间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的相互关系

抗核抗体复筛查试验阴性与特异性抗体确认试验阳性的关联作者：肖静杨元好梁燕刘文毅来源：《中国现代医生》2013年第20期[摘要] 目的探讨抗核抗体（ANA）复筛查试验阴性与特异性抗体确认试验阳性的关联。

方法对2065例间接免疫荧光法（IIF）检测阴性结果的样本进行免疫印迹法（LIA）检测，并使用ELISA进行辅助检测。

观察IIF阴性结果下LIA、ELISA检测结果，并对样本稀释度对结果的影响进行深入研究。

结果 165例IIF阴性样本经LIA确认为阳性，其中以SS-A最多，达到29.76%。

通过ELISA检测SS-A，发现与LIA符合率达到88.0%；而通过降低样本稀释度，可以发现50%的样本是因为特异性抗体的浓度较低才漏检的。

结论对于高度怀疑为AID的患者，不管IIF检测是否为阳性，都应该进行LIA的复检，以提高检测的准确性。

[关键词] 抗核抗体；特异性抗体；间接免疫荧光法；免疫印迹法[中图分类号] R446.6 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）20-0070-03抗核抗体（ANA）检测是目前临床上诊断自身免疫性疾病（AID）最重要、可靠的一种实验室诊断手段，其中间接免疫荧光法（IIF）的使用最为广泛[1，2]。

随着实验技术的进一步发展，目前其他针对特异性抗体（ANAs）的新型检查手段也不断出现，如ELISA、免疫扩散及免疫印迹等[3，4]。

临床工作中，IIF常常作为初步检测存在，对检测结果呈现阳性的样本进行特异性抗体确认试验[5]。

但临床工作中发现，有时IIF与特异性抗体确认试验结果差异较大。

我科对2 065份IIF检测阴性样本进行免疫印迹法（LIA）检查，共发现15种特异性抗体。

本研究试图阐述IIF阴性样本与LIA检查的关系与意义，现报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料本研究共纳入受试者2 065例，均为我院2010年1月～2012年12月各科室申请ANA检测的患者，ANA检测均采用IIF，检测结果均为阴性。

抗核抗体的检测方法主要包括间接免疫荧光法、放射免疫法、ELISA测定法和免疫印迹测定法。

以下是这些方法的简要介绍和原理：
1.间接免疫荧光法：此方法是检测抗核抗体的常用方法之一。

原理是将待测标本与细胞底物片（如HEp-2细胞）的相应抗原进行反应，然后加入
荧光素标记的抗人免疫球蛋白抗体（通常为抗IgG抗体），形成抗原-抗体-荧光二抗的复合物。

通过荧光显微镜观察，可以判断待测标本中是否存在针对细胞相关抗原的自身抗体。

2.放射免疫法：此方法常用于检测抗DNA抗体。

原理是用同位素标记DNA，与被检血清中的抗DNA抗体结合，然后通过沉淀和对比沉淀物与上
清液中的放射活性，得到DNA的结合活性。

结合率高于一定值（通常为20%）则判断为阳性。

3.ELISA测定法：即酶联免疫吸附法，是一种常用的固相酶免疫测定方法。

原理是将抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在
固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗去，最后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。

4.免疫印迹测定法：此方法是将混合的抗原作为凝胶电泳分离，然后转印到硝酸纤维素的薄膜上，再用标记抗体进行检测和分析。

以上各种方法都有其特点和适用范围，可以根据实验需求和条件选择合适的方法进行检测。

三种抗核抗体检测方法的比较吴秀风;陈惠娟;曾勇彬;陈添彬;陈静;詹富国【摘要】Objective To compare the characteristics of three assay methodsof antinuclear antibody (ANA) and to evaluate their clinical use.Methods 445 sera specimens were detected by Enzyme-Linked Immunosorbent Assays(ELISA),Indirect Immunofluorescence (IIF)and Line Immumoassay (LIA), then consistency of the three methods were analyzed.Results There were some differences of the consistency of the three methods(Kappa0.573、0.725、0.566,P<0.05)respectively.ConclusionELISA was suitable for the screening of the ANA specimens,which could not replace IIF or LIA completely. The assay methods should be adopted according to the disease of the patients.%目的：比较三种不同原理抗核抗体（Antinuclear antibody，ANA）检测方法的性能特点，评估其临床应用价值。

方法445例血清样本分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光法（IIF）和免疫印迹法（LIA）三种方法进行检测，比较三者检验结果的一致性。

抗核抗体的检测方法及原理
抗核抗体（ANA）是一种特殊的抗体，它们是人体免疫系统产生
的一类抗体，主要针对自身细胞核中的蛋白质和核酸成分。

抗核抗
体的检测方法主要用于自身免疫性疾病的诊断，如系统性红斑狼疮（SLE）和类风湿性关节炎（RA）等。

目前常用的抗核抗体检测方法包括间接免疫荧光法（IFA）和酶
联免疫吸附试验（ELISA）。

1. 间接免疫荧光法（IFA）：
该方法主要通过观察抗核抗体与细胞核结构的结合情况来确定
是否存在抗核抗体。

具体步骤如下：
- 取一份患者血清，将其与细胞核结构进行反应。

- 通过荧光显微镜观察，如果血清中存在抗核抗体，它们会与
细胞核结构结合形成荧光标记的复合物。

- 根据荧光标记的情况，可以确定抗核抗体的存在及其荧光模式，进而进行疾病的诊断。

2. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：
该方法通过测定抗核抗体与特定抗原的结合情况来确定是否存
在抗核抗体。

具体步骤如下：
- 取一份患者血清，将其与特定抗原进行反应。

- 加入特定抗核抗体的检测试剂，使其与抗核抗体结合。

- 加入酶标记的抗人免疫球蛋白抗体，使其与抗核抗体结合形
成复合物。

- 加入底物，使酶标记的抗体与底物发生反应，产生颜色反应。

- 通过测定反应产生的颜色强度，可以确定抗核抗体的存在及
其浓度水平。

以上是两种常用的抗核抗体检测方法。

这些方法的原理基于抗体与特定抗原的结合反应，并通过不同的检测手段来确定抗核抗体的存在及其水平。

这些检测方法在临床上被广泛应用于自身免疫性疾病的早期诊断和疾病活动性的监测。

间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的相互关系【摘要】目的：对间接免疫荧光法（iif）筛查抗核抗体与特异性抗体检测之间的相互关系进行研究分析。

对其临床意义予以确定。

方法：抽取1894份临床连续送检血清标本的抗核抗体，将这1894例标本随机分成三组，分别作为自身免疫性疾病组、疑似自身免疫性疾病组和非自身免疫性疾病组，采用间接免疫荧光法对这些标本进行筛查，采用线性免疫印迹法(lia)对抗核抗体进行检测，对检测结果的相互关系进行分析与总结。

结果：在所调查的结果中，两种方法均阳性的有833份，约占43.98%；iif检查结果表现出阳性而lia检查结果为阴性的有246份，约占12.99%；iif检查结果表现出阴性而lia检查结果为阳性的有189份，约占9.98%；两种方法均呈阴性的有626份，约占33.05%。

两种方法的总体符合率为77.03%，以上同级的数据均具有明显的统计学差异（p<0.05）。

结论：采用间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的结果显示出，两种方法具有很高的符合率，这对临床来说具有重要意义。

【关键词】间接免疫荧光法；抗核抗体；特异性抗体检测；线性免疫【中图分类号】r446.6 【文献标识码】a 文章编号：1004-7484（2012）-04-0357-02目前在临床上在对自身免疫性疾病进行诊疗的过程中对抗核抗体进行检测具有无法取代的位置。

对抗核抗体进行检测的方法中最为重要的一种就是间接免疫荧光法，被认为是检测抗核抗体的金标准。

尽管间接免疫荧光法对抗核抗体进行检测无疾病特异性，但是因该方法进行测定主要目标是细胞成分的总抗体，具有较高的检测敏感度，由此而被广泛应用与国内外的众多实验室。

研究发现间接免疫荧光法对抗核抗体的检测结果并不完全与特异性抗体检测结果相符合［1］。

在本次研究中对1894份间接免疫荧光法阴性的抗核抗体标本采用免疫印记法对15种特异性抗体进行检测，对间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测之间的相互关系进行研究分析，以下为本次研究的结果报告。

抗核抗体诊断标准
抗核抗体（ANA）是一种检测自身免疫性疾病的重要指标，
常用于诊断系统性红斑狼疮（SLE）和其他结缔组织病。

抗核
抗体的诊断标准通常包括以下几个方面：
1. 实验室检测结果：抗核抗体通常通过间接免疫荧光法（IIF）进行检测。

阳性结果表示存在抗核抗体，但不能确定具体的抗核抗体种类。

通常需要进一步进行特异性抗核抗体检测，如抗双链DNA抗体、抗Sm抗体等，以确定疾病的类型和严重程度。

2. 异质性：抗核抗体的阳性结果需要在不同时间点进行重复检测，以排除偶发阳性和暂时感染等非自身免疫因素。

3. 结合临床表现：抗核抗体的阳性结果应结合患者的临床表现进行综合分析。

一般来说，阳性结果结合相关症状和体征，如关节痛、皮疹、发热等，可以认为是系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的可能。

需要注意的是，抗核抗体作为一项检测指标，并非仅凭阳性结果就可以诊断某一疾病，还需结合其他相关指标和临床表现进行全面判断。

此外，不同类型的抗核抗体与不同的自身免疫性疾病之间存在一定的关联性，具体的诊断标准可能会根据具体疾病而有所不同。

因此，建议在临床实践中，医生应根据患者的具体情况进行综合分析和判断。

・202・黑龙江医药科学244年4月第42卷第2期间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的相关性分析①陈戊才（郑州大学第二附属+隐检验科,河南郑州456009）摘要：目2:探讨间接免疫荧光法（（A）筛查抗核抗体（ANA）与特异性抗体检测的相关性，并进行相应的分析。

方法:抽取904份临床连续送检的血清标本抗核抗体，分成A组（自身免疫性疾病组）、B组（疑似自身免疫性疾病组）、C自身免疫性疾病组）。

各组利用IIL法筛查ANA,利用免疫印迹法（I BT）检测特异性ANA,分析IIL法筛查ANA与特异性抗体检测的相关性。

结果:检测后2阳性标本率为77.07%,阴性标本率为56.06%,总符合率为74.55%。

IA检测结果为阴性者且IBT 检测结果为非阴性者中，A组比例略高于B组（P> 4.45）；但A组比例明显高于C组，比较具有统计学意义（P<4.45）。

A 组的IA+/IBT+比例明显高于IA-/IBT-的比例，但B组、C组的IIL+/IBT+比例明显低于IIL-/IBT-的比例，比较均有统计学意义（P<4.45）。

结论：用IA法筛查抗核抗体易导致特异性抗体漏诊，用IBT法检测特异性抗体，易导致抗核抗体漏诊，应进行联合检测，避免出现漏检。

关键词：间接免疫荧光法；筛查；抗核抗体;线性免疫印迹法;特异性抗体中图分类号:R446.60文献标识码:B文章编号：903-4144（2216）40-4220-40ANA是抗细胞内非特异性自身抗体的总称，其可作为自身免疫病（AID）的诊断指标4］。

IIC法是ANA检测的金标准，虽然IIC法检测ANA不存在疾病特异性，但IA法测定的细胞成分总抗体,对其检测具有较高的敏感度，因此广泛在临床上应用4］。

目前，特异性抗体检测也不断应用到临床中，因此,采取合理的抗体检测方法来降低漏诊率已为重点研究内容。

研究显示/A法检测ANA的检测不完全与IBT法检测特异性抗体的结果相符4］。

抗核抗体检测原理抗核抗体是指针对细胞核内物质（包括核糖体、线粒体等）的自身免疫抗体。

抗核抗体检测在临床上广泛应用于风湿免疫系统疾病的诊断和鉴别诊断。

抗核抗体检测原理主要是通过ELISA或间接免疫荧光法等技术，检测患者血清中的自身免疫抗体与核抗原结合的情况，来判断是否存在自身免疫反应。

抗核抗体检测的方法有多种，本文将重点介绍ELISA和间接免疫荧光法。

一、ELISA法检测原理ELISA法是酶联免疫吸附试验，又称酶标法。

其检测原理基于抗原与特异性抗体的反应，在一个特定的底物上标记酶使其可定量测定。

ELISA法的具体操作步骤如下：1. 将核抗原制备成微孔板的包被抗原，加入标准物、阳性及阴性对照和待检血清。

2. 洗涤掉未结合物，加入人抗IgG酶标记物，形成抗体-抗原-酶复合物。

3. 清洗掉未结合的抗体，加入底物与显色剂，使酶与底物反应所生成的色素可量化。

4. 通过光密度计测定每个孔的发光程度，根据标准曲线计算出各样本抗体的浓度。

二、间接免疫荧光法检测原理间接免疫荧光法又称间接荧光抗体法，其检测原理是使用荧光标记的细胞核物质（如正常人淋巴细胞的核）作为抗原，检测待测血清中的自身抗体结合情况。

具体操作步骤如下：1. 将正常人淋巴细胞制成薄片，用甲醛固定，形成抗原。

2. 加入待检血清，其中若存在抗核抗体，会与抗原结合形成复合物。

3. 再加入荧光标记的抗人IgG抗体，以荧光染色，并进行显微镜观察。

4. 观察样本的荧光染色程度、荧光颗粒的类型和形态、分布情况等，以判断是否存在抗核抗体的阳性反应或抗核抗体水平的高低。

三、应用抗核抗体检测可以用于如系统性红斑狼疮、硬皮病、混合型结缔组织病等自身免疫性疾病的诊断和鉴别诊断。

对于一些具有高度特异性的抗核抗体或特定细胞核抗原，如抗ds-DNA（双链DNA）抗体，根据抗体阳性水平还可以预测某一个病人的病情的严重程度和治疗效果。

高滴度抗核抗体可预示病情活动度高，反之即预示病情不活跃，治疗效果好等。

实验三、间接免疫荧光法检测血清中抗核抗体一、实验目的：1、掌握免疫荧光法的原理。

2、掌握免疫荧光法检测过程中避免非特异荧光干扰的方法。

二、实验原理：间接免疫荧光技术是利用荧光抗体标记第二抗体检测未知抗原或未知抗体（第一抗体）的方法。

以检测人血清抗核抗体（ANA）为例。

病人血清中ANA（Ab）能与各种系细胞核成分（Ag）特异性结合，此种结合的Ab（IgG型）能与荧光标记的羊抗人IgG（二抗）结合，在荧光显微镜下，细胞核显示荧光，提示血清中ANA的存在。

三、试验材料：0.1M，pH6.8PBS；小白鼠，待测血清，对照血清（阴性血清），羊抗人IgG荧光抗体、滴管、试管、孵箱、荧光显微镜等。

四、实验步骤：1、小鼠断颈处死取肝，NS漂洗，剪取肝横断面印片于玻片上，左右各一处，自然干燥；滴加无水乙醇固定，室温凉干；2、左右印片处分别盖上一片小纸片，分别滴加阳性血清和阴性血清各1滴，37℃30′；3、去除纸片，PBS冲洗1min×3次，吸干水分；4、左右印片处分别盖上一片小纸片，并滴加荧光标记羊抗人IgG（二抗）各1滴，37℃305、去除纸片，PBS漂洗1min×3次，吸干水分；6、荧光显微镜镜检。

五、实验结果：荧光显微镜下观察：细胞核发黄绿色荧光为阳性染色细胞，不发荧光为阴性；抗原片中出现阳性染色细胞为ANA 阳性，否则为阴性；阳性待检血清可作进一步稀释后测定效价。

（均质型）细胞核呈均匀一致的荧光(斑点型)细胞核内呈现斑点状荧光六、实验讨论：1、注意事项：1）制作核抗原片（印片）不宜太厚；2）滴加的血清或荧光抗体要充分盖满抗原片；3）荧光抗体孵育时要注意避光;4）染色后的片子应及时镜检，不宜放置过久。

5）注意各步骤的漂洗要充分。

2、临床意义：1）总的ANA检测在临床诊断与鉴别诊断中是一个极为重要的筛选试验。

绝大多数自身免疫性疾病均可呈阳性。

ANA阳性者进一步检测各亚类ANA抗体对明确诊断、临床分型、病情观察、预后及治疗评价有重要意义。

抗核抗体及特异性自身抗体检测结果的应用分析邱蕴文;吴俊渊【摘要】目的：探讨间接免疫荧光法（IIF）检测抗核抗体（ANA）及线性免疫印迹法（LIA）检测特异性自身抗体在自身免疫性疾病（AID）诊断中的应用价值。

方法1386例患者标本同时采用 IIF 法检测 ANA 和用 LIA 法检测特异性自身抗体，结合临床诊断将患者分为 AID 组和非 AID 组，将两种方法检测结果进行比较分析。

结果 IIF和 LIA 诊断 AID 的灵敏度分别为83．02％和60．38％，特异度分别为65．87％和84．13％，两者联合检测诊断AID的灵敏度和特异度分别为83．73％和94．58％，阴性预期值为85．22％；在222例 IIF 与 LIA 结果不一致的 AID 患者中，有129例诊断为类风湿性关节炎（RA），其中结果为 IIF（＋）LIA（-）的，诊断为 RA 的114例，占62．30％；结果为 IIF（-）LIA（＋）的，诊断为RA 的15例，占38．46％，其次诊断为多发性肌炎／皮肌炎（PM ／DM ）的占30．77％，没有诊断为系统性红斑狼疮的病例。

结论 IIF 和 LIA 联合检测，可提高 AID 诊断的特异性和准确性，且对排除AID 诊断是有一定意义的。

当两种检测结果不一致时，应根据患者临床症状，作进一步相关检查，以便明确诊断。

%Objective To explore the application value of the indirect immunofluorescence(IIF) method for de-tecting anti-nuclear antibody(ANA) and the linear immunoblotting(LIA) method for detecting specific autoantibodies in the diagnosis of autoimmune disease(AID) .Methods Totally 1 386 of samples from the patients were simultane-ously detected ANA by IIF and the specific autoantibodies by LIA .These patients were divided into the AID group and the non-AID group by combining with the clinical diagnosis .The results detected by the two kinds of method wereperformed the comparative analysis .Results The sensitivities of IIF and LIA in the diagnosis of AID were 83 .02% and 60 .38% ,their specificities were 65 .87% and 84 .13% respectively ,while the sensitivity and specificity of combined detection in the diagnosis of AID were 83 .73% and 94 .58% ,the negative predictive value was 85 .22% . In 222 patients with inconsistent IIF and LIA results ,129 cases were diagnosed as rheumatoid arthritis (RA ) ,in which ,114 cases were IIF(+ ) LIA( - ) and accounted for 62 .30% ;15 cases were IIF( - ) LIA (+ ) and accounted for 38 .46% ;followed by a diagnosis of polymyositis/dermatomyositis (PM /DM ) ,which accounted for30 .77% ,there was no diagnosis of systemic lupus erythematosus (SLE) .Conclusion The combined detection of IIF and LIA can improve the specificity and accuracy of AID diagnosis ,and has certain significance to rule out the diagnosis of AID . When the two detection results are inconsistent ,the further related detection should be conducted according to clinical symptoms for clarifying the diagnosis .【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2016(013)006【总页数】3页(P763-764,767)【关键词】抗核抗体;特异性自身抗体;间接免疫荧光法;线性免疫印迹法;自身免疫性疾病【作者】邱蕴文;吴俊渊【作者单位】江苏省南通市第一人民医院检验科 226001;南通大学附属第二医院检验科，江苏南通 226001【正文语种】中文抗核抗体(ANA)是针对自身真核细胞的多种细胞核成分为靶抗原的自身抗体，通常临床上将ANA作为自身免疫性疾病(AID)的筛查项目[1]。

[作者简介] 吴春龙(1977-),男,本科,主管技师,主要从事临床免疫学检验工作。

=经验交流>间接免疫荧光法阴性的抗核抗体标本中特异性抗体检测的临床意义吴春龙,祁灿灿,李俊,徐巍(浙江省台州医院,浙江临海 317000)[关键词] 间接荧光免疫法;抗核抗体;免疫印迹法[中图分类号] R 446.61 [文献标识码] C [文章编号] 1004-8685(2011)06-1574-03 抗核抗体(ANA )在临床中应用于自身免疫性疾病(A I D )的诊断已有50多年的历史。

抗核抗体是以细胞成分为靶抗原的器官非特异性自身抗体的总称,以H ep-2细胞为抗原基质的间接免疫荧光法(II F )被认为是ANA 检测的/金标准0[1]。

除间接免疫荧光法以外,近年来随着技术的不断发展,一些针对特异性抗体(ANA s)的检测方法也不断应用于临床,如EL IS A 、免疫扩散、免疫印迹、悬浮微阵列及抗原芯片等[2~4]。

在抗核抗体检测的临床应用中,许多实验室常先进行间接免疫荧光法抗核抗体的筛查试验,对阳性的标本再进行特异性抗体的确认试验[5,6]。

但在实际工作中,间接免疫荧光法抗核抗体的检测结果与特异性抗体的确认试验结果并不完全符合。

本次研究对2065份间接免疫荧光法阴性的抗核抗体标本用免疫印记法(li ne i m muno assay ,L I A )检测15种特异性抗体,以讨论在间接免疫荧光法阴性的抗核抗体标本中特异性抗体检测的临床意义。

1 对象与方法1.1 研究对象2010年8月-2011年1月就诊于浙江省台州医院申请抗核抗体检测的标本中间接免疫荧光法阴性的2065份标本。

其中男972例,平均年龄51.9岁;女1093例,平均年龄50.6岁。

送检样本均为患者清晨空腹静脉血,离心分离血清。

1.2 方法1.2.1 IIF 法检测ANA 用德国欧蒙公司提供的ANA (马赛克)IIF 试剂盒检测患者血清ANA 。

抗核抗体和特异性自身抗体检测的临床应用
仇宁;陈志强
【期刊名称】《国际皮肤性病学杂志》
【年(卷),期】2001(027)004
【摘要】结缔组织病是一组多种临床症状重叠的自身免疫性疾病,抗核抗体和特异性自身抗体检测在结缔组织病诊断中起重要作用.现就临床上如何正确选择检查项目,正确使用实验结果诊断疾病、监测病程和判断预后等作一综述.
【总页数】4页(P229-232)
【作者】仇宁;陈志强
【作者单位】中国医学科学院,皮肤病研究所;中国协和医科大学,皮肤病研究所【正文语种】中文
【中图分类】R75
【相关文献】
1.间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的相互关系 [J], 李绍龙
2.抗核抗体及特异性自身抗体检测结果的应用分析 [J], 邱蕴文;吴俊渊
3.间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的临床意义分析 [J], 陈霞
4.间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的相关性分析 [J], 陈茂才
5.抗核抗体、类风湿抗体在老年人梅毒特异性抗体检测中的影响 [J], 江云川;龚丽坤;高卫;杨婷;沈蓝;张瑛
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