HPLC法同时测定重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液的含量及有关物质

UV法和HPLC法测定盐酸左氧氟沙星注射液及滴眼液的含量韩保萍钱雪李金泉贺艳丽盐酸左氧氟沙星（LVFX-HCl）为喹诺酮类抗菌药，其有效成分为左氧氟沙星（LVFX）。

LVFX系氧氟沙星（ofloxacin）的光学活性S-(-)异构体，其体外抗菌活性是氧氟沙星的两倍，为右旋体的8～128倍，具有抗菌谱广，高效低毒等特点。

盐酸左氧氟沙星的片剂、胶囊剂和注射剂已在国内上市，其滴眼剂正在研制中，本文对LVFX-HCl注射液（100ml：100mg）及滴眼液（5ml：15mg）的含量测定方法进行了探讨。

1 仪器与试药岛津UV-265FW紫外可见分光光度计，Waters高效液相色谱仪，Waters-996PAD检测器，Waters-Millennium-32色谱数据处理机。

LVFX-HCl对照品（自行精制，纯度>99.5％）；LVFX-HCl注射液（100ml：100mg，市售）；LVFX-HCl滴眼液（5ml：15mg，自行配制）；乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果2.1 紫外分光光度法2.1.1 溶液的配制标准溶液：精密称取经105℃干燥至恒重的LVFX-HCl对照品适量（约相当于LVFX10mg），置50ml量瓶中，加入0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀。

样品溶液：按处方比例分别配制出注射液和滴眼液的样品溶液。

空白辅料液：按处方比例，不加LVFX-HCl，配制注射液和滴眼液空白辅料液。

2.1.2 测定波长的选择精密量取标准溶液和样品溶液适量，分别加0.1mol/L盐酸溶液使成含LVFX 约6μg/ml的溶液，同法稀释其相应的空白辅料液。

以0.1mol/L盐酸溶液作参比，在400nm～200nm波长范围内扫描，对照品与样品均在293nm波长处有最大吸收峰，空白溶液无吸收，故选择293nm为测定波长。

2.1.3标准曲线的绘制精密量取标准溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml，分别置100ml 量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，以0.1mol/L盐酸溶液作参比，在293nm 波长处测定吸收度。

酮体 酮体
10%HCl
0.24
0.01mol/L HCl
20
310 不得大于0.10 330 不得大于0.47
苯乙胺类药物杂质检查及含量测定
三、苯乙胺类药物的杂质检查
（二）有关物质检查 肾上腺素中有关物质的HPLC检查 色谱条件：供试品溶液：1mg/ml 对照溶液0.2%（2μg/ml） 氧化破坏溶液：50mg供试品，加浓过氧化氢溶液1ml，放 置过夜，加盐酸0.5ml，加流动相稀释至50ml 系统适用性试验溶液 ：取重酒石酸去甲肾上腺素对照品适 量，加氧化破坏溶液溶解并稀释制成每1ml中含 20μg的溶 液
苯乙胺类药物杂质检查及含量测定
四、苯乙胺类药物的含量测定
（一）非水溶液滴定法
有机碱的硫酸盐，因硫酸在滴定液中酸性很强，只能滴
定至HSO4-
OH CH2OH
SO42- + HClO4
+
CH(OH)CH2NH2C(CH3)3 2
OH CH2OH
ClO4- +
OH (OH)CH2NH2C(CH3)3
四、苯乙胺类药物的含量测定
（一）非水溶液滴定法
BH+·A- + HClO4 BH+·ClO4- + HA
测定弱碱性药物含量-主要用于原料药分析 冰醋酸为溶剂 醋酸汞消除氢卤酸的干扰 指示剂（终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并将 滴定结果用空白试验校正 ） 若碱性较弱则加醋酐使突跃明显
苯乙胺类药物杂质检查及含量测定
四、苯乙胺类药物的含量测定
（四）高效液相色谱法 • 测定方法 ➢ 精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素
4mg），置25ml量瓶中， 加醋酸溶液（1→25）稀释至 刻度，摇匀，取2μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另 取重酒石 酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋 酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液， 同法 测定。按外标法以峰面积计算，即得。

重酒石酸去甲肾上腺素的杂质检验研究方法本品为(R)-4-(2- 氨基-1- 羟基乙基 )-1，2-苯二酚重酒石酸盐一水合物。

按无水物计算，含不得少于%。

【1. 性状】重酒石酸去甲肾上腺素为白色或类白色结晶性粉末，无臭，味苦。

遇光或遇空气易变质。

（本品分子结构中具有邻苯二酚结构，露置空气中或遇光、热易氧化，色泽变深，故因注意贮藏条件。

）溶解度易溶于水，微溶于乙醇，难溶于乙醚、氯仿。

(去甲肾上腺素含有酚羟基,氨基等亲水基团,极性偏大;其在酸性条件下较稳定,故一般与重酒石酸形成的形式;)熔点熔点为100~106℃，熔融时同时分解，并显浑浊。

（可以用熔点,熔程鉴别化合物,但本品熔融时同时分解，故用热分析法分析鉴别较适宜）比旋度取本品精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含50mg的溶液，比旋度为°至°(左旋去肾上腺素的活性是右旋去甲肾上腺素的27倍,药用常用左旋体,根据比选度的测量也可作为其鉴别的方法之一)【2. 鉴别】重酒石酸去甲肾上腺素属于儿茶酚胺类药物，根据其根结构和性质，可采取如下方法进行鉴别试验。

与三氯化铁反应2.1.1原理重酒石酸去甲肾上腺素分子结构中具有邻苯二酚，其酚羟基极易被Fe3+氧化而现色;碱性条件氧化加剧，加入碳酸氢钠试液后产物颜色加深。

2.1.2方法取本品约10mg，加水1ml溶解后，加三氯化铁试液1滴，振摇，即显翠绿色：再缓缓加碳酸氢钠试液，即显蓝色，最后变成红色。

2.1.3方法学考察专属性：应不受可能共存的物质干扰，其他结构相似的物质均应呈负反应(本法专属性差)耐用性：将样品试液放置一段时间后（样品稳定性），用本法测量结果变化不大氧化反应原理本品结构中具有酚羟基，易被碘氧化而呈色。

加硫代硫酸钠过剩的碘被还原。

方法取本品约1mg，加酒石酸氢钾的饱和溶液10ml溶解后，加碘试液1ml，放置5分钟后，加硫代硫酸钠试液2ml，溶液为无色或仅显微红色或淡紫色。

中国医科大学2021年7月《药物分析》作业考核试题一、单选题 (共 20 道试题,共 20 分)第1题，《中国药典》规定亚硝酸钠滴定法进行滴定的温度是:()【A选项】.0～5℃【B选项】.5～10℃【C选项】.0～10℃【D选项】.10～20℃【E选项】.10～30℃提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：E第2题，有效数字3位的是：()【A选项】.5．301【B选项】.pH=13．14【C选项】.7．8200【D选项】.pK=7．263【E选项】.0．001提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：D第3题，在氯化物检查中,最适宜的酸度是:()【A选项】.50ml中含5ml硝酸【B选项】.50ml中含10ml硝酸【C选项】.50ml中含5ml稀硝酸【D选项】.50ml中含8ml稀硝酸【E选项】.50ml中含10ml稀硝酸提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：E第4题，用于鉴别巴比妥类药物的硝化反应,主要是利用该类药物结构中的:() 【A选项】.饱和碳氧双键【B选项】.不饱和碳氮双键【C选项】.互变异构中形成的羟基【D选项】.取代基中含有的双键【E选项】.取代基中含有的苯环提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：E第5题，具有Δ4-3-酮基结构的药物为:()【A选项】.醋酸地塞米松【B选项】.雌二醇【C选项】.庆大霉素【D选项】.盐酸普鲁卡因【E选项】.苯甲酸钠提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：A第6题，制剂分析具有的特点是:()【A选项】.对含量测定方法的准确度要求较高【B选项】.对含量测定方法的专属性要求较高【C选项】.对含量测定方法的灵敏度要求不高【D选项】.多采用滴定分析【E选项】.以上都不是提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：D第7题，维生素B注射液的含量测定方法为:()【A选项】.非水溶液滴定法【B选项】.异烟肼比色法【C选项】.紫外分光光度法【D选项】.Kober反应比色法【E选项】.碘量法提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：C第8题，黄体酮可发生的反应是：()【A选项】.分子结构中含有甲酮基，在一定条件下与亚硝基铁氰化钠反应应显蓝紫色【B选项】.分子结构中含酚羟基，可与重氮苯磺酸反应生成红色偶氮染料【C选项】.分子结构中含有C3-酮基，可与2，4-二硝基苯肼反应，形成黄色的腙【D选项】.可与硝酸银试液反应，生成白色沉淀【E选项】.经有机波坏(氧瓶燃烧法)后，可显氟化物反应提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：A第9题，在氯化物检查中，加入稀硝酸的作用是:()【A选项】.加速AgCl的生成，并产生良好乳浊【B选项】.加速氧化银沉淀的生成【C选项】.加速碳酸银沉淀的生成【D选项】.A+B【E选项】.A+B+C提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：A第10题，具有7-ACA母核的抗生素类药物是:()【B选项】.盐酸四环素【C选项】.氨苄西林【D选项】.头孢氨苄【E选项】.青霉素钾提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：D第11题，水解后呈伯胺发生重氮化偶合反应的药物是:()【A选项】.氯氮卓【B选项】.乙酰水杨酸【C选项】.诺氟沙星【D选项】.苯巴比妥【E选项】.乌洛托品提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：A第12题，含有苯并二氢呋喃结构的药物为:()【A选项】.维生素A【B选项】.维生素B1【C选项】.维生素C【D选项】.四环素【E选项】.维生素提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：E第13题，可用于鉴别尼硫酸奎宁的反应是:()【A选项】.戊烯二醛反应【B选项】.绿奎宁反应【C选项】.水解后茚三酮反应【D选项】.水解后呈重氮化-偶合反应提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：B第14题，异烟肼的特殊杂质为:()【A选项】.戊烯二醛反应【B选项】.银镜反应【C选项】.游离肼【D选项】.亚硝酸钠【E选项】.香草醛提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：C第15题，银量法测定异戊巴比妥钠的含量,下列说法中不正确的是:()【B选项】.采用银玻璃电极系统电位法指示终点【C选项】.属于直接滴定法【D选项】.在碳酸钠介质中滴定【E选项】.采用银甘汞电极系统电位法指示终点提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：E第16题，永停滴定法指示终点是:()【A选项】.用两个相同的铂电极插入到被测溶液中【B选项】.在两个电极间外加10～200mV的电压【C选项】.利用产生的电流指示滴定终点【D选项】.利用点位的突越指示滴定终点【E选项】.如果电极钝化可用含三氯化铁的硝酸液温热浸泡提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：D第17题，用酸性染料比色法测定生物碱类药物含量时,水相的pH值过高时:()【A选项】.有利于离子对的形成【B选项】.溶剂提取较完全【C选项】.有利于生物碱的解离【D选项】.有利于酸性染料的解离【E选项】.不利于酸性染料的解离提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：B第18题，用三点校正法(三波长校正法)测定维生素A醋酸酯含量时，下列叙述中正确的是:()【A选项】.原理是维生素A可与三氯化锑反应显色【B选项】.杂质吸收在测定波长范围内为线性，且随波长增加吸收度增强【C选项】.当最大吸收波长在326～329nm之间时，不一定不需皂化处理【D选项】.当校正吸收度与未校正吸收度之差在未校正吸收度的±3．0％以内时，用校正吸收度计算含量【E选项】.换算因数为0．1939提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：C第19题，以下检查中，不属于注射剂其他成分检查的是:()【A选项】.皂化价检查【B选项】.抗氧剂检查【C选项】.助溶剂检查【D选项】.防腐剂检查【E选项】.等渗溶液的检查提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：A第20题，注射剂的一般检查不包括:()【A选项】.注射液的装量检查【B选项】.注射液的澄明度检查【C选项】.注射液的无菌检查【D选项】.pH值检查【E选项】.注射剂中防腐剂使用量的检查提示：本题难度适中，请认真复习中医大2021年课程，并完成相关学习！【-参考答案-】：E二、判断题 (共 10 道试题,共 10 分)第21题，凡检查溶出度的制剂,不再进行崩解时限的检查。

高效液相色谱法同时测定血浆中的肾上腺素和去甲肾上腺素邹远高;秦永平;梁茂植;余勤;黄英【期刊名称】《华西医科大学学报》【年(卷),期】1999(30)4【摘要】为同时测定人血浆中肾上腺素和去甲肾上腺素浓度，建立了高效液相色谱－电化学检测方法，采用ＹＷＧ－Ｃ１８分析柱，３，４－二羟基苄胺作内标，以０．０５ｍｏｌ／Ｌ醋酸盐缓冲液（ｐＨ３．０）－甲醇－０．０５ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ－Ｎａ２（７８∶２０∶２）为流动相，每１Ｌ流动相含ＳＤＳ２００ｍｇ，流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ。

去甲肾上腺素和肾上腺素及内标的保留时间分别为７．３、８．３和１０．４分钟，线性范围均为３１．２５～４０００ｎｇ／Ｌ（ＮＥ：ｒ＝０．９９９９，Ｅ：ｒ＝０．９９９６）。

去甲肾上腺素和肾上腺素日内ＲＳＤ分别低于１．８７％和２．０７％，日间ＲＳＤ分别小于８．９２％和９．６５％，平均萃取回收率分别为９３．５％和９１．３％。

提示本方法快速简便，灵敏准确，适用于嗜铬细胞瘤的鉴别诊断和临床研究。

【总页数】3页(P457-459)【关键词】高效液相色谱;电化学检测法;去甲肾上腺【作者】邹远高;秦永平;梁茂植;余勤;黄英【作者单位】华西医科大学附属第一医院临床药理研究所【正文语种】中文【中图分类】Q577.03【相关文献】1.高效液相色谱法测定血浆去甲肾上腺素、肾上腺素及多巴胺 [J], 金律2.用正交设计法选择高效液相色谱法测定血浆去甲肾上腺素的试验条件 [J], 张林3.样品固相萃取及高效液相色谱法测定血浆中去甲肾上腺素 [J], 吴燕川;冯秀丽;何士大;秦俭4.高效液相色谱-电化学检测法同时测定人血浆中的组织胺和去甲肾上腺素 [J], 刘文弟;齐伟;郑惠良5.高效液相色谱法同时测定血浆中组织胺和去甲肾上腺素 [J], 刘文第;祁元明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPLC法同时测定盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液的含量及有关物质Simultaneous determination of both isoprenaline hydrochloride injection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances by HPLC methodSUN Ke-gang , SHI Jian-guo* , JIANG Yu-dan(Shanghai Harvest Pharmaceutical Co.,Ltd, Shanghai,201206)ABSTRACT Objective: To establish a method for the determination of both isoprenaline hydrochloride injection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances. Method: An HPLC was perfo rmed on a column of Welch Materials C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm) with the mobile phase of methanol- acetonitrile ? sodium heptanesulfonate solution (1∶1∶8) at detection wavelength of 280 nm. Results: For isoprenaline hydrochloride, the calibration curve was linear (r=0.999 9) over the range of 10～40 µg?ml-1, the average recovery was 100.5% with RSD 0.76% and the limit of detection was 40.66 ng?ml-1. For epinephrine hydrochloride, the calibration curve was linear (r=0.999 6) over the range of 60～240 µg?ml-1, the average recovery was 100.2% with RSD 0.60% and the limit of detection was 44.12 ng?ml-1. Conclusion: This method is simple, rapid, accurate, high sensitive and good reproducible, which can be applied in the determination of both isoprenaline hydrochlorideinjection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances.KEY WORDS HPLC； isoprenaline hydrochloride；epinephrine hydrochloride； injection；assay； related substances 盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液，主要成份分别为盐酸异丙肾上腺素和盐酸肾上腺素。

沙丁胺醇注射液（及其片剂、胶囊、缓释片与缓释胶囊）、盐酸苯
乙双胍片、盐酸氯丙那林片、盐酸麻黄碱注射液与滴鼻液、盐酸氨 溴索（及其口服溶液、片剂、胶囊与缓释胶囊）等的含量测定方法。
指示剂的选 用及终点颜 色的判断要 注意

滴定剂的稳定性：挥发性溶剂，结果需要校正。 终点指示方法：电位滴定法、指示剂法。 其它干扰

四、Assay
二、溴量法

原理：药物分子中的苯酚结构，在酸性溶液中酚羟基的邻、
对位活泼氢能与过量的溴定量地发生溴代反应，再以碘量法 硫代硫酸钠滴定测定剩余的溴。根据与药物定量反应消耗的 溴滴定液的量，即可计算供试品的含量。
盐酸异丙肾上腺素
异丙肾上腺素红
淡红色溶液
溶液为无色或仅显 微红色或淡紫色
肾上腺素 或盐酸异丙肾上腺素
明显的红棕色 或紫色
第二节、Identification
四、氨基醇的双缩脲反应
盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱和盐酸去氧肾上腺素等药物分子结构中， 芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲特征反应
盐酸麻黄碱
盐酸克伦特罗
(clenbuterol ydrochloride)
瘦肉精
硫酸沙丁胺醇
(salbutamol sulfate)
盐酸麻黄碱
(ephedrine hydrochloride)
第一节 性质
R1 H H C C N R2 * H OH R3
弱碱性：
烃胺基侧链，仲胺氮－弱碱性。 游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其 盐可溶于水
三、Detection of specific impurities
二、有关物质

肾上腺素——HPLC 盐酸苯乙双胍——纸色谱法 盐酸去氧肾上腺素——TLC 其它药物——HPLC

计算 PABA 的限量 解： 限量%
CS VS 60 5 100% 100% 1.2% C X VX 2.5 1000 10
13.硝苯地平的含量测定方法如下：几名称取本品 0.4021g,加无水乙醇 50ml，微热使溶解， 加 高氯酸溶液 50ml、邻二氮菲指示液 3 滴，立即用硫酸铈滴定液（0.1mol/ml)滴定，在水浴中 加热至 50℃左右，继续缓缓滴定至橙红色消失，消耗硫酸铈滴定液（0.1mol/ml)23.28ml，另 作空白同法测定，消耗硫酸铈滴定液（0.1mol/ml)0.05ml。 已知：硫酸铈滴定液（0.1mol/ml)的浓度校正因素 F=0.9976；滴定度 T=17.32ml。 计算：硝苯地平含量。 解： （V V0 ) F T (23.28 0.05) 0.9976 17.32 含量% 100% 100% 99.8% S 0.4021 1000 14.尼群地平软胶囊（10mg/粒）的含量测定方法如下：闭关操作。取本品 10 粒，置于小烧杯 中，以剪刀剪破囊壳，加无水乙醇少量，振摇使溶解后，将内容物与囊壳全部转移至具塞锥形 瓶中，用无水乙醇反复冲洗剪刀及小烧杯，洗液并入锥形瓶中，将锥形瓶密塞，置 40℃水浴 中加入 15 分钟，并不断振摇，将内容物移入 100ml 量瓶中，用无水乙醇反复冲洗囊壳和锥形 瓶，洗液并入量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取 2ml，置 100ml 量瓶中，用无 水乙醇稀释至刻度，摇匀，在 353nm 的波长处测定吸光度为 0.562；精密量取尼群地平对照 品 10.22mg,置 100ml 量瓶中，无水乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取 10ml,无水乙醇稀释至 50ml，同法测定吸光度为 0.576，计算本品的含 100% 100% 0.2% C样品V样品 10 10

重酒石酸去甲肾上腺素的杂质检验研究方法C8H11NO3.C4H6O6本品为(R)-4-(2- 氨基-1- 羟基乙基 )-1，2-苯二酚重酒石酸盐一水合物。

按无水物计算，含C8H11NO3.C4H6O6不得少于99.0%。

【1. 性状】1.1重酒石酸去甲肾上腺素为白色或类白色结晶性粉末，无臭，味苦。

遇光或遇空气易变质。

（本品分子结构中具有邻苯二酚结构，露置空气中或遇光、热易氧化，色泽变深，故因注意贮藏条件。

）1.2溶解度易溶于水，微溶于乙醇，难溶于乙醚、氯仿。

(去甲肾上腺素含有酚羟基,氨基等亲水基团,极性偏大;其在酸性条件下较稳定,故一般与重酒石酸形成的形式;)1.3熔点熔点为100~106℃，熔融时同时分解，并显浑浊。

（可以用熔点,熔程鉴别化合物,但本品熔融时同时分解，故用热分析法分析鉴别较适宜）1.4比旋度取本品精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含50mg的溶液，比旋度为-10.0°至-12.0°(左旋去肾上腺素的活性是右旋去甲肾上腺素的27倍,药用常用左旋体,根据比选度的测量也可作为其鉴别的方法之一)【2. 鉴别】重酒石酸去甲肾上腺素属于儿茶酚胺类药物，根据其根结构和性质，可采取如下方法进行鉴别试验。

2.1 与三氯化铁反应2.1.1原理重酒石酸去甲肾上腺素分子结构中具有邻苯二酚，其酚羟基极易被Fe3+氧化而现色;碱性条件氧化加剧，加入碳酸氢钠试液后产物颜色加深。

2.1.2方法取本品约10mg，加水1ml溶解后，加三氯化铁试液1滴，振摇，即显翠绿色：再缓缓加碳酸氢钠试液，即显蓝色，最后变成红色。

2.1.3方法学考察专属性：应不受可能共存的物质干扰，其他结构相似的物质均应呈负反应(本法专属性差)耐用性：将样品试液放置一段时间后（样品稳定性），用本法测量结果变化不大2.2 氧化反应2.2.1原理本品结构中具有酚羟基，易被碘氧化而呈色。

加硫代硫酸钠过剩的碘被还原。

2.2.2方法取本品约1mg，加酒石酸氢钾的饱和溶液10ml溶解后，加碘试液1ml，放置5分钟后，加硫代硫酸钠试液2ml，溶液为无色或仅显微红色或淡紫色。

高效液相色谱法分离检测四种肾上腺素类化合物黄露闽江学院化学与化学工程系　福建福州３５０１０８ ［摘要］采用液相色谱法对四种肾上腺素类化合物——肾上腺素、去甲肾上腺素、去氧肾上腺素以及异丙肾上腺素进行了分离检测。

考察了流速、缓冲液类型、ｐＨ值、浓度以及流动相中的甲醇比例等因素对分离的影响。

在最佳实验条件下，四种肾上腺素类化合物能够在８ｍｉｎ内达到基线分离，检出限均达到５０　ｎｇ／ｍＬ。

最终检测到四种化合物在加标尿样中的回收率为９３．１％～９９．２％。

高效液相色谱；肾上腺素；去甲肾上腺素；去氧肾上腺素；异丙肾上腺素＠＠［１］陈福南，张迎雪，章竹君，何德勇．高效液相色谱化学发光检测人体血清及尿样中的盐酸肾上腺素［Ｊ］．分析化学，２００５，３３（１２）：１７７１－１７７４．＠＠［２］邹远高，秦永平．高效液相色谱法同时测定血浆中的肾上腺素和去甲肾上腺素［Ｊ］．华西医科大学学报，１９９９，３０（４）：４５７－４５９．＠＠［３］刘文弟，齐伟，郑惠良．高效液相色谱：电化学检测法同时测定人血浆中的组织胺和去甲肾上腺素［Ｊ］．色谱，１９９９，１７（１　）：８０－８２．＠＠［４］于遐．高效毛细管电泳法测定肾上腺素和去甲肾上腺素［Ｊ］．山东医科大学学报，１９９４，３２（４）：３４７－３４８． 作者简介：黄露（１９８３．８－），女，江西景德镇人，讲师，博士，研究方向为现代分离分析研究，工作单位为福建省福州市闽江学院化学与化学工程系。

基金项目：福建省青年人才创新项目（２０１０Ｊ０５０２９）；福建省教育厅科技项目（ＪＡ１０２２２，ＪＢ０９１８８）。

高效液相色谱法分离检测四种肾上腺素类化合物作者：黄露作者单位：闽江学院化学与化学工程系 福建福州350108刊名：科技信息英文刊名：Science & Technology Information年，卷(期)：2011(29)被引用次数：1次1.陈福南.张迎雪.章竹君.何德勇高效液相色谱化学发光检测人体血清及尿样中的盐酸肾上腺素[期刊论文]-分析化学 2005(12)2.邹远高.秦永平高效液相色谱法同时测定血浆中的肾上腺素和去甲肾上腺素[期刊论文]-华西医科大学学报 1999(04)3.刘文弟.齐伟.郑惠良高效液相色谱:电化学检测法同时测定人血浆中的组织胺和去甲肾上腺素[期刊论文]-色谱 1999(01)4.于遐高效毛细管电泳法测定肾上腺素和去甲肾上腺素 1994(04)1.鱼芳人体组织液中肾上腺素和去甲肾上腺素测定方法的研究进展[期刊论文]-中国民族民间医药 2012(17)本文链接：/Periodical_kjxx201129011.aspx。

醇（ 动 ： 甲 Ｖ流 相 醇＝９ ：，Ｈ ４５ ． 米诺溶 解 于 Ｎ ＨＣ ３Ｎ Ｏ ２８ ｐ ．） 鲁 ａ Ｏ － ａ Ｈ缓 冲 液 中 ， ｐ 值 等 于 ９８ 实现 且 Ｈ ．．
了对 人 体 血 清 中重 洒 石 酸去 甲 肾上腺 素 的分 离与 测 定 ．方 法的 线 性 范 围为 ５ １ － ｇ ｒ≥ ￣ ０ｓ ／ ｍＬ ０９ ９ １ 。 出 限为 １１ ￣ ０ ／ ． ５ １－ ｇｍ ．９ ） 检 ．３ １ ｇｍＬ 对 ￣ ０ｓ ／ Ｉ 的重 酒石 酸 去 甲 肾上腺 素连 续进 行 １ １次 平
摘
要 ： 于铁氰 化钾 与碱 性鲁 米诺 溶 液混 合产 生化 学发光 ， 酒石 酸去 甲 肾上 腺 素 的存 在 基 重
可 以大大增 强其化 学发光 强度 ． 建立 高效液相 色谱 化 学发光 法测 定人 体血 清 中的重 酒石 酸去 甲肾
上腺 素 的方 法 ： Ｃ８ 向柱上 ， 在 反 室温 ， 速为 １ Ｊ ｎ 流 动相 为邻 苯二 甲酸 氢钾 Ｏ １ ｌ 、 流 ． ｍｌｍｉ， ０ ． ／ 甲 ０ ｍｏ Ｌ
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第 ２ １卷 第 ２期 ２０ ｏ ８年 ６月
海 南 师 范大 学 学 报 （ 然 科 学版 ） 自
Ｊｕ ａ ｏ ａ ａ ｏｍａ Ｕ ｉｅｓｙ Ｎ ｔｒｌ ｃｅ ｃ ） ｏ ｒｌ ｆ Ｈ ｉ ｎＮ ｒ ｌ ｎｖｒｉ （ ａ ａ Ｓ ｉｎ ｅ ｎ ｎ ｔ ｕ
去 甲肾上腺 素 （ ｏａ ｒｎ ｉｅ 是 肾上腺 素 能神 经 的 主要 神 经递 质 ， 要 激 动 受 体 ， Ｎ ｒｄｅａ ｎ ） ｌ 主 对 受 体 激 动作
用很 弱 。具有 很强 的血 管 收缩 作用 ． 其兴 奋心 脏及 抑 制平 滑肌 的作用 都 比肾上 腺 素弱 ． 临床 上 主要 利用 它

HPLC法同时测定盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液的含量及有关物质作者：孙克刚施建国蒋宇丹来源：《上海医药》2012年第05期摘要目的：建立测定盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液的含量及有关物质的方法。

方法：采用高效液相色谱法，色谱柱：Welch Materials C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 µm)；流动相：甲醇-乙腈-庚烷磺酸钠溶液（1∶1∶8）；检测波长：280 nm；流速：2.0 ml·min-1；柱温：30 ℃。

结果：盐酸异丙肾上腺素在10～40 µg·ml-1质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 9；高、中、低3种浓度的平均回收率为100.5%，RSD为0.76%（n=9）。

盐酸异丙肾上腺素的最小检测限为40.66 ng·ml-1。

盐酸肾上腺素在60～240 µg·ml-1质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 6；高、中、低3种浓度的平均回收率为100.2%，RSD为0.60%（n=9）。

盐酸肾上腺素的最小检测限为44.12 ng·ml-1。

结论：该法简便、快速、准确、灵敏度高，重现性好，适用于盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液的含量测定，也可用于有关物质检查。

关键词高效液相色谱法盐酸异丙肾上腺素盐酸肾上腺素注射液含量测定有关物质中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1006-1533(2012)05-0041-04Simultaneous determination of both isoprenaline hydrochloride injection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances by HPLC methodSUN Ke-gang , SHI Jian-guo* , JIANG Yu-dan(Shanghai Harvest Pharmaceutical Co.,Ltd, Shanghai,201206)ABSTRACT Objective: To establish a method for the determination of both isoprenaline hydrochloride injection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances. Method: An HPLC was performed on a column of Welch Materials C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm) with the mobile phase of methanol- acetonitrile – sodium heptanesulfonate solution (1∶1∶8) at detection wavelength of 280 nm. Results: For isoprenaline hydrochloride, the calibration curve was linear(r=0.999 9) over the range of 10～40 µg·ml-1, the average recovery was 100.5% with RSD 0.76% and the limit of detection was 40.66 ng·ml-1. For epinephrine hydrochloride, the calibration curve was linear (r=0.999 6) over the range of 60～240 µg·ml-1, the average recovery was 100.2% with RSD 0.60% and the limit of detection was 44.12 ng·ml-1. Conclusion: This method is simple, rapid, accurate, high sensitive and good reproducible, which can be applied in the determination of both isoprenaline hydrochloride injection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances.KEY WORDS HPLC； isoprenaline hydrochloride；epinephrine hydrochloride； injection；assay； related substances盐酸异丙肾上腺素注射液和盐酸肾上腺素注射液，主要成份分别为盐酸异丙肾上腺素和盐酸肾上腺素。

ｍｅｔｈｏｄ．ｉｔ ｉＳ ｎｏｔ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏ ｒ ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ ｕｓｅ ｉｎ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｏｆ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｔｉｔｒａｔｉｏｎ ａｒｅ ｃｕｍｂｅｒｓｏｍｅ，ａｎｄ ｉｔｓ ｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔａｌ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｃｙ ａｒｅ ｐｏｏｒ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ １ＯＷ—ｃｏｓｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎｅ ｂｉｔａｒｔｒａｔｅ ｗｉｔｈｏｕｔ ｕｓｉｎｇ ｓｏｐｈｉｓｔｉｃａｔｅｄ ｉｎｓｔｒ ｕｍ ｅｎｔｓ ｉＳ ａ ｄｅｓｉｒａｂｌｅ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｇｏａ１．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍ ｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎｅ ｂｉｔａｒｔｒａｔｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｂ—Ｚ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｗ ａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍ ｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｌｏｇａｒｉｔｈｍ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎｅ ｂｉｔａｒｔｒａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ３．９２ｘ１０．５～ ３ ３３×１０～ ｍｏｌ／Ｌ．ｈａｄ ａ ｇｏｏｄ １ｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ＡＴ ｏｆ ｔｈｅ Ｂ—Ｚ ｃｈｅｍｉｃａ１
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｔ ｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅ ｍａｉｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎｅ ｂｉｔａｒｔｒａｔｅ ａｒｅ ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏｒｍ ａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ

HPLC法同时测定重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液的含量及有关物质孙克刚; 施建国; 蒋宇丹【期刊名称】《《上海医药》》【年(卷),期】2012(033)007【总页数】4页(P38-41)【关键词】高效液相色谱法; 重酒石酸去甲肾上腺素; 盐酸去氧肾上腺素; 注射液;含量测定; 有关物质【作者】孙克刚; 施建国; 蒋宇丹【作者单位】上海禾丰制药有限公司上海 201206【正文语种】中文【中图分类】O657.72; R927.2重酒石酸去甲肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均为肾上腺素受体激动药，具有收缩血管的作用。

临床上用于治疗休克及维持血压。

重酒石酸去甲肾上腺素注射液[1]和盐酸去氧肾上腺素注射液[2]均为《中国药典》2010年版二部收载品种。

重酒石酸去甲肾上腺素注射液的含量和有关物质测定均为高效液相色谱法，但色谱条件不同，盐酸去氧肾上腺素注射液含量测定方法采用溴量法，有关物质测定采用薄层色谱法。

故将两种注射液的含量测定及有关物质测定方法进行统一，以方便生产检验。

我们采用同一种色谱条件[3]测定重酒石酸去甲肾上腺素注射液和盐酸去氧肾上腺素注射液含量及有关物质。

1 仪器与试药美国Agilent 1100高效液相色谱仪，VWD紫外检测器，Sartorius CPA225D电子天平。

重酒石酸去甲肾上腺素：武汉武药制药有限公司；盐酸去氧肾上腺素：深圳沃兰德药业有限公司；重酒石酸去甲肾上腺素注射液（规格：1 ml：2 mg）和盐酸去氧肾上腺素注射液(规格：1 ml∶10 mg)由本公司提供。

乙腈、甲醇、庚烷磺酸钠为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果2.1 重酒石酸去甲肾上腺素注射液的溶液制备1）供试品溶液的制备取重酒石酸去甲肾上腺素注射液适量，加4%醋酸溶液稀释制成0.16 mg/ml的溶液。

2）对照品溶液的制备精密称取重酒石酸去甲肾上腺素对照品适量，加4%醋酸溶液制成0.16 mg/ml的溶液。

HPLC法测定盐酸异丙嗪注射液有关物质含量 【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。

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 HPLC法测定盐酸异丙嗪注射液有关物质含量 作者：宋新康饶春意，姚海燕，梁香 【摘要】目的建立HPLC法测定盐酸异丙嗪注射液有关物质含量。

方法采用反相高效液相色谱法：色谱柱为SHIMADEU Vp?C18柱，甲醇?水(用冰醋酸调节pH值为2.25 0.05)(体积比49∶51)为流动相，流速：0.8 mL min-1，柱温：30 ℃，检测波长为254 nm。

结果在正常贮藏条件下，11批样品的杂质总量均在0.4%～0.6%之间，定量限小于0.5 g。

结论本法可用于盐酸异丙嗪注射液中有关物质的含量测定。

 【关键词】高效液相色谱法;盐酸异丙嗪注射液;有关物质 Abstract:Objective To establish a HPLC method to determine related substance in promethazine hydrochloride injection. Method The HPLC was carried out on a C18 column,of which the mobile phase was consisted of water (adjusted to pH 2.25 0.05 by acetate) and methanol (51∶49). The detective wavelength was 254 nm. Results The contents of 11 samples were above 0.4%,and below 0.6% under normal store conditions. The limit of quantification was under 0.5 g. Conclusion It is simple,accurate and feasible for determining related substance in promethazine hydrochloride injection by HPLC. Key words:HPLC; promethazine hydrochloride injection; related substance 盐酸异丙嗪注射液为常用抗组胺药，本品以吩噻嗪为母核经缩合而成，在缩合反应时产生N?N，?三甲基?10H?吩噻嗪?10?乙胺异构体，虽经丙酮精制等步骤，但仍难以完全除去，故成品中可能带入吩噻嗪及上述异构体等杂质。

4. 溶解性 游离碱难溶于水，易 溶于有机溶剂，其盐可溶于水
5. 取代基：具芳伯氨基的盐酸克 仑特罗可用重氮化—偶合反应鉴别、 亚硝酸钠滴定法测定含量。
二、鉴别试验
（一）三氯化铁反应 在 碱 性 溶 液 中 与 三 价 Fe 成紫或紫红。
（二）与甲醛—硫酸反应 (氧化?)成醌式有色物（P156）
（五）HPLC法 茶苯海明片 离子抑制色谱法
内标法定量
例1. 氨基醚衍生物类药物的鉴别反应 是（ABCD）
A. 硫酸呈色反应 B. 水解反应 C. 与硝酸银反应 D. 吸收光谱法 E. 三氯化铁反应
例2. 盐酸苯海拉明的含量测定可用 （CDE）
A. 电泳法 B. X—射线衍射法 C. 非水溶液滴定法 D. 酸性染料比色法 E. 阴离子表面活性剂滴定法
检查方法 比较法（含量测定法） 检查原理 利用酮体在310nm波长
处有最大吸收，而药物本身在 此波长处几乎没有吸收，规定 一定浓度溶液在310nm波长处的 吸收度限制酮体的量。
（二）有关物质检查 盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺
醇等药物中的有关杂质进行检查。 检查方法：TLC中高低浓度对比法。 配制两种浓度，稀的作对照，杂质斑 点不得更深。两液相差100-200倍。
例3. 阴离子表面活性剂滴定法的终点 指示原理是（B）
A. 碱性药物和滴定剂反应，所生 成的配位化合物溶于有机溶剂而显色
B. 滴定剂和碱性染料反应，所生 成的配位化合物溶于有机溶剂而显色
碱滴定。所列14种药物中有11中采用 此法。
1 重酒石酸去甲肾上腺素的测定 0.2g加冰醋酸10ml，微温溶解，
加结晶紫指示剂一滴，高氯酸滴定至 溶液显蓝绿。空白实验校正。1ml高 氯酸滴定液（0。1mol/l）相当于31。 93mg。

(一) 基本原理 BH+A +HClO
-
游离碱类盐4
BH+Cl +HA O4
被置换出的弱酸
当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须 除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。
因此，要根据不同情况采用相应测定条件
(二) 一般方法
高氯酸滴定液
供
冰
试 +醋
结
品
酸
果
以空白试验 校正
10ml30ml
醋酐或醋 酸汞试液
3、 UV与比色法
UV：结构中苯环具有紫外吸收
比色法：
➢利用药物分子结构中的Ar-NH2重氮化偶 合显色，如：盐酸克仑特罗栓
➢利用药物分子结构中的Ar-OH与Fe2＋络 合显色，进行比色测定，如：盐酸异丙肾 上腺素注射液、盐酸多巴胺注射液
4、HPLC
盐酸肾上腺素注射液、重酒石酸去甲肾上 腺素注射液等
3.滴定剂的稳定性
溶剂冰醋酸具有挥发性，膨胀系数较大，
温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。若滴
定样品与标定HClO4溶液时的温度不一致， 温差未超过10℃时，应将高氯酸滴定液的浓
度用公式加以校正
N1
1
N0 0.0011(t1
t0
)
0.0011：冰醋酸的体积膨胀系数
温差超过10℃时，应重新标定
4.终点指示方法
比醋酸合质子的酸性更强，可增强药物的碱 性
2.酸根的影响
在酸性介质中的酸性强弱: HClO4＞HBr＞H2SO4＞HCl＞HSO4-＞HNO3
当被置换出的酸的酸性较强，则此置换反应 无法定量完成。盐酸盐的酸性较强，因此滴定 前预先加入醋酸汞与氢卤酸生成在冰醋酸中难 解离的卤化汞，从而消除氢卤酸对滴定反应的 不良影响。