碱性磷酸酶ALP测定标准操作程序SOP文件

血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书1.实验原理碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4，2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。

ALPpNPP + AMP -----------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率，它与标本中ALP的活性成正比。

2. 标本采集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。

2.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。

2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。

避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。

3. 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。

如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。

冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。

4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

6. 实验材料：6.1 上海申能ALP测定试剂盒（141 0417170 1 试剂1 6×64 ml ＋试剂 2 6×16 ml）6.1.1 试剂组成试剂1：2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）缓冲液0.90mol/L （pH:10.4）醋酸镁1.6mmol/L硫酸锌0.4mmol/LHEDTA2.0mmol/L试剂2：磷酸对硝基酚16.0mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。

反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性，切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。

若反应液与皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。

6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

碱性磷酸酶（ALP）测定（速率法）标准化操作程序文件1：概述碱性磷酸酶英文简称AKP或ALP，是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。

它不是单一的酶，而是一组同功酶。

目前已发现有AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与AKP6 六种同功酶。

碱性磷酸酶（ALP）：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。

从大肠杆菌提取的AP分子量为80kD，酶作用的最适pH为8.0；用小牛肠黏膜提取的AP分子量为l00kD，最适pH为9.6.一般采用对硝基苯磷酸酯（p-NPP）作为底物。

它可制成片状试剂，使用方便。

产物为黄色的对硝基酚，在405nm有吸收峰。

用NaOH终止酶反应后，黄色可稳定一段时间。

2标本的收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。

血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。

样本在4摄氏度可稳定7天。

采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。

3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。

不建议采用血浆标本。

3：方法原理样本中的碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚，生成游离的对硝基苯酚和磷酸，引起405nm处的光吸收值升高，，通过检测405nm处光吸收值上升的速率，可以测定碱性磷酸酶的活力。

4剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。

启用后在2-8度可稳定30天。

若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在405nm处的光吸收值低于0.8A,应予丢弃。

试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。

5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数：样品量4 u/l 试剂量：第一试剂200 u/l（R1）；第二试剂50 u/l测光点23—38 测定模式：速率法正反应分析波长：405nm/505nm(主波长/副波长)6计算方法ALP(U/L)=( A/min*Tv*1000)(18.8*Sv*P)式中Tv=总反应体积Sv=样本体积18.8=NADH在405nm处的毫摩尔消光系数P=比色杯光径（cm）7 线性范围：本实验的线性范围：0----850U/L8 参考范围：男性：1---12岁《500 U/L12—15岁《750 U/L》25岁40--150 U/L女性：1---12岁《500 U/L》15岁40--150 U/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。

血清碱性磷酸酶ALP测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2 实验原理本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。

ALP对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。

通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。

3 标本采集与处理：3.1 病人准备：无特殊要求。

3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。

3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。

避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。

3.4 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。

如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。

冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。

3.5 标本运输：常温条件下运输3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

4 实验材料：4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：乙酸镁3.0mmol/L硫酸锌 1.5mmol/LHEDTA 3.0mmol/LAMP缓冲液420mmol/L试剂2（R2）：对-硝基苯磷酸盐81.5mmol/LAMP缓冲液420mmol/LHEDTA5.0mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。

试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。

4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。

血清碱性磷酸酶ALP测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2 实验原理本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。

ALP对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。

通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。

3 标本采集与处理：3.1 病人准备：无特殊要求。

3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。

3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。

避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。

3.4 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。

如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。

冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。

3.5 标本运输：常温条件下运输3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

4 实验材料：4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：乙酸镁3.0mmol/L硫酸锌 1.5mmol/LHEDTA 3.0mmol/LAMP缓冲液420mmol/L试剂2（R2）：对-硝基苯磷酸盐81.5mmol/LAMP缓冲液420mmol/LHEDTA5.0mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。

试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。

4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。

SOP标准操作程序ALP 碱性磷酸酶（货号：OSR6104，OSR6204）实验原理：血清碱性磷酸酶（ALP）（EC3.1.3.1）的测量用在由于成骨细胞活性增加而引起的骨病和肝胆疾病的诊断中。

某些条件下，如何杰金病，充血性心力衰竭和溃疡性结肠炎会引起碱性磷酸酶中等水平的升高，它的非病理性升高可在妊娠末三个月观察到1。

方法奥林巴斯AU640ALP的测定是基于Bowers和McComb创建2，并由IFCC（国际临床化学联合会）和AACC推荐的方法3。

碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4，2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。

ALPpNPP + AMP -------------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率，它与标本中ALP的活性成正比。

标本：病人准备：无特殊要求。

类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。

血清应在收集后两小时内分离出来。

避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。

标本稳定性：血清中的ALP在15～25℃可稳定3天，如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。

冷藏的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。

它的活性恢复到初始值的速率依赖于时间和温度4。

仪器与材料:仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪材料：奥林巴斯AU640碱性磷酸酶参与反应成份的最终浓度：2-氨基-2甲基-1-丙醇（PH 10.4）0.35mol/Lp-硝基-磷酸苯酯16.0 mmol/LHEDTA 2 mmol/L硫酸锌1mmol/L醋酸镁 2 mmol/L其中含有稳定剂，表面活性剂和防腐剂。

注意：1.此试剂为体外诊断用。

2.有毒，不要入口，吞下有害。

避免和眼睛，皮肤和粘膜接触。

外部接触：用大量的水冲洗受损害的部位。

内部接触：立即寻找医疗保护。

3.防腐剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。

对-硝基苯磷酸盐在碱性溶液中为无色，在ALP的催化下，对-硝基苯磷酸盐分列出磷酸基团，生成游离的的对硝基酚，对硝基酚在碱性溶液中转变为醌式结构，呈现出较深的黄色，在405 nm 处连续监测吸光度的上升反应速率，反应速率与样本中碱性磷酸酶的含量成正比。

即可计算出样本中碱性磷酸酶的活力。

2．标本要求最适样本为新鲜不溶血血清或血浆。

血浆采用肝素扛凝；请勿使用EDTA、草酸盐或氟化物。

储存血清ALP的活性会缓慢增高，建议采血当天测定ALP的活性。

【3．试剂3.1 试剂：本试剂盒为液体双试剂，各组分如下：R1：AMP缓冲液410mmol/L、醋酸镁2.5mmol/LR2：AMP缓冲液410mmol/L、醋酸镁2.5mmol/L、对硝基苯磷酸二钠16.2mmol/L3.2：校准血清本试剂盒为连续监测法，可采用理论因子进行结果的计算：每次测定前只需要进行空白定标。

3.3 试剂的稳定性：2 ～ 8℃避光保存，防污染，有效期一年。

试剂首次开启后尽快用完。

当试剂空白吸光度高于0.8时，试剂按照失效处理。

4．仪器BT815A型号半自动生化仪。

5．操作5.1、参数设置6．计算ALP (U/L) =ΔAT/min×K 405 nm时，K=2713 7、性能指标的计算方法7.1、空白吸光度计算1-3号试管的吸光度的平均值，即为空白吸光度值，应符合：A405nm ≤0.80。

7.2、准确度计算4-6号试管的含量的平均值，即为准确度。

应符合：测定定值质控血清，三次测定的平均值应在规定的靶值范围内。

7.3 线性范围计算出7-11号试管的浓度值，在EXCEL中，利用相关系数公式（CORREL），自动求出理论浓度值与测定浓度值的相关系数。

应符合：在5～1000U/L范围内, 相关系数r应≥0.9907.4 分析灵敏度计算出12-21号试管的浓度值，在EXCEL中，利用平均值公式（AVERAGE），自动计算出平均值（X）；利用标准差公式（STDEV），自动计算出标准差（SD），求出X+2SD。

血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书1.实验原理碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4，2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。

ALPpNPP + AMP -----------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率，它与标本中ALP的活性成正比。

2. 标本采集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。

2.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。

2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。

避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。

3. 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。

如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。

冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。

4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

6. 实验材料：6.1 上海奥林巴斯ALP测定试剂盒试剂1 ＋试剂26.1.1试剂准备：试剂为即用式。

6.1.2 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.4 注意事项：碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。

反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性，切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。

若反应液与皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。

6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶（ALP）存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。

测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力，做临床辅助诊断用。

2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶（ALP）的活力。

3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶（ALP）活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶（ALP）试剂盒采用的是AMP缓冲液法。

5.原理在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。

在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。

−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：AMP缓冲液（PH10.50）、乙酸镁；R2：AMP缓冲液（PH8.85）、磷酸对硝基苯、乙酸镁。

AMP：2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性：试剂在2-8℃避光保存，有效期1年。

试剂工作液在2-8℃避光保存，可稳定4周，15-25℃可保存稳定4天。

7.4试剂准备：试剂为即用式。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。