丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定

丙氨酸氨基转移酶ALT(GPT紫外乳酸脱氢酶法作业指导书1、前言试验名称：丙氨酸氨基转移酶测定，英文名称：ALT，方法：紫外-乳酸脱氢酶法。

本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB450全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的丙氨酸氨基转移酶活力，以保证测定结果的准确可靠。

本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中丙氨酸氨基转移酶的活力。

丙氨酸氨基转移酶在肝脏中有较高的浓度，而在肾、心、骨骼肌、胰、脾、肺脏中则含量较少，ALT升高通常是由某些与肝脏有关的疾病引起的，这些疾病包括：肝硬化、肝癌、病毒性或中毒性肝炎和阻塞性黄疸。

在急性病毒性或中毒性肝炎时，ALT明显高于AST，而对于绝大多数的慢性肝炎病人ALT则低于AST，ALT升高也见于广泛损伤和肌肉疾病、伴有休克的循环衰竭、缺氧、心肌梗塞和溶血性疾病。

2、测定原理本试验测定原理以IFCC推荐的方法为基础，实验分两步进行测定原理如下：a、样本中的ALT催化丙氨酸氨基转换至α-氧代戊二酸，生成丙柄酸和L-谷氨酸。

b、枘柄酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸，同时NADH被氧化为NAD+，从而合340nm处的光吸收值下降，通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可以测定ALT的活力。

L-丙氨酸+α-氧代戊二酸ALT丙酮酸+L-谷氨酸LDH L-乳酸+ NAD+丙酮酸+NADH3、试剂试剂生产商：长海科华生物工程股份有限公司。

剂型：液体双试剂。

包装量：R1：4*40ml R2：4*20ml注册号：沪食药监械（准）字2010第2400056号。

生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。

基本成份：试剂1：L-丙氨酸600mmol/l乳酸脱氢酶﹥1820u/lNADH0.26mmol/lTris缓冲液80mmol/l试剂2：Tris缓冲液80mmol/lα-氧代戊二酸36mmol/lEDTA 5.0mmol/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。

血清丙氨酸氨基转移酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2 实验原理本试剂以国际临床化学会(IFCC)推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。

⑴样本中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化丙氨酸的氨基转换至α-氧代戊二酸，生成丙酮酸和L谷氨酸。

⑵丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸的同时还原型辅酶I（NADH+ H+）被氧化为辅酶I（NAD+），而使波长340nm处的吸光度值下降。

通过对波长340nm处吸光度值的下降速率进行监测，即可测得样本中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活性。

(3)样本中内源性丙酮酸的干扰，可由试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）在测定的延迟时间内快速、完全地消除，不会对测定产生干扰。

ALTL-丙氨酸 + -酮戊二酸丙酮酸 + L-谷LDH（乳酸脱氢酶）氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸 + NAD+ + H2O3 标本3.1病人准备：12小时禁食。

3.2 类型：血清。

3.3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。

3.4 标本运输：常温条件下保存运输。

3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。

4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALT试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1 L丙氨酸 600mmol/L 乳酸脱氢酶＞1820U/L（R1）：NADH 0.26mmol/LTris缓冲液 80mmol/L试剂2（R2）：Tris缓冲液80mmol/L α氧代戊二酸36mmol/LEDTA 5.0mmol/4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。

4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

丙氨酸氨基转移酶检测方法丙氨酸氨基转移酶(ALT)是一种重要的肝脏酶,也是一种常见的生化指标。

检测方法通常用于判断肝脏功能的健康程度和疾病的演变趋势。

下面，我们将对丙氨酸氨基转移酶检测方法进行详细的阐述。

一、常规检测方法常规检测方法是指采用血清学方法检测ALT水平。

具体步骤如下：1.患者空腹4～8小时。

2.采集3～5ml静脉血标本，禁止吸烟和饮酒。

3.将血样放于离心管中，进行离心处理，得到血清样本。

4.通过检测仪器检测血清ALT酶的含量。

二、生物传感器检测方法生物传感器检测方法可以检测非常低的ALT水平，可以提供更加精确的测试结果。

具体步骤如下：1.准备含有具有高选择性的生物传感器的电极。

2.采集患者的静脉血标本。

3.将血样与生物传感器电极接触并依据特定的工艺条件进行分析。

4.通过仪器获得ALT的浓度明确的结果。

三、免疫学方法免疫学方法采用免疫学技术分析ALT特定抗体的含量。

具体步骤如下：1.准备特定的抗ALT抗体试剂。

2.采集患者的静脉血标本。

3.加入抗ALT抗体图谱，进行特异性反应，每个抗原对应一个抗体。

4.使用适当的试剂盒，对空白对照样品和样品进行ELISA测定。

5.通过光学振荡仪读取ALT特定抗体的含量并获得浓度明确的结果。

综上所述，以上列出的三种方法都是常用的丙氨酸氨基转移酶检测方法。

针对不同的病情和检测需求选择不同的检测方法非常重要。

总之，如果您的ALT测试结果不正常，医生会建议您进一步进行了解。

您可以向医生咨询，了解其他可能涉及的测试方法和预防方法。

血清丙氨酸氨基转移酶测定1.实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。

ALTL-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮LDH（乳酸脱氢酶）酸+ L-谷氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD++ H2O 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与`样品中ALT的活力成正比,在340nm处NADH呈现特性吸收峰，而NAD+则没有。

因此，可在340nm监测吸光度的下降速率（-△A/min）,计算出ALT的活性单位。

2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。

2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。

3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。

6. 实验材料6.1 试剂欧泰克ALT测定试剂盒6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH 7.4 80mmol/LL-丙氨酸800mmol/LLDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/La-酮戊二酸18mmol/LNADH 0.18mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。

不可入口！避免接触皮肤及粘膜。

应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2 校准品：使用罗氏公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

7. 仪器：日立7060生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

一、实验目的1. 了解丙氨酸转氨酶（ALT）在生物体内的重要作用。

2. 掌握ALT活力的测定原理和方法。

3. 分析ALT活力与肝脏疾病之间的关系。

二、实验原理丙氨酸转氨酶（ALT）是一种在生物体内广泛存在的氨基转移酶，其主要功能是催化丙氨酸和α-酮戊二酸之间的氨基转移反应。

ALT在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中具有重要作用。

当肝脏、心肌等组织发生损伤或坏死时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血液中ALT活性升高。

本实验采用连续监测法测定ALT活力，以丙酮酸为底物，通过测定反应体系中NADH的生成量来反映ALT的活力。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血清样本- 丙酮酸- NADH氧化酶- 2,6-二氯酚靛酚- 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 1mol/L氢氧化钠溶液- 0.1mol/L盐酸溶液- 移液器- 实时荧光分光光度计2. 实验仪器：- 低温高速离心机- 精密电子天平- 恒温水浴锅- 紫外可见分光光度计四、实验方法1. 样本处理：将血清样本离心，取上清液备用。

2. 标准曲线绘制：以丙酮酸浓度为横坐标，NADH的生成量为纵坐标，绘制标准曲线。

3. ALT活力测定：将血清样本、丙酮酸、NADH氧化酶、磷酸盐缓冲液等按照实验步骤混合，在实时荧光分光光度计上测定NADH的生成量。

4. 数据处理：根据标准曲线，计算ALT活力。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，得到线性方程为y = 0.0126x - 0.0018，相关系数R² = 0.9989。

2. ALT活力测定：将血清样本按照实验步骤进行测定，得到ALT活力为x = 0.015 mol/L。

3. 数据分析：根据ALT活力与肝脏疾病之间的关系，当ALT活力超过正常值时，提示肝脏可能存在炎症、损伤等疾病。

六、实验结论通过本实验，我们成功测定了血清中ALT的活力，并分析了ALT活力与肝脏疾病之间的关系。

丙氨酸氨基转移酶检测操作程序丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase ，ALT ）属于转氨酶类，主要存在于肝细胞内，参与肝细胞内的新陈代谢，在血液中不发挥催化作用。

采用速率法测定，能有效地降低内源性物质的干扰，使测定结果较为准确。

主要用于肝脏等疾病的诊断。

实验原理L-丙氨酸和a-酮戊二酸在ALT 作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。

丙酮酸被试剂中的LDH 还原为L-乳酸，同时NADH 被氧化为NAD +，通过监测340nm 处吸光度值下降的速率，可以测定ALT 活力。

样本中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH 在初始孵育期内快速、完全地消除，不会干扰测定。

反应如下：L-丙氨酸 + a-酮戊二酸丙酮酸 + L-谷氨酸丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+样本中丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+试剂与仪器1. 试剂1.1.丙氨酸氨基转移酶试剂盒（由上海复兴长征医学科学有限公司提供）化学组成：R1: L-丙氨酸600mmol/L 乳酸脱氢酶 ＞1820U/L NADH 0.26mmol/L Tris 缓冲液 80mmol/L R2: Tris 缓冲液 80mmol/L a-酮戊二酸 36mmol/LEDTA5.0mmol/L在开展项目之前或更换试剂品牌时，将以上工作参数输入到仪器内，并按要求进行调整后，方可进行实验。

技术性能指标:试剂空白起始吸光度（340nm37℃）≤1.60A 。

线性范围：450U/L ±10%。

准确度：相对偏差(RE%)≤±10%。

精密度：批内精密度变异系数(CV%)≤5%；批间精密度相对极差(%)≤5%。

储存条件、有效期：储存于2～8℃，避光可稳定12个月。

启用后可稳定30天。

混浊或以蒸馏水为空白在340nm 处光吸收值高于1.0A 时，则不能使用。

ALTLDH LDH计算公式： ALT(U/L )= K= ——————————式中 TV=总反应体积(mL )SV=样本体积(mL )6.3=NADH 在340nm 处的毫摩尔吸光系数P=比色杯光径(cm )K 为工作参数表中的【K Factor 】以上是依据化学实验计算测试结果的公式，全自动分析时将工作参数（K 值）输入仪器即可。

丙氨酸氨基转移酶(ALT)1．检测目的规范丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测实验，确保检测结果的准确性和重复性。

2.标本采集(1)ALT测定可以采用血清、肝素或EDTA抗凝血浆。

(2)稳定性：在室温(20℃)可以保存48小时，在4℃冰箱可保存l周，在一25℃以下可保存1个月。

(3)建议使用带分离胶的真空采血管，并及时分离血清。

3.测定方法(1)方法：速率法(2)原理：在ALT速率法测定中酶偶联反应式为L一丙氨酸+α一酮戊二酸 A L T 丙酮酸+L一谷氨酸丙酮酸+NADH+H+L D H L一乳酸+NAD++H20上述偶联反应中．NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比，在340nm波长处，NADH呈现特征性吸收峰，而NAD+则没有。

因此，可在340nm处连续监测吸光度的下降速率( - △A／min)，计算出ALT的活性单位。

4.试剂试剂成份实验深度RⅠa-酮戊二酸NADH乳酸脱氢酶(LDH)15mmol/l0.18mmol/l≥5000U/LRⅡTris缓冲液（PH7.3)L-丙氨酸100mmol/L 500mmol/L5.校准(1)校准物的准备与保存，严格按照购置说明执行。

(2)校准频率：①新仪器设备在开始使用时；②设备进行重要维护保养以及发生故障维修之后；③试剂盒在仪器上28天后；④试剂批号更改后；⑤更换试剂厂家后；⑥由室内质控结果决定；⑦定期校准，可由实验室根据检测系统(仪器与试剂)的情况自行决定校准周期。

6质量控制(1)质控品：质控品应选择稳定、瓶间差小、基质效应小的物质。

同时，因为是定量检测项目，所以应选择两个不同浓度水平的质控品，这样有利于在不同的医学决定性水平上监测方法的性能。

(2)质控方法的选择：备选的质控规则如下：12s(一个质控结果超出i±2SD为违背此规则，提示警告)。

13s(一个质控结果超过i±3SD为违背此规则，提示失控，存在随机误差)。

22s(两个连续质控结果同时超过i±2SD，提示失控，存在系统误差)。

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定5页一、实验目的1. 掌握测定血清ALT活力的方法和原理。

2. 熟悉ALT在肝脏功能监测中的重要性。

二、实验原理ALT是一种酶，分布在人体的细胞内，主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌和肾脏等组织中。

正常情况下，ALT主要在肝脏中发挥作用。

当肝脏受到损伤时，ALT会释放到血液中，导致血液中ALT活力的升高。

因此，测定血清ALT活力是一种常用的肝功能检测方法。

本实验使用比色法测定血清ALT活力。

利用谷草-丙氨酸转移酶测定(AST)所产生的谷草酸，和血清ALT催化产生的丙酮酸反应，生成2,4-二硝基苯胺，其吸光度与丙酮酸的浓度成正比。

由此计算出血清ALT活力。

三、实验步骤1. 将标准品和待测血清样品准备好，室温恢复至20-25°C。

2. 取比色管，在无菌条件下加入以下试剂：2.5ml缓冲液pH7.5、0.25ml 10mmol/L 肌酸盐缓冲液、0.2ml5.5mmol/LNADH、0.2ml2mol/L丙酮酸、0.1ml3%的PEG，混匀。

3. 加入待测血清样品1ml，立即混匀。

4. 马上读测吸光度(Zero)。

5. 在37℃恒温箱中孵育10分钟。

6. 然后再读一次吸光度。

7. 加入ALT试剂，混匀，孵育60秒钟。

8. 反应结束后7分钟内，读取吸光度值，记录。

9. 将标准品同样操作，测定吸光度，计算样品中ALT活力的单位(L_0.9)四、实验注意事项1. 实验中的所有仪器、试剂、杯器等都要事先清洗干净，确保无污染。

2. 实验操作应在干燥、无尘、无异味的净化房间内进行。

3. 操作过程中要注意保持常温。

4. 实验中的吸光度必须在规定时间内完成测定，避免影响结果。

5. 测定前，必须保证血清样品无血浆外渗。

6. 测定期间谨慎操作，防止试剂泼溅，注意安全。

五、实验结果分析ALT活性测定值与肝损伤的程度有一定的相关性。

当ALT活性超过健康人参考范围时，说明肝脏功能出现异常，可能出现肝炎、脂肪肝等肝病状况。

丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程.检验原理：（酶偶联速率法）L-丙氨酸和α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶的作用下生成丙酮酸和L-谷氨酸。

丙酮酸在乳酸脱氢酶（LDH）作用下生成L-乳酸，同时还原型辅酶I（NADH）被氧化为氧化型辅酶I（NAD、在340nm处测得吸光度呈下降趋势与ALT活性成正比。

根据NADH吸光度下降程度计算丙氨酸氨基转移酶的活力单位。

试剂内不含磷酸弼哆醛。

1.-丙氨酸+Q-酮戊二酸一生→丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H，侬->L一乳酸+MUT3.2225828°C48-20°C保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6 .检验结果的解释：6.1 样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W∕V）的氯化钠溶液稀释样本。

6 .2.单位换算：ukat∕L=U∕L×16.67×10^37 .检验方法的局限性7.1 结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。

7. 2若试剂浑浊，或以水空白在34Onnl处吸光度小于LOOO时不能使用。

8.试剂性能指标8.1 试剂外观：无色或淡黄色透明液体，无悬浮物及沉淀。

8. 2装量：不低于标识值。

8. 3试剂空白吸光度：在34Onnl处，光径ICnI时，空白吸光度A21.0008 .4试剂空白吸光度变化率：在34Onm处，光径ICm时，Z∖A∕minW0.0049 .5线性区间：试剂的线性区间为[10-500]U∕L,在此线性区间内：a)线性相关系数r应不小于0.9900；b)[10-50]U/L区间内，线性绝对偏差不超过±5U/L；(50-500)U/L 区间内,线性相对偏差不超过±10%。

8. 6准确度：相对偏差应不大于±15机8. 7分析灵敏度：在34Onrn处，光径ICnl时，测量已知浓度的样品后换算成W/L的丙氨酸氨基转移酶时，吸光度变化AAU∕L∕min22XIO-48. 8批内精密度：CV≤5%8. 9批间精密度:R≤10%8. 10稳定性：(2-8)C下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后一个月的试剂进行测试，应满足1-8的要求。