柿叶片不定芽再生的研究

第４５卷第５期　

２００６年９，｛　湖北农业科学　Ｈｕｂｅｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　Ｖｏ１．４５　Ｎｏ．５　Ｓｅｐｔ．，２００６　

文章编号：０４３９—８１　１４（２００６）０５—０６１８－０４　

柿叶片不定芽再生的研究　

刘月英　，马俊莲　，唐　霞　，宋春丽　

（１．ｉｉ￣Ｉ－ＩＬ绎贸大　：ｑ－物科学与Ｉ　拌学院，石家庄０５００６１；２．河北农业大学食品科技学院，河北保定０７１００１；　

３０可北农业大学定州中兽医学院．河北定州０７３０００）　

摘要：以柿组培苗叶片为外植体，通过Ｉ　（３　）正交试验，研究了基础培养基、激素种类及浓度对不定芽再　

生的影响同时．对叶片的着生节位、切块大小及接种方式的影响进行了试验。结果表明。ＺＴ浓度对叶片　

不定芽再生的影响作用最大．基础培养基次之．但ＩＡＡ对愈伤组织形成的作用高于ＺＴ和基础培养基；　

将组培苗顶端前２节位伸展叶片切成４ｍｍｘ４ｍｍ左右的切块正放接种。可以获得最高的再生效率　组培　

苗切片在ＭＳ（１／２Ｎ）＋ＺＴ４．０ｍｇ・Ｉ　。培养基中直接光照下，分化率可达到７６．７６％，平均不定芽数为ｌ－２６个。　

关键词：柿；叶片；不定芽；植株再生；　中图分类号：￥６６５．２：Ｑ９４４．５６：Ｑ９４３．１　文献标识码：Ａ　

柿（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　以　Ｔｈｕｎｂ．）果不仅营养丰富，而　

且具有很高的药用价值”・　。但由于柿果采收期集　

中．采后极易软化，给　藏保鲜和运销带来很大困　

难：加Ｔ过程中义檄易发生褐变，严重影响产品的　

质量．极大地降低了柿果的商品价值，造成了严重　

的经济损欠　虽然近些年来果蔬　藏保鲜技术有　

了很大进步．如气调时、：藏、减压　：藏、保鲜剂等的广　

泛应用，但这些方法　仅成本较高，而且保鲜期非　

常有限　此．采用生物技术寻找与果蔬保鲜、加Ｔ　

性能相关的目的基【大１．从遗传物质上进行改造．就　有可能从根本上解决果蔬保鲜及加Ｔ问题。而建立　

高效、稳定的不定芽再生体系是利用基因Ｔ程获得　

耐　运、适加Ｔ柿果的前提。为此，我们对河北省柿　

果的主栽品种磨盘柿的叶片不定芽进行了诱导，以　

期为通过转基因技术抑制柿果的完熟软化及褐变　

奠定基础。　

１　材料与方法　

１．１　材料　

磨盘柿为河北农业大学果同１５年生树。在含　

收稿日期：２００６—０４—０４　基金项目：ｉ＂ｆ－Ｉｔ省科技攻父坝日（０４３９５５０ｌ１）一３）　作者简介：刘』Ｊ蜒（１９７０一）．女，￣．ｆ－ｌｔ阜城人，讲师，硕ｊ：，（电话）０３ｌ１－８７６５５６８０（电子信箱）ｌｉｕｙｕｅｙｉｎｇＴ０＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ；　通　作者．・５俊莲．（电话）０３ｌ２－７５２８４３７（电子信箱）ｓｈｐｉｇ＠ｍａｉｌ．ｈｅｂａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。　

＋一＋一＋一＋一＋一＋一＋＊＋一＋”＋一＋＊＋一＋一＋一＋一＋一＋ｎ＋一＋一＋＊＋一＋＊＋一＋一＋＊＋一＋＊＋＊＋一＋一＋＊＋一＋＊＋一＋＊＋一＋一＋一＋一＋一＋一＋一＋＊＋＊＋　参考文献：　３］　陈长兰，贾敬贤，龚欣．梨属植物抗寒性鉴定初报『Ｊ］．北方园　ｌ　陈立松，刘　辉．果树逆境　理ｌＭ１．北京：【ｆｌ同农业出版社．　岂，１９９ｌ（１）：ｌ一３．　２００２．　：４　贺晋超，牛立新．电导法测定果树抗寒性中确定适当计量单位　２　张成材，张冰冰．１｛　林省冻害凋杏报告…．卉林农业科学．２００２　的探讨【Ｊ１＿中因果树，１９８６（３）：４５—４７．　

（３）：４７—５１．　

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｃｏｌｄ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　Ｄｉｆｉｅｒｅｎｔ　Ｐｅａｒ　Ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｉｎ　Ｙａｎｂｉａｎ　Ａｒｅａ　

ＱＵ　Ｂａｉ－ｈｏｎｇ　．ＬＩ　Ｙｕ－ｍｅｉ　Ｌｏｎｇｊｉｎｇ　１３３４００，Ｊｉｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｊｉｌｉｎ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｉｐｉｎｇ　１３６０００，Ｊｉｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｃｏｌｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｅａｒ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ａｎｔｉ　ｔｈｅｉｒ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｓｕｇａｒ，ｆｒｅｅ　ｐｒｏｌｉｎｅ，ｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｂｏｕｎｄ　ｗａｔｅｒ／ｆｒｅｅ　ｗａｔｅｒ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　２００４　ｔｏ　２００５　ｉｎ　Ｙａｎｂｉａｎ　ａｒｅａ　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｌｅｃｔｒｉｃ　ｅｏｎｄｕｃｔａｎ（　ｅ　ａｎｄ　ｉｎｊｕｉ７　ｒａｔｉｏ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｃｏｌｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｓｅ—　ｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｅａｒ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｗａｓ　Ｉ）ａｘｉａｎｇｓｈｕｉ＞Ｓｈａｎｌｉ＞Ｎａｎｇｕｏｌｉ＞Ｚａｏｓｕｌｉ＞Ｘｉａｏｘｉａｎｇｓｈｕｉ＞Ｘｉｅｈｕａｔｊａｎ＞Ｐｉｎｇｇｕｏｌｉ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｂ　ｖａｌｕｅ　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐｅａｒ；（　ｍｆ，ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｓｕ［，ｓｔａｎｃｅ；ｂｏｕｎｄ　ｗａｔｅｒ／ｆｒｅｅ　ｗａｔｅｒ；ｃｏｌｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　（责任编辑王珞）

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ＺＴ　１．０　ｍｇ・Ｉ　．ＢＡ　１．０　ｍｇ・Ｌ　和ＩＡＡ　０．１　ｍｇ・Ｌ　的　

ＤＫＷ培养基中培养５代以上，本次选用继代３０　ｄ　

左有的磨盘柿组培苗的叶片。　

１．２方法　

１．２．１　基础培养基、ＺＴ及ＩＡＡ的处理取组培苗顶　

端第一伸展叶片，切成约４　ｒａｍ￣４　ｍｍ的小块，正放接　

种。采用Ｉ　（３　）正交试验设计，其因素水平如表１。　

１．２．２　叶片不同着生节位的处理　取组培苗顶端　

第一、第二和第叫展开叶片，切成４　ｒａｍ￣４　ｍｍ的小　

块，正放接种ｊ：ＭＳ（Ｉ／２Ｎ）＋ＺＴ　４．０　ｍｇ・Ｌ　的培养　

基中。　

１．２－３　叶片不同切片大小的处理　取组培苗顶端　

第一、第二展开叶片，分别切成２　ｒａｍ￣２　ｉＦｌｍ，４　ｒａｍ￣４　

ｍｍ和８　ｒａｍ￣８　ｍｍ的切块，正放接种于ＭＳ（１／２Ｎ）＋　

ＺＴ４．０　ｍｇ・Ｌ　的培养基巾。　

１．２．４　叶片不同接种方式的处理　取组培苗顶端　

第一、第二展开叶，切成约４　ｒａｍ￣４　ｍｍ的小块，分别　

以正放和反放接人ＭＳ（Ｉ／２Ｎ）＋ＺＴ　４．０　ｍｇ・Ｌ　的培养　

基中。　

１．２．５培养条件每升培养基中含６．５　ｇ琼脂，３０　ｇ　

蔗糖，０．５　ｇ聚乙烯吡咯烷酮一４０（ＰＶＰ一４０），ｐＨ值为　

５．７～５．８。ＺＴ经０．４５　ｍ微孔滤膜过滤除菌后，于无　表ｌ　叶片不定芽再生基础培养基、ＺＴ及ＩＡＡ处理的　

因素水平组合　

注：１／２Ｎ指ＭＳ培养蕈『｝１总氮的含量减少５０％，Ｆ同　

菌条件下加入到已灭菌、温度降至５０　以下的培养　

基中．摇匀后自然冷却凝同备用。培养温度（２５＋　

２）ｑＣ，光照每天１６　ｈ，光照强度４０　Ｅ・ｍ之・ｓ。　

１．２．６　结果统计及分析　每处理接种３２个外植　

体．重复２次，５０　ｄ后统计分化率、平均不定芽数、　

愈伤组织系数，数据取平均值：采用ＳＰＳＳＩ　１．０软件　

及正交设计助手软件进行分析。　

２结果与分析　

２．１　基础培养基、ＺＴ及ＩＡＡ对叶片不定芽再生的　

影响　

基础培养基、ＺＴ及ＩＡＡ对叶片不定芽再生的　

影响结果如表２。南表２可知，ＺＴ对分化率（分化叶　

片数／接种叶片数×１００％）和平均不定芽数（再生的　

表２基础培养基、ＺＴ及ＩＡＡ对叶片不定芽再生的影响　

注：愈伤组织系数：０级——无愈伤组织形成；１级——叶脉处有极少量愈伤组织形成；２级…一叶脉处有少鲢愈伤　！形成；３级一　叶　脉处有较大量愈伤组织形成；４级——叶脉处有极大量愈伤组织形成或叶片周隔及内部形成较夫培愈伤组　¨人小　字ｆ：士分别表示　

０．０１水平上差异极显著。在Ｏ．Ｏ５水平上差异显著，下同。

　维普资讯 http://www.cqvip.com ６２０　Ｅ　农　・　私　２０（＾６　

：　数Ｈ萎　ＩＩｆ”牧）的忤川最凡，丛础培养　移（　之，ＩＡＡ的竹。１Ｉ　Ｊ　、Ｚｒｌ　Ｈｉ　础Ｊ　养毡计分化苹相『　卜均　定　数的　圳姐ｌ岛Ｔ　ＩＡ＾．ｍ　ＩＡ＾刊愈伤　纠【　Ｉ　Ｊ　ｌＪＥ　ｎ　ｆ｛　１】Ｊ　ｌ舟ｊ’胛ｆｆ１琏　｝：　齐养魁　ｆ｛Ｊ¨】　叭片作灯外　ｌＩｃｆ扛ｉｌｌ－衍　定爿　ｌ　ｎｑ最佳　ｌ弁为Ｍ　（１／２Ｎ）＋　１　４（）ｉｎｇ－Ｉ　此埔养键¨ｆ１．叶Ｈ的行化　率匀７６　７６　，、１ｔ．均　芽数　Ｉ．２６．均板　籍离丁　他处川ｊｆｌＩ引Ｉ，　２　

图Ｉ　ｚＴ　２．０ｍｇ・ｌ　。。的叶片再生　

图２　Ｉ　４．０ＩｎＥ・Ｉ　。的叶片再生　

２　２叶片着生节位对不定芽再生的影响　值Ｊ女ｉ培　赝端前２节位腰　叶的分化半ｆｆｆ　均　宅　数池仃批｝＾音蓐婷，分化率仵７６　５５％　ｌ一，－Ｆ均　乏甜：数１．２ｌ　上．仳擞　蒋高】　应丁顾　端柳４　忆的仲鹱ＩＩ¨　愈汹小　系数无２１ｌｌ甚监　件　ｆＩＡ　３所小　

表ｊ　叶片着生节位对不定芽再生的影晌　２　３切片大小对叶片不定芽再生的影响　ＩＩｆ片Ｕ川’赶小州　培　ＩＩ。。片　定蝣。ｉ耳　的影　响结果　是４　Ｉｈ表４　ｉ１　Ｊ　Ｌ　开　．　１ＩＩＩ片　片人小为　４Ｉｔ］ｌｌｉｘ４Ｉｔｌｌｌｌ川，叶ＨＩ＇ｌ￣Ｊ分化　｝　和ｌ　：定芽数分别　匀７６．７６嘶ｆ¨１　２６．均械　ｆ弼Ｉ　Ｊ土他处　

表４不同切片大小对不定芽再生的影响　

２　４接种方式对不定芽再生的影响　接利ｒｈ式对　培ｍ叫片　、定　ｆＪ｝生曲影响结　果　５从＆５”Ｊ以霸…．接种一‘　℃计好化率影响　做｛１　若，对　均　定芽数的影响　嚣：，对愈ｌ行ｊ乳【织　系数兀　菩影Ｉ￣Ｉｉ＇，Ｊ　叶Ｈ』１．艘接　＼，　叮以拱褂最高的　分化　瞽和平均　定芽数，分圳　７６．７６％ｆ¨【．２６．同　时愈ｆｊｊ组织的ｌＢ战越较小　

衰５接种方式对不定芽再生的影响　

３讨论　

３．１　着生节位　叶片住组培｝　上荇生的　位小　．分化　效率　亦　：削　本研究小，顶端筇一　二片镌忏ＩＩ　由　Ｋ旺盛．细帆舒裂能＿力强．分化效　忸跤扁，平均小定　芽数　较多ｌｆ『『着生节位越ｎ下　成熟废越商，细胞　分裂能』Ｊ就减弱，脱分化能　电弱，『ｑ而分化串较　低，平均小定芽数撼少　３．２叶片切片大小　．『１”ｔｌＪ片大小也对　：定芽再，Ｉ－　蒋的搿响　，　试验发现，４　ｎ１『１１×４ｌ¨ｌｌ－左　Ｉ的叶Ｈ‘州块可以获得最　高的　生效事　切片过小般蜴造成外｛＝ｊｌ【催柄黄北　Ｔ。。，当　片夫小只有２ｉｎｍｘ２ｔｌｌＩＩＩｌ计，外十亢体ｎ々死『　簪陵近５Ｏ％　如果１；ｌ＿『片过人，　，　过程Ｉ『Ｉ全急剧长　＾＝，增厚，呈风　绿色＋愈伤　“ｎ　Ｊ　战量就ｌ１月　减　少．分化率和平均　：定芽数【且嵴低　３　３接种方式　ＩＩ¨｛‘圳片ｌｉ　敢比厦放　ｊ故粜好．　为小定芽　多儿叶片近轴瞄Ｉｈｌ　Ｊ　生Ｋ，ＩＩ　片１ｆ　欣　仪　定芽长　舟　，Ｉｕ］Ｉ１．Ｊ，ＩＩＩ　Ｉｈ　ｌｎ１　孔较多．　疏橙，与培养　培接制１．窬拐吸收更多的养圩　垃ｌｆ　放时．在培养过　程巾，阱片四周切口会与培养基紧密接触；而＇Ｊ