洁净室浮游菌的测试方法-精选.pdf

洁净室浮游菌的测试方法洁净室中的浮游菌可通过空气采样和表面采样来进行测试。

下面将介绍一些常用的测试方法。

1.空气采样：空气采样是评估洁净室中浮游菌水平的一种常用方法。

主要有以下几种常用的空气采样方法。

（1）活菌采样：活菌采样主要用于测定空气中活菌的浓度。

一种常用的方法是将空气通过特定尺寸的孔径孔板进行采样，然后使用营养培养基将采样得到的微生物进行培养和计数。

（2）非活菌采样：非活菌采样主要用于测定空气中非活菌的浓度。

一种常用的方法是使用培养基进样器或高效气溶胶采样器收集空气中的微生物，然后将采样得到的样品在培养基上培养并进行计数。

2.表面采样：表面采样是评估洁净室工作台、墙壁和设备等表面的浮游菌水平的一种有效方法。

主要有以下几种常用的表面采样方法。

（1）接触板法：接触板法是将含有营养培养基的培养皿直接接触在洁净室表面上，通过培养皿中的培养基来收集和培养细菌。

可选择不同尺寸和材质的培养皿根据需要进行采样。

（2）方向摸拭法：方向摸拭法是使用含有缓冲液的棉签或消毒纱布，在洁净室表面上进行摸拭，然后将摸拭得到的物质悬浮在缓冲液中，进行培养和计数。

（3）负压采集法：负压采集法是使用带有过滤器的特殊采样装置，通过空气流动将洁净室表面的微生物收集到过滤器上。

然后将过滤器在培养基上进行培养和计数。

除了以上的测试方法，还可以根据需要采用分子生物学方法，如PCR 和测序等，对洁净室中的浮游菌进行进一步的分析和鉴定。

在进行测量之前，需要注意以下几点：1.选择适当的采样点，涉及产品质量的关键区域应优先考虑。

2.在进行采样之前，确保洁净室和采样装置已经进行了必要的清洁和消毒处理，以避免任何外界污染。

3.根据洁净室等级和要求，选择合适的采样方法和采样时间。

4.采集样品后，尽快将样品送到实验室进行分析，以避免样品污染和测试结果的偏差。

通过以上的测试方法，可以有效地评估洁净室中浮游菌的水平，为洁净室的运行和管理提供科学依据。

1目的：本文规定了洁净室中浮游菌的测试方法。

以达到对其空气洁净度的评定。

2范围：适用于洁净区中浮游菌的监测和对洁净区等级的验证。

3检测仪器：浮游菌采样器、真空抽气泵、高压消毒锅、恒温培养箱。

4.检测依据：GB/T 16293—2010医药工业洁净室浮游菌的测试方法。

5. 测试前的准备：5.1洁净室的温度应控制在18℃～26℃，相对湿度应控制在45％～65％之间。

5.2风速或压差的测试应符合要求。

5.3 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。

5.4 对单向流测试应在洁净空气调节系统正常运行时间不少10min后开始。

5.5 对非单向流测试应在洁净空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。

5.6 采样点数目，见表1。

表1 最少采样点数目5.7 对100级洁净区可在离操作处30cm处设测点，对每10000级工作区可在工作面处设测点。

5.8 采样点的布置洁净室(区)采样点布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于稀疏。

下列采样点的图示可作参考。

洁净棚(层流罩)，洁净工作台等局部空气净化设施的采样点布置：.1 水平单向流2 垂直单向流5.9 最小采样量，见表：注：每次采样点一般采样一次。

5.10 采样注意事项：5.10.1 工作区测点离地面0.8～1.5m左右。

5.10.2 送风口测点位置离开送风面30cm左右。

5.10.3 对单向流或送风口，采样器采样管口应正对气流方向。

对非单向流，采样管口向上。

5.10.4 布置采样点时，至少应尽量避开尘埃较集中的回风口。

5.10.5 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。

6.操作要求：6.1 测试前测试仪器表面先用消毒剂消毒采样器的内、外面，采样口及采样管使用前必须高温灭菌。

6.2 采样者应穿戴与被测洁净区相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前双手应消毒。

6.3 开动真空泵抽气，不少于5min,并调好流量和转盘转速。

6.4 关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙。

悬浮粒⼦浮游菌和沉降菌的测试⽅法共25页ICS 13.040.30C 10中华⼈民共和国国家标准GB/T 16292~16294—1996 医药⼯业洁净室（区）悬浮粒⼦、浮游菌和沉降菌的测试⽅法Test method for airborne particles, airborne microbeand settling microbe in clean room(area)of the pharmaceutical industry1996-04-10发布1996-10-01实施国家技术监督局发布⽬次GB/T 16292—1996 医药⼯业洁净室（区）悬浮粒⼦的测试⽅法GB/T 16293—1996 医药⼯业洁净室（区）浮游菌的测试⽅法GB/T 16294—1996 医药⼯业洁净室（区）沉降菌的测试⽅法GB/T 16292—1996前⾔本标准等效采⽤美国联邦标准FS-209E—1992《洁净室和洁净区内空⽓浮游粒⼦洁净等级》，并参考JGJ 71—90《洁净室施⼯及验收规范》制定的。

悬浮粒⼦和微⽣物的测试是评价医药⼯业洁净室（区）空⽓洁净度的主要指标。

本标准⽤悬浮粒⼦的测试来评价洁净室（区）空⽓中的尘粒数。

医药⼯业洁净室（区）的悬浮粒⼦测试⽅法，应采⽤本标准。

本标准从⽣效之⽇起，废⽌YY/T 0141—93。

本标准的附录A是标准的附录。

本标准的附录B是提⽰的附录。

本标准由国家医药管理局提出并归⼝。

本标准起草单位：上海医药管理局药品测试所。

本标准主要起草⼈：纪炜、徐进庆、沈建华。

中华⼈民共和国国家标准医药⼯业洁净室（区）悬浮粒⼦的Test method for airborne particles in cleanroom (area) of the pharmaceutical industry1 范围本标准规定了医药⼯业洁净室（区）中悬浮粒⼦的测试⽅法和悬浮粒⼦⽽⾔的空⽓洁净度的评定。

本标准适⽤于医药⼯业洁净（区）中悬浮粒⼦洁净度的监测和洁净度等级的验证。

ICSC 10中华人民共和国国家标准GB/T 16292~16294—1996医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法Test method for airborne particles, airborne microbeand settling microbe in clean room(area)of the pharmaceutical industry1996-04-10发布1996-10-01实施国家技术监督局发布目次GB/T 16292—1996 医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法GB/T 16293—1996 医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法GB/T 16294—1996 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法GB/T 16292—1996前言本标准等效采用美国联邦标准FS-209E—1992《洁净室和洁净区内空气浮游粒子洁净等级》，并参考JGJ 71—90《洁净室施工及验收规范》制定的。

悬浮粒子和微生物的测试是评价医药工业洁净室（区）空气洁净度的主要指标。

本标准用悬浮粒子的测试来评价洁净室（区）空气中的尘粒数。

医药工业洁净室（区）的悬浮粒子测试方法，应采用本标准。

本标准从生效之日起，废止YY/T 0141—93。

本标准的附录A是标准的附录。

本标准的附录B是提示的附录。

本标准由国家医药管理局提出并归口。

本标准起草单位：上海医药管理局药品测试所。

本标准主要起草人：纪炜、徐进庆、沈建华。

中华人民共和国国家标准医药工业洁净室（区）悬浮粒子的Test method for airborne particles in cleanroom (area) of the pharmaceutical industry1 范围本标准规定了医药工业洁净室（区）中悬浮粒子的测试方法和悬浮粒子而言的空气洁净度的评定。

本标准适用于医药工业洁净（区）中悬浮粒子洁净度的监测和洁净度等级的验证。

洁净室浮游菌测试操作规程一、实验前准备1.准备必要设备和试剂，包括洁净室采样器、空气费氏培养皿、洁净无菌办公用品、评价菌种等。

2.检查设备是否正常工作，保证无菌和完好。

3.准备洁净室进出口空气流速仪，测量室内外空气流速是否符合要求。

二、样品采集1.样品采集前，应对操作人员进行培训，确保操作规程的正确执行。

2.在采样器上固定好无菌采样头，确保不受外界微生物的污染。

3.将采样器插入室内适当位置，保持采样头不与其他物体接触。

4.开始采样后，保持采样器连续运行一定时间，通常为15-30分钟，以保证采样量足够。

5.每次测试至少采集3个位置的样品，并记录位置信息。

三、菌落计数1.采样结束后，将采样器取出并标记样品编号和采样时间等信息。

2.使用洁净的工具将采样头从采样器上取下，放入含有适量无菌溶液的容器中。

注意避免非洁净区域的污染。

3.搅拌均匀后，取出一定体积的样品液体，分别接种在凝胶平板上。

4.将接种的凝胶平板置于适宜的温度和湿度下，进行培养。

培养条件需符合相应的标准。

5.按照标准时间进行培养，一般为48小时。

6.在培养结束后，使用显微镜对培养平板上的菌落进行观察，记录菌落的数量和特征。

7.使用专业的计数器对菌落进行计数，每个培养平板至少进行三次计数，保证结果的准确性。

四、数据分析和结果报告1.统计每个采样点和不同采样时间的菌落计数，计算出平均值和标准偏差。

2.根据相关的标准和要求，对测试结果进行评估和分析。

3.生成报告，包括测试日期、采样时间和位置、菌落计数结果、评价和建议等信息。

4.将测试结果及时上报给相关部门，以便采取必要的控制和改进措施。

五、实验结束后1.实验结束后，清洗和消毒测试设备，确保无菌。

2.整理并保存好测试数据和相关记录，以备后续分析和参考。

3.定期检查和维护测试设备，保持其正常工作状态。

总结：洁净室浮游菌测试操作规程的严格执行对于保证测试结果的准确性和可靠性至关重要。

操作人员应严格遵守规程，进行必要的培训和操作指导，以确保测试过程中不受任何干扰和污染。

1目的建立洁净室浮游菌测试标准操作程序，规范洁净室浮游菌的检测。

2范围适用于洁净室（包括洁净工作台）浮游菌的测试和环境验证。

3职责QA、QC人员遵照执行。

4内容4.1参考标准：GB/T 16293-20104.2测试方法本测试方法为计数浓度法，即通过收集悬浮在空气中的生物性粒子于专门的培养基（选择能证实其能够支持微生物生长的培养基），经若干时间和适宜的生长条件让其繁殖到可见的菌落计数，以判定该洁净室的微生物浓度。

4.3测试仪器、辅助设备和培养基浮游菌采样器、培养皿（选用与仪器相适应的培养皿）、培养基、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。

4.4测试状态及测试时间4.4.1静态和动态两种状态均可进行测试，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。

4.4.2在静态a测试时，单向流洁净室（区），测试在净化空调系统正常运行时间不少于10分钟后开始；非单向流洁净室（区），测试在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。

在静态b测试时，单向流洁净室（区），测试在生产操作人员撤离现场并经过10分钟自净后开始；非单向流洁净室（区），测试在生产操作人员撤离现场并经过20分钟自净后开始。

4.5采样点的确定4.5.1最少采样点数目见表1，每次最小采样量见表2。

表1 最少采样点数目表2 最小采样量4.5.2采样点位置布置宜力求均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏，采样点按照《洁净区环境监控管理规程》附件×××车间洁净度监测采样点布局图的要求布置，每个采样点一般采样一次。

4.5.3工作区采样点位置离地0.8m~1.5m左右（略高于工作面），送风口测点位置离开送风面30cm 左右，可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。

4.6测试准备4.6.1采样器在进入被测区域前先清洁表面，然后用75%酒精消毒一遍或存放于被测区域内，与被测试区域一起消毒（用于A级洁净室的采样器必须预先放在被测房间内）。

4.6.2A/B级区采用一次性培养皿，其它区域按无菌操作要求，在中检室洁净工作台上提前制备培养备用（将灭菌后的培养基用水浴溶解，冷却至约50-60℃，Φ90mm培养皿每个倾注约20ml培养基，Φ150mm培每个倾注约30ml培养基），培养皿加盖后在室温下放至凝固。

1.目的：建立一个洁净室（区）浮游菌测定的标准操作规程，确保洁净室（区）洁净程度。

2.范围：适用于洁净室和洁净区、无菌室或局部空气净化区域（包括洁净工作台）的浮游菌的测定和环境的验证。

3.责任：质量管理部QA监测员对本规程的实施负责。

4.程序：4.1.术语和定义：下列术语和定义适用于本标准操作规程。

4.1.1.菌落：微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称CFU。

通常用个数表示。

4.1.2.浮游菌：用本标准操作规程提及的方法收集悬浮在空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。

4.1.3.浮游菌浓度：单位体积空气中含浮游菌菌落数的多少，以计数浓度表示，单位是个/m3或个/L。

4.1.4.纠偏限度：对于受控的洁净室（区），由使用者自行设定微生物含量等级。

当检测结果超过该等级时，应启动监测程序对该区域的微生物污染情况立即进行跟踪。

4.1.5.警戒限度：对于受控制的洁净室（区），由使用者自行设定一个微生物含量等级，从而给定了一个正常状态相比最早警戒的偏差值。

当超过该最早警戒的偏差值时，应启动保证工艺或环境不受影响的程序及相关措施。

4.2.测试方法4.2.1.方法提要：本标准操作规程采用的方法是计数浓度法。

即通过收集悬游在空气中的生物性粒子于专门的培养基（选择能证实其能够支持微生物生长的培养基），经若干时间和适宜的生长条件让其繁殖到可见的菌落计数，以判定该洁净室的微生物浓度。

4.2.2.人员的职责及培训：洁净室（区）的测试人员应进行本专业的培训并获得相应资格后才能履行对洁净室（区）测试的职责，其中包含涉及的卫生知识和基本微生物知识。

洁净室（区）的测试人员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式。

4.2.3.仪器、辅助设备和培养基选择合适的浮游菌采样器，包括采用无油的抽气泵，较低的气流流速和较大的采样流量，以保证培养基表面的水分不被吹干。

本测试需要具备仪器、辅助设备和培养基如下：浮游菌采样器、培养皿、培养基（见本标准附录B）、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。

浮游菌检测标准1 取样前准备工作1.1 依据检测区域的取样点数，按照《培养基配制、灭菌标准操作程序》制备适量的营养琼脂培养基。

1.2 在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15ml的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。

1.3 将制备的营养琼脂平皿倒置于隔水式恒温水浴培养箱内于30～35℃培养48小时。

取出逐个检查，确认无菌落数后即可使用。

1.4 采样：将上述制备好的营养琼脂平皿交与QA人员取样。

2 仪器、设备和培养基2.1 所用的仪器、设备和培养基2.1.2 浮游菌采样器2.1.3 培养皿（φ90mm×15mm）2.1.4 培养基（营养琼脂培养基）2.1.5 恒温培养箱2.2 仪器、设备、培养基的要求2.2.1 浮游菌采样器2.2.1.1 浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。

2.2.1.2 应严格按仪器说明书的要求进行操作。

2.2.1.3 采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性，检验项目有：定时器，转盘转速，流量计。

2.2.1.4 每次测试前应先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计和定时器。

2.2.1.5 空气采样量根据需要选定，已知采样器的流量（L/min）,设定采样时间（min）两者相乘即得采样量（L）。

2.2.1.6 采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造，采样管严禁渗漏，内壁应光滑，采样管的长度应根据测定点的高度定，尽量减少弯曲。

3 测试方法3.1 测试用仪器、培养皿表面必须严格消毒。

3.1.1 采样器进入被测房间前先用消毒剂灭菌。

3.1.2 用消毒剂擦净培养皿的外表面。

3.1.3 采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盘、转盘以及罩子的内外面，采样结束再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。

3.1.4 采样口及采样管使用前必须高温灭菌，如用消毒剂对采样管的外壁、内壁进行消毒，应将管中的残留液倒掉并晾干。

3.1.5 采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。

医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法是一项关乎洁净室(区)质量的重要工作。

本文将从测试准备、测试流程和测试结果解读三个方面，分步骤阐述应如何进行医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法。

一、测试准备在进行医药工业洁净室(区)浮游菌的测试前，首先需要准备一些必要的设备和材料。

具体如下：1. 根据洁净室(区)级别选择空气采样器，例如可旋转式风轮采样器、分离式采样器等。

2. 准备适量的灭菌器具、培养基、培养基混悬液、菌落计数板等必要的材料。

3. 做好检测前的准备工作，比如洗手消毒、戴口罩手套等。

4. 根据洁净室(区)所处环境的不同特点选择不同的测试方法和频次。

二、测试流程测试流程是医药工业洁净室(区)浮游菌的测试过程中最为重要的环节。

其步骤如下：1. 将采样器等设备装置妥当后，将采样器放在所需检测的位置上，按照规定时间进行采样。

2. 采样结束后，将采样器拆卸下来，将采样头放入少量快速灭菌的液态呋喃中，使其受到灭菌处理。

3. 将采样头及培养基共同放入反应器内进行培养。

4. 在培养结束之后，取出后进行菌落计数，统计浮游菌的数量。

5. 完成菌落计数之后，应按照规定的方法、时间及频次，记录浮游菌的采样、分析结果。

三、测试结果解读在进行测试结果解读之前，每次完成测试都应将测试结果保存记录下来。

在测试结果解读时，应判断采样地点、时间等是否存在问题，进而推测污染原因。

若出现了比较严重的情况，则需要采取适当的措施进行改善。

总而言之，对于医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法，我们应仔细准备设备与材料，认真执行测试流程，及时记录和分析测试结果。

只有这样才能够全面了解洁净室(区)的质量是否达到标准要求，从而保障医药工业中药品的安全生产。

1. 目的建立洁净室（区）浮游菌检测的标准操作程序，用以规范检测人员的检测操作。

2. 范围适用于洁净室（区）浮游菌的检测。

3. 职责3.1 专职检验员负责洁净室浮游菌的检测，并在检测结束后出具检测记录报告。

3.2 质量监督员负责监督本规程的执行。

4. 内容4.1仪器设备及培养基4.1.1培养皿：玻璃培养皿或一次用无菌培养皿。

4.1.2培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。

4.1.3仪器：浮游空气尘菌采样器、恒温培养箱、立式高压蒸汽灭菌锅。

4.2检测用培养基平皿的制备玻璃培养皿使用前应先灭菌，制备培养基平皿时注意无菌操作，每批次应设置对照平皿。

制备好的培养基平皿在2～8℃的环境中存放。

4.3 采样空态或静态测试时，采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目，不得少于最少采样点数目。

动态测试时，悬浮粒子采样点数目及其布置，应根据产品的生产及关键工艺操作区设置。

表1 最少采样点数 表2 最小采样量面积（m 2）洁净度级别10010 000 100 000 <10 2～3 2 2 ≥10～<20 4 2 2 ≥20～<40 8 2 2 ≥40～<100 16 4 2 ≥100～<200 40 10 3 ≥200～<40080206注：表中的面积，对于单向流洁净室指的是送风面积，对于非单向流洁净室指的是房间面积。

4.3.1 采样点位置工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。

送风口测点位置离开送风面30cm 左右，可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。

图1 采样点位置参考图4.3.2 采样次数每个采样点一般采样一次。

4.4 采样注意事项4.4.1 采样前应仔细检验每个培养基平皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

洁净度级别 采样量（L/次）100级 1000 10 000级 500 100 000级 100 300 000级1004.4.2测试用具要做无菌处理，以确保测试的可靠性，正确性。