怀志;叶冰莹
【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
【年(卷),期】1990(8)2
【摘要】本文用空气干燥法制作片吸虫染色体,测量结果二倍体型染色体数为
2n=20,n=10.三倍体型染色体数为3n=30,n=10。

两者核型相似。

二倍体型虫体与巨片吸虫相似,三倍体型虫体与肝片吸虫相似。

一部分三倍体型标本中发现少数细胞具20个染色体,由10个单价染色体和10个双价染色体组成。

经测量,这些染色体可分为10对,每对由1个单价染色体和1个双价染色体组成。

【总页数】3页(P124-126)
【关键词】片吸虫;核型;染色体;细胞学
【作者】尹怀志;叶冰莹
【作者单位】福建省寄生虫病研究所;福建师范大学生物系
【正文语种】中文
【中图分类】R383.26
【相关文献】
1.并殖吸虫病临床类型与并殖吸虫染色体核型关系的研究 [J], 邵向云;刘明达;陈名刚;常正山;Blair D;洪加林;陈韶红;张永年
2.肝片形吸虫的减数分裂与核型 [J], 李杰华
3.广西那坡异盘并殖吸虫染色体核型的初步研究 [J], 周世祜;胡文床
4.丰宫并殖吸虫染色体核型的研究 [J], 王文林;雷霖;周本江;刘爱华;王蕊芳;林世英
5.浙江省永嘉县并殖吸虫DNA序列分析、形态及核型研究 [J], 洪加林;陈名刚;常正山;邵向云;刘明达;陈韶红
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我国人群感染片形吸虫的调查分析向才碧;张青松;张登斌;杜礼义【期刊名称】《职业与健康》【年(卷),期】2003(19)11【摘要】片形吸虫属于扁形动物门的吸虫纲,复殖目,片形科,分姜片属(姜片吸虫)和片形属(肝片吸虫和巨片吸虫)[1].姜片吸虫、肝片吸虫、巨片吸虫是人兽共患寄生虫病.姜片吸虫和肝片吸虫流行于世界各国,巨片吸虫流行于非洲、夏威夷及日本等地.为反映我国改革开放和早日实现"2010年远景规划,人人享有基本医疗保健"的战略目标,在巩固疟疾、丝虫病、血吸虫病、黑热病防治成果的前提下,有计划地开展对其他寄生虫病的防治提供科学依据,卫生部决定在全国范围内首次开展人体寄生虫分布调查.按照<全国人体寄生虫分布调查实施细则>的要求,各省自治区、直辖市,从1986～1992年分别随机抽样调查726个县市、2 848个点,1 477 742人,进行了人体寄生虫分布调查,现将调查姜片吸虫、肝片吸虫、巨片吸虫在我国人群中的流行情况分析如下.【总页数】1页(P90-90)【关键词】片形吸虫;感染率;姜片吸虫;肝片吸虫;巨片吸虫【作者】向才碧;张青松;张登斌;杜礼义【作者单位】湖南省桑植县疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】R383.26【相关文献】1.宾川县片形吸虫感染疫情的调查报告 [J], 张克琴;陈宝杰;张克志;杨汝涛;陶如春;杨桂霞;赵严;段平贤2.巍山、弥渡县牛片形吸虫感染情况抽样调查 [J], 杨慧;段玉春;刘榆华;罗家军;王海英;赵甲;瞿海燕3.河南中牟县奶牛片形吸虫感染情况调查及种类鉴定 [J], 刘复生4.江西高安市郊椎实螺体内肝片形吸虫包氏毛毕吸虫幼虫感染情况调查 [J], 张文波;周吉薇;李麟;金保春;吴家斌5.海南省肝片形吸虫和巨片形吸虫感染报告 [J], 陈绩彰;徐凤翙;吴让庄;郭仁能;邢贻忠;黄定良;李善文;林绍雄;黄捷敏;刘姚若;陈冬燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。