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早熟艾美耳球虫上海株的分离鉴定及生物学特性观察陈兆国;米荣升;于慧珠;郝言明;胡义彬;黄燕;李正锋;李艳;林矫矫【摘要】为分离和鉴定早熟艾美尔球虫(Eimeria praecox),观察其主要生物学特性,本研究采用单卵囊感染技术分离单一虫株,通过卵囊形态学、PCR技术和18S rRNA基因检测,对其进行性状观察、虫种鉴定和系统发生关系分析.在获得的5株单一虫株中,对其中一株的卵囊形态、寄生部位、最短孢子化时间和最短潜在期进行观察.结果表明:该株球虫具有E.praecox的主要生物学特征;分离自肠道的卵囊明显小于分离自粪便的卵囊;最短潜在期为81 h;经PCR鉴定为E.praecox,命名为E.praecox上海株.测序结果显示,其18S rRNA基因序列长1 747 bp,与GenBank 登录的相关基因序列同源性为99.4%;该虫株对雏鸡呈轻度致病性.该虫株的分离和鉴定为丰富我国鸡球虫虫种资源,开展球虫病防治研究提供了依据.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2010(032)007【总页数】5页(P529-533)【关键词】早熟艾美尔球虫;分离;鉴定;生物学性状;18S rRNA基因【作者】陈兆国;米荣升;于慧珠;郝言明;胡义彬;黄燕;李正锋;李艳;林矫矫【作者单位】中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心,上海,200241;中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心,上海,200241;中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心,上海,200241;中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心,上海,200241;中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心,上海,200241;中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心,上海,200241;中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心,上海,200241;中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心,上海,200241;中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心,上海,200241【正文语种】中文【中图分类】S852.72鸡球虫病是由艾美耳属(Eimeria)球虫引起的一种寄生虫病，严重危害鸡的生长发育，对雏鸡的危害尤为严重。
堆型艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性测定刘瑞丽;王丽;张李琦;蔡秀敏;郑明学;古少鹏;白瑞【摘要】本试验旨在研究堆型艾美耳球虫(E.acervulina)早熟株对常用抗球虫药(地克珠利、妥曲珠利、磺胺间甲氧嘧啶、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和土霉素)的敏感性.通过测定人工试验鸡的抗球虫活性百分比(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)4项指标,综合评定该虫株的药物敏感性.结果显示,妥曲珠利、磺胺间甲氧嘧啶、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、盐霉素和土霉素组的POAA、RLS、ROP、ACI 4项指标均为阴性;地克珠利组除ROP指标为阳性,POAA、PLS、ACI 3项指标均为阴性;马杜米星组的ROP和ACI为阳性,POAA和RLS为阴性.结果表明,堆型艾美耳球虫早熟株对地克珠利、妥曲珠利、磺胺间甲氧嘧啶、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、盐霉素和土霉素敏感,对马杜米星轻度敏感.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2014(041)002【总页数】4页(P232-235)【关键词】堆型艾美耳球虫早熟株;抗球虫药;药物敏感性【作者】刘瑞丽;王丽;张李琦;蔡秀敏;郑明学;古少鹏;白瑞【作者单位】山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801【正文语种】中文【中图分类】S852.72+3鸡球虫病是由1种或数种艾美耳属球虫寄生于鸡肠道上皮细胞内而引起的原虫病，病鸡以血痢、贫血、消瘦和生长发育受阻为特征，是威胁养鸡业较为严重的一种寄生虫病（蔡皓瑶等，2010）。
福建三株柔嫩艾美耳球虫的分离、鉴定及致病性的初步研究吴昌标;郑文金;张灵玲;林伯全;关雄【期刊名称】《寄生虫与医学昆虫学报》【年(卷),期】2010(017)003【摘要】采用单卵囊分离技术,从福建省莆田市、福清市和连江县等三地鸡场的病鸡盲肠内容物样品中,分离获得3株柔嫩艾美耳球虫Eimeria tenella,代号分别为PT0705、FQ0709和LJ0711.为比较这3株柔嫩艾美耳球虫的致病性,分别用1×104、5×104和10×104个孢子化卵囊的剂量感染14日龄和21日龄健康无球虫雏鸡,通过临床表现、死亡率、增重、病变计分等指标进行统计和分析,确定PT0705为毒性最强虫株.【总页数】5页(P140-144)【作者】吴昌标;郑文金;张灵玲;林伯全;关雄【作者单位】福建农林大学,教育部生物农药与化学生物学重点实验室,福州,350002;福建农业职业技术学院,福州,350119;金日兴生物科技有限公司,福建莆田,351100;福建农林大学,教育部生物农药与化学生物学重点实验室,福州,350002;福建农业职业技术学院,福州,350119;福建农林大学,教育部生物农药与化学生物学重点实验室,福州,350002【正文语种】中文【相关文献】1.鸡柔嫩艾美耳球虫绵阳地方株的分离鉴定及致病性研究 [J], 陈希文;房春林;郭晓萍;陆昕;王雄清;代敏;王娜;庞瑜婧2.柔嫩艾美耳球虫纯种的分离鉴定和致病性观察 [J], 苑淑贤;姚新华;任科研;杨金生3.柔嫩艾美耳球虫山西分离株的分离与致病性观察 [J], 古少鹏;韩春来;郑明学;韩克光;曹宏卿4.柔嫩艾美耳球虫洛阳分离株的致病性研究 [J], 李葱晓;宋宏晓;王天奇;闫文朝;钱伟锋;邵晓冬;袁林5.柔嫩艾美耳球虫的分离鉴定与致病性测定 [J], 王仲兵;古少鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
巨型艾美耳球虫感染对鸡Toll样受体的影响潘仰栋;刁胤轩;蒲响林;陆明敏;徐立新;严若峰;李祥瑞;宋小凯【期刊名称】《畜牧与兽医》【年(卷),期】2024(56)2【摘要】为了探究巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)感染对宿主局部免疫组织盲肠扁桃体和系统免疫组织(脾脏和外周血)中Toll样受体(Toll like receptor,TLR)的影响,用巨型艾美耳球虫感染雏鸡,感染后第0、3、7和11天,采集鸡盲肠扁桃体、外周血和脾脏淋巴细胞,用实时荧光定量PCR检测上述组织中8种鸡TLR的mRNA水平变化。
结果显示:TLR4和TLR21 mRNA水平在3种组织中无显著变化;TLR2 mRNA水平在感染后第3天开始在外周血和脾脏中显著下降(P<0.05),在盲肠扁桃体中第3和7天无显著变化,在第11天显著上升(P<0.01)。
TLR1、TLR3、TLR5、TLR7和TLR15 mRNA水平在3种组织中显著上升(P<0.05),但应答时间有所差异,具体为TLR1和TLR3 mRNA水平在盲肠扁桃体中在第3天开始上升,而在外周血和脾脏中第7天开始上升;TLR5和TLR15 mRNA水平在外周血和脾脏中第3天开始上升,而在盲肠扁桃体中第7天开始上升。
结果表明:巨型艾美耳球虫感染上调宿主3种组织中的TLR1、TLR3、TLR5、TLR7和TLR15 mRNA水平,下调外周血和脾脏中的TLR2 mRNA水平;盲肠扁桃体TLR1和TLR3 mRNA水平上升早于外周血和脾脏,而其TLR5和TLR15 mRNA水平上升晚于外周血和脾脏。
本研究为揭示鸡TLR在抗球虫感染中的作用提供依据,也为揭示鸡球虫先天性免疫机制提供参考。
【总页数】6页(P76-81)【作者】潘仰栋;刁胤轩;蒲响林;陆明敏;徐立新;严若峰;李祥瑞;宋小凯【作者单位】南京农业大学动物医学院【正文语种】中文【中图分类】S855【相关文献】1.鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立2.布氏艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫感染后鸡血清生化指标变化的研究3.布氏艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫在鸡肾细胞及鸡胚培养中的发育4.巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)地理株研究Ⅱ.11株巨型艾美耳球虫的致病性分析5.巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)地理株研究Ⅲ.11株巨型艾美耳球虫的同工酶分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鼠镰形艾美耳球虫致病性试验刘立恒;姚美兰;王萍;李麟;吴家斌【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2017(053)008【总页数】3页(P35-36,中插3)【作者】刘立恒;姚美兰;王萍;李麟;吴家斌【作者单位】江西农业大学动物科学技术学院,江西南昌330045;江西省吉安市新干县大洋镇农业综合站,江西新干331317;江西农业大学动物科学技术学院,江西南昌330045;江西农业大学动物科学技术学院,江西南昌330045;江西农业大学动物科学技术学院,江西南昌330045【正文语种】中文【中图分类】S852.72+3小鼠作为实验动物，在多种医学科学实验中被广泛应用。
其需求量日益增多，并且对质量的要求越来越高[1]。
实验动物感染寄生虫可使实验研究受到干扰，甚至影响结论的正确性，从而降低科研的科学性、准确性及稳定性[2]。
多发易发的鼠球虫病是由艾美耳球虫寄生于鼠的肠道而引起小鼠消化不良和腹泻甚至死亡症状的寄生虫病，危害较为严重。
据报道，寄生于小鼠的艾美耳球虫有12种，其生活史清楚且具有一定致病性的镰形艾美耳球虫(E.falciformis)及蠕形艾美耳球虫(E.vermiformis)两种[3]，为了解小鼠感染E.falciformis虫株后出现的临床症状及寄生部位组织病理变化，笔者进行鼠镰形艾美耳球虫致病性试验，旨为共同提高对小鼠镰形艾美耳球虫病的认识,防制小鼠球虫病的发生，保障实验小鼠质量提供临床理论依据。
【相关文献】[1] 杨晓野，刘珍莲,郭媛华，等. 实验小鼠寄生蠕虫及外寄生虫种类分析[J]. 内蒙古畜牧科学，1994,03:38-40.[2] 李超，郑安洁,张强，等. 实验小鼠体内寄生虫感染情况调查[J].中国寄生虫病防治杂志，2005，02:163-164.[3] 徐彩云,张大维,邴国强，等. 实验小动物艾美球虫概述[J]. 中国比较医学杂志,2004,05:318-320.[4] 刘世新，实用生物组织学技术[ M ]，北京：科学出版社，2004：74-75．[5] 张西臣，杨举，尹继刚，等.费氏艾美尔球虫(E.ferrisi)某些生物学特性的研究[J]. 上海实验动物科学,1997.17(2):64-66.中图分类号：S852.72+3。
毒害艾美耳球虫早熟株致病性与繁殖力的研究史宗勇;赵剑;李贇;史新涛;古少鹏【期刊名称】《农学学报》【年(卷),期】2011(001)003【摘要】为选育制备弱毒疫苗所需的毒害艾美耳球虫(Eimeria.necatrix)早熟株,以临床表现、平均增重、相对增重率、小肠病变记分、血便记分、死亡率、每克粪便中的卵囊数(OPG)、卵囊总产量和每个卵囊的繁殖能力为指标,研究了E.necatrix 早熟株与亲本株的致病性和繁殖力.结果表明该早熟株与其亲本株相比,早熟株的致病性降低了,接种相同剂量时早熟株平均增重、相对增重率高于亲本株,病变记分、血便记分和死亡率均低于亲本株;早熟株产卵高峰提前,繁殖力下降至亲本株的55%左右,符合球虫早熟疫苗株的特性.【总页数】5页(P46-50)【作者】史宗勇;赵剑;李贇;史新涛;古少鹏【作者单位】山西农业大学生命科学学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801【正文语种】中文【中图分类】S852.72【相关文献】1.毒害艾美耳球虫早熟株致病性与繁殖力的研究 [J], 史宗勇;赵剑;李赟;史新涛;古少鹏2.柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)早熟株与亲本株致病性和繁殖力的研究 [J], 古少鹏;韩克光;韩春来;曹宏卿;郑明学3.堆型艾美耳球虫早熟株与强毒株致病性和繁殖力的比较 [J], 郭钰珏;蔡秀敏;王丽;郑明学4.毒害艾美耳球虫早熟株与亲本株繁殖力的观察 [J], 李赟;古少鹏;赵剑5.堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)早熟株与毒株的繁殖力和致病性比较试验[J], 刘群;陈宏武;索占伟;彭嘉鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毒害艾美耳球虫钙调素依赖性蛋白激酶基因的原核表达及其在不同发育阶段的表达分析朱玉;宿世杰;苏丁泽阳;高阳;刘丹丹;候照峰;许金俊;陶建平【期刊名称】《中国家禽》【年(卷),期】2019(41)23【摘要】在前期分析比较毒害艾美耳球虫第二、三代裂殖子和配子体的转录组时,发现基因代号为ENH00078000的钙调素依赖性蛋白激酶(CaMK)基因呈差异表达。
为了研究毒害艾美耳球虫钙调素依赖性蛋白激酶(EnCaMK)的功能,研究首先人工合成了该基因,构建pET-28a-EnCaMK表达载体,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,并进一步分析EnCaMK 在毒害艾美耳球虫第二、三代裂殖子和配子体中的表达情况。
结果显示:重组蛋白大小为48 ku左右,以包涵体形式为多,能被组氨酸(His)单克隆抗体特异性识别和鸡抗毒害艾美耳球虫多克抗隆抗体血清识别;用抗重组蛋白的鼠多克隆抗体在第三代裂殖子和配子体蛋白中检测到35 ku左右的EnCaMK条带,且在第三代裂殖子中表达量较高,显示差异表达。
研究结果为进一步研究EnCaMK的酶活性与功能奠定了基础。
【总页数】5页(P21-25)【作者】朱玉;宿世杰;苏丁泽阳;高阳;刘丹丹;候照峰;许金俊;陶建平【作者单位】扬州大学兽医学院;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心【正文语种】中文【中图分类】S855.9【相关文献】1.柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3基因在毕赤酵母中的表达及分析2.柔嫩艾美耳球虫5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶基因的克隆、原核表达及酶活性分析3.鸡毒害艾美耳球虫LZ株MIC5基因的重组表达及其表达产物的抗原性分析4.堆型艾美耳球虫ATP酶基因的生物信息学分析及原核表达5.毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的原核表达与定位分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毒害艾美耳球虫感染对雏鸡免疫器官IL-2表达及淋巴细胞增殖能力的影响赵伟;郑世民【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2011(033)004【摘要】为了探讨毒害艾美耳球虫(E.necatrix)感染雏鸡后,其免疫器官白细胞介素(IL-2)和T、B淋巴细胞增殖能力的变化,本研究应用组织匀浆涂片和酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色及细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法对E.necatrix感染雏鸡免疫器官的T淋巴细胞百分数、IL-2诱生活性、T和B淋巴细胞对ConA 或PMA的增殖能力动态变化进行较全面系统的研究.结果发现,E.necatrix感染雏鸡后,其胸腺和脾脏T淋巴细胞百分数分别于感染后7 d～21 d和7 d～24 d明显高于对照雏鸡;IL-2诱生活性分别于16 d～18 d和18 d～21 d较对照雏鸡显著升高;T淋巴细胞对ConA的增殖能力分别在14 d～16 d和10 d～18 d明显增强.法氏囊和脾脏B淋巴细胞对PMA的增殖能力分别于14 d～24 d和14 d～21 d显著高于对照雏鸡.表明E.necatrix感染雏鸡免疫器官的IL-2调节及细胞免疫和体液免疫功能均明显提高.%Dynamic changes of percentage of T lymphocytes, IL-2 induced activity and proliferation of T and B lymphocytes to concanavalin A (ConA) or phorble myristate acetate (PMA) in immune organs of 14-day-old chicks infected with Eimeria necatrix were studied using acid nonspecific alpha-naphthyl acetate esterase (ANAE), cellular culture technique and MTT assay.These results showed that the IL-2 induced activity in thymus and spleen of chicks infected with E. necatrixwas significantly increased compared with that of controls at 16 to 18 day and 18 to 21 day post infection (PI), respectively. The proliferation of T lymphocytes to ConA in thymus and spleen of chicks infected with E. necatrix was significantly elevated compared with control chickens at 14 to 16 day and 10 to 18 day PI, respectively. The proliferation of B lymphocytes to PMA in spleen and bursa of Fabricius of chicks infected with E. necatrix was significantly higher than that of control at 14 to 24 day and 14 to 21 day PI,respectively. These results showed that IL-2 immune regulation and function of cellular and humoral immunity in immune organs of chicks infected with E. necatrix had been significantly increased.【总页数】4页(P309-312)【作者】赵伟;郑世民【作者单位】东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;佳木斯大学,黑龙江佳木斯154007;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】S852.72【相关文献】1.雏鸡感染毒害艾美耳球虫后免疫器官T细胞亚群的动态变化 [J], 刘晶;郑世民;胡京友2.毒害艾美耳球虫初次感染雏鸡免疫器官IL-2和淋巴细胞增殖功能变化 [J], 郑世民;胡京友;刘晶;高雪丽3.益生菌对新城疫疫苗免疫雏鸡免疫器官T细胞增殖能力和IL-2mRNA表达影响[J], 白玉;李琰;高雪丽;刘超男;吕晓萍;郑世民4.金银花复方制剂对人工感染NDV雏鸡免疫器官T淋巴细胞及其亚群以及B淋巴细胞的影响 [J], 王洪梅; 宋洋洋; 于浩然; 李天琦; 刘微; 葛铭5.AIV感染雏鸡免疫器官T细胞免疫功能及IL-2诱生活性变化 [J], 高雪丽;郑世民;顾志刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毒害艾美耳球虫初次感染对雏鸡外周血液免疫功能的影响郑世民;刘晶;胡京友;高雪丽
【期刊名称】《中国家禽》
【年(卷),期】2006(28)7
【摘要】应用免疫SPA菌体花环、间接ELISA及细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法对毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)初次感染雏鸡外周血液的T、B 细胞数量及其对ConA或PMA的增殖功能和IgG、IgM、IgA含量的动态变化进行了较全面系统的研究。
结果发现,E.necatrix初次感染雏鸡外周血液的T、B细胞数量及其相应增殖功能、血清中上述三种免疫球蛋白含量均不同程度地高于未感染的对照雏鸡,表明E.necatrix初次感染雏鸡外周血液的细胞免疫和体液免疫功能均明显提高。
【总页数】3页(P9-11)
【关键词】毒害艾美耳球虫;雏鸡;外周血液;免疫球蛋白
【作者】郑世民;刘晶;胡京友;高雪丽
【作者单位】东北农业大学动物医学学院
【正文语种】中文
【中图分类】S858.312.4;S852.723
【相关文献】
1.毒害艾美耳球虫初次感染雏鸡免疫器官IL-2和淋巴细胞增殖功能变化 [J], 郑世民;胡京友;刘晶;高雪丽
2.毒害艾美耳球虫感染对雏鸡肠道组织热休克蛋白-90 mRNA表达的影响 [J], 侯宁;吕志慧;赵靓;高雪丽;刘超男;吕晓萍;郑世民
3.柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验 [J], 黄兵
4.毒害艾美耳球虫感染对雏鸡免疫器官IL-2表达及淋巴细胞增殖能力的影响 [J], 赵伟;郑世民
5.毒害艾美球虫二次感染雏鸡外周血液免疫功能的变化 [J], 郑世民;刘晶;胡京友;高雪丽
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镰形艾美耳球虫感染早期对小鼠的致病性研究贾妮娜;袁顺子;车丽霞;张丽萍;杨雯;任超【摘要】为研究镰形艾美耳球虫感染早期对小鼠的致病性,将镰形艾美耳球虫经口感染小鼠,同时设立无球虫感染空白对照组.通过观察各组小鼠的临床症状,感染36 h后剖检的眼观病变,以及各个脏器的病理组织学观察和盲肠免疫组化观察,来研究感染早期镰形艾美耳球虫对小鼠的致病性.结果表明:早期感染镰形艾美耳球虫主要破坏肠道的黏膜组织,导致黏膜上皮和腺上皮细胞变性、坏死、脱落,黏膜下层水肿,炎性细胞浸润至黏膜层,对其他脏器未造成可见的病理损伤;免疫组化观察,发现早期感染镰形艾美耳球虫也主要侵染黏膜层和黏膜下层.因此,镰形艾美耳球虫仅感染小鼠的盲肠,不感染其他器官,可以作为候选的疫苗载体.【期刊名称】《天津农学院学报》【年(卷),期】2018(025)001【总页数】5页(P54-58)【关键词】镰形艾美耳球虫;致病性;小鼠;器官指数;免疫组化;病理组织切片【作者】贾妮娜;袁顺子;车丽霞;张丽萍;杨雯;任超【作者单位】天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384;天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384;天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384;天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384;天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384;天津农学院动物科学与动物医学学院,天津300384【正文语种】中文【中图分类】S852.72+3研究发现，艾美耳球虫生物安全性较高，寄生宿主的特异性强，遗传性状稳定，通过人工转染能够表达外源抗原，可持续传代并稳定表达目的抗原，激发局部黏膜免疫和系统性免疫反应[1-2]。
鉴于艾美耳球虫具有上述优势，在禽免疫学上已利用柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）和缓艾美耳球虫（Eimeria mitis）作为抗原载体，研究外源抗原被有效运送、递呈，进而产生保护性免疫应答的细胞与分子生物学机制[3-5]。
感染哺乳动物的球虫，如感染家兔的斯氏艾美耳球虫（Eimeria intestinalis），也可以作为抗原载体通过人工转染途径稳定表达外源抗原[6]。
目前已发现的鼠球虫有15种，镰形艾美耳球虫（Eimeria falciformis）是其中的一种，它主要感染小鼠盲肠和结肠的黏膜组织[7]。
镰形艾美耳球虫能够在小鼠体内大量繁殖，未来有望成为一类新型疫苗载体，具有广阔的应用前景。
因此，本研究通过建立镰形艾美耳球虫感染小鼠的动物模型，研究感染早期镰形艾美耳球虫对小鼠各个脏器的致病性，以及镰形艾美耳球虫抗原的组织分布，为新型兽用疫苗载体的研究提供新的研究思路。
1.1.1 试验动物昆明系小鼠60只，购自天津医科大学实验动物中心，9 周龄，体重为（25±2）g，饲料充足，饮水不限，分笼饲养，室温，湿度适宜。
1.1.2 主要试剂生物素标记的山羊抗鸡IgY二抗购自艾美捷科技有限公司；HRP标记的链霉卵白素复合物购自北京鸿跃创新科技有限公司；DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒购自北京雷根生物技术有限公司。
1.1.3 虫株镰形艾美耳球虫由中国农业大学国家动物寄生原虫实验室赠予，天津农学院基础兽医学实验室保存。
1.2.1 试验动物分组与处理将9周龄雌性清洁级昆明小鼠20只分成2组，每组10只，试验组小鼠经口感染镰形艾美耳球虫5×104个/只，对照组灌服等量生理盐水。
感染后观察并记录各组小鼠的精神状态、活动情况、皮毛光泽、食欲排泄、死亡等临床症状。
1.2.2 剖检与病理组织学观察将感染36 h后的小鼠剖检，观察各组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肾脏、盲肠的病变情况，计算器官指数（各脏器重量与体重之比）。
采集各组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肾脏、盲肠组织，用4%甲醛溶液进行固定，经过7 d的组织固定，将各组小鼠的脏器进行常规病理组织切片制备与HE染色，光镜下观察各脏器的病理变化。
“-”表示无病变，“＋”表示轻度损伤，“＋＋”表示中度损伤，“＋＋＋”表示重度损伤。
1.2.3 免疫组织化学观察石蜡切片按常规进行脱蜡处理至蒸馏水，之后PBS洗3次，每次5 min；5%双氧水室温避光孵育20 min，去除内源性过氧化物酶，PBS洗3次，每次5 min；山羊血清室温封闭30 min；弃去血清，滴加鸡抗镰形艾美耳球虫全抗原一抗（工作浓度为1∶2 000），37 ℃孵育2 h，PBS洗3次，每次5 min；滴加生物素标记的山羊抗鸡IgY二抗（工作浓度为1∶1 000），37 ℃孵育1 h，之后PBS洗3次，每次5 min；滴加HRP标记的链霉卵白素复合物，37 ℃孵育30 min，之后PBS 洗3次，每次5 min；滴加DAB显色液，室温显色10 min；用蒸馏水终止显色；放入苏木素中复染30 s；蒸馏水冲洗后盐酸酒精分色10 s；自来水反蓝5 min；按HE染色步骤进行脱水、透明、中性树胶封片，显微镜下观察。
1.2.4 统计与分析应用SPSS11.5软件采用T检验法对试验数据进行统计分析处理，利用Excel软件制作表格，以（±SD）表示。
在感染镰形艾美耳球虫36 h内，试验组与对照组小鼠的精神、活动、食欲、排泄、皮毛等临床症状均无异常。
感染36 h后剖检观察各组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肾脏，试验组与对照组相比，各脏器的形状、大小与色泽均正常，未见病变情况，且各脏器的器官指数差异不显著（表1）。
对盲肠剖检，观察可见试验组黏膜肿胀、有少量出血点，黏膜表面覆盖多量黏液。
试验组与对照组相比，小鼠的盲肠指数差异显著（表1）。
感染36 h后试验组与对照组相比，小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肾脏的病理组织学观察未见异常，差异不显著（表2，图1A-H）。
感染36 h后试验组与对照组相比，试验组小鼠的盲肠黏膜上皮和腺上皮变性、坏死、脱落，大量炎性细胞浸润，黏膜下层水肿、增宽，对照组的病理组织学观察未见异常（表3，图1I-J）。
感染36 h后试验组与对照组相比，镰形艾美耳球虫阳性区域主要分布在黏膜上皮、固有层、黏膜下层和肠腔中，对照组未见镰形艾美耳球虫阳性区域（图2）。
说明镰形艾美耳球虫在早期主要侵染小鼠盲肠的黏膜层和黏膜下层。
镰形艾美耳球虫隶属于顶复门（Apicomplexa）、孢子虫纲（Sporozoasida）、球虫亚纲（Coccidiasina）、真球虫目（Eucoccidiorida）、艾美耳亚目（Eimeriorina）、艾美耳科（Eimeriidae）、艾美耳属（Eimeria），潜隐期为7 d，症状明显期10～16 d[7-8]。
卵囊经口感染后，先在体内进行无性生殖，感染16 h后，盲肠和结肠的肠腺上皮细胞内含有成熟的第一代裂殖体；感染32 h后，盲肠和结肠的肠腺上皮细胞内有第二代裂殖体[8]。
研究发现，感染36 h后，镰形艾美耳球虫的虫体不断进行无性繁殖，对盲肠的肠黏膜造成损伤，导致黏膜上皮和腺上皮细胞变性、坏死、脱落，黏膜下层水肿，炎性细胞浸润至黏膜层（图1I-J）。
对于其他器官，没有发现眼观和镜检的可见病理变化（图1A-H）。
免疫组化观察，发现镰形艾美耳球虫早期感染也主要侵染盲肠的黏膜层和黏膜下层（图2）。
这些都与前人的研究相符合，说明镰形艾美耳球虫早期感染的主要部位是盲肠，造成小鼠肠道黏膜层的严重损伤，其他器官不存在损伤，可以作为候选的疫苗载体进行研究。
艾美耳球虫用作疫苗活载体具有以下几方面优势：第一，相对于病毒和细菌，艾美耳球虫基因组较大，约60 Mb[9]，可供外源基因插入的潜在位点较多。
Su等利用piggyBac转座子对柔嫩艾美耳球虫进行转染，获得了稳定转染球虫群体，并且通过genome-walking的方法发现插入位点具有TTAA特征，进一步从基因水平解析球虫作为疫苗载体的价值[10]。
第二，艾美耳球虫是真核生物，可以像宿主细胞对表达出的外源蛋白进行化学化修饰，而不影响蛋白的抗原活性。
Kurth等对大鼠尼氏球虫（Eimeria nieschulzi）进行了体外瞬时转染和体内稳定转染，并利用柔嫩艾美尔球虫的MIC-1调控序列实现了黄色荧光蛋白和药物筛选基因DHFR在鼠球虫中的转染[11]。
第三，球虫活卵囊疫苗已经商品化，能够激发宿主产生良好的群体免疫保护效果（保护率＞90％[12]）。
第四，球虫疫苗可口服接种，简单易行，适用大规模的群体饮水或拌料免疫。
第五，球虫的繁殖周期较短，感染属于自限性，在生成卵囊以后即排到体外，不会引起免疫耐受问题，且生物安全性较高，不存在跨种间传播的威胁，田间应用时也不会出现所谓“散毒”的局面。
第六，球虫寄生于肠上皮细胞内，不同阶段虫体对肠黏膜上皮细胞反复入侵，能激发宿主产生较强的黏膜免疫和细胞免疫应答，不仅能够激发宿主对球虫表达的外源蛋白产生免疫反应，而且也能使宿主产生针对球虫自身的免疫反应，起到一苗多用的效果[1-4]。
此外，艾美耳球虫感染能够激活宿主肠道上调TLR1LA、TLR3、TLR4、TLR5、TLR15、TLR21的表达，并启动 MyD88 信号通路来诱导先天性免疫应答[13-15]。
因此，艾美耳球虫作为一种新型的模式生物，具有活疫苗载体的功能，通过改造镰形艾美耳球虫的致病基因，减轻对宿主肠道的损伤，使镰形艾美耳球虫成为一种新型抗原载体，用于进一步研究抗原与宿主免疫细胞之间的相互作用，具有更为广阔的应用前景。
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