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誅兽药黄柏由芸香科植物黄皮树干燥树皮制成。
黄柏含有多种生物碱成分，主要为小檗碱。
其他生物碱有黄柏碱、巴马丁、白瓜蒌碱、蝙蝠葛任碱等，其总生物碱具有抗溃疡及抗腹泻作用，对免疫功能具有调节作用。
本篇文字以几个实验的形式，以小檗碱含量作为判定标准，研究能影响黄柏提取效率的因素。
希望能对广大读者生产提供一定的参考意见，与之分享。
1仪器与试药医用电子天平（瑞士梅特勒公司产），M202/LC 电磁炉（广东美的电器股份有限公司），电热套（河南爱博特科技发展有限公司），RE-5205旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），紫外可见分光光度计（上海谱元仪器有限公司），高效液相色谱仪（美国生产制造）。
本实验中使用的硫酸、生石灰、乙醇均为分析纯试剂。
盐酸小聚碱对照品来自中国药品生物制品检定所。
黄柏药材购自河北安国市药昌药材有限公司。
试验中所用的水为双蒸水。
2测定方法与结果盐酸小檗碱含量测定方法：色谱条件为使用高效液相色谱仪其流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（50: 50），每100毫升，加十二烷基磺酸钠0.1克。
流速为1.0毫升每分钟，高效液相色谱仪柱温：35℃。
标准曲线制备，用医用电子天平称量适量的干燥至恒重的盐酸小檗酸对照品后加乙3醇，制成每毫升含0.120毫克的溶液，吸取其2、4、6、8微升注入液相色谱仪，连续进样5次。
以对照品进样量为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，盐酸小檗碱在0.30~1.02微克范围内线性良好。
配置供试品溶液的方法：取精确上述样品50毫克，置100毫升量瓶中，加乙醇85毫升，超声处理40分钟，加乙醇定容，用0.2微米滤膜过滤。
制备对照品溶液的方法：准确称取1.5毫克盐酸小檗碱标准品，置50毫升容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，即得。
加0.05摩尔/升硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，另取乙醇1毫升，置100毫升量瓶中，加0.05摩尔/升硫酸溶液稀释至刻度，作为空白对照溶液，检测波长：345纳米。
天然药物化学实验讲义重庆医科大学药学院目录一、黄柏中生物碱的提取、分离和鉴别二、槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离与鉴别三、穿心莲中穿心莲内酯的提取、分离与鉴别四、八角茴香挥发油的提取及鉴别五、大黄中蒽醌苷元的提取、分离与鉴别六、苦参生物碱的提取、分离与鉴别前言《天然药物化学实验》是一门实践性很强的课程，理论教学与实验教学是一个不可分割的完整体系。
通过实验课的学习使学生能印证并加深理解课堂讲授的理论知识，掌握由天然药物中提取、分离、精制有效成分，并对其进行鉴别的基本方法和技能，提高学生独立动手、观察分析、解决问题的能力，培养学生严谨的科学态度和良好的科研作风。
实验一黄柏中小檗碱的提取、分离和鉴别【实验目的】1.掌握从黄柏中提取小檗碱的原理和方法。
2.掌握小檗碱的理化性质和鉴别方法3.熟TLC的基本操作以及在中药有效成分提取分离中的应用。
【实验原理】1.小檗碱(berberine)，含量为1.4%-4%(川黄柏含量较高)性状：黄色结晶，有5.5个结晶水，mp145℃。
溶解性：能缓缓溶于冷水中（1:20），微溶于冷乙醇（1:100），易溶于热水和热乙醇，微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮，硝酸盐极难溶于水，盐酸盐微溶于冷水（1:500）但较易溶于沸水，硫酸盐和枸橼酸盐在水中溶解度较大（1:30），盐酸小檗碱为黄色结晶，含2分子结晶水，220℃时分解并转变为棕红色小檗红碱，285℃时完全熔融。
2.小檗碱为季铵碱，其游离型在水中溶解度较大，其盐酸盐在水中溶解度较小。
利用小檗碱的溶解性及黄柏中含黏液质的特点，首先用石灰乳沉淀黏液质，用碱水提出小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出。
【实验仪器与试剂】1.1000、500、100、10ml烧杯，10ml试管，试管架，托盘天平，量筒，三角漏斗，洗瓶，布氏漏斗，电炉，10×20cm薄层板，10×20cm薄层色谱缸，点样毛细管，紫外灯（仪），玻棒，牛骨匙，纱布，脱脂棉。
不同产地黄柏药材中4种主要生物碱类成分的含量测定（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：范积平，张贞良，廖晓玲【摘要】目的建立不同产地黄柏药材中4种主要生物碱类成分的含量测定方法。
方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm, 5μm)，流动相为乙腈0.5%三乙胺(梯度洗脱)，流速为1.0 mL·min-1，柱温为25 ℃，检测波长为284 nm，同时测定黄柏药材中黄柏碱、药根碱、巴马汀和小檗碱的含量。
结果4种成分均能达到基线分离，线性良好。
不同产地黄柏药材中4种主要生物碱类成分的含量差别较大，产自四川泸州黄柏中的黄柏碱、甘肃武都黄柏中的药根碱、广西桂林黄柏中的巴马汀、四川雅安黄柏中的小檗碱含量分别为最高。
结论本方法操作简便、结果准确、重现性好，适用于黄柏药材中4种主要生物碱类成分的含量测定。
【关键词】高效液相色谱法;黄柏;生物碱;黄柏碱;药根碱;巴马汀;小檗碱;含量测定Abstract:Objective To establish a simultaneous determination method for four main alkaloids in CortexPhellodendri Chinensis from different habitats by HPLC. Methods HPLC was performed on Diamonsil C18 column (250 mm ×4.6 mm, 5 μm) with acetonitrile0.5% triethylamine as mobile phase (gradient elution) at a flow rate of 1.0 mL·min-1. The column temperature was maintained at 25 ℃and the detective wavelength was set at 284 nm. The contents of phellodendrine, jatrorrhizine, palmatine and berberine were determined simultaneously.Results All the four alkaloids achieved baseline separation with good linearity. The contents of the four main alkaloids in Cortex P. Chinensis from different habitats varied significantly. Respectively, the contents of phellodendrine in Cortex P. Chinensis from Luzhou of Sichuan, jatrorrhizine in those from Wudu of Gansu, palmatine in those from Guilin of Guangxi, and berberine in those from Yaan of Sichuan were highest.Conclusion This method is simple, reliable and repeatable, and is suitable for the determination of main alkaloids in Cortex P. Chinensis.Key words:HPLC;Cortex Phellodendri Chinensis; alkaloids; phellodendrine; jatrorrhizine; palmatine; berberine; determination黄柏为常用中药，具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮之功效，始载于《神农本草经》，原名“檗木”，列为上品，味苦，寒，无毒[1]，其后历代本草均有记载。
实验一 黄柏皮中小檗碱的提取、分离与鉴定一、实验目的1掌握从黄柏皮中提取小檗碱的原理和方法。
2掌握柱层析的基本操作方法以及其在中药有效成分提取分离过程中的应用。
3掌握生物碱的鉴别方法。
二、实验原理1、概述生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,是许多中草药中的有效成分。
它们是人类对植物研究得最早最多的一类有效成分,现已分离出有六千余种。
这些生物碱在植物体内一般均与有机酸或无机酸结合成盐而存在,只有弱碱性生物碱往往呈游离状态,还有一些是与糖结合成苷而存在。
小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨科黄连（Coptis chinensis Fran ）和芸香科黄柏(Phellodendron amurense Rup.)等植物中提出的一种黄色生物碱。
黄连属植物的根茎、须根、叶中等都含有小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马亭等生物碱,我国黄连药材产量占世界第一位。
现已发现，唐松草属（Thalictrum ）、小檗科的小檗属(Berberis L.)、十大功劳属(Mahomia Nuff )及防己科的天仙藤属（Fibraurea ）等都可作为提取小檗碱的资源植物本实验是从黄柏皮中提取小檗碱。
黄柏皮是豆科植物黄皮树（Phellodendron chinense Schneid ）或黄檗（P. amurense Rupr .）的树皮，其主要有效成分为小檗碱，小檗碱及其盐类有较好的抗菌作用，临床用以治疗菌痢和一般炎症。
小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145℃(乙醚),微溶于水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。
小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。
不同小檗碱盐类在水中的溶解度均有较大差别。
小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。
溶解度分别为:小檗碱,1∶２０（冷水）,1∶100(冷乙醇);盐酸盐,1∶500(冷水);硫酸盐,1∶30(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。
