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生物标志物的筛查方法及研究进展虞萌;黄家恺;巴俊强;蒋成燕【摘要】生物标志物在疾病的预测、诊断、病情监测、治疗效果和预后评估及疾病普查等方面有很大的价值.寻找疾病相关的生物标志物已成为热点话题,尤其在肿瘤领域.基因组学、蛋白质组学及代谢组学研究的日趋深入及相关技术的合理应用,将会对筛选理想的特异性生物标志物提供有益的方法.基因组学从分子生物学技术水平分析疾病状态下基因顺序、数目、排列等的变化,找出可能致病的差异基因,随着遗传工程技术日趋成熟,基因水平寻找生物标志物已被广泛报道.蛋白质组学技术多样化有利于筛选区别于生理状态下的差异表达蛋白质(潜在生物标志物),有利于阐明疾病的发病机制,对疾病的预防、诊断、预后具有重要作用.随着核磁共振技术和质谱等技术的发展,代谢组学已广泛应用于疾病的诊断、分子生理学、分子病理学及基因功能组学等多领域.后基因组时代蛋白质组学及代谢组学作为新兴学科不断被重视.%Biomarkers have great value in predicting ,diagnosis,monitoring, treatment,prognosis and general investiga-tion of diseases .Looking for disease-related biomarkers has become a popular topic ,especially in the field of oncology .The rational application ofgenomics ,proteomics,metabolomics and related technologies will provide a useful method for screen -ing specific biomarkers.Genomics analyzes the sequence ,number,arrangement of genes by molecular biologic technology to find out the different genes that may cause diseases .With the development of genetic engineering technology ,the search of biomarkers on gene level has been widely reported .The diversification of proteomics technology is helpful to screen differen-tially expressed proteins ( potentialbiomarkers ) different from physiological condition ,and is helpful to elucidate the patho-genesis of diseases and plays an important role in disease prevention , diagnosis and prognosis .With the development of nuclear magnetic resonance and mass spectrometry , metabonomics has been widely used in the fields of diagnosis ,molecular physiology , molecular pathology and functional genomics .The post-genomic era ( proteomics ) and metabolomics are more and more valued as emerging disciplines .【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2017(023)005【总页数】5页(P867-871)【关键词】生物标志物;基因组学;蛋白质组学;代谢组学【作者】虞萌;黄家恺;巴俊强;蒋成燕【作者单位】遵义市第一人民医院内分泌科,贵州遵义 563000;遵义市第一人民医院骨科,贵州遵义 563000;遵义市第一人民医院内分泌科,贵州遵义 563000;遵义市第一人民医院内分泌科,贵州遵义 563000【正文语种】中文【中图分类】R446生物标志物是能被客观测量的指标，可作为正常生物学过程、病理改变、治疗后的药物反应的指标。
生物信息技术考试试题一、选择题（每题 3 分，共 30 分）1、以下哪个不是生物信息学的主要研究内容？（）A 基因组学B 蛋白质组学C 细胞学D 代谢组学2、生物信息学中用于序列比对的常用算法是（）A 动态规划算法B 贪心算法C 分治算法D 回溯算法3、在基因表达数据分析中，常用的标准化方法是（）A RPKMB TPMC FPKMD 以上都是4、以下哪种数据库主要用于存储蛋白质结构信息？（）A GenBankB PDBC UniProtD Ensembl5、进行系统发育分析时，常用的构建进化树的方法是（）A 邻接法B 最大简约法C 最大似然法D 以上都是6、以下哪个软件不是用于基因序列分析的？（）A Primer PremierB SPSSC DNAStarD Vector NTI7、生物信息学中，预测蛋白质二级结构的方法不包括（）A 基于同源建模B 基于机器学习C 基于物理化学原理D 基于经验规则8、在生物信息学中，BLAST 程序主要用于（）A 序列比对B 进化分析C 基因预测D 蛋白质结构预测9、以下哪种编程语言在生物信息学中应用较为广泛？（）A JavaB PythonC C+＋D Fortran10、用于分析基因芯片数据的软件包是（）A R 语言中的 BioconductorB MATLABC StataD SAS二、填空题（每题 3 分，共 30 分）1、生物信息学中的三大核心数据库是_____、＿____、＿____。
2、基因序列的相似性搜索常用的工具是_____。
3、蛋白质的一级结构是指_____。
4、常见的基因注释数据库有_____、＿____等。
5、系统发育树的构建基于_____的原理。
6、生物信息学中常用的数据格式有_____、＿____等。
7、预测蛋白质三级结构的方法主要有_____、＿____。
8、基因表达数据的差异分析常用的方法有_____、＿____。
9、用于分析高通量测序数据的软件有_____、＿____。
双向电泳的应用及研究进展摘要:双向电泳是蛋白质组学研究中最常用的技术,具有简便、快速、高分辨率和重复性等优点。
本文重点介绍了双向电泳的基本原理及其应用。
同时对当前双向电泳技术面临的挑战和发展前景进行了讨论。
关键词: 双向电泳，应用，前景1.1双向电泳技术概述双向电泳（two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE）是蛋白分离的黄金标准，由此可以分析生物样品的显著差别，产生的结果用于诊断疾病、发现新的药物靶标和分析潜在的环境和药物的毒性。
双向电泳分离技术利用复杂蛋白混合物中单个组分的电泳迁移，第一向通过电荷的不同分离，另一向通过质量的不同分离。
双向电泳协同质谱技术是正在出现的蛋白组学领域的中心技术。
双向电泳是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取的蛋白质混合物的有力手段，是目前唯一能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术，其高分辨率、高重复性和兼具微量制备的性能是其他分离方法所无与伦比的。
双向电泳技术、计算机图像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术被称为蛋白质组研究的三大基本支撑技术。
可见双向电泳在蛋白质组学研究中的重要性。
就像Fey和Larsen在他们的综述中提到：“尽管人们都想有新技术取代它，可是如果希望对细胞活动有全面的认识，其他技术无法在分辨率和灵敏度上与双向电泳相媲美”。
1.2双向电泳基本原理1975年,意大利生化学家O’Farrell发明了双向电泳技术[1],双向电泳是指利用蛋白质的带电性和分子量大小的差异,通过两次凝胶电泳达到分离蛋白质群的技术。
双向电泳技术依据两个不同的物理化学原理分离蛋白质。
第一向电泳依据蛋白质的等电点不同,通过等电聚焦将带不同净电荷的蛋白质进行分离。
在此基础上进行第二向的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,它依据蛋白质分子量的不同将之分离。
双向电泳所得结果的斑点序列都对应着样品中的单一蛋白。
因此，上千种蛋白质均能被分离开来，并且各种蛋白质的等电点，分子量和含量的信息都能得到。
双向凝胶电泳（2-DE）双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。
近年来经过多方面改进已成为研究蛋白质组的最有使用价值的核心方法。
分离蛋白质组所有蛋白的两个关键参数是其分辨率和可重复性。
在目前情况下，双向凝胶电泳的一块胶板（16cm×20cm）可分出3～4千个，甚至1万个可检测的蛋白斑点，这与10万个基因可表达的蛋白数目相比还是太少了。
80年代开始采用固定化pH梯度胶，克服了载体两性电解质阴极漂移等许多缺点而得以建立非常稳定的可以随意精确设定的pH梯度。
由于可以建立很窄的pH范围（如0.05U/cm)，对特别感兴趣的区域可在较窄的pH范围内做第二轮分析，从而大大提高了分辨率。
此种胶条已有商品生产，因此基本上解决了双向凝胶电泳重复性的问题。
这是双向凝胶电泳技术上的一个非常重要的突破。
第二向SDS-PAGE有垂直板电泳和水平超薄胶电泳两种做法，可分离10～100kD分子量的蛋白质。
其中灵敏度较高的银染色法可检测到4ng蛋白，最灵敏的还是用同位素标记，20ppm的标记蛋白就可通过其荧光或磷光的强度而测定。
用图像扫描仪、莱赛密度仪、电荷组合装置可把用上述方法得到的蛋白图谱数字化，再经过计算机处理，去除纵向和横向的曳尾以及背景底色，就可以给出所有蛋白斑点的准确位置和强度，得到布满蛋白斑点的图像，即所谓“参考胶图谱”。
蛋白质组研究的主要困难是对用双向凝胶电泳分离出来的蛋白，进行定性和定量的分析。
最常用的方法是先把胶上的蛋白印迹到PVDF(polyvinylidene difluoride)膜上后再进行分析，确定它们是已知还是未知蛋白。
现在的分级分析法是先做快速的氨基酸组成分析，也可先做4～5个循环的N末端微量测序，再做氨基酸组成分析；结合在电泳胶板上估计的等点电和分子量，查对数据库中已知蛋白的数据，即可作出判断。
蛋白质双向凝胶电泳操作经验及解析操作步骤:1.样品准备:将待测蛋白质混合物进行样品处理，如蛋白质提取、浓缩和去污等步骤，以获得高纯度、高浓度的样品。
2.第一维电泳:将样品加载到等电点聚焦凝胶中。
等电点聚焦是根据蛋白质的等电点进行分离的方法，即根据蛋白质电荷差异使其定位到等电点位置。
通常使用毛细管等电点聚焦，具体操作步骤是：将样品注入到毛细管中，两端分别连接正负电极，施加电压使得蛋白质开始迁移，直到在等电点位置停止。
这个阶段的电流较低。
3. 第一维凝胶电泳结束后，可使用pH梯度(pH gradient)的凝胶电泳或两种缓冲液浸泡在两边以建立静电场将蛋白质进一步扩散。
4.第二维电泳:将第一维电泳分离得到的凝胶嵌入到另一种凝胶中进行第二次电泳。
通常使用SDS-凝胶。
该凝胶使用离子溶液降解电荷，所有的蛋白质都将带有同样的电荷。
这个阶段的电流较高。
5. 染色和图像分析: 电泳结束后，可以用染色剂进行染色，如Coomassie蓝染色或银染色。
然后使用透射扫描或数字图像分析仪，获取电泳凝胶的图像，并进行质谱分析。
解析与解释:1.蛋白质双向凝胶电泳可以提供更高的分辨率和更好的分离效果，因为它结合了等电点聚焦和SDS-的优势。
2.在等电点聚焦过程中，蛋白质根据其等电点的差异而聚集在凝胶中的不同位置。
这一步骤可以将样品分离成多个窄条带，每个窄条带包含具有相似等电点的蛋白质。
3.在第二维电泳中，蛋白质将根据其分子质量而进一步分离。
较小分子量的蛋白质可以迁移到更远的位置，而较大分子量的蛋白质则停留在较近的位置。
4.通过染色和图像分析，可以将电泳凝胶的图像数字化并用于质谱分析。
这将帮助确定每个蛋白质的分子质量和相对丰度。
蛋白质双向凝胶电泳是一种非常有价值的蛋白质分析方法，尤其适用于分析复杂的混合物。
通过合理的操作步骤和解析方法，可以获得高质量的实验结果。
这些结果对于了解蛋白质的功能和相互作用，以及发现新的生物标志物具有重要的意义。
双向电泳和质谱技术双向电泳和质谱技术是两种广泛应用于生物化学和生物物理学领域的分析方法。
它们通过不同的原理和技术手段，可以对生物分子进行定性和定量的分析。
本文将介绍双向电泳和质谱技术的基本原理、应用领域以及发展前景。
一、双向电泳双向电泳是一种常用的蛋白质分析方法，它通过电泳将蛋白质在两个正交方向上进行分离，从而实现高分辨率的分析。
其基本原理是利用蛋白质在电场中的电荷、大小和形状等特性，通过在两个方向上施加电场，不断地移动蛋白质分子，使其在凝胶中分散开来，最终实现完全的分离。
双向电泳技术在生物化学和生物物理学领域中有着广泛的应用。
它可以用于研究蛋白质的组成和结构，探索蛋白质相互作用的机制，寻找新的蛋白质标记和药物靶点等。
双向电泳技术的主要优点是分离效果好、分析速度快、灵敏度高。
然而，该技术也存在一些局限性，比如在分离过程中可能出现混叠现象，对样品要求较高等。
二、质谱技术质谱技术是一种以测定生物样品中质量与荷电比（m/z）为基础的分析方法，它可以对样品中的化合物进行分析和鉴定。
质谱技术的基本原理是将样品中的化合物通过电离技术转化为带电离子，然后根据离子在磁场中受到的作用力大小，测量离子的质量和荷电比，从而确定分子的质量。
根据质谱仪的不同类型和检测模式，质谱技术可以分为质谱仪、质谱成像、质谱图谱等多种形式。
质谱技术在生物化学和生物物理学领域中扮演着重要的角色。
它可以用于寻找新的生物标记物、研究代谢产品的组成、药物的代谢途径以及蛋白质的翻译后修饰等。
同时，质谱技术还可以与其他分析方法进行联用，如液相色谱联用质谱、气相色谱联用质谱等，以增强分析的灵敏度和分辨率。
三、双向电泳与质谱技术的结合双向电泳和质谱技术在生物科学研究中常常被结合使用，以实现更全面、深入的分析。
双向电泳可以将蛋白质分子进行高效的分离，而质谱技术可以对分离得到的蛋白质进行质量测定和结构鉴定。
通过双向电泳与质谱技术的结合，可以在一定程度上弥补两种方法的局限性，提高分析结果的准确性和可靠性。
双向电泳法双向电泳法（Bidimensional Electrophoresis，2-DE）是一种常用的蛋白质分离技术，可以同时分析样品中上千种蛋白质。
本文将详细介绍双向电泳法的原理、步骤和应用。
原理双向电泳法结合了等电聚焦（IEF）和SDS-PAGE两种技术，通过两个维度的分离将复杂的蛋白质混合物分解为一系列单独的斑点。
在第一维度中，根据蛋白质的等电点（pI）进行分离；在第二维度中，根据蛋白质的分子量进行分离。
通过将这两个维度的分离结果叠加，可以获得高分辨率的蛋白质图谱。
双向电泳法的关键步骤如下：1.等电聚焦（IEF）：在第一维度中，使用等电聚焦技术将样品中的蛋白质按照其等电点进行分离。
等电聚焦是一种基于蛋白质在电场中向氧化物离子（OH-）或氢离子（H+）方向移动的分离方法。
在等电聚焦过程中，蛋白质会在pH梯度中向其等电点迁移，直到净电荷为零。
通过控制pH梯度和应用的电压，可以将蛋白质在等电聚焦过程中分离开。
2.SDS-PAGE分离：在第二维度中，将第一维度的等电聚焦凝胶与SDS-PAGE凝胶垂直叠加。
在SDS-PAGE凝胶中，蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶的孔隙随着电场的作用向阳极迁移。
由于SDS（十二烷基硫酸钠）的存在，蛋白质在SDS-PAGE凝胶中的迁移速度与其分子量成反比。
因此，蛋白质在SDS-PAGE 凝胶中会根据其分子量进行分离。
3.染色和分析：经过双向电泳分离后，凝胶可以通过染色方法显示出一系列斑点，每个斑点代表一个蛋白质。
常用的染色方法包括银染法、荧光染色、贵金属染色等。
对于银染法，它在灵敏度和线性范围上具有优势。
染色后可以使用成像设备捕捉图像并进行定量分析。
通过对斑点的比较和定量，可以识别不同样品之间的差异和变化。
步骤双向电泳法的步骤如下：1.样品制备：将待分析的生物样品（如细胞提取物）进行蛋白质提取，并使得蛋白质在石蜡中可溶解。
常用的方法包括总蛋白提取、亲和层析、激光捕获等。
2.等电聚焦（IEF）：将蛋白质样品与具有连续pH梯度的凝胶进行接触。
收稿日期:2006-11-02基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.30370672)作者简介:白晓苏(1971-),女,博士研究生,主治医师,主要从事糖尿病的遗传标志及发病机制的研究。
双向凝胶电泳2质谱技术筛选血清标志物方法的建立白晓苏,张素华,任 伟,龚莉琳,李 蓉,张闻宇,程庆丰(重庆医科大学附属第一医院内分泌科,重庆400016)摘要:目的 应用双向凝胶电泳2质谱技术建立和评价血清蛋白质组学研究中白蛋白和Ig G 的去除方法。
方法 应用Proteo Extract Albumin/Ig G Removal K it 纯化血清蛋白,去除白蛋白和Ig G ,利用双向凝胶电泳(22DE )和质谱分析评价血清蛋白纯化效果。
结果 建立了稳定的血清白蛋白和Ig G 去除方法和双向凝胶电泳技术,且质谱证实22DE 图谱中低丰度蛋白质分辨率增加,减少了高丰度蛋白对其的干扰。
结论 本研究成功建立了血清蛋白质的纯化技术,为寻找疾病的血清学标志物奠定了基础。
关键词:血清蛋白质组学;双向凝胶电泳;质谱;白蛋白;IgG中图分类号:R318;Q51 文献标识码:A 文章编号:1000-2294(2007)01-0005-03Establishment of Screening Serum Biom arkers by Tw o 2dimensional Polyacrylamide G el E lectrophoresis and Mass SpectrometryBAI Xiao 2su ,ZHANG Su 2hu a ,REN Wei ,G ONG Li 2lin ,L I R ong ,ZHANG Wen 2yu ,CHENG Q ing 2feng(Dep artment of En docri ndog y ,t he Fi rst A f f ili ated Hos pit al ,Chongqi ng U ni versit y ofMedical S ciences ,Chongqi n g 400016,Chi na )ABSTRACT :Objective To establish and evaluate t he met hod of removing albumin and Ig G in se 2rum p roteomics by Two 2dimensional elect rop horesis (22DE )and Mass Spect romet ry (MS ).Methods Removing serum albumin and Ig G was achieved by filtering wit h Proteo Ext ract Albumin/Ig G Removal K it and t he effectiveness of p urification evaluated by 22DE and MS.R esults The met hod of removing serum albumin and Ig G and 22DE was established stably ,increasing sharp ness of sep 2aratio n of low 2abundance proteins and decreasing t he dist urbing of high abundance p roteins in 22DE which were confirmed by MS.Conclusion The established met hod of p urifying serum pro 2teins may be foundation in searching serology marker of diseases.KE Y WOR DS :serum proteomics;t w o 2dimensional polyacrylamide gel electrophoresis;mass spectrometry;albumin ;IgG 双向凝胶电泳2质谱技术常常应用于疾病的血清蛋白质组学(serum p roteo mics ),寻找疾病的血清标志物的研究中[122]。
血清中高丰度蛋白质的存在,尤其是白蛋白和Ig G ,使得低丰度蛋白质的分辨率下降,影响双向凝胶电泳(22D E )的分离效果,进而影响蛋白质质谱(MS )的鉴定[3]。
本研究应用Proteo Ext ract Albumin/Ig G Removal K it 处理血清,建立血清白蛋白和Ig G 的去除方法。
应用22DE 和MALDI 2TOF MS 技术评价血清蛋白纯化的效果。
1 材料和方法1.1 材料1) 标本:血清标本取自重庆医科大学的正常献血者。
2) 试剂:Proteo Ext ract Albumin/Ig G Re 2moval Kit 为Merck 公司产品、固相p H 梯度干胶条(immobilized p H gradient IP G 427,17cm )、40%w/v Bio 2L yte Amp holyte (p H 3210、p H 427)均为Bio 2Rad 公司产品;碘乙酰铵、三氟乙酸(TFA )、乙睛、α2氰基242羟基肉桂酸均为Sigma 公司产品;尿素、二硫苏糖醇(D T T )、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、CHA PS 、SDS 、Tris 、矿物油、甘油、硫脲、甘氨酸均为Amresco 公司产品;胰酶(质谱级)为promega 公司产品;YM 23为Millipore 公司产品;宽范围分子量蛋白标记购自宝生物公司,其他常用试剂为国产分析纯市售商品,所用溶液均用去离子水配制。
3) 仪器:等电聚焦仪(PRO TEAN IEF Cell )、垂直电泳系统(PRO TEAN II XI Cel1)、图像分析软件为PDQuest7.1均购自Bio 2Rad 公司。
1.2 方法1) 血清收集:取研究对象的静脉血5mL ,室温静止约1h ,3000r/min 离心并吸取血清,Brad 2ford 法测定血清蛋白浓度,按100μL 分装,-80℃冰箱保存。
2) 血清的处理:取35μL 血清按照Proteo 2Ext ract Albumin/Ig G Removal K it 说明书操作。
然后用YM 23超滤膜浓缩蛋白质,Bradford 法测定血清蛋白浓度,分装,用前采用预冷丙酮处理样品。
3) 双向凝胶电泳:22DE 方法按Bio 2Rad 双向电泳手册及参考文献[4]进行。
取上述蛋白质样品加入重泡胀液(8mol/L 尿素,2M 硫脲,4%C HA PS ,65mMD T T ,0.2%两性电解质,0.001%痕量溴酚蓝)至终体积320μL 混匀。
等电聚焦在19℃下自动进行,总伏小时70kVh 。
等电聚焦后,IP G 胶条分别在含20g/L D T T 的平衡液A 和含25g/L 碘乙酰胺的平衡液B 中各平衡15min ,将平衡后的IP G 胶条置于12.5%的均匀SDS 聚丙烯酰胺凝胶上方,胶条端滴加宽范围的蛋白标记物10μL ,低溶点琼脂糖封闭,电泳参数:5mA/gel 1h ,待溴酚蓝前沿移入SDS 胶时,以25mA/gel 6h 直至溴酚蓝前沿抵达距胶底边缘约0.5cm 时为止。
凝胶采用与质谱兼容银染法染色[5]。
4) 图像分析:用PDQuest7.1图像分析软件分析扫描图像,进行强度校正、点检测、背景消减、均一化和匹配等处理。
5) 酶解及质谱鉴定:切取需要分析的点,进行胶内酶解,将提取的肽段溶于0.1%TFA/α2氰基242羟基肉桂酸基质中,点样于靶板,采用ABI Voyager D E Pro 进行MALDI 2TO F MS 分析。
6) 数据库查询:在http ://p /misfit ,采用Swissprot 、Unip rot 和NCB Inr 数据库搜索。
2 结果1) 血清蛋白过滤纯化前后的比较:见图1。
图1 血清双向凝胶电泳图a 、b 均为原血清、上样量分别为300、700μg ,p H 分别为3210、427;c 为血清过柱后,上样量100μg ,p H427 2) 质谱结果:取出图1c 中的标记点,酶解及质谱分析,在Swissprot 、U niprot 和NCB Inr 数据库3个数据库中均可找到C 反应蛋白与血清标准图一致,结果如表1。
表1 查询结果Protein name AccessionNo.score SequenceCoverage (%)Mr (kDa )/p I C 反应蛋白前体P0274114122176125/5.53 讨论3.1 血清蛋白的纯化血清中含有90%～91%的水,6.5%～8.5%的蛋白质和2%左右的低分子量蛋白质。
潜在的新的疾病生物标志分子常常呈现低丰度,去除血清中占60%～80%的人血清白蛋白和免疫球蛋白Ig G ,提高灵敏度,促进低丰度蛋白质的检出。
高丰度蛋白也可能导致邻近的蛋白移位,影响对差异蛋白的检出,样本蛋白质浓度的动态幅度可达1～109,而丙稀酰胺凝胶的最大分辨幅度仅104。
因此,去除血清中的高丰度蛋白是进行血清蛋白表达谱分析的首要关键。
本实验采用Proteo Ext ract Albumin/Ig G Re 2moval K it 去除血清中高丰度白蛋白和Ig G 达85%～90%以上。
其22DE 图中蛋白质分离效果较好,绝大多数蛋白质点能够清晰分辨(图1c ),尤其是在这两种蛋白掩盖下的蛋白得到很好的分离和较好的分辨率。
蛋白的上样量由原血清的6μL 左右,提高到相当于原血清的3～4倍的上样量,使得一部分低丰度蛋白得到较好的显现。
同时为了验证分离效果,作者从图1c 中选取在原血清图中掩盖、分离效果不佳的已知点C 反应蛋白,行质谱鉴定。
根据质谱结果,在Swissp rot 、Uni 2prot 和NCB Inr 数据库3个数据库中均可找到C 反应蛋白,肽段覆盖率为61%,成功地鉴定出此点为C 反应蛋白。
质谱结果显示无Ig G 轻链或其他高丰度蛋白的干扰,进一步证实,此血清蛋白纯化方法的可行性。
3.2 l PG 胶条pH 范围的选择p H3210L (线性)、p H3210NL (非线性)可用于分析标本蛋白总体情况,虽然p H3210NL 扩大了p H427段的相对长度,但对于分离血清蛋白组,分辨率仍较低。
作者试用p H3210L 胶条分析蛋白总体情况,发现血清蛋白主要集中于p H427段(图1a ),于是作者采用窄p H 梯度胶条p H427的胶条(图1b和图1c ),进一步分析感兴趣的区域,提高分辨率,同时进一步提高上样量,检测低丰度蛋白质。
