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淋巴瘤诊疗规范（2018年版）欧阳光明（2021.03.07）一、概述淋巴瘤（lyphoma）是我国最常见的恶性肿瘤之一。
根据国家癌症中心公布的数据，2014年我国淋巴瘤的确诊发病率为 5.94/10万，2015年预计发病率约为 6.89/10万。
由于淋巴瘤病理类型复杂，治疗原则各有不同，为进一步提高淋巴瘤诊疗能力和规范化水平，配合抗肿瘤药品供应保障有关政策调整，保障医疗质量与安全，现对《中国恶性淋巴瘤诊疗规范（2015年版）》进行修订和更新。
二、淋巴瘤的诊断应当结合患者的临床表现、体格检查、实验室检查、影像学检查和病理学等进行诊断。
（一）临床表现淋巴瘤的症状包括全身和局部症状。
全身症状包括不明原因的发热、盗汗、体重下降、皮肤瘙痒和乏力等。
局部症状取决于病变不同的原发和受侵部位，淋巴瘤可以原发于身体的任何器官和组织，通常分为原发于淋巴结和淋巴结外两大类。
最常见表现为无痛性的进行性淋巴结肿大。
如有以上述症状的患者在基层医院就诊时，应予以重视，并尽早转诊至上级医院或肿瘤专科医院。
（二）体格检查应特别注意不同区域的淋巴结是否增大、肝脾的大小、伴随体征和一般状态等。
（三）实验室检查应完成的实验室检查包括血常规、肝肾功能、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、β2微球蛋白、红细胞沉降率、乙型肝炎和丙型肝炎病毒检测以及骨髓穿刺细胞学和活检等，还应包括人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）筛查在内的相关感染性筛查。
对原发胃的黏膜相关边缘带B细胞淋巴瘤，应常规进行幽门螺杆菌（helicobacter pylori，Hp）染色检查；对NK/T细胞淋巴瘤患者，应进行外周血EB病毒DNA滴度检测。
对于存在中枢神经系统受累风险的患者应进行腰穿，予以脑脊液生化、常规和细胞学等检查。
（四）影像学检查常用的影像检查方法：计算机断层扫描（computed tomography，CT）、核磁共振（nuclear magnetic resonance，MRI）、正电子发射计算机断层显像（positron emission tomography，PET-CT）、超声和内镜等。
Ｔ细胞淋巴瘤ＴＣＲＴ基Ｎ重排特征分析及检测方法的优化摘要研究背景与目的淋巴瘤在组织和细胞形态学方面与高度反应增生性淋巴组织的鉴别诊断十分困难，容易造成误诊。
淋巴瘤病理诊断是临床病理工作的难题之一。
目前国内主要依靠以形态学为主、免疫组化为辅的诊断手段。
随着分子生物学的发展，从基因水平研究和分析诊断疾病的技术不断出现并且日趋成熟，为淋巴瘤诊断提供了有效工具。
淋巴瘤是由单克隆淋巴细胞增生所致，而反应增生性淋巴组织则来自于多克隆淋巴细胞，这是二者的重要区别。
编码免疫球蛋白（Ｉｇ）或Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）的基因经过重排以后，不同克隆之间的重排基因互不相同，因此，基因重排对淋巴瘤的诊断具有特异性价值。
以ＰＣＲ技术为基础的方法以其简便、高效、廉价及适用面广而在淋巴瘤基因重排研究方面越来越受重视。
但不同研究文献中所采用的引物、ＰＣＲ条件、ＰＣＲ产物检测方法等都不尽相同，结果也有差异。
因此，难以找到适于常规临床病理诊断之用的标准程序。
Ｊｕｒｋａｔ细胞是Ｔ细胞淋巴瘤基因重排研究中常用的阳性对照细胞，但有关Ｊｕｒｋａｔ细胞基因重排的详细情况也未见报道。
假基因是Ｉｇ和ＴＣＲ胚系ＤＮＡ中常见的基因，有关假基因参与重排的情况以及在设计引物方面是否应将假基因包括在内也未见有关研究报道。
本实验以ＴＣＲ基因重排为研究对象，通过优化引物选择、ＰＣＲ条件及ＰＣＲ产物的检测方法等，分析Ｔ细胞淋巴瘤基因重排检测的最佳方法。
同时，分析ＴＣＲ基因重排的特点，为进一步研究ＴＣＲ基因重排提供理论和技术支持。
方法１以ＴＣＲｙ基因重排为研究对象，选用通用引物ＴＶＧ、ＶｖＩ及ＴＣＲ７家族特异性引物为工具。
用正交设计实验优化ⅥＩ引物的ＰＣＲ条件。
另选一对ＴＣＲ［ｊ通用引物作为ＴＣＲｙ引物的补充和比较。
２利用ＰＣＲ和测序研究Ｊｕｒｋａｔ细胞基因重排情况，分析ＴＣＲ基因重排的基本特点。
３ＰＣＲ产物检测方法①利用ＴＣＲ通用引物检测淋巴瘤克隆性基因重排阳性率，分别用琼脂糖电泳和ＳＳＣＰ分析ＰＣＲ产物；②将ＰＣＲ产物分别进行直接测序和克隆后测序，分析ＴＣＲ基因重排的特点及探索测序方法在基因重排检测中的应用；⑧分析ＰＣＲ产物中ＤＮＡ的克隆数与ＳＳＣＰ中条带数目的关系。
基因突变和基因重排的检测方法基因突变和基因重排是影响生命过程的两个关键机制。
突变是指DNA序列发生了错误，而重排则是指基因组中的一段DNA序列被移动或复制到另一个位置。
这些变化会导致有害的影响，如导致癌症、自身免疫性疾病和遗传病等。
因此，检测这些变化变得极其重要，以便及早发现并防止这些疾病的发生。
在过去几十年里，科学家已经开发出了多种基因突变和基因重排的检测方法，其中一些方法在诊断遗传性疾病和癌症等方面证明了非常有效。
下面是一些常见的基因突变和基因重排检测方法。
1. Sanger测序Sanger测序是第一种可靠的DNA测序技术，通过分析DNA序列来检测突变和重排。
将DNA反复复制并添加特定的荧光标记，然后测量不同荧光信号的强度来确定DNA序列。
这种方法可以检测单个基因的突变以及一些基因的重排，并已广泛用于诊断遗传性疾病和癌症等。
2. PCRPCR是另一种常见的基因检测方法，它使用聚合酶链反应技术来扩增DNA片段。
通过扩增目标DNA片段，可以检测基因突变和重排。
PCR可以用于从血液、唾液和口腔黏膜等样本中提取DNA，并且已成为诊断基因突变和重排的主要工具。
3. FISHFISH是一种高度特异性的细胞遗传学方法，可用于检测基因重排。
通过将荧光标记的DNA探针与细胞的染色体配对，科学家可以识别染色体上的重排。
这种方法已被广泛用于癌症分析和遗传诊断等领域。
4. CGHCGH是一种用于检测基因重排的分子遗传学技术。
它可以检测整个基因组上的DNA重排，而不是单个基因。
CGH技术基于比较样品DNA和控制DNA之间的差异，以检测DNA重排的部位和类型。
这种方法已被广泛用于研究人类基因组的变异，并在癌症和遗传性疾病诊断中得到应用。
5. NGSNGS是一种DNA测序方法，可以快速、准确地测定DNA序列。
它通过将样品DNA纳入微型反应器中，然后生成数以百万计的DNA片段。
NGS技术可以同时检测多个基因的突变和重排，并已广泛用于快速检测基因变异。
TCR Gene Rearrangement in the Pathologic Diagnosisof T-cell LymphomaDissertation Submitted toNorth China University of Science and Technology in partial fulfillment of the requirementfor the degree ofMaster of MedicinebyJia Wen(Pathology and Pathophysiology)Supervisor:Ph.D Ma XiaobingJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。
论文作者签名：日期：2015年6月10日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。
作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。
作者签名：导师签名：签字日期：2015年6月10日签字日期：2015年6月10日√摘要摘要目的探讨T细胞抗原受体（T cell receptor，TCR）基因重排在T细胞淋巴瘤中的特异性及其在病理诊断中的价值。
由于淋巴瘤在临床病理诊断中难度较大，仅凭HE和免疫组织化学特点得出的结论易造成误诊和漏诊。
在恶性淋巴瘤的分类中，T细胞淋巴瘤是一种临床上相对少见且异质性较高的肿瘤，准确做出诊断给病人的治疗和预后带来不可或缺的价值。
bcr基因重排
bcr基因重排是一种常见的基因突变，它发生在B细胞白血病和淋巴瘤等恶性肿瘤中。
bcr基因位于长臂染色体22上，它编码一种酪氨酸激酶，与另一染色体上的abl基因融合后，产生了一种瘤原蛋白bcr-abl。
bcr-abl瘤原蛋白具有不受控制的酪氨酸激酶活性，导致细胞增殖和抗凋亡机制的紊乱，从而导致白血病和淋巴瘤等恶性肿瘤的发生。
bcr基因重排是这些疾病中最常见的突变之一，对于诊断和治疗具有重要意义。
目前，针对bcr-abl瘤原蛋白的靶向治疗已经成为一种常用的治疗策略，有效地改善了患者的生存率和疗效。
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T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用潘鑫艳;杨长绍;黎贵芸;杨举伦;王丽【摘要】目的：探讨T细胞受体( T cell receptors, TCR)基因重排检测对T细胞性淋巴瘤诊断的价值。
方法收集T细胞性淋巴瘤30例和淋巴反应性增生组织30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的56条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析结果。
结果30例T细胞性淋巴瘤标本中TCRβ、TCRγ、TCRδ的检出率分别为83．3%(25/30)、93．3%(28/30)、13．3%(4/30),三者联合检测的检出率为96．7%(29/30),30例淋巴反应性增生组织中均未检测出TCR 基因重排。
结论利用BIOMED-2引物系统检测TCR 基因重排可作为T细胞性淋巴瘤的辅助诊断工具。
%Purpose To discuss the TCR gene rearrangements in the diagnosis of T-cell lymphomas. Methods Formalin-fixed and paraffin-embedded samples including 30 cases of T-cell lymphomas and 30 cases of reactive lymphoid hyperplasia were chosen for ex-tracting genomic DNA and PCR amplification using 56 BIOMED-2 primers. PCR products were analyzed by heteroduplex and polyacryl-amide gel electrophoresis. Results In all 30 cases of T-cell lymphomas, 25 cases (83. 3%) showed TCRβ gene monoclonal rear-ran gements, 28 cases (93. 3%) of TCRγ gene monoclonal rearrangements, 4 cases (13. 3%) of TCRδ gene monoclonal rearrange-ments. 29 cases (96. 7%) with TCRβ+TCRγ+TCRδ gene monoclonal rearrangements were detected. but no clonal TCR gene rear-rangements were found in 30 cases of reactive lymphoid hyperplasia. Conclusions The detection of TCR gene rearrangements using BIOMED-2 primers is a useful assistant method for the diagnosis of T-cell lymphomas.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】4页(P400-403)【关键词】T细胞性淋巴瘤;基因重排;BIOMED-2;TCR基因【作者】潘鑫艳;杨长绍;黎贵芸;杨举伦;王丽【作者单位】成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032;成都军区昆明总医院病理科，昆明 650032【正文语种】中文【中图分类】R733.4非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma，NHL)包括B细胞性淋巴瘤(B-cell lymphoma)和T细胞性淋巴瘤(T-cell lymphoma)，因T细胞性淋巴瘤种类繁多，分类复杂，病理诊断较难。
基因重排检测技术的建立及其在淋巴瘤诊断中的应用【关键词】淋巴瘤Detection and clinical significance of gene rearrangements in diagnosis of lymphomas【Abstract】 AIM: To establish a way to detect the gene rearrangements of IgH and TCR and to assess the application of the detection technique in the diagnosis of malignant lymphoma. METHODS: Fiftythree cases of malignant lymphoma and 20 cases of reactive lymphoid hyperplasia were chosen for making tissue sections. Genomic DNA was extracted， and amplified via PCR. The products were resolved on denaturing polyacrylamide gels and visualized through silver staining. RESULTS: Gene rearrangements of IgH and TCR were negative in 20 cases of reactive lymphoid hyperplasia. In all of 18 cases of T cellnonHodgkins lymphoma (TNHL)， gene rearrangement of TCR γ was found in 12 cases and that of TCR β was found in 3 cases， and IgH gene rearrangement was not found. IgH gene rearrangement was found in 28 cases out of 32 cases of B cellNHL (BNHL)，in 2 cases of which gene rearrangements of TCR γ and IgH were both found. There was IgH gene rearrangement in 3 cases of suspected lymphomas. There was a remarkable difference between NHL group and benign group in gene rearrangment (P<0.05). CONCLUSION: The detection of gene rearrangements of IgH and TCR by PCR can be a kind of subsidiary means to diagnose the lymphoproliferative disease. Particularly， the clonality showed in the formalinfixed and paraffinembedded samples may be useful in the retrospective researches.【Keywords】 lymphoma; gene rearrangement; polymerase chain reaction; neoplasm【摘要】目的：建立基于克隆性分析技术的B和T淋巴细胞产生的抗原受体分子基因重排检测技术，探讨B淋巴细胞免疫球蛋白及T淋巴细胞受体基因重排在恶性淋巴瘤临床诊断中的应用. 方法：从组织蜡块中切取组织片5~10张，提取基因组DNA，PCR扩增，聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示基因重排结果. 结果：20例良性淋巴组织反应性增生病例中，淋巴细胞IgH及TCR基因重排均为阴性；18例T细胞非何杰金氏淋巴瘤中TCRγ基因重排12例，TCRβ基因重排3例，未见有IgH基因重排；32例B细胞性非何杰金氏淋巴瘤标本中有28例IgH基因重排阳性，有2例TCRγ和IgH基因重排均阳性；3例未确诊的疑难病例均为IgH基因重排；IgH及TCR基因重排检出率在淋巴瘤组与良性组之间，差异有显著意义(P<0.05). 结论：应用PCR法检测B淋巴细胞IgH和T淋巴细胞TCR基因重排可作为淋巴细胞来源的良、恶性病变的一种辅助诊断手段，且适用于石蜡标本以进行回顾性研究.【关键词】淋巴瘤；基因重排；聚合酶链反应；肿瘤0引言恶性淋巴瘤(malignant lymphoma)是免疫系统的原发性恶性肿瘤，主要发生于淋巴器官和淋巴组织. 根据肿瘤的组织结构及细胞学特征可分为何杰金氏病（Hodgkins disease， HD）及非何杰金恶性淋巴瘤（nonHodgkins malignant lymphoma， NHL），淋巴瘤的诊断一直是病理诊断中的难点，部分淋巴组织增生性病变单纯通过HE和免疫组化很难明确性质，另外NHL由于种类繁多，分类复杂，给临床病理工作者带来了一定的困难.淋巴细胞从原始的胚系构型到分化成熟，其抗原受体(Ig和TCR)基因通过基因重排而形成有功能的基因. 一个T，B细胞或其克隆性后代，均只含一种独特的分子遗传学标记. 一旦某一克隆的淋巴细胞发生恶性变化，即可呈现特异的基因重排［1］. 因此，对基因重排类型进行检测可用于对淋巴细胞增殖性疾病的诊断. 此研究拟应用这一手段，探讨淋巴组织增生性病变的性质，并对该技术在恶性淋巴瘤中的诊断价值进行探讨.1材料和方法1.1材料53例恶性淋巴瘤标本均来自第四军医大学唐都医院病理科（1995~2005）. 其中男性29例（55%），女性24例（45%）；年龄12~76岁，平均年龄44.2岁. 所有标本均为福尔马林固定、石蜡包埋组织. 其中B细胞非何杰金淋巴瘤32例，T细胞非何杰金淋巴瘤18例，未能定性的淋巴组织增生性病变3例. 20例良性淋巴组织反应性增生病例作为阴性对照. 所有淋巴瘤病例均在取PCR 模板前经临床病理HE和免疫组化标记（B细胞: CD20，CD79α; T细胞: CD3，CD45RO）证实，以确定为相应病例且所取部位确为病变部位，包含有需检测的部分. 3例未能定性的淋巴组织增生性病变怀疑为BNHL(免疫组化标记CD79α阳性)，但诊断仍未明确.1.2方法1.2.1石蜡包埋组织DNA的提取每例标本制备厚度为4 μm的切片6张，贴于载玻片上，常规烤片、二甲苯脱蜡、乙醇冲洗，切片自然干燥. 用无菌双面刀片将组织刮入1.5 mL的离心管中，按以前的方法［2-3］提取基因组DNA.1.2.2引物合成引物序列由上海生工生物工程技术公司合成. 引物序列为: β球蛋白基因内对照PC03：ACACAACTGTGTTCACTAGC， PC04：CAACTTCATCCACGTTCACC；免疫球蛋白基因重排(IgH) FR3A：ACACGGCTGTGTATTACTGT， LJH： TGAGGAGACGGTGACC，VLJH：GTGACCAGGGTACCTTGGCCCCAG；T细胞受体基因重排(TCR β链和γ链)Db1: CAAAGCTGTAACATTGTGGGGAC， Jb2:AGCACTGTGAGCCTGGTGCC，TVG: AGGGTTGTGTTGGAATCAGG， TJX: CGTCGACAACAAGTGTTGTTCCAC，Vγ11: TCTGGAGTCTATTACTGTGC，Vγ101: CTCACACTCTCACTTC，Jγ12:CAAGTGTTG TTCCACTGCC， Jp12: GTTACTATGAGCTAGTCC.1.2.3PCR扩增及循环条件PCR扩增在PT200型热循环仪（MJ Research）上进行. 反应体系为25 μL，含10 mmol/L dNTP（Gibco BRL）2 μL，10×缓冲液2.5 μL，50 mmol/L MgCl2 0.75 μL，Taq DNA聚合酶（Gibco BRL） 1 U，20 pmol/L引物1 μL，DNA样品1~5 μL. IgH基因采用半巢氏PCR扩增: 第一轮引物为FR3A和LJH，95℃预变性3 min，然后94℃变性40 s，62℃退火50 s，72℃延伸40 s，共30个循环; 最后72℃延伸10 min. 扩增产物经1∶100稀释后取1 μL进行第二轮扩增，引物为FR3A和VLJH，95℃预变性3 min，然后94℃变性40 s，60℃退火50 s，72℃延伸40 s，共30个循环; 最后72℃延伸10 min. FR 3A与VLJH扩增产物为100～120 bp.TCRβ和TCRγ采用40个循环，其中TCRγ引物为Vγ11，Vγ101和Jγ12或Vγ11，Vγ101和Jp12的混合物. 95℃预变性3 min，然后94℃变性40 s，56℃退火50 s，72℃延伸40 s；最后72℃延伸10 min. TCRβ扩增产物为65～85 bp. TCRγ各组扩增产物在70～200 bp不等.β球蛋白基因引物作为内对照进行扩赠，共40个循环. 95℃预变性3 min，然后94℃变性40 s，60℃退火50 s，72℃延伸40 s；最后72℃延伸10 min. 产物长度为110 bp.1.2.4电泳及结果观察琼脂糖凝胶（20 g/L）电泳评价扩增效果后，将3 μL产物和等体积的上样缓冲液［4］（990 mL/L甲酰胺，1 g/L溴酚蓝，1 g/L二甲苯青）混匀后加到厚度为0.8 mm的聚丙烯酰胺凝胶（100 g/L，含尿素8mol/L），应用miniVE系统（AmershamPharmacia Biotech）泳动8 h（80 V）.取出后按以前的方法［2］银染，分别用UVP凝胶分析系统（UVP， Cambridge，UK）和光学照相记录数据，根据IgH及TCR相应阳性位置判断结果.1.2.5结果判定阳性结果判定标准：①PCR扩增电泳条带清晰，宽度不大于1 mm，边缘锐利；②片段大小与预计范围相符，与期望值相差不超过5 bp；③若出现期望值大小之外的其他条带或期望值内出现两条或以上可接受的条带，应判定为重排阴性.统计学处理：采用SPSS 10.0统计分析软件对组间率的差别进行χ2检验，以P<0.05为有统计学意义.2结果2.1组织学观察和免疫组织化学结果32例B细胞非何杰金淋巴瘤免疫组化证实CD20和(或)CD79α阳性， CD3和CD45RO阴性（图1）; 18例T细胞非何杰金淋巴瘤免疫组化证实CD3和(或)CD45RO阳性， CD20和CD79α阴性（图2），支持原来的诊断和分型. 3例未能定性的淋巴组织增生性病变免疫组化标记CD79α阳性， CD3和CD45RO阴性，怀疑为BNHL. 20例良性淋巴组织反应性增生病例CD20，CD79α，CD3，CD45RO均有不同程度的阳性表达.A: CD79а； B: CD20.图1BNHL组织中CD79а和CD20阳性表达（略）A: CD45RO； B: CD3.图2TNHL组织中CD45RO和CD3阳性表达（略）2.2基因重排检测结果2.2.1石蜡组织标本DNA检测PC03，PC04引物对良性增生的淋巴组织以及淋巴瘤组织DNA进行扩增，均见110 bp大小的β球蛋白特异条带（图3）.右侧泳道为100 bp DNA标志物的位置. 1：实验组TNHL. 黄色箭头为110 bp涌动位置;2：实验组BNHL；3：阳性对照TNHL（已知TCRγ重排阳性）；4：阳性对照BNHL（已知IgH重排阳性）；5：反应性增生淋巴组织作为阴性对照.图3PC03/PC04引物PCR扩增结果电泳图（略）2.2.2良性淋巴组织反应性增生病例结果20例良性淋巴组织反应性增生病变组织B细胞和T细胞抗原受体重排均为阴性（图4）.2.2.3阳性对照T，B淋巴瘤检测结果B细胞淋巴瘤阳性对照标本组织B细胞Ig重排阳性（图5）. T细胞淋巴瘤阳性对照标本组织T细胞TCRγ1重排阳性（图6）.右侧泳道为100 bp DNA标志物的位置. 1：IgH FR3A/LJH， FR3A/VLJH引物扩增产物；2：TCRβDb1/Jb2引物扩增产物；3：TCRγ1 TVG/TJX引物扩增产物；4：TCRγ2 Vγ11/Vγ101/Jγ12引物扩增产物； 5：TCRγ3Vγ11/Vγ101/Jp12引物扩增产物. 黄色箭头为110 bp涌动位置.图4良性淋巴组织反应性增生病例PCR扩增结果电泳图（略）左侧泳道为100 bp DNA标志物的位置. 1：内对照PC03/PC04引物扩增产物；2：IgH FR3A/LJH，FR3A/VLJH引物扩增产物；3：TCRβDb1/Jb2引物扩增产物； 4：TCRγ1 TVG/TJX引物扩增产物； 5：TCRγ2 Vγ11/Vγ101/Jγ12引物扩增产物；6：TCRγ3 Vγ11/Vγ101/Jp12引物扩增产物；7：阴性对照FR3A/LJH，FR3A/VLJH引物扩增产物. 黄色箭头为110 bp涌动位置.图5阳性对照BNHL PCR扩增结果电泳图（略）2.2.4淋巴瘤组织检测结果18例T细胞淋巴瘤中TCRγ基因重排为12例，TCRβ基因重排为3例， TCR基因重排阳性率83.3%，与良性组（TCR基因重排均阴性）相比，差异有显著意义(χ2=15.10， P<0.05)；32例B细胞性非何杰金氏淋巴瘤标本中有28例IgH基因重排阳性，其中2例TCRγ基因重排也阳性，基因重排阳性率87.5%，与良性组（IgH基因重排均阴性）相比，差异有显著意义(χ2=25.30， P<0.05).中间泳道为100 bp DNA标志物的位置. 1：TCRβDb1/Jb2引物扩增产物； 2：TCRγ3 Vγ11/Vγ101/Jp12引物扩增产物；3：TCRγ2Vγ11/Vγ101/Jγ12引物扩增产物；4：TCRγ1 TVG/TJX与内对照PC03/PC04引物扩增产物；5：阴性对照TCRγ1 TVG/TJX与内对照PC03/PC04引物扩增产物；6：阴性对照TCRγ2 Vγ11/Vγ101/Jγ12引物扩增产物； 7：阴性对照TCRγ3Vγ11/Vγ101/Jp12引物扩增产物；8：IgH FR3A/LJH，FR3A/VLJH引物扩增产物. 黄色箭头为110 bp涌动位置，红色箭头为190 bp涌动位置，红色箭头为80 bp涌动位置.图6阳性对照TNHL PCR扩增结果电泳图（略）2.2.5未确诊病例检测结果3例未确诊的疑难病例均为IgH基因重排，经FR3A/LJH，FR3A/VLJH引物采用半巢氏PCR扩增后出现95 bp大小IgH阳性条带.3讨论恶性淋巴瘤(malignant lymphoma)是免疫系统的原发性恶性肿瘤，主要发生于淋巴器官和淋巴组织. 淋巴瘤的诊断一直是病理诊断中的难点，部分淋巴组织增生性病变单纯通过HE染色和免疫组化方法很难明确性质，另外NHL种类繁多，分类复杂，给临床病理工作者带来了一定的困难［5］.干细胞在向淋巴细胞分化过程中， Ig重链基因(IgH)和T细胞受体(TCR)基因的可变区(V)和结合区(J)基因会发生重排［6］. 基因重排过程是一个正常的过程，正常淋巴细胞在发育中是多克隆性质，但淋巴造血系统肿瘤所具有的是单克隆性重排，也就是全部肿瘤细胞具有一个相同的免疫球蛋白或TCR 基因重排，即表现为重排基因为单一模式，这对研究淋巴细胞恶变的机制和解决临床的诊断问题都十分重要［6］. 检测单克隆性免疫球蛋白和T细胞受体基因有助于鉴别淋巴系统的肿瘤性和反应性增生，并确定细胞的来源.本研究中18例T细胞淋巴瘤中TCRγ基因重排为12例，TCRβ基因重排为3例， TCR基因重排阳性率83.3%，与Diss等［7］报道的T 细胞淋巴瘤78.2%的检出率相近. 而良性淋巴组织未见克隆性条带， TCR基因重排检出率在TNHL及良性淋巴结反应性增生之间相比，差异有显著意义(P<0.05). 说明TCR基因引物对T细胞性NHL的克隆性确定有重要价值. 32例B细胞性非何杰金氏淋巴瘤标本中有28例IgH基因重排阳性，基因重排阳性率87.5%，与Kros等［8］报道的B细胞淋巴瘤77%的检出率以及国内王萍等［9］报道的B细胞淋巴瘤72 %的检出率相近. 而TNHL及反应性增生均未见IgH克隆性基因重排， IgH基因重排检出率在BNHL及良性淋巴结反应性增生之间相比，差异有显著意义(P<0.05). 说明IgH基因引物对B细胞性NHL的克隆性和细胞源性确定有重要价值，可用于淋巴瘤的诊断和分型.B淋巴细胞产生的抗原受体分子Ig和T淋巴细胞产生的抗原受体分子TCR，其编码基因在细胞的分化过程中均发生重排. 一个T，B细胞或其克隆性后代，均只含一种独特的分子遗传学标记. 大量的实验已证实，淋巴细胞肿瘤源于单克隆性增生. 我们利用特定的引物对其基因进行扩增，当将扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时，多克隆淋巴细胞将产生一片弥漫带（见于反应性增生），而单克隆性增殖的淋巴组织则出现一明显条带（见于恶性淋巴瘤）.因此对于淋巴瘤的诊断，首先应依靠形态学检查，并辅以免疫组化结果，对于仍不能明确诊断一小部分病例得，可行基因重排检测，在本研究中有3例较难诊断病例，由于病理HE切片、免疫组化均不能做出明确诊断，通过运用PCR技术对其进行基因重排检测，有IgH的特异性重排条带，提示基因重排的检测对于识别此类交界性及淋巴瘤的早期发现可能具有重要价值.参考文献［1］ Garcia MJ， Delgado BM， Granizo JJ， et al. IgH，TCRγ and TCRβ gene rearrangement in 80 B and Tcell NonHodgkins lymphomas: Study of the association between proliferation and the socalled “A berrant” patterns［J］. Diag Mol Pathol， 2001， 10(2): 69-77.［2］王淑芳，苏勤，朱少君，等．多发性子宫平滑肌瘤的克隆性［J］．中华病理学杂志，2002， 31:107-111.［3］朱少君，苏勤，王淑芳，等. 女性外阴尖锐湿疣的克隆性［J］. 诊断病理学杂志， 2003， 10:81-84.［4］ Lucas DR， Shroyer KR， McCarthy PJ， et al. Desmoid tumor is a clonal cellular proliferation: PCR amplification of HUMARA for analysis of patterns of Xchromosome inactivation［J］. Am J SurgPathol， 1997， 21:306-312.［5］高子芬，潘增刚，裴斐，译. 女性生殖系统. 见: Juan Rosai，ed. 回允中，主译. 阿克曼外科病理学［M］. 8版. 沈阳: 辽宁教育出版社，1999. 1319.［6］朱平. 现代血液肿瘤诊断治疗学［M］ . 北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1998:24-41.［7］ Diss TC， Watts M， Pan LX， et al. The polymerase chain reaction in the demonstration of monoclonality in T cell lymphomas［J］. J Clin Pathol， 1995， 48:1045-1050.［8］ Kros JM， Bagdi EK， Zheng P， et al. Analysis of immunoglobulin H gene rearrangement by polymerase chain reaction in primary central nervous system lymphoma［J］. J Neurosurg， 2002，97:1390-1396.［9］王萍，王瑞年，卢健，等. 非霍奇金淋巴瘤的IgH和TCRδ基因重排［J］. 临床与实验病理学杂志， 2002，18: 21-23.。
恶性肿瘤研究基因测序技术在精准治疗中的应用恶性肿瘤一直以来是医学界和社会关注的焦点之一。
虽然传统的治疗手段在一定程度上可以减轻患者的痛苦，但是与此同时也面临着许多问题，比如不同患者对同一治疗方法的反应差异、大部分患者的肿瘤容易复发和转移等。
如何提高恶性肿瘤的治疗效果成为亟待解决的问题。
近年来，恶性肿瘤研究领域涌现出了一项前沿技术——基因测序技术，并成功应用于精准治疗中。
基因测序技术通过对患者体内的DNA 序列进行分析，可以准确地获取肿瘤相关的遗传信息，从而指导恶性肿瘤的治疗。
首先，基因测序技术可以帮助诊断恶性肿瘤。
通过测序分析，医生可以获得患者个体的基因组信息，包括突变基因、突变类型、变异频率等，从而对肿瘤进行精确定位和分类。
这不仅有助于准确定义肿瘤类型，还可以帮助医生判断肿瘤的发展趋势和预测患者的预后情况。
相比传统的组织学诊断，基因测序技术具有更高的准确性和敏感性，可以避免因样本质量不佳而导致的漏诊或误诊，提高了恶性肿瘤的早期诊断率。
其次，基因测序技术可以指导个体化治疗方案的制定。
每个患者的基因组都是独特的，因此对于同一类型的肿瘤，其基因组特点也会存在一定差异。
基因测序技术能够全面了解患者的基因组信息，为医生提供更全面的决策依据。
医生可以根据患者的基因遗传信息，选择针对性的治疗方案，避免盲目使用药物，减少患者的治疗不良反应。
这种个体化的治疗方案不仅可以提高治疗效果，还能够减轻患者的痛苦和副作用，提高生活质量。
最后，基因测序技术可以评估治疗效果和预测复发转移风险。
治疗过程中，通过连续的基因测序追踪，医生可以及时了解患者的肿瘤变异情况，判断治疗的效果，并及时调整治疗方案。
此外，基因测序技术还可以通过分析肿瘤标记物等遗传信息，预测患者的复发转移风险，进一步指导治疗和进行复查。
总之，恶性肿瘤研究基因测序技术在精准治疗中的应用，为恶性肿瘤的防治提供了有力的支持。
它不仅可以帮助医生准确定位和分类肿瘤，还能指导个体化治疗方案的制定，评估治疗效果和预测复发转移风险。
现代医学Modern Medical Journal2020，Dec；48（12）：1651-1654［收稿日期］2019-08-11［修回日期］2020-10-22［作者简介］周凯（1994），男，四川井研人，在读硕士研究生。
E-mail：1041196731@qq．com ［通信作者］张培先E-mail：px29@163．com［引文格式］周凯，张培先．脾脏肿瘤的病理研究进展［J］．现代医学，2020，48（12）：1651-1654．·综述·脾脏肿瘤的病理研究进展周凯1，2，张培先2，3（1．云南中医药大学第一临床医学院，云南昆明650051；2．昆明医科大学附属延安医院肿瘤科，云南昆明650051；3．云南省肿瘤免疫防治研究重点实验室，云南昆明650051）［摘要］脾脏肿瘤临床较少见，可能与其免疫功能和特殊解剖结构有关。
随着病理诊断技术的发展，尤其是分子病理诊断技术的应用，学者对脾脏肿瘤的病理类型及特征有了更加深入的认识，脾脏肿瘤的检出率也随之提高。
作者就脾脏肿瘤的病理诊断技术及病理特征研究进展作一综述。
［关键词］脾脏；肿瘤；病理；综述［中图分类号］Ｒ733．2［文献标识码］A［文章编号］1671-7562（2020）12-1651-04doi：10．3969/j．issn．1671-7562．2020．12．034脾脏是人体重要的免疫器官，不仅具有造血、滤血、毁血等功能，还具有非常强大的免疫功能［1］。
脾脏可分泌多种非特异性抗肿瘤物质促进抗肿瘤免疫，且搏动明显的脾脏动脉导致肿瘤细胞难以停留，故脾脏原发性肿瘤临床少见［2］。
Bostick［3］在约8万例手术标本及尸检中仅发现5例脾脏原发性肿瘤。
2009年1月至2015年3月间，孙程明等［2］接诊约19．64万例肿瘤患者，其中有61例诊断为脾脏肿瘤，占总病例的0.31ɢ，与国外研究［4］一致。
尽早明确脾脏肿瘤的病理诊断、实施合适的治疗是改善预后的关键。
分子生物学技术在免疫学诊断中的应用一、BCR和TCR基因重排检测对血细胞恶性变如白血病、淋巴瘤等的诊断，长期以来多应用细胞形态学检查和免疫细胞表型分析。
由于这些方法在特异性和敏感性上的限制，对于丢失了细胞表面标志，或分化较好难以和正常细胞区别。
也可能由于恶性细胞数量少，混在大量正常细胞中难以查出。
近年来由于分子生物学技术的广泛应用，且由于获得了Ig片段的特异基因克隆及TCR各链的基因克隆，在此基础上发展了应用Ig基因重排作为B细胞的特异标记，诊断B细胞来源的白血病的和应用TCR基因重排为T 细胞特异标志诊断T细胞恶性变引起的白血病，从而将白血病的细胞学分类法提高到基因水平分析，建立了免疫基因型诊断的新方法，大大提高了诊断的敏感性和特异性。
该方法不但可以确定细胞来源、分化程度，且由于DNA分析的高度敏感性而能查出显微镜不能看到的微小变化，从而能监测治疗效果，发现微量残留病变细胞。
该方法首先要从待检的细胞中分离出总DNA。
在非T、非B细胞的Ig 和TCR基因不发生重排称为胚基因（germ line）。
而T和B细胞在分化早期即有TCR和Ig基因重排，重排后的Ig和TCR片段，转移至硝酸纤维膜或尼龙膜上，然后用同位素或酶标记的Ig血病细胞进行分类鉴定，若有Ig基因重排说明恶性细胞来源于B细胞，若有TCR基因发生重排，则为T细胞来源的。
如果既无Ig基因重排，又无TCR基因重排的淋巴细胞则属非T、非B细胞来源的瘤细胞。
二、限制酶切片段长度多态性组织配型法迄今，一直是血清学和细胞学方法进行HLA抗原结构分析，最近已开始应用分子生物学基因克隆技术进行HLA定型。
由于人们已常握了HLA共同和特异的抗原的核苷酸序列，才有可能用此新方法进行组织配型检验。
限制酶切片段长度多态性（restriction fragment length polym orphism,RFLP）组织配型技术的原理是目前已掌握了编码HLA抗原的核苷酸序列，包括各等位基因共有的和专有的序列。
基因测序技术在肿瘤诊断和治疗中的应用近年来，基因测序技术在肿瘤诊断和治疗中的应用逐渐成为研究的热点。
基因测序技术的快速发展为肿瘤的个体化治疗提供了重要的工具，有效地推动了肿瘤精准医学的发展。
本文将探讨基因测序技术在肿瘤诊断和治疗中的应用，并讨论其带来的机遇和挑战。
一、基因测序技术在肿瘤诊断中的应用随着肿瘤发病率的增加，传统的肿瘤诊断方法已经难以满足临床医学的需求。
而基因测序技术的应用为肿瘤诊断带来了新的希望。
通过对肿瘤基因组的测序，可以发现肿瘤基因组的异常变化，从而帮助医生更准确地确定肿瘤类型和分期。
基因测序技术还可以帮助寻找肿瘤相关的遗传突变，为肿瘤患者的个性化治疗提供依据。
二、基因测序技术在肿瘤治疗中的应用1. 靶向治疗靶向治疗是基因测序技术在肿瘤治疗中的一大应用领域。
通过测序分析，可以发现肿瘤细胞中存在的特定基因突变，然后针对这些突变的蛋白或信号通路进行针对性的治疗。
这种个体化的治疗策略可以提高治疗的效果，减少患者的不良反应。
2. 免疫治疗免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域的重要突破，而基因测序技术在免疫治疗中的应用使得治疗的效果更加显著。
通过测序分析，可以发现肿瘤细胞中的免疫逃逸机制，从而寻找到合适的免疫治疗靶点。
此外，基因测序技术还可以通过预测肿瘤患者免疫治疗的应答性，从而帮助医生制定更加个体化的治疗方案。
三、基因测序技术在肿瘤诊断和治疗中的机遇与挑战1. 机遇基因测序技术的不断发展为肿瘤诊断和治疗带来了巨大的机遇。
通过对肿瘤基因组的全面测序和分析，可以实现肿瘤的早期诊断和个体化治疗。
此外，基因测序技术的不断降低成本也使得肿瘤基因测序技术更加普及和广泛应用。
2. 挑战随着基因测序技术的广泛应用，也面临着一些挑战。
首先，基因测序技术在临床应用中的标准化和规范化仍然需要进一步完善。
其次，基因测序技术的数据分析和解读也是一个挑战，需要专业的人员和工具支持。
此外，隐私保护和信息安全也是基因测序技术应用中需要重视的问题。
基因重排检测技术诊断脾脏淋巴瘤朱少君李艳红张伟王姝妹巩丽兰淼【摘要】目的: 利用B和T淋巴细胞产生的抗原受体分子基因重排检测技术，探讨1例原发性脾脏恶性淋巴瘤(PLS)基因重排检测结果. 方式: 从组织蜡块中切取组织片5~10张，提取基因组DNA，PCR扩增，聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示基因重排结果. 结果: 脾脏淋巴瘤免疫组化证明为B细胞性滤泡性淋巴瘤. 从24个不同部位取得的组织经PCR均扩增成功，所有部位组织T细胞受体基因重排阴性，22个部位组织B细胞单克隆性免疫球蛋白基因重排阳性，基因重排阳性率%. 结论: 应用PCR法检测B淋巴细胞IgH和T淋巴细胞TCR基因重排可作为淋巴细胞来源的良、恶性病变的一种辅助诊断手腕，对脾脏淋巴瘤有较高的诊断价值.【关键词】淋巴瘤；基因重排；聚合酶链反映；脾脏【Abstract】 AIM: To assess the significance of detecting the gene rearrangements of IgH and TCR in the diagnosis of primary malignant lymphoma of the spleens (PLS). METHODS: Twenty four samples were taken from different places of the PLS. Genomic DNA was extracted, and amplified via PCR. The products were resolved on denaturing polyacrylamide gels and visualized through silver staining. RESULTS: All samples were successfullyamplified. Gene rearrangements of IgH and TCR were negative in 10 cases of reactive lymphoid hyperplasia. In all of the 24 samples from PLS, gene rearrangements of TCR γ and TCR β were not found, and IgH gene rearrangements were found in 22 samples %). There was remarkable difference between PLS group and benign group in gene rearrangment (P<. CONCLUSION: Detection of the gene rearrangements of IgH and TCR by PCR could be a kind of subsidiary means to diagnose the lymphoproliferative disease. It is very helpful in the diagnosis of splenic lymphoma.【Keywords】 lymphoma; gene rearrangement; polymerase chain reaction; spleen0引言恶性淋巴瘤(malignant lymphoma)是脾脏最多见的恶性肿瘤，一样为全身性疾病的一部份. 原发性脾脏淋巴瘤(primary lymphoma of the spleen, PLS)少见，占所有淋巴瘤的1%~3%. 通过基因重排，机体产生大量多样的重排构型，编码种类繁多的抗原特异性抗体. 但关于一个个体及其后代，只含有其独特的重排构型，也确实是说，一个T, B细胞或其克隆性后代，均只含一种独特的分子遗传学标记. 一旦某一克隆的淋巴细胞发生恶性转变, 即可呈现特异的基因重排［1］. 因此, 对基因重排类型进行检测可用于对淋巴细胞增殖性疾病的诊断. 咱们应用这一手腕，探讨1例脾脏淋巴瘤的基因重排检测结果，并对该技术在脾脏淋巴组织增生性病变中的诊断价值进行探讨.1材料和方式材料脾脏恶性淋巴瘤标本 1 例来自第四军医大学第二附属医院病理科. 女，69岁. 已排除淋巴瘤或白血病累及脾脏. 标本为40 g/L 中性甲醛液固定,石蜡包埋. 制备厚度为4 μm的切片6张，贴于载玻片上，常规烤片、二甲苯脱蜡、酒精冲洗，切片自然干燥. 用无菌双面刀片将组织刮入 mL的离心管中，按以前的方式［2-3］提取基因组DNA. 引物序列由上海生工生物工程技术公司合成. 引物序列为: β球蛋白基因内对照PC03：ACACAACTGTGTTCACTAGC, PC04：CAACTTCATCCACGTTCACC; 免疫球蛋白基因重排(IgH) FR3A：ACACGGCTGTGTATTACTGT, LJH：TGAGGAGACGGTGACC, VLJH：GTGACCAGGGTACCTTGGCCCCAG; T细胞受体基因重排(TCR β链和γ链) Db1: CAAAGCTGTAACATTGTGGGGAC, Jb2:AGCACTGTGAGCCTGGTGCC, TVG: AGGGTTGTGTTGGAATCAGG, TJX: CGTCGACAACAAGTGTTGTTCCAC, Vγ11: TCTGGAGTCTATTACTGTGC, Vγ101: CTCACACTCTCACTTC, Jγ12: CAAGTGTTGTTCCACTGCC, Jp12: GTTACTATGAGCTAGTCC.方式PCR扩增在PT200型热循环仪（MJ Research）上进行. 反映体系为25 μL，含10 mmol/L dNTP（Gibco BRL） 2 μL，10×缓冲液μL，50 mmol/L MgCl2 μL，Taq DNA聚合酶（Gibco BRL） nkat，20 pmol/L引物1 μL，DNA样品1~5 μL. IgH基因采纳半巢氏PCR 扩增: 第1轮引物为FR3A和LJH, 95℃预变性3 min, 然后94℃变性40 s, 62℃退火50 s, 72℃延伸40 s, 共30个循环; 最后72℃延伸10 min. 扩增产物经1∶100稀释后取1 μL进行第2轮扩增, 引物为FR3A和VLJH, 95℃预变性3 min，然后94℃变性40 s，60℃退火50 s, 72℃延伸40 s, 共30个循环; 最后72℃延伸10 min. FR 3A与VLJH 扩增产物为100~120 bp. TCRβ和TCRγ采纳40个循，其中TCRγ引物为Vγ11, Vγ101和Jγ12或Vγ11, Vγ101和Jp12的混合物. 95℃预变性3 min，然后94℃变性40 s，56℃退火50 s，72℃延伸40 s；最后72℃延伸10 min. TCRβ扩增产物为65~ 85 bp. TCRγ各组扩增产物在70~200 bp不等. β球蛋白基因引物作为内对照进行扩增，共40个循环. 95℃预变性3 min，然后94℃变性40 s，60℃退火50 s，72℃延伸40 s；最后72℃延伸10 min. 产物长度为110 bp. 琼脂糖凝胶（20 g/L）电泳评判扩增成效后，将3 μL产物和等体积的上样缓冲液［3］（990 mL/L甲酰胺，1 g/L溴酚蓝，1 g/L二甲苯青）混匀后加到厚度为 mm的聚丙烯酰胺凝胶（100 g/L，含尿素8 mol/L），应用miniVE系统（Amersham Pharmacia Biotech）泳动8 h（80 V）. 掏出后按以前的方式［3］银染，别离用UVP凝胶分析系统（UVP, Cambridge，UK）和光学照相记录数据，依照IgH及TCR相应阳性位置判定结果. 阳性结果判定标准：① PCR扩增电泳条带清楚，宽度不大于1 mm，边缘锐利；②片段大小与估量范围相符,与期望值相差不超过5 bp；③假设显现期望值大小之外的其它条带或期望值内显现两条或以上可同意的条带，应判定为重排阴性.统计学处置：采纳SPSS 统计分析系统对分类资料的不同或相关分析, 采纳χ2查验, 以P<为有统计学意义.2结果脾脏病理脾脏明显肿大, 脾脏表面凸凹不平，体积21 cm×14 cm×8 cm，质量790 g，切面灰白、灰黄色，呈粟粒状小结节弥散散布，结节直径～ cm，质地中等、均匀. 大体上表现为粟粒状小结节,要紧累及白髓，低倍镜下肿瘤性滤泡遍及脾脏内，而且呈“背靠背”的密集排列，肿瘤性滤泡一样为圆形，大小不一，能够形状不规那么. 一样较反映性生发中心小. 中心细胞具有稀少的细胞浆和不规那么的、拉长的、有裂的细胞核. 细胞核较正常淋巴细胞稍大，染色质致密，但不如小淋巴细胞，核仁不明显. 中心母细胞和间变性中心细胞较正常淋巴细胞2-3倍或更大，核圆形或分叶状.免疫表型本例原发性脾脏恶性淋巴瘤起源于 B 细胞. 其免疫表型：LCA()，CD20()，CD79α()，CD21()，Bcl2()，CK18（-），EMA（-），VIM（-），CD38（-），CD43（-），CD3（-），CD45RO （-），CD5（-），CD10（-），cyclinD1（-），CD30（-），CD15（-），κ链（-），λ链（-），Ki67（-），p53（-）.基因重排检测PC03，PC04引物对良性增生的淋巴组织和阳性对照B，T淋巴瘤组织和本实验中的2个部位淋巴瘤组织DNA进行扩增，均见110 bp大小的β球蛋白特异条带（图1）. 10例良性淋巴组织反映性增生病例经FR3A/LJH, FR3A/VLJH引物采纳半巢氏PCR扩增和一组TCRβ通用引物Db1/Jb2，3组TCRγ通用引物TVG/TJX，Vγ11/Vγ101/Jγ12和Vγ11/Vγ101/Jp12扩增均未见扩增产物或模糊条带（图2）. B细胞淋巴瘤阳性对照标本组织经FR3A /LJH，FR3A/VLJH引物采纳半巢氏PCR扩增后显现110 bp大小IgH阳性条带（图3）. T细胞淋巴瘤阳性对照标本组织经一组TCRβ通用引物Db1/Jb2，3组TCR γ通用引物TVG/TJX，Vγ11/Vγ101/Jγ12和Vγ11/Vγ101/Jp12扩增，其中TVG/TJX引物扩增后显现190 bp大小TCRγ1阳性条带Vγ11/Vγ101/Jγ12引物扩增后显现80 bp大小TCRγ2阳性条带（图4）. 从脾脏淋巴瘤不同部位取得的肿瘤标本24个经基因重排检测TCRγ和TCRβ基因重排均为阴性，22个部位IgH 基因重排均为阳性, 基因重排阳性率%,与良性组相较,不同有显著意义(χ2=, P<. 3讨论脾脏恶性淋巴瘤由于结构特殊和类型复杂,其诊断一直是病理诊断中的难点,部份脾脏淋巴组织增生性病变单纯通过HE和免疫组化很难明确性质，给临床病理诊断带来了必然的困难. 干细胞在向淋巴细胞分化进程中, Ig重链基因(IgH)和T细胞受体(TCR)基因的可变区(V)和结合区(J)基因会发生重排, 即由分割的、无转录活性的基因片断在特异性重组酶的作用下联接成一个完整的、有转录功能的活性基因. 一旦完成基因重排, IgH和TCR基因即开始转录和表达, T，B 细胞继续分化成熟. 反之，就发生凋亡而被清除. 在正常情形下，B细胞分化的最先时期IgH重排，接着是Ig轻链基因(IgL)重排. 在T 细胞中, TCRδ基因第一重排, 接着是TCRγ, TCRβ与TCRα基因重排. 通过基因重排的机制估量能产生108以上不同的免疫球蛋白与TCR，足够去对抗人类所能碰到的大量抗原. 基因重排进程是一个正常的进程，正常淋巴细胞在发育中是多克隆性质，但淋巴造血系统肿瘤所具有的是单克隆性重排，也确实是全数肿瘤细胞具有一个相同的免疫球蛋白或TCR 基因重排，即表现为重排基因为单一模式. 应用PCR方式［4］，依照其核苷酸序列设计引物, 对其基因进行扩增，扩增产物在聚丙烯酰胺凝胶（或琼脂糖凝胶）电泳中分离，银染色，紫外灯下观看结果，正常淋巴组织由于是多克隆性质，重排方式极多，因此PCR 产物呈一片弥漫带,显现多条非特异带. 而肿瘤呈单克隆性增殖，在电泳中会显现单一或少数特异带. 这种特异性使得每一类患者具有其独特的克隆标志，能够用来作为肿瘤诊断和检测微小病灶的依据. 这对研究淋巴细胞恶变的机制和解决临床的诊断问题都十分重要. 检测单克隆性免疫球蛋白和T细胞受体基因有助于辨别淋巴系统的肿瘤性和反映性增生，并确信细胞的来源.依照肿瘤的组织结构及细胞学特点可分为何杰金氏病（Hodgkin s disease, HD）及非何杰金恶性淋巴瘤（non Hodgkin s malignant lymphoma, NHL），NHL大体病变特点包括4种类型［5］：①脾脏孤立性巨块型占位；②脾脏多结节肿块；③脾脏弥漫粟粒状肿大；④脾脏均匀肿大，未见明显占位性病变. 淋巴瘤细胞的特点决定了大体改变，本例B细胞性滤泡性淋巴瘤为后两种表现, 因其具有滤泡生长能力或偏向,多形成粟粒结节. 由于结构特殊和类型复杂,脾脏淋巴瘤的诊断一直是病理诊断中的难点,对脾脏淋巴瘤的诊断,除少数典型大细胞性淋巴瘤和比较有特点的肿瘤(如典型肝脾TCL) 外,定性及分类较困难. 专门是小B细胞淋巴瘤的诊断与辨别诊断是难点,免疫组化在确信类型上有专门大帮忙［6］. 咱们应用B和T淋巴细胞产生的抗原受体分子基因重排检测技术，证明1例原发性脾脏恶性淋巴瘤不同部位肿瘤组织具有相同的基因重排结果, 提示基因重排的检测关于识别此类脾脏交壤性病变及淋巴瘤的初期发觉可能具有重要价值. 辨别诊断: ①反映性滤泡增生（FH）；②错构瘤；③组织细胞肉瘤与噬血细胞组织细胞增生症. 免疫组化和基因重排检测能够区别.致谢感激王娟红、黄高升僧人凤霞医生的帮忙.基金项目：国家自然科学基金（）; 国家回国人员研究启动基金（Hg98004）; 陕西省卫生厅科研基金（02D02）【参考文献】［1］Garcia MJ, Delgado BM, Granizo JJ, et al. IgH, TCR γ and TCRβgene rearrangement in 80 B and T cell Non Hodgkin s lymphomas: Study of the association between proliferation and the so called“A berrant”patterns［J］. Diag Mol Pathol, 2001, 10(2): 69-77.［2］王淑芳，苏勤，朱少君，等．多发性子宫滑腻肌瘤的克隆性［J］．中华病理学杂志，2002, 31:107-111.［3］朱少君, 苏勤, 王淑芳, 等. 女性外阴尖锐湿疣的克隆性［J］. 诊断病理学杂志, 2003, 10:81-84.［4］Derksen PW, Langerak AW, Kerkhof E, et al. Comparison of different polymerase chain reaction based approaches for clonality assessment of immunoglobulin heavy chain gene rearrangements in B cell neoplasia ［J］. Mod Pathol, 1999, 12(8): 794-805.［5］张丽, 李百周, 徐天蓉, 等. 脾脏非霍奇金淋巴瘤临床病理学研究［J］. 临床与实验病理学杂志, 2003, 19(1):43-47.［6］Pittaluga S, Verhoef G, Criel A, et al. Small B cell non Hodgkin s lymphomas with splenomegaly at presentation are either mantle cell lymphoma or marginal zone cell lymphomas. A study based on histology, cytology, immunohistochemistry, and cytogenetic analysis［J］. Am J Surg Pathol, 1996, 20: 211-223.。
