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高效液相色谱―紫外检测法同时测定北柴胡中柴胡皂苷a、b2、c、d、f含量DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.05.023基金项目：国家科技重大专项-重大新药创制（2009ZX09103）；江西省自然科学基金（2010GQY0048）通讯作者：王跃生，E-mail：Wylw915126苷及苷元、挥发油及黄酮类等。
柴胡皂苷具有抗炎、保肝、抗肝纤维化、降低血中胆固醇和调节内分泌等多方面药理活性。
近年来，关于柴胡药材中柴胡皂苷类成分含量测定的报道颇多，如采用高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）测定柴胡药材中柴胡皂苷a[3-4]，柴胡皂苷a、d[5-7]或柴胡皂苷a、c、d[8]，采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）测定柴胡药材中柴胡皂苷a、d[9-10]或柴胡皂苷a、c、d、f[11]，采用高效液相色谱-质谱法测定柴胡皂苷a、d[12]。
本研究以北柴胡中具有多方面药理活性的柴胡皂苷a、b2、c、d、f为指标，采用HPLC-UV同时测定不同产地北柴胡中柴胡皂苷a、b2、c、d、f 的含量，为合理选用药材及柴胡药材的质量检测提供参考依据。
1 仪器与试药超声波清洗器（上海必能信超声XX公司）， DZF-1B型真空干燥箱（上海跃进医疗仪器厂）， Agilent 1100高效液相色谱仪（包括色谱泵、自动进样器紫外检测器、色谱工作站），HH-6数显恒温水浴锅（国华电器XX公司），AL104/01电子天平（梅特勒-托利多仪器XX公司）。
柴胡皂苷a对照品（中国食品药品检定研究院，批号110777-200507），柴胡皂苷d对照品（中国食品药品检定研究院，批号110778-200506），柴胡皂苷b2、c、f对照品[金测分析技术（天津）XX公司，批号分别为1650005-201108、1650006-201107、1650007-201107，HPLC≥98%]，不同产地北柴胡原药材购自江西樟树药材市场，经江西中医药大学曹岚教授鉴定为北柴胡。
不同产地柴胡中柴胡皂苷的含量测定
王鹏;贾凌云;孙启时;潘强
【期刊名称】《沈阳药科大学学报》
【年(卷),期】2004(21)3
【摘要】目的测定不同产地柴胡中柴胡皂苷a及柴胡总皂苷的含量。
方法以柴胡皂苷a为指标 ,采用高效液相色谱法和可见分光光度法。
结果柴胡皂苷a分别在 0 9～7 2 μg(r =0 9998)及0 0 4～0 36 g·L-1(r =0 9999)内线性关系良好。
柴胡皂苷a的平均回收率分别为 98 5 % (n =6 ,RSD =2 1% )和 97 3% (n =6 ,RSD =1 9% )。
柴胡皂苷a的含量以陕西最高 ,内蒙最低 ;柴胡总皂苷以内蒙最高而山西最低。
结论此方法简便、快速。
【总页数】3页(P193-195)
【关键词】北柴胡;柴胡皂苷a;柴胡总皂苷;含量测定
【作者】王鹏;贾凌云;孙启时;潘强
【作者单位】沈阳药科大学中药学院;辽宁省药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R914
【相关文献】
1.HPLC测定不同产地柴胡中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量 [J], 白雪梅;田嘉铭;王德宝
2.HPLC法对不同产地柴胡根中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量测定 [J], 马泽刚;
黄春花;钟辉云
3.RP-HPLC法测定不同品种不同产地柴胡中柴胡皂苷a、d的含量 [J], 白杨;胡继鹰
4.HPLC法测定不同产地柴胡中柴胡皂苷a、c、d的含量 [J], 李卫斌;胡宝平;项炫萌
5.不同产地南北柴胡中柴胡皂苷的含量测定 [J], 郭泰麟;康廷国;张慧
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HPLC法测定银州柴胡中五种皂苷的含量符颖;朱占军;黄帅;斯建勇;魏建和;潘瑞乐【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2011(23)3【摘要】首次建立HPLC法同时测定银州柴胡中柴胡皂苷a、c、d、e和f五种皂苷含量的方法.流动相为乙腈-水梯度洗脱,柱子为Hibar(R) RT RP-18(4.6 mm×250 mm,5μm),流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长210nm.柴胡皂苷a、c、d、e和f的线性范围及相关系数分别为:21.78～43.56μg(r=0.9993),3.94～9.85μg(r=0.9994),20.68～51.70μg(r=0.9998),1.67～5.57μg(r=0.9997),1.91～6.70μg(r=0.9992);柴胡皂苷a、d的加样回收率分别为101.5%和98.5%.该方法操作简便,结果准确,重现性好,为柴胡药材多指标质量分析方法的建立和银州柴胡药用提供了参考依据.%A method was established for determining five saikosaponins simultaneously, including saikosaponins a, c, d, e and f inthe root of Bupleurum yinchowense by HPLC for the first time. Separation was achieved by A Hibar ? RT C18 column (250 mm ×4.6 mm,5 μm) using acetonitrile and water as the mobile phase with gradient elution at theflow rate of 1.0 mL/min,column temperature at 30 ℃ and the wavelengthof UV detection was 210 nm. There were good linear correlations between the studied concentrations of the five saikosaponins and their chromatographic peak areas, and the correlation coefficients were 0.9992-0.9998. The recoveries of saikosaponins a and d were 101.5 and98.5％ ,respectively. The RSD of precision and accuracy was less than 3％.This method is simple,accurate and reproducible,and also provides a reference for establishing the multiple-value quality control method for Radix Buplerui and the use of B.yinchowense as a medicine.【总页数】4页(P494-497)【作者】符颖;朱占军;黄帅;斯建勇;魏建和;潘瑞乐【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京,100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京,100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京,100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京,100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京,100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京,100193【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.HPLC 法测定复方龙血竭胶囊中五种皂苷含量 [J], 徐士奎;罗艳秋;覃安2.HPLC法测定柴胡中柴胡皂苷的含量及皂苷类成分指纹图谱初步研究 [J], 于健东;杨青;王钢力;林瑞超3.HPLC法测定川产道地药材柴胡中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量 [J], 杨慧;王书林;余弦4.HPLC法测定不同产地柴胡中柴胡皂苷a、c、d的含量 [J], 李卫斌;胡宝平;项炫萌5.HPLC法测定兴安柴胡中柴胡皂苷d的含量 [J], 郭司群;迟晓雪;白雅静;王怀刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一测多评法在中药材含量测定中应用进展摘要：影响中药材质量因素很多，导致市场上中药材质量控制困难，目前仅凭单一成分评价中药材质量过于片面，不能很好反应中药材质量优良。
一测多评法以中药材本身具有成分为内参物，同时测定多种成分，可以很好反应中药材质量。
笔者结合近年一测多评法在中药材中应用实例进行探讨，为中药材质量控制提供参考。
关键词：中药材，含量测定，一测多评影响中药材质量的因素很多，有不同产地、不同炮制加工方法、不同储藏方式等[1]。
因此，目前中药材市场药材质量良莠不齐，直接影响中医临床辨证施治的治疗效果。
现阶段中药标准多用单一成分含量高低来反应中药材质量，但中药材成分复杂多样，作用机制模糊，大多靠几种成分协同发挥药效，这样仅以一种成分含量无法全面反映中药质量。
但如果以传统测定方法同时测中药材中几种成分不但面临对照品难得，检验周期长，还耗能、耗时。
2006年王智民等[2]首次提出一测多评法（quantitative analysis of multi-components by single-marker，QAMS），该通过中药有效成分间存在的内在函数关系和比例关系法，测定一个成分（对照品易得、价廉、有效者）实现多个成分（对照品难以得到或难供应者）同步测定。
不仅解决了中药多成分定量和多指标质量控制中存在的对照品缺乏问题，同时实现多指标同步质量控制反映中药质量。
该法提出后得到业内学者广泛认可和应用，并于2010版《中国药典（一部）》收载。
现就一测多评法原理及应用进展进行概述，并对存在的问题和发展前景进行探讨，为中药质量控制提供参考依据。
1一测多评概念与原理研究思路起源于内标法、校正因子法、主成分自身对照法以及紫外百分吸收系数法等几个概念。
在一定线性范围内，成分的量（质量或浓度）与检测器响应成正比的原理，在多指标质量评价时，引入相对校正因子的概念，以样品中某一典型成分( 有对照品供应者、价廉、有活性) 为内标，根据中药有效成分间存在的内在函数关系和比例关系，建立该成分与其他成分之间的相对校正因子(relative correction factor,RCF)，通过RCF计算其他成分的含量。
-药学研究-一测多评法同时测定清热疏肝口服液中8种活性成分刘艳芬，马云［摘要］目的建立一测多评法，同时测定清热疏肝口服液中氧化芍药苷、芍药苷、滨蒿内酯、金丝桃苷、异槲皮苷、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量。
方法以Waters Symmetry C l8柱(250mm x4.6mm,5|jim)为色谱柱，柱温：30C；流动相：乙月青-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱,流速：1.0ml/min；检测波长分别为230nm(检测氧化芍药苷、芍药苷)、345nm(检测滨蒿内酯、全丝桃苷、异槲皮苷、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸)和210nm(检测柴胡皂苷a、柴胡皂苷d)。
以异槲皮苷为内参物，建立其与氧化芍药苷、芍药苷、滨蒿内酯、全丝桃苷、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的相对校正因子，通过相对校正因子计算清热疏肝口服液中上述7种成分含量，比较计算值与外标法实测值的差异。
结果氧化芍药苷、芍药苷、滨蒿内酯、全丝桃苷、异槲皮苷、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分别在1.29〜25.80.6.96~139.20.5.78~ 115.60.2.47〜49.40、0.88~17.60.8.71~174.20.2.09〜41.80、1.76~35.20jg/ml范围内线性关系良好(厂M0.9994),平均加样回收率(R5D)分别为98.27%(1.50%)、99.00%(0.53%)、99.82%(0.81%)、97.93%(1.44%)、97.68%(1.16%)、100.04%(0.64%)、98.90%(0.97%)和96.86%(1.09%)；氧化芍药苷、芍药苷、滨蒿内酯、全丝桃苷、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的相对校正因子分别为0.3672.0.4628、0.5355、0.3180.0.5176、0.3398、0.3840,其计算值和实测值之间无明显差异。
中药与临床Phar m acy and C l i ni cs of C hi nese M at er i a M edi ca2013；4(2)品种品质“一测多评”法在中药质量评价和控制中的应用概况范成杰[摘要]“一测多评”法是指只测定一个成分(对照品可以得到者)，来实现对多个成分(对照品没有或难以供应)的同步监控的方法。
本文从“一测多评”法原理及其在中药质量评价和控制中的应用等方面，对“一测多评”法进行了归纳和总结，旨在为今后的相关研究提供参考依据。
[关键词】一测多评；中药质量评价；应用现状[中图分类号]R284[文献标识码]A[文章编号]1674—926X(2013)02007—03A ppl i cat i on s i t uat i on of m ul t i-com ponent s quan t i t at i on by on e m ar ker new m et hod f or qual i t y eval u at i on and cont r ol of C hi nes e her bal m edi ci n e／FA N C heng-j i e／!(Phar m acy C ol l ege,C hen gdu U ni ve r si t y of Tra di t i onal C hi nes e M e di ci ne,Chengdu 611137,C hi na)I A bs t r act】T he m ul t i-com p onen t s qu ant i t at i on by on e m a r ke r is a new m e t hod t ha t nee ds det er m i nat i on of onl y one com ponent(t he s t a nda rd r ef er ence s ub s t an ce c an be ga i ne d)，t o achi eve t he s ynchr onous m oni t o r i ng of t he m ul t i pl e com ponent s(T he s t a nda rd r ef e re nce s ub s t an ce i s absent o r di f f i cul t t o get)．T he pr i nci pl e of t he new m et hod，t he a ppl i ca t i on of t he new m e t hod f or qual i t y e va l ua t i on and cont rol of C hi nes e her bal m edi ci ne ar e anal y zed and sum m ar i ze d i n t hi s ar t i cl e，i n order t o pr ov i de r ef e re nce i nfor m at i on f or t he r el e vant r esea r ch．【K e y w or ds】M ul t i-c om ponent s qua nt i t at i on by one m arker；qual i t y eval uat i on and c ont r ol of C hi n es e her bal m e di ci ne；a ppl i ca t i on si t ua t i on中药质量评价和控制是中药现代化的瓶颈，亦是中医药研究的热点与难点。
伤科跌打片提取工艺的试验研究摘要：目的：确定伤科跌打片的提取工艺。
方法：采取正交实验方法，以柴胡皂苷a为考察指标进行研究，最终产品的提取工艺。
结果：提取工艺为：取处方药材加12倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏，即得。
结论：该提取工艺科学可靠，稳定性好，适合工业生产。
关键词：伤科跌打片提取工艺试验研究doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.08.542【中图分类号】r9 【文献标识码】b 【文章编号】1671-8801（2013）08-0466-02伤科跌打片主要由三七、大黄、木香等中药组成。
具活血散瘀，消肿止痛。
用于跌打损伤、伤筋动骨、瘀血肿痛、闪腰岔气。
[1]为了更好的控制产品的提取工艺，现对伤科跌打片提取工艺进行研究。
1 材料与仪器制川乌、三棱（制）、莪术（制）、香附（醋制）、当归、续断、牡丹皮、蒲黄、防风、五灵脂（制）、红花、乌药、柴胡、地黄（购自安徽省亳州市药材总公司），柴胡皂苷a对照品（中国药品生物制品检定所，含量测定用，编号765-200104），所用试剂均为分析纯。
hplc（岛津公司）；c18柱（250mm×4.6mm）。
柴胡皂苷α对照品购自自中国药品生物制品检定所，甲醇为色谱醇；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 正交试验因素水平的选择。
2.2 样品提取。
称取制川乌15g、三棱（制）15g、莪术（制）15g、香附（醋制）15g、当归15g、续断15g、牡丹皮15g、蒲黄15g、防风15g、五灵脂（制）15g、红花15g、乌药11.25g、柴胡11.25g、地黄22.5g，共计210g，计9份，按l9（34）正交试验设计表格，加水煎煮，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加水定容至1000ml，即得。
2.3 样品测定。
2.3.1 供试品溶液制备。
精密吸取样品液25ml，置分液漏斗中，加石油醚（75℃）和醋酸乙酯各振摇提取3次，每次30ml，弃去石油醚层和醋酸乙酯层，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，分取正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解，并定量转移至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
一测多评法同时测定消癥微丸中4种柴胡皂苷夏彦铭;董迎;狄留庆;赵晓莉【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2017(039)008【摘要】目的建立一测多评法同时测定消癥微丸(柴胡、香附、大黄等)中4种柴胡皂苷的含有量.方法该药物5％氨水-甲醇提取液的分析采用Waters Xbridge C1s色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-水为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长210、254 nm.以柴胡皂苷a为内标,计算柴胡皂苷b1、b2c的相对校正因子,再测定其含有量.结果 4种柴胡皂苷在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率98.08％～102.94％,RSD 0.85％～1.82％,一测多评法所得结果与外标法接近.结论该方法简单、精确、可行,可用于消癥微丸的质量控制.【总页数】6页(P1620-1625)【作者】夏彦铭;董迎;狄留庆;赵晓莉【作者单位】南京中医药大学药学院,江苏南京210023;南京中医药大学药学院,江苏南京210023;南京中医药大学药学院,江苏南京210023;江苏省中药高效给药系统工程技术研究中心,江苏南京210046;南京市中药微丸产业化工程技术研究中心,江苏南京210046;南京中医药大学药学院,江苏南京210023;江苏省中药高效给药系统工程技术研究中心,江苏南京210046;南京市中药微丸产业化工程技术研究中心,江苏南京210046【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.一测多评法测定冀南产柴胡中柴胡皂苷类成分 [J], 张洪峰;王乐;张凯;刘燕娟2.HPLC-ELSD同时测定柴胡消瘿颗粒中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、芍药苷、阿魏酸及橙皮苷的含量 [J], 周旭;翟延君3.一测多评法在消癥胶囊质量控制中的应用 [J], 李锦;赵晓莉4.HPLC同时测定消癥丸中柴胡皂苷a、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚和橙皮苷 [J], 赵晓莉;贡磊5.一测多评法同时测定柴胡药渣总皂苷中3种次生柴胡皂苷含量 [J], 姜华;李军;张延萍;李欣;徐强;申屠平安因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一测多评法在含皂苷类成分中药质量控制中的应用张纯志（山东省临沂市沂水县马站人民医院药剂科 276403）【摘要】由于中药成分多、多靶点，因此中药质量控制工作较为繁杂困难。
皂苷广泛分布于自然界中，是大部分中药的主要活性物质，皂苷具有抗病毒、抗肿瘤和预防心血管疾病的作用。
一测多评法近几年广泛应用于中药质量控制中，并取得了明白的成绩。
本文就一测多评法在含皂苷类成分中药质量控制中的应用进行详细研究与阐述，以期为今后中药质控领域提供些许参考。
【关键词】一测多评法；皂苷类中药；质量控制；应用【中图分类号】R9 【文献标识码】B 【文章编号】1674-361X(2019)06-0021-02当今市面上有很多含皂苷类的中成药，例如地奥心血康，盾叶冠心宁等，含皂苷累中药的毒副作用很低，治疗效果显著。
在皂苷类中药质量控制中应合理选择评测方法，保证中药的安全性。
常用的质量控制方法有多指标质控模式，但是这种模式对对照品的要求很高，并且价格质控成本高，不适于实际应用。
一测多评法只需测定一个成分，对照品容易获得，从而实现多个成分的定量[1]。
本文总结了近几年含皂苷类成分中药质量控制的研究，分析其潜在风险问题，希望对日后中药和制剂质控工作提供借鉴。
1皂苷类成分及其在中药中的分布皂苷类植物通常分布在大陆高等植物中，少量在海洋生物中。
皂苷又称为皂素和碱皂体。
按皂苷配基结构可以将皂苷分为三萜皂苷和甾体皂苷，比较多见的是三萜皂苷。
三萜皂苷的配基是三萜的衍生物，其分子通式为()685H C ,四环三萜和五环三萜都属于三萜皂苷，五加科（人参、三七）、木通科（预知子）、桔梗科（桔梗）、忍冬科（金银花）、豆科（黄芪）中均有三萜皂苷。
甾体皂苷的苷元是含有27个碳原子的螺甾烷醇或呋甾烷醇，百合科（重楼、知母、麦冬）、蒺藜科（蒺藜）、萝藦科（香加皮）中均有甾体皂苷[2]。
2一测多评法在含皂苷类成分中药质量控制中的应用2.1含三萜皂苷类成分中药质量控制自然界中很多天然药物都有三萜皂苷，三七中有人参皂苷，柴胡中有柴胡皂苷，近几年，一测多评法在三萜皂苷类成分中药的质量控制中广泛应用。
一测多评法同步测定柴胡药材中3种皂苷的含量（作者： _________ 单位：___________ 邮编：___________ ）作者：黄帅，马淼，黄倩倩，符颖，魏建和，潘瑞乐【摘要】目的首次将一测多评分析方法应用于柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d的含量测定，为柴胡药材多指标质量评价奠定基础。
方法以柴胡皂苷a为对照品，建立药材中该成分与柴胡皂苷c及柴胡皂苷d 的相对校正因子，利用校正因子计算柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的含量，同时用外标法测定药材中3种成分的绝对含量，采用t-检验法对一测多评法的计算值与外标法实测值进行比较，评价一测多评法对柴胡药材中3种皂苷含量测定的准确性和科学性。
结果在一定的线性范围内，柴胡皂苷a与柴胡皂苷c 及柴胡皂苷d的相对校正因子分别为0.735，0.944，且在不同的实验条件下重现性良好（RSD=0.70%，0.56%）;常规的外标法对柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的实测含量与一测多评法计算的含量没有显著性差异，经统计学t检验，P0.05，实验所得校正因子可信。
结论该方法使用一个对照品可同时测定柴胡药材中3种柴胡皂苷的含量，为柴胡药材的多指标质量评价及控制提供了科学依据。
【关键词】一测多评；高效液相色谱；校正因子；柴胡；柴胡皂苷中药的质量评价和控制是制约中药现代化、国际化发展的关键问题之一，也一直是中医药研究的难点和热点。
然而，由于中药本身的复杂性，现行以单一活性成分或指标成分定性定量分析为核心的质量控制模式，已不能适应全面控制中药质量的要求，多指标综合质量控制模式已成为中药质量评价和控制的发展趋势。
由于多指标质量控制模式需要足够量的化学对照品，而中药化学对照品分离难度大，有些单体结构不稳定难以分离或分离成本过高等因素，致使中药多指标成分质量控制仅限于科研，在实际生产应用中很难推广。
王智民等［1］利用中药有效成分内在函数和比例关系，提出了“一测多评”的想法，即只测定1个成分(对照品易得者)，来实现对多个成分(对照品没有或难以供应)的同步监控，并已成功运用于木通3种有效成分及人参与三七药材中多种人参皂苷含量的同步测定［1，2］。
中药柴胡为伞形科(Umbelliferae)柴胡属(Bupleurum)植物，柴胡Bupleurum chinense DC.(北柴胡)及狭叶柴胡B. scorzonerifolium Willd.(南柴胡)的干燥根，是一味疗效显著的常用中药，其主要活性成分为柴胡皂苷a、柴胡皂苷d及柴胡皂苷c，目前柴胡的质量评价主要以这3种成分作为指标［3〜5］。
由于柴胡皂苷结构复杂，在酸性条件下不稳定等，其对照品制备难度非常大，致使柴胡药材及制剂的质量难以准确控制。
本文以柴胡皂苷a (SSa)作为对照品，建立柴胡皂苷a与柴胡皂苷d (SSd)及柴胡皂苷c (SSc)的相对校正因子，并用相对校正因子计算柴胡皂苷d及柴胡皂苷c的含量。
以统计学t-检验法对相对校正因子的计算值与外标法实测值进行比较，对不同品牌色谱柱、不同厂家的高效液相色谱仪及不同实验室的实验结果进行考察，综合评价一测多评法在柴胡药材中应用的准确性和科学性。
1仪器与试药Waters系列高效液相色谱仪，包括：Waters 600 controller ，Waters 600 pump ，Waters 2487 dual absorbanee detector ，Waters Empower工作站。
电子分析天平（上海天平仪器厂），KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），乙腈、甲醇为色谱纯（Fisher 公司）。
Wahaha纯净水（市售），提取用甲醇为分析纯（北京化工厂）。
柴胡皂苷a（批号110777-200406）和柴胡皂苷d（批号110778-200505）均由中国药品生物制品检定所提供，柴胡皂苷c由本实验室分离纯化，HPLC（面积归一化法）纯度98%。
柴胡药材收集自不同产地，经作者鉴定为北柴胡 B. chinense DC.的干燥根。
对照品结构式见图1。
图1柴胡皂苷a （1），柴胡皂苷d （2）和柴胡皂苷c （3）的结构式2方法与结果2.1方法原理在一定的线性范围内成分的量（质量或浓度）与检测器响应成正比，即：W=f朋［6］。
在多指标质量评价时，以药材中某一典型组分（有对照品供应者）为内标，建立该组分与其他组分之间的相对校正因子，通过校正因子计算其他组分的含量。
这种测定一个成分，实现对多个成分定量的方法命名为一测多评法。
假设某样品中含有i个组分，存在Wi/Ai二fi(i=1,2,…,k,…,m)①。
式中Ai为组分i的峰面积;Wi为i组分的量。
选取其中一组分k为内标，建立组分k与其他组分m之间的相对校正因子，有fkm=fk/fm=(Wk xAm) /(Wm X Ak)②。
由此可导出定量计算公式：Wm=(Wk X Am) /(fkmX Ak)③。
式中Ak为内标物峰面积，Wk为内标物量;Am为组分m的峰面积，Wm为组分m的量。
2.2 一测多评方法学考察2.2.1 色谱条件色谱柱为Venusi ASB-C18 柱(4.6 mm X250 mm,5g);流动相：乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱(0〜50 min, 25TO% A;50 〜55 min,90 T0% A;55 〜60 min, 90 展5% A;60 〜70 min, 25 宀25% A);流速1.0 ml min-1;柱温30 C ;检测波长210 nm。
在上述色谱条件下，SSc，SSa，SSd与其它峰能达到较好的分离。
对照品及样品HPLC图谱见图2。
2.2.2对照品溶液的制备精密称定柴胡皂苷c、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品1.02，2.05，2.39 mg置于同一 2 ml量瓶中，用色谱甲醇定容，制得混合对照品溶液，于4C保存备用。
1.SSc2.SSa3.SSd图2对照品(A)及样品(B)的HPLC图2.2.3供试品溶液的制备取本品粉末(过60目筛)约0.5 g，精密称定，置50 ml三角瓶中，加入5%氨水甲醇溶液25 ml，密闭，于30 C水温超声处理30 min，滤过，滤渣用甲醇润洗两次，每次10 ml，合并滤液，回收甲醇至干。
残渣加甲醇（色谱纯）溶解并转移至5 ml 量瓶中，过0.45 mm的微孔滤膜，即得。
224线性范围精密吸取上述混合对照品溶液2, 5, 10, 15, 20 “注入高效液相色谱仪，按2.2.1 ”项下色谱条件进行分析。
分别以对照品量C （⑷）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得柴胡皂苷c、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的标准曲线回归方程及线性范围（见表1），表明各化合物在相应范围内线性关系良好。
表1线性关系实验结果2.2.5校正因子计算以SSa为内标，按2.1 ”项下公式②，分别计算SSa对SSc禾口SSd的校正因子，见表2。
表2 SSa对SSc禾口SSd的相对校正因子2.2.6精密度实验精密吸取同一混合对照品溶液20山连续进样6次，记录SSc, SSa和SSd的峰面积，其峰面积的RSD分别为 1.40%，1.30%和1.47%。
表明仪器精密度良好，符合含量测定要求。
2.2.7稳定性实验取同一供试品溶液20 “分别于0，2，4, 6, 8, 10 h进样测定，记录SSc, SSa和SSd峰面积，其峰面积的RSD 分别为1.70%, 2.00% 和2.10%。
表明SSc、SSa 和SSd 在10 h 内稳定不变。
2.2.8重复性实验称取同一批柴胡药材粉末（60目）约0.50 g共6份,精密称定，按供试品溶液处理方法制备样品并测定，SSc, SSa 和SSd 含量的RSD（n=6）分别为 1.20%, 2.94% 和 2.87%。
表明实验方法重复性较好。
229加样回收率精密称取已知含量的柴胡药材粉末(60目)适量6份，分别加入一定量的SSa对照品，按供试品溶液处理方法制备样品并测定，计算加样回收率，SSa的平均回收率为101.64%,RSD(n=6)为2.33%。
表明实验方法准确度符合要求。
2.2.10样品测定分别精密吸取供试品、混合标准品各20山注入高效液相色谱仪并测定。
分别采用一测多评法和外标法计算柴胡药材中SSc、SSa和SSd含量(见表3)。
表3两种方法测定不同产地柴胡药材中3种皂苷含量2.3 一测多评方法耐用性和系统适应性评价2.3.1色谱柱及高效液相色谱仪考察取2.2.2 ”项下混合对照品溶液，进样2, 5, 10, 15, 20山测定，按22.5 ”项下计算SSa对SSc禾口SSd的校正因子。
实验考察了Waters 600, Waters 2690 两种高效液相色谱系统和Venusi ASB-C18(4.6 mm >250 mm, 5 ^m), Venusi MP-C18(4.6 mm X250 mm, 5 ^m)，Hibar RT-C18(4.6 mm >250 mm, 5 ^m) 3 种色谱柱。
结果见表4。
表4不同仪器和不同色谱柱测得的相对校正因子2.3.2实验室考察采用建立的一测多评分析方法在两个实验室进行复核实验，结果表明两个实验室实验结果差异不大。
见表5。
表5不同实验室测得的相对校正因子2.4统计学方法采用统计学t检验，对一测多评法与常规法得到的柴胡药材SSc和SSd含量进行比较，P0.05，表明两种方法测得含量没有显著性差异。
3讨论本实验通过方法学验证、方法耐用性、系统适应性考察，对一测多评法用于柴胡药材3种皂苷含量测定的技术适用性和应用可行性进行了探讨。
结果表明在不同色谱柱、不同仪器及不同实验条件下，柴胡皂苷a 与柴胡皂苷c和柴胡皂苷d之间的相对校正因子（RCF）有较好的重现性（RSD分别为0.70%和0.56%）。
用一测多评法计算的含量与常规的外标法测得的含量经统计学t-检验没有显著性差异，说明本研究所得的SSa对SSc与SSd的校正因子具有普适性。
在本研究的色谱条件下，柴胡药材HPLC色谱图中色谱峰比较简单，可以通过SSa与SSc和SS d之间的相对保留时间差进行色谱峰定位，因此在定量柴胡皂苷a、c、d含量时，只要有柴胡皂苷 a 一个对照品，即可通过该方法实现3种成分同步含量测定。
本实验所得的相对保留时间差RTSSa-RTSSc 和RTSSa-RTSSd 的平均值分别为3.7185 和-5.9955 min，校正因子f SSa/SSc 和f SSa/SSd 的平均值分别为0.742和0.945，可供参考和使用。
中药化学成分非常复杂，在不同色谱条件下有不同的色谱峰，在同一色谱条件下，其色谱峰的数量、出峰时间及峰形等也受色谱柱、仪器及溶剂系统等多种因素影响，因此如何将待测色谱峰准确定位，是“一测多评”方法能否成功应用的关健问题，需要进行深入广泛的研究。
