新型分散液液微萃取-高效液相色谱法检测盐酸利多卡因注射液中2,6-二甲基苯胺杂质王璇璇;李潇;肖玉秀【摘要】A novel hexafluoroisopropanol(HFIP)-octanol supramolecular solvent(SUPRAS) based dispersive liquid-liquidmicroextraction(DLLME)method was developed for the determi-nation of 2,6-dimethylaniline(2,6-DMA)in lidocaine hydrochloride injection coupled with high performance liquid chromatography-ultraviolet detection(HPLC-UV). n-Octanol was selected as extraction solvent while HFIP was served as dispersing agent,self-assembly inducer of n-octanol as well as density-regulating agent of n-octanol. The HFIP-octanol SUPRAS displays reverse micellar aggregate structures(2-6 μm)with hydrophilic inner cores and is located in the bottom phase of the system after phase separation,which not only facilitates the efficient extraction and enrichment of polar 2,6-DMA,but also simplifies the extraction process. Several parameters influencing the extraction efficiency of 2,6-DMA were investigated and optimized. Under optimum conditions(0.4%(v/v)n-octanol,5%(v/v)HFIP,vortex for 3 s at 60 W, standing for 3min,centrifugation for 3 min at 3 000 r/min,sample solution pH 9),the novel DLLME-HPLC method shows good linearity for quantitative detection of 2,6-DMA in the range of 1-100 μg/L(R=0.998 9). The limi t of detection(LOD)was 0.33 μg/L. The enrichment factor(EF)reached about 63. Intra-day and inter-day precisions(n=3)were all below 2.5%. The recoverieswere from 93.9% to 100.8%. The results demonstrate that the novel DLLME-HPLC method is suitable for the accurate quantitative determination of 2,6-DMA in lidocaine hydrochloride injection with advantages of simplicity,rapidness,high efficiency and environ-mental friendliness,and may own high potential in future prospects.%以正辛醇为萃取剂,六氟异丙醇(HFIP)为分散剂、正辛醇的自组装诱导剂和密度调节剂,建立了基于 HFIP-正辛醇超分子溶剂(SUPRAS)的新型分散液液微萃取(DLLME)方法;应用该萃取方法和 HPLC-UV 法检测了盐酸利多卡因注射液中的2,6-二甲基苯胺(2,6-DMA)杂质.HFIP-正辛醇 SUPRAS 为反向胶束聚集体结构,且位于体系的下层,因此有利于萃取富集极性较大的2,6-DMA,且可简化萃取操作.在最佳萃取条件(0.4%(v/v)正辛醇, 5%(v/v)HFIP,涡旋3 s,静置3 min,以3000 r/min 离心3 min,样品溶液 pH 9)下,2,6-DMA 的富集因子约为63.在1~100 μg/L范围内方法的线性关系良好(R=0.9989),检出限为0.33 μg/L,日内、日间精密度均不高于2.5%,回收率为93.9% ~100.8%.新型 DLLME方法简便、快速、高效、环保,其与 HPLC-UV 法结合可定量检测盐酸利多卡因注射液中的2,6-DMA.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2018(036)003【总页数】7页(P292-298)【关键词】分散液液微萃取;高效液相色谱;超分子溶剂;正辛醇;六氟异丙醇;2,6-二甲基苯胺;盐酸利多卡因注射液【作者】王璇璇;李潇;肖玉秀【作者单位】组合生物合成与新药发现教育部重点实验室,武汉大学药学院,湖北武汉430071;组合生物合成与新药发现教育部重点实验室,武汉大学药学院,湖北武汉430071;组合生物合成与新药发现教育部重点实验室,武汉大学药学院,湖北武汉430071【正文语种】中文【中图分类】O658临床常用的局麻药盐酸利多卡因注射液中常含有杂质2,6-二甲基苯胺(2,6-DMA, log P=1.631±0.223,极性较大)[1]。
2,6-DMA是一种具有遗传毒性和致癌性的化合物,可能导致高铁血红蛋白血症,且在动物实验中表现出膀胱癌和鼻腔癌致癌性[2-4]。
因此,严格控制该注射液中2,6-DMA杂质的含量并进行准确定量显得格外重要。
目前,2,6-DMA的定量分析方法主要为HPLC和GC,如GC-FID[5]、GC-MS[5]、LC-MS/MS[6]、超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UHPLC-QTOF MS)[7]等。
《中国药典》(2015版)采用HPLC-UV法直接检测盐酸利多卡因注射液中的2,6-DMA杂质[8]。
然而,由于注射液中所含有的2,6-DMA浓度极低,现有杂质检测方法常常难以准确定量,不利于盐酸利多卡因注射液的质量控制。
对2,6-DMA进行预富集、提高检测灵敏度,是解决这一问题的有效手段。
目前用于萃取富集2,6-DMA的方法主要包括SPE[7]、液-液萃取(LLE)[6,9]和SPME[5]等。
传统的样品预处理方法SPE和LLE存在萃取时间长、有机溶剂消耗量大、不利于高效富集等缺点。
SPME和液液微萃取(LLME)可以显著降低有机溶剂的消耗量,是环境友好的样品预处理方法。
其中,分散液液微萃取(DLLME)因操作简便、快速,有机试剂消耗少、绿色环保,萃取富集效果好等优点,自2006年以来在分析领域受到广泛关注[10]。
DLLME基于目标物在水相和微量有机相中的分配以达到萃取富集效果,特别适合于水性基质样品中目标物的高效富集。
经典DLLME体系的组成主要包括萃取剂和分散剂,前者是萃取过程的主要执行者,后者主要是将萃取剂充分分散于待测的水样中,以提高萃取率。
早期的萃取剂以含氯有机试剂(密度大于水)为主[11],但其毒性大且对极性化合物萃取不理想[12-14]。
近年来,长链烷醇类化合物作为萃取剂已广泛应用于DLLME[15]。
长链烷醇是一类低毒性的两亲性物质,有生物表面活性剂的美誉,其在一定条件下可以形成反向胶束结构的超分子溶剂(SUPRAS)[16]; SUPRAS也即两亲物质在分子和纳米尺寸上连续自组装而凝聚形成的与水不相混溶的纳米/微米结构液体,其独特性质是兼具疏水和亲水区域,故对不同极性目标物均能实现高效萃取[17]。
然而,由于其密度低于水,微量的长链烷醇萃取剂在DLLME体系中会漂浮在水溶液表面而导致收集困难,常需借助自制窄口径器皿等特殊方法来实现收集,增加了操作的复杂性和/或成本[11,12,15,18,19]。
六氟异丙醇(HFIP)是一个全氟代醇,其相比于碳氢醇具有很多独特的性质:高密度(1.46 g/cm3),强氢键给体能力,两个三氟甲基又赐予其一定的疏水性;与水完全互溶,对很多有机试剂(包括长链烷醇)都具有很强的溶解能力,是潜在的DLLME分散剂;可以介导单一或混合表面活性剂发生自组装而凝聚形成SUPRAS[20-24]。
目前国内外还未见HFIP介导长链烷醇两亲分子自组装形成SUPRAS的研究报道。
本文选择正辛醇为萃取剂,HFIP为分散剂、正辛醇的自组装诱导剂和密度调节剂,通过研究HFIP-正辛醇-H2O三元混合体系的相行为,构建了基于HFIP-正辛醇SUPRAS且萃取相位于下层的新型DLLME体系,并采用该萃取体系与HPLC-UV 分析方法对盐酸利多卡因注射液中的2,6-DMA杂质进行了检测。
1 实验部分1.1 仪器、试剂与材料LC-20AD高效液相色谱仪,配备紫外检测器(Shimadzu,日本); H1850台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司); MX-S涡旋仪(北京大龙兴创实验仪器有限公司); Leica-LCS-SP8-STE超高分辨共聚焦荧光显微镜(Leica,德国);890Titrando卡氏水分测定仪(Metrohm,瑞士)。
正辛醇(纯度99.5%)、HFIP(纯度99.5%)、利多卡因标准品(纯度≥99%)购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司;2,6-DMA标准品(纯度99%)购于上海麦克林生化科技有限公司;盐酸利多卡因注射液(批号:1612072、1612092,标示量为0.1 g: 5 mL)购于山东华鲁制药有限公司;氯化钠、磷酸二氢钠、十二水合磷酸氢二钠、甲醇(分析纯)购于上海国药集团化学试剂有限公司;乙腈(色谱纯)购于上海星可高纯溶剂有限公司;去离子水(电阻率≥18 MΩ\5cm, pH=5.6～5.8)由Milli-Q Reference超纯水系统(Millipore,法国)制得。
利多卡因标准储备液(1 g/L)和2,6-DMA标准储备液(10 mg/L)分别用甲醇配制于5 mL棕色容量瓶中,于4 ℃避光储存。
