MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书

人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液是一种常用的实验试剂，用于分离和提取人体外周血中的淋巴细胞。

下面是使用该试剂的详细说明：
1. 实验准备：
- 准备干净的工作台和操作工具。

- 检查分离液是否过期，确保其保存条件良好。

- 为实验准备足够数量的外周血样本。

2. 样本处理：
- 从被试者的外周血中采集适量的血液。

- 使用无菌技术将血液转移至无菌离心管中。

3. 样本离心：
- 将含有外周血的离心管放入离心机中。

- 以2000-2500转速离心10分钟，使细胞沉淀到离心管底部。

4. 废液处理：
- 弃去上层的血浆和血小板，只留下上清或底部的细胞悬浮液。

5. 细胞分离：
- 将分离液缓慢倒入含有细胞沉淀的离心管中，通常使用10 mL分离液对应1 mL的细胞悬浮液。

- 轻轻摇晃离心管，使分离液均匀混合。

- 静置15-20分钟，使淋巴细胞在分离液中上浮。

6. 细胞收集：
- 将含有上浮淋巴细胞的上清缓慢转移到新的离心管中。

- 用相同的方法重复上述步骤，以提高细胞收集率。

- 将收集到的细胞悬浮于适当的培养基中，进行后续实验。

请注意，这只是一个基本的使用说明，具体的实验步骤和分离效果可能会因实验目的和细胞样本的来源而有所不同。

在进行实验前，建议查阅供应商提供的用户手册，以获得更加详细的使用说明和操作技巧。

同时，使用过程中严格遵守实验室安全操作规范，确保个人和实验室的安全。

希望以上使用说明能够对您的实验工作有所帮助。

人外周血淋巴细胞分离液产品技术要求3.1 产品规格及其划分说明250ml/瓶、500ml/瓶、3.2 性能指标3.2.1 外观乳光或微乳光液体。

3.2.2 澄清度比重1.077 –1.080 g/mL3.2.3 pH值（每升标示量/L）pH要求为7.1～7.3，允许偏差范围为±0.30。

3.2.4 渗透压/（m0sm/kgH2O）渗透压为280～340 m0sm/kgH2O3.2.5 细菌内毒素/（EU/ml）﹤0.53.2.6 无菌检查3.2.6.1 细菌数不得检出3.2.6.2霉菌数不得检出3.2.7 细胞分离实验3.2.7.1 细胞形态正常。

3.2.7.2细胞分离数量及存活率数量：90%-95%；存活率：95%-98%3.2.8 安全性检验项目抗生素：不得检出。

3.3 检验方法3.3.1外观检测方法肉眼观察为乳光或微乳光液体3.3.2 澄清度的测定按中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅨB进行。

3.3.3 pH值的测定按中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅥH进行。

3.3.4 渗透压的测定按中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅨG进行。

取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5℅。

3.3.5 细菌内毒素的测定按中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。

3.3.6 无菌检查按中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅪH无菌检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。

检测法采用平皿法。

3.3.7 人周边血淋巴细胞分离计数及存活率检测实验3.3.7.1 人周边血细胞分离实验3.3.7.1.1方法提要1）本实验所用容器具及溶液均为无菌，实验操作过程均为无菌操作。

2）分离外周血，并计数分离所得细胞及细胞存活率3.3.7.1.2 实验试剂和材料1）人外周血：新鲜血5ml(加肝素抗凝20u/ml)2）分离液：本产品样品3）1640无血清培养液4）10%NCS5）3%冰醋酸6）台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒3.3.7.1.3 仪器1）医用超级洁净工作台：洁净级别为百级。

动物组织淋巴细胞分离液使用说明规格：4×200mL/kit保存：18-25℃保存，有效期2年。

动物组织淋巴细胞分离液易感染细菌，需无菌条件下操作。

无菌条件下操作，启封后置于常温保存。

如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

试剂盒内容：样本稀释液200mL清洗液200mL动物组织淋巴细胞分离液200mLF液200mL操作步骤：全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。

1.首先制备组织单细胞悬液。

2.取一支15ml离心管，加入与组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于3ml）。

3.用吸管小心吸取组织单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min。

（注：根据组织单细胞悬液量确定离心条件，组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

4.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。

第一层为稀释液层。

第二层为环状乳白色淋巴细胞层。

第三层为透明分离液层。

第四层为红细胞层。

5.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，向离心管中加入10ml清洗液，混匀细胞。

6.250g，离心10min。

7.弃上清。

8.用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。

9.250g，离心10min。

10.重复7、8、9，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。

注意事项：1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。

为获得最佳的实验结果，最好在取样2h内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。

样品放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

2.本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

3.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。

大鼠骨髓淋巴细胞分离液使用方法
大鼠骨髓淋巴细胞分离液的使用方法如下：
1. 悬浮细胞：将需要进行分离的细胞悬浮在分离液中。

2. 离心：将悬浮液在2000rpm的转速下离心5分钟，收集沉淀的细胞。

3. 清洗：使用清洗液清洗离心后的细胞沉淀，以去除杂质和多余的分离液。

4. 再次离心：将清洗后的细胞在相同条件下再次离心，以进一步纯化细胞。

5. 培养：将纯化后的细胞接种到培养基中进行培养，以进行后续的实验或研究。

需要注意的是，大鼠骨髓淋巴细胞分离液需要在无菌条件下操作，且启封后应置常温保存。

如果需要在4℃保存，应避免出现白色结晶，以免影响分离效果。

此外，该试剂盒易感染细菌，因此在使用过程中需要特别注意无菌操作。

以上是大鼠骨髓淋巴细胞分离液的使用方法，仅供参考，如需获取更多详细信息，建议查阅相关网站。

Lonza Walkersville, Inc.biotechserv@Tech Service: 800-521-0390Document # INST-17-829-1 06/07Walkersville, MD 21793-0127 USA© 2007 Lonza Walkersville, Inc.Lymphocyte Separation MediumInstruction For Use17-829EIntroductionLymphocyte Separation Medium (LSM) is a mixture of Ficoll® and sodium diatrizoate (Hypaque) with density adjusted to 1.077 g/ml. This sterile filtered product is intended for laboratory/manufacturing use, and is not for in vitro diagnostic use. It is commonly used to isolate lymphocytes from human blood. One protocol to accomplish this is presented here.Protocol1. Anticoagulated blood (citrated or heparinized)should be used.Note: Always treat human and other primatesource material as potentially infectious and take safety precautions.2. Dilute blood 1:1 with calcium-magnesium-freePBS and layer 9 ml onto 6 ml LSM. Use a clearplastic centrifuge tube with a cap. For largevolumes use a similar ratio of diluted blood toLSM.3. Centrifuge at 400xg for 15 minutes.4. Remove plasma-PBS without disturbing theinterface.5. Collect the interface with a cannula and dilute to20 ml in serum-free medium, such as RPMI1640.6. Centrifuge at 70xg for 10 minutes.7. Discard supernatant fluid and resuspend pelletin 2-3 ml serum-free medium.8. Count nucleated cells on a hemocytometer orelectronic counting device.9. Lymphocytes will be concentrated at theinterface, along with some platelets andmonocytes. Granulocytes will be found mostly in the Lymphocyte Separation Medium anderythrocytes will pellet at the bottom of the tube.References1. Boyum, A. 1968. Isolation of mononuclear cellsand granulocytes from human blood. Isolation of mononuclear cells by one centrifugation, and ofgranulocytes by combining centrifugation andsedimentation at 1 g. Scand. J. Clin. Lab. Invest.Suppl. 97:77-89.2. Boyum, A. 1976. Isolation of lymphocytes,granulocytes and macrophages. Scand. J. Clin.Lab. Invest. Suppl. 5:9-15.3. Boyum, A. 1977. Separation of lymphocytes,lymphocyte subgroups and monocytes: areview. Lymphology. 10-2:71-6.4. Boyum, A. 1984. Separation of lymphocytes,granulocytes and monocytes from human blood using iodinated density gradient media. Methods Enzymol. 108:88-102.5. Boyum, A. et al. 2002. Separation of HumanLymphocytes from Citrated Blood by DensityGradient (NycoPrep) Centrifugation: MonocyteDepletion Depending upon Activation ofMembrane Potassium Channels. Scand. J.Immunol. 56-1:76-84.6. Koistinen, P. 1987. Human peripheral blood andbone marrow cell separation using densitygradient centrifugation on Lymphoprep andPercoll in haematological diseases. Scand. J.Clin. Lab. Invest. 47-7:709-14.7. Rola-Pleszczynski, M. and W.H. Churchill. 1978.Purification of human monocytes by continuous gradient sedimentation in ficoll. J. Immunol.Methods. 20:255-62.Product Use StatementTHESE PRODUCTS ARE FOR RESEARCH USE ONLY. Not approved for human or veterinary use, for application to humans or animals, or for use in clinical or in vitro procedures.INST-17-829-1 06/07Ficoll is a trademark of GE Healthcare. All other trademarksherein are marks of Lonza Group or its subsidiaries.1。

人外周血淋巴细胞分离液使用说明使用人外周血淋巴细胞分离液的步骤如下：1.样本准备：准备外周血样本，并将其采集到一个干净的试管中。

确保样本是新鲜的，并在使用前充分混合。

2.离心：将样本离心，以去除血浆或血浆和血小板，通常以低速（300×g）离心5-10分钟。

将离心管中的血浆小心吸除。

3.阻止红细胞溶解：加入足够的红细胞阻断缓冲盐溶液到血细胞沉淀中，使其与样本体积相等。

这将阻止红细胞的溶解和污染淋巴细胞。

4.包裹淋巴细胞：将滤质或管中的混合物转移到一个滤筒或离心管中，并加入合适的分离液。

分离液的添加量通常是样本体积的2-3倍。

5.混合和离心：彻底混合分离细胞和分离液，然后以适当的速度和时间进行高速离心（500×g，5-10分钟）。

此步骤将导致淋巴细胞在分离液的底部形成一个沉淀。

6.转移沉淀：使用无菌吸管或移液器小心地将沉淀转移到干净的离心管中，以避免污染。

7.洗涤：向沉淀中加入足够的平衡缓冲盐溶液，如磷酸缓冲盐溶液，轻轻混合后进行低速离心。

再吸去上清液，保留沉淀。

8.储存：沉淀可在冷藏条件下暂时储存，或冷冻保存以备将来使用。

需要注意的是，在使用人外周血淋巴细胞分离液时，一些步骤可能因其具体的类型和制造商而有所不同。

因此，建议在使用前仔细查阅并遵守产品说明书和使用手册。

此外，使用前要确保实验室操作是在严格的无菌条件下进行的，以避免污染和细胞的损伤。

总而言之，人外周血淋巴细胞分离液是一种用于从人类外周血样本中分离和富集淋巴细胞的试剂。

准确遵循产品说明和使用手册中的步骤和建议，能够帮助实验者在研究和临床应用中有效地使用该分离液。

第1篇一、产品概述本产品为一种生物医学试剂，主要用于从人血液中分离纯化淋巴细胞。

淋巴细胞是人体免疫系统的重要组成部分，广泛用于免疫学研究和临床诊断。

本产品采用特殊的分离技术，能够高效、快速地从人外周血中分离出高纯度的淋巴细胞，为后续的免疫学研究提供高质量的实验材料。

二、产品规格| 产品规格 | 批号 | 有效期 || :-------: | :---: | :----: || 100ml/瓶 | ABC123 | 2025年12月 |三、产品特性1. 高效分离：本产品采用独特的分离介质，能够高效地将淋巴细胞与其他血细胞分离，分离效率高，纯度好。

2. 操作简便：本产品使用方法简单，无需特殊设备，适合实验室常规操作。

3. 稳定性好：本产品在规定的储存条件下，稳定性良好，保质期内质量稳定。

4. 无污染：本产品在生产过程中严格遵循无菌操作规程，产品无细菌、病毒等生物污染。

四、产品用途1. 免疫学研究：用于分离淋巴细胞，进行细胞因子检测、细胞培养、细胞因子基因表达等研究。

2. 临床诊断：用于检测血液中的淋巴细胞，辅助诊断某些疾病，如自身免疫性疾病、肿瘤等。

3. 药物研发：用于药物筛选、药效评价等。

五、使用方法1. 准备工作：- 将分离液室温下平衡至室温。

- 准备无菌试管、移液器、吸头等实验器材。

- 准备适量抗凝剂（如EDTA-K2）。

2. 操作步骤：- 将抗凝全血加入分离管中，轻轻混匀。

- 将分离液加入另一支无菌试管中，加入量约为全血量的2倍。

- 将全血和分离液轻轻混合，避免产生气泡。

- 将混合后的样品垂直静置1-2小时，直至形成清晰的三层界面。

- 小心吸取淋巴细胞层，避免混入其他细胞层。

- 将淋巴细胞转移至新的无菌试管中，加入适量磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，重复洗涤2-3次，以去除残留的分离液和杂质。

- 最后，将洗涤后的淋巴细胞悬浮于适量的PBS中，即可进行后续实验。

六、注意事项1. 操作过程中应严格遵守无菌操作规程，防止污染。

人外周血淋巴细胞分离液使用说明人外周血淋巴细胞分离液（Peripheral Blood Lymphocyte Separation Medium）是一种广泛应用于分离人外周血中淋巴细胞的试剂，被广泛应用于免疫学和生物医学研究领域。

该试剂通过层析技术，可快速、高效地分离出外周血中的淋巴细胞，供后续的分析和实验使用。

一、试剂组成人外周血淋巴细胞分离液的主要成分包括离心管分层缓冲液、细胞分离密度悬液、所需的辅助试剂和脏器灭菌液等。

离心管分层缓冲液的成分通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、酵母精、酵母根、胰蛋白水解物、洋葱提取物、N-酰胺毛细管蓝等。

细胞分离密度悬液则通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、葡萄糖、胰蛋白水解物等，以及一些辅助试剂如生理盐水、浓度为2%的纯度高粘度明胶等。

辅助试剂方面，常用的有人凝血酶、去细菌酶、维生素C和青霉素等。

脏器灭菌液则是为了确保细胞分离过程中试剂和设备的无菌。

二、试剂使用方法1.准备工作在开始实验前，应准备好所需的实验试剂和设备，并确保所用的所有物品和材料都是无菌的。

同时，应将离心管分层缓冲液和细胞分离密度悬液放在常温下静置30分钟以上。

2.外周血分离取相应容量的外周血标本，在无菌条件下加入带有抗凝剂的离心管中，并轻轻倾转混合均匀，避免凝块形成。

置于无菌离心管架中，以1000-1500r/min离心5-10分钟，离心后分血浆、白细胞层和红细胞层。

3.分离淋巴细胞将离心后的中间白细胞层完全转移至新的离心管中，加入适量的生理盐水进行洗涤，离心1500r/min 5分钟。

倒掉上清液，留下沉淀。

重复该步骤2-3次。

洗涤后，加入等量的细胞分离密度悬液轻轻混合，再次离心。

离心1000r/min 20分钟。

此步骤可以使淋巴细胞充分分离。

4.收集淋巴细胞将分离好的淋巴细胞沉淀取出，加入等量的生理盐水或适宜的培养基中进行悬浮，使淋巴细胞悬浮液浓度适宜。

然后可以根据实验需要进行后续分析和实验操作。

[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101012449A [43]公开日2007年8月8日[21]申请号200610063555.6[22]申请日2006.11.09[21]申请号200610063555.6[71]申请人深圳市达科为生物技术有限公司地址518067广东省深圳市南山区蛇口工业六路科健大厦四楼西[72]发明人朱义鑫 [74]专利代理机构深圳创友专利商标代理有限公司代理人罗瑶[51]Int.CI.C12N 5/06 (2006.01)权利要求书 1 页 说明书 8 页[54]发明名称淋巴细胞分离液及分离脾脏淋巴细胞的方法[57]摘要本发明公开了一种淋巴细胞分离液，所述分离液中包含重量体积百分浓度为14.0～17.5％的碘克沙醇(Iodixanol)。

本发明还公开了采用上述分离液分离脾脏淋巴细胞的方法，该方法包括：将脾脏直接在分离液中研磨，制备成单细胞悬液，并将悬有脾脏细胞的分离液进行离心操作。

本发明的分离液及方法无毒、便于操作且易于分离得到的状态好、活力高的淋巴细胞。

200610063555.6权 利 要 求 书第1/1页 1、一种淋巴细胞分离液，其特征在于：所述分离液中包含重量体积百分浓度为14.0～17.5％的碘克沙醇(Iodixanol)。

2、根据权利要求1所述的一种淋巴细胞分离液，其特征在于：所述淋巴细胞分离液的渗透压为230～310mOsm，内毒素含量小于1EU/mL，pH 值为7.0～7.2。

3、根据权利要求2所述的一种淋巴细胞分离液，其特征在于：所述淋巴细胞分离液还包含体积百分浓度为70.8～76.7％的RPMI1640培养基以及体积百分浓度为9.3～11.7％的超纯水。

4、根据权利要求2或3所述的一种淋巴细胞分离液，其特征在于：所述淋巴细胞分离液的密度为1.077～1.095g/mL。

5、根据权利要求4所述的一种淋巴细胞分离液，其特征在于：所述淋巴细胞分离液用于分离小鼠或大鼠的脾脏淋巴细胞。

大鼠外周血淋巴细胞分离液说明书修订日期说明书修订日期：：2015.10.21Cat number ：KGA832Store at 4 for 12 months ℃For Research Use Only （科研专用）一、试剂盒组份名称 规格 A各种动物外周血淋巴细胞分离液 200ml B全血及组织稀释液（赠品） 200ml C 细胞洗涤液（赠品） 200ml注：本试剂内容中各单品可根据货号单独购买，客户可根据试剂使用情况自行选择购买。

适用于从动物抗凝血液中分离淋巴细胞，无菌条件下所分离的淋巴细胞可用于细胞培养等。

本品仅供科研使用。

二、试剂盒原理本分离液为FICOLL 、羟乙基淀粉550与泛影酸葡甲胺的混合液。

抗凝外周血可在分离液中分层。

离心时，在FICOLL 、羟乙基淀粉的作用下红细胞与粒细胞聚集并迅速沉降；此时，淋巴细胞及其他单个核细胞仍处于分离液上层，红细胞污染可忽略不计。

大部分血小板可在细胞清洗低速离心过程中去除。

其他人及动物多重比重细胞分离液，因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。

三、试剂盒以外自备仪器和试剂可提供400g 离心力的水平转子离心机、15ml 玻璃离心管、吸管等。

四、试剂盒试剂盒使用注意事项使用注意事项1. 使用前，本分离液需复温至18-22℃。

为获得最佳的实验结果，最好在取血后2小时内进行试验，血液提取后存放时间越长细胞活性越低。

2. 实验过程中，如需稀释血液或洗涤细胞，不可使用Ca 、Mg 离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集大大降低细胞得率及纯度。

本公司生产的全血及组织稀释液和细胞洗涤液不含Ca、Mg离子、低内毒素水平且含细胞和保护成分，推荐使用。

3. 最优抗凝剂选择：EDTA、枸橼酸、肝素，其他抗凝剂也可使用，但会影响细胞活性。

应注意在血液稀释过程中去除抗凝剂体积。

4. 当血液样本粘度过高或血样样本大于等于3ml时，最优稀释方法：将血液于18-22℃以250g离心10分钟，弃去血浆，补充添加全血及组织稀释液，添加量为所弃去血浆体积的1.5-2倍，混匀备用。

人淋巴细胞分离液说明书修订日期：2018.12.10 Cat number：KGA830Store at 2-8℃ for 12 monthsFor Research Use Only一、试剂盒说明人淋巴细胞分离液将人血液中的淋巴细胞分离出来，是由于各种机体的血细胞比重不同制备出不同比重的分离液，它是一种体外应用的生化试剂，本品为带有乳光或微乳光的注射水溶液，主要组成成份是羟乙基淀粉（6%）与泛影酸钠9%，适用于从血液或组织匀浆中中分离所需细胞。

单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞等细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同，红细胞和白细胞等细胞密度较大，为1.090 g/ml 左右，而淋巴细胞和单核细胞密度为1.075～1.090 g/ml，血小板为1.030～1.035 g/ml。

经过密度梯度离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。

二、试剂盒组份组份Cat: KGA830 保存条件人淋巴细胞分离液200ml 2-8℃，12months三、试剂盒以外自备仪器和试剂注射用生理盐水、离心机四、使用注意事项1. 启封后应置4℃保存，有效期6个月。

2. 细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液温度升至室温时，混匀后使用。

3. 整个分离过程中，温度应控制在18-28℃，否则会影响分离质量。

五、操作方法本分离液要求血液为新鲜的抗凝血，血液收集时应无菌操作且在储存、处理和运输过程中避免冷冻和冷藏。

1. 取新鲜抗凝血1ml，与注射用生理盐水1：1混匀后，小心加于2ml的细胞分离液之液面上，以400-800×g离心（半径15cm水平转子）20-30分钟，此时离心管中由上至下细胞分四层（第一层为血浆层（含血小板），第二层为环状乳白色淋巴细胞或单核细胞，第三层为透明分离液层，第四层为红细胞层（含大量中性粒细胞），红细胞层表面有悬起的部分白细胞层，收集此界面上的细胞）2. 用吸管小心收集第二层淋巴细胞，放入含4-5毫升注射用生理盐水的试管中，充分混匀后，以500×g离心20分钟，弃上清，沉淀经反复洗2次即得所需细胞。

小鼠外周血淋巴细胞分离液说明书修订日期：2016.03.31 Cat number：KGA831Storage RT for2yearsFor Research Use Only（科研专用）一、试剂盒说明小鼠淋巴细胞分离液将人血液中的淋巴细胞分离出来，是由于各种机体的血细胞比重不同制备出不同比重的分离液，它是一种体外应用的生化试剂，主要成分聚蔗糖（Ficoll）或葡聚糖与泛影酸葡甲胺或泛影酸钠，适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞。

二、试剂盒组份组份Cat:KGA831保存条件小鼠淋巴细胞分离液200ml室温，有效期两年。

样本稀释液（赠品）200ml清洗液（赠品）200ml三、试剂盒以外自备仪器和试剂离心机（最大离心力要求达到1200g）四、操作方法首先取抗凝血按体积比1:1的比例与样本稀释液混匀，根据稀释后的样本量大小，分以下两种情况：情况A：稀释后的血液样本量小于5ml时，实验方法如下：1.取一支15ml离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液（注：分离液最少不得少于3ml）。

2.用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。

第一层为血浆层。

第二层为环状乳白色淋巴细胞层。

第三层为透明分离液层。

第四层为红细胞层。

4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，往所得离心管中加入10ml清洗液，混匀细胞。

5.250g，离心10min。

6.弃上清。

7.用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。

8.250g，离心10min。

9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。

情况B：稀释后的血液样本量大于等于5ml时，实验方法如下：1.取一支适当的离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液。

Lymphocyte Separation Medium(淋巴细胞分离液）Density(密度) = 1.077-1.080 g/mL at 20ºC【分离目的】方便在人体外对机体各种免疫细胞分别作鉴定，计数或功能测定。

淋巴细胞分离以后可以做淋巴细胞抗原片制备，E花环试验，淋巴细胞转化试验，淋巴细胞培养（需无菌操作）【分离原理】人淋巴细胞的方便来源是外周血，分离的原则是收率较高，纯度较好，失活较低，根据不同试验有相对纯度，无论采用哪种方法，应尽最大可能保持细胞应有活性。

分离的技术可根据细胞的物理性状和表面标志设计，根据不同实验目的可采用密度梯度离心法、吸附分离法和其它特殊分离法。

此次实验采用的1就是密度梯度离心法。

其原理是：人外周血中各种细胞的密度不同，人红细胞密度为1.093，粒细胞为1.092，淋巴细胞为1.074±0.001。

密度梯度离心法的原理主要根据各类血细胞比重的差异，利用比重介于某两类细胞之间的细胞分离液对血液离心，使一定比重的血细胞依相应的密度梯度分布于不同的独立带，从而达到分离的目的。

【材料】1、肝素抗凝管，普通管（负压），采血针，血清收集管2、淋巴细胞分离液(比重1.077– 1.080 g/mL）。

3、无Ca++、Mg++、Hank's 液4、刻度吸管、毛细吸管、离心管、离心机等。

5置于冰箱的冷丙酮（固定细胞，保持细胞的完整性）【方法】1．采静脉血2ml加入肝素抗凝管（或枸橼酸钠），3ml加入普通管。

2．普通管斜面放置30MIN，此时可分离淋巴细胞。

用竹签将血块轻轻剥离管壁（主张用玻璃棒），2000rPm离心20分钟，用毛细吸管吸取上清（血清）于血清收集管中，于4℃冰箱保存备用，用于以后的ELISA实验，对流免疫电泳实验和伤寒试管凝集实验，溶血反应，免疫比浊测定补体C3或C4等等。

（剥离时也可用毛细吸管轻轻剥离）3．趁普通管放置30MIN时，将装有静脉血2ml加入肝素抗凝管（或枸橼酸钠）轻轻摇动使血液与抗凝剂混匀，出现凝集不能继续实验。

淋巴细胞分离液分离淋巴细胞的原理以淋巴细胞分离液分离淋巴细胞的原理为标题，本文将详细介绍淋巴细胞分离液的作用机制以及分离淋巴细胞的原理。

淋巴细胞是一类免疫细胞，主要参与机体的免疫防御反应。

为了研究淋巴细胞的功能以及特性，科学家们需要从复杂的混合细胞群中分离出纯净的淋巴细胞。

淋巴细胞分离液作为一种常用的实验试剂，可以通过特定的原理实现淋巴细胞的分离。

淋巴细胞分离液的主要作用是通过调节细胞浓度和分离效果，将淋巴细胞与其他细胞分离开来。

分离液中的成分通常包括细胞培养基、离心密度梯度介质等。

细胞培养基可以提供细胞所需的营养物质和适宜的环境条件，而离心密度梯度介质则可以根据细胞的密度差异来实现分离。

淋巴细胞分离液分离淋巴细胞的原理主要包括两个方面：密度梯度离心和粘附分离。

密度梯度离心是通过调节离心管中不同密度的梯度介质，使得细胞在离心过程中按照密度从大到小的顺序分层。

在离心过程中，密度较大的细胞，如红细胞和颗粒细胞，会沉积到离心管的底部，而密度较小的淋巴细胞则会在梯度介质中形成一个明显的分离层。

通过适当的离心速度和离心时间，可以将淋巴细胞从其他细胞中分离出来。

粘附分离是通过调节细胞与培养基或其他材料表面的亲和性，使得淋巴细胞能够黏附在特定的载体上，从而将其与其他细胞分离。

通常，载体表面会涂覆一层特定的物质，如抗体或特定的细胞因子，这些物质可以与淋巴细胞表面的特定受体结合。

通过调节粘附条件，可以实现淋巴细胞的选择性粘附和分离。

除了密度梯度离心和粘附分离，还有其他一些方法可以用于分离淋巴细胞，如磁珠分离和流式细胞术。

磁珠分离利用特定的磁珠表面修饰的抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，通过磁力的作用将淋巴细胞与其他细胞分离。

流式细胞术则是利用细胞在流动条件下的体积、形状和荧光特性的差异，通过流式细胞仪的检测和分选功能，实现淋巴细胞的分离。

淋巴细胞分离液通过密度梯度离心和粘附分离等原理，可以实现淋巴细胞的纯化和分离。

这为淋巴细胞的研究提供了重要的工具和方法。

专利名称：一种外周血淋巴细胞分离液及其应用专利类型：发明专利
发明人：涂佳鹏,何小燕,李银平
申请号：CN202111668019.X
申请日：20211230
公开号：CN114350605A
公开日：
20220415
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种外周血淋巴细胞分离液及其应用。

该外周血淋巴细胞分离液以质量计算，含有102.8～110份泛影酸钠、10～30份羟乙基淀粉、30～45份聚蔗糖和2.5～20份聚丙烯吡咯烷酮。

采用泛影酸钠代替昂贵的泛影葡胺的同时，引入其他糖类或非糖类高分子，改善小鼠外周血淋溶菌酶巴分离过程中分离效果不佳或者不稳定的现象。

可以在长时间内维持分离液和血液间的稳定性，可防止加样时间过长或力度过大，出现的血液和分离液互混的问题，减少血液和分离液互溶现象。

且回收效率高、纯度高和活率高，血小板污染少。

申请人：武汉赛维尔生物科技有限公司
地址：430200 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二路388号武汉光谷国际生物医药企业加速器1.2期22栋5层2室
国籍：CN
代理机构：广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：孙凤侠
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深圳市达科为生物工程有限公司地址：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703518122人淋巴细胞分离管说明书Cat#7121012【产品名称】产品名称：人淋巴细胞分离管英文名称：Human Lymphocyte Separation Tube【包装规格】15mL/支×20支【预期用途】用于从人外周抗凝全血中分离单个核细胞（主要为淋巴细胞）。

【产品介绍】人淋巴细胞分离管（Human Lymphocyte Separation Tube ）是达科为公司的专利产品，发明专利号：200610063125.4。

它采用医用级别的半固体材料与密度介质相吸附而制成。

半固体材料为医用级别，化学性质稳定，无细胞毒性和组织毒性。

密度介质完全化学惰性且无生物毒性。

本产品具有使用快捷简便、无细胞毒性、细胞得率高、活力好等一系列优点。

本产品的基本参数见下表：【适用仪器】水平转子离心机。

【样本要求】本品要求样本为新鲜的抗凝血，血液收集时应无菌操作且储存、处理和运输过程中避免冷冻和冷藏。

【检验方法】1.检查。

如图一（A ）所示。

取出分离管，观察半固体材料之上是否有游离的分离液。

如果有，请用离心机20℃，800g ，离心1min 。

2.倒入血液。

血液样品必须为抗凝全血，无需稀释。

如图一（B ）所示。

3.离心。

20℃，800g ，15min 。

设置较慢的加速与减速（如果共有十档且第十档为最高档，加速与减速应该调整到第三档）。

4.吸取PBMC 细胞层。

如图一（C ）所示，PBMC 层在血浆下面，分离液上面。

5.RPMI 1640洗涤1-2次（20℃，250g ，10min ）。

用0.9%(W/V)生理盐水或合适的培养基将淋巴细胞重悬备用。

产品名Human Lymphocyte Separation Tube 人淋巴细胞分离管分离管组成密度介质医用级别半固体材料样品量每支可分离3-5mL 全血储存条件及有效期未开封并且常温避光保存，有效期为2年。