基因工程实验报告的实验步骤

基因工程实验报告学号姓名1实验目的（1）学习并掌握基因工程操作技术中最常用的载体质粒DNA的提取方法。

（2）学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法，检测质粒DNA的浓度与分子量。

（3）了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技术。

（4）学习利用限制性内切酶切割DNA的方法，并通过电泳检测酶切的效果。

（5）学习DNA重组技术中的核心步骤，DNA片段之间的体外连接方法。

（6）学习制备感受态细胞并将体外重组DNA引入受体细胞的技术。

（7）掌握利用蓝白斑筛选出转化子的方法。

2 实验原理2.1质粒DNA提取的原理菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，双链DNA氢键断裂，DNA双螺旋结构遭破坏而发生变性，但由于质粒DNA分子量相对较小，且呈环状超螺旋结构，即使在高碱性pH条件下，两条互补链也不会充分分离，当加入中和缓冲液调时，变性质粒DNA又恢复到原来的构型；而线性的大分子量的细菌染色体DNA则不能复性，与细胞碎片、蛋白质、SDS等形成不溶性复合物。

当加入中和溶液后，质粒DNA能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；变形的蛋白质和DNA呈絮状，离心时可以沉淀下来。

碱裂法获得的质粒DNA 经过苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀除去残余的蛋白质和RNA，所得纯化的质粒DNA可满足实验要求。

2.2 PCR扩增功能基因的原理将反应体系(模板DNA、引物1、引物2、Mg2+、4种dNTP和Taq DNA聚合酶)置于高温(94℃)下变性，使模板双链DNA解链为两条单链。

在低温(37~65℃)下退火，使引物与模板链3’端结合，形成部分双链DNA。

在中温(~72℃)下，通过Taq DNA聚合酶使引物从5’端向3’端延伸，随着4种dNTP的掺入合成新的DNA互补链，完成第一轮变性、退火和聚合反应循环。

反复进行这种变性、退火和聚合反应循环，可使两端引物限定范围内的DNA 序列以指数形式扩增。

循环的次数主要取决于模板的浓度，从理论上将一个目的DNA分子经20轮扩增后，可达106。

基因工程实验报告一、实验目的：本实验旨在掌握基因工程的基本操作技能，了解DNA的提取、PCR扩增和基因克隆等基本实验过程，并通过实际操作检测转基因植物的存在。

二、实验原理：1.DNA提取：采用传统的CTAB法提取植物基因组DNA，目的是获得待测植物样品中的基因组DNA。

2.PCR扩增：选用合适的引物，利用PCR技术将待测基因扩增出来。

PCR反应中需要设置阳性对照、阴性对照和试验样品，以确定PCR扩增结果的可靠性。

3.基因克隆：将PCR扩增得到的目标基因与质粒载体进行连接，再将重组质粒导入大肠杆菌进行转化培养，最后通过酶切和测序等方法验证目标基因的克隆成功与否。

三、实验步骤：1.DNA提取：将待测植物样品加入CTAB提取缓冲液中，酶解并脱脂植物细胞，通过乙酰酚/氯仿法提取总DNA。

2. PCR扩增：设计合适的引物，进行PCR反应。

反应条件通常为94℃预变性5min，然后循环20-35次，每次循环包括94℃变性30s、56-68℃退火30s、72℃延伸1-2min，最后72℃延伸10min。

3.基因克隆：将PCR扩增得到的目标基因进行酶切，并与质粒载体进行连接，然后转化大肠杆菌进行培养。

通过PCR重放大和酶切验证目标基因是否成功克隆。

4.验证目标基因：通过测序等方法对目标基因进行验证，判断基因克隆是否成功。

四、实验结果与分析：1.DNA提取：从待测植物样品中成功提取到总DNA，并进行酶切分析，可见DNA带状条带。

2.PCR扩增：通过PCR扩增，得到了目标基因的特异性条带，并且也验证了阳性对照和阴性对照的准确性。

3.基因克隆：通过酶切和重放大等方法验证了目标基因的成功克隆。

4.验证目标基因：通过测序结果，确认目标基因与已知序列一致，说明基因克隆成功。

五、实验结论：通过本实验，我们掌握了基因工程的基本操作技能，成功进行了DNA提取、PCR扩增和基因克隆等实验过程，并通过测序等方法验证了目标基因的克隆成功。

第1篇一、实验目的本实验旨在通过分子生物学技术，学习并掌握目的基因的分离方法，包括基因组DNA提取、目的基因的克隆、扩增和鉴定等步骤。

通过实验，使学生熟悉实验原理、操作步骤和注意事项，提高学生的动手能力和实验技能。

二、实验原理目的基因分离是指从生物基因组中提取出特定的基因片段，并进行克隆、扩增和鉴定。

实验步骤主要包括以下几部分：1. 基因组DNA提取：利用各种方法从生物组织中提取出基因组DNA。

2. 目的基因的克隆：利用PCR技术扩增目的基因，并克隆到载体上。

3. 目的基因的鉴定：通过限制性内切酶酶切、DNA测序等方法对克隆的目的基因进行鉴定。

4. 目的基因的表达：将目的基因导入宿主细胞，进行表达和功能验证。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：大肠杆菌、质粒载体、目的基因DNA模板等。

2. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂、限制性内切酶、DNA连接酶、DNA测序试剂盒等。

四、实验步骤1. 基因组DNA提取（1）取适量生物组织，按照DNA提取试剂盒说明书进行操作。

（2）提取的基因组DNA用琼脂糖凝胶电泳检测，确保DNA提取质量。

2. 目的基因的克隆（1）设计特异性引物，用于PCR扩增目的基因。

（2）按照PCR试剂盒说明书进行PCR扩增，获得目的基因。

（3）将PCR产物与载体连接，转化大肠杆菌。

（4）通过蓝白斑筛选，获得阳性克隆。

3. 目的基因的鉴定（1）对阳性克隆进行酶切鉴定，验证目的基因是否成功克隆。

（2）对阳性克隆进行DNA测序，确定目的基因序列。

4. 目的基因的表达（1）将目的基因克隆到表达载体上，构建表达系统。

（2）将表达载体导入宿主细胞，进行目的基因的表达。

（3）检测目的基因的表达产物，验证目的基因的功能。

五、实验结果与分析1. 基因组DNA提取：提取的基因组DNA在琼脂糖凝胶电泳中呈现清晰的主带，说明DNA提取成功。

2. 目的基因的克隆：通过PCR扩增，获得目的基因片段，大小与预期相符。

基因工程实验报告摘要：提取小麦的总的RNA通过RT—PCR扩增出GAPDH截短体基因ｃDNA，ＰＣＲ扩增ｃDNA获得大量目的基因，对目的基因和表达载体p ＧＥＸ４Ｔ－１进行双酶切，通过电泳分离条带胶回收酶切的目的基因和载体，然后载体和目的基因连接构建表达载体，重组载体转入大肠杆菌top10中大量复制目的基因；提取质粒，转入大肠杆菌bl21，通过ＩＰＴＧ诱导目的基因的表达；通过ＳＤＳ染色和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交检验目的蛋白是否表达。

实验流程：小麦幼苗总ＲＮＡ提取ＲＴ＿ＰＣＲ扩增目的基因表达载体构建表达菌株转化（ｔｏｐ１０）从ｔｏｐ１０转入ＢＬ２１诱导表达Ｗｅｓｅｒｎ杂交一．目的基因的获得１．小麦总ｒｎａ的提取（Ｔｒｉｚｏｌ法）１在研钵中加入液氮，再将小麦剪成小片段在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的钥匙取１００ｕｌ粉末于已加入１ｍｌ的ｔｒｉｚｏｌ的ＥＰ管中，充分混匀。

２室温放置５ｍｉｎ，然后加入２ｏｏｕｌ的氯仿，剧烈震荡。

３１２０００ｒｐｍ离心１０分钟，取上清于新的ＥＰ管，加入500ul异丙醇，温和颠倒，室温放置10分钟，12000rpm离心10分钟。

4小心弃上清，加入75%乙醇，混匀，4度12000rpm离心5分钟。

5重复46弃上清，室温干燥5-10分钟，用30uldepc溶解rna。

2.rna电泳检测是否提取出rna（10ulrna+1ul buffer）图中出现明显的亮的条带的即表示提取出rna，其中我们提取的rna比较少条带不明显，可能是操作过程中被污染，所以在提取rna是一定要注意防止rna降解，因为空气中随处都是rna酶，所以要带上手套，快速操作，尽量不要暴露在空气中，使用处理过的试管，器材。

3.RT-PCR扩增目的基因cDNA3.1 rna反转录Total RNA 6ulOligo dt primer 1ulH2o 5ul65℃5min,补加下列试剂5×reaction buffer 4ulRibolock rnase inhibitor 1ul10mM dntp mix 2ulRevertaid m-mulv reverse transcripase 1ul42℃ 60min70℃ 5min3.2 PCR扩增目的基因（表达引物扩增 25ul)2×pcr mix 12.5ul 95℃1mincDNA 1ul 95℃10s引物GAPDH1-1 1ul 58℃ 20s 35cycle引物GAPDH1-2 1ul 72℃45sH2O 9.5ul 72℃10min通过图片的条带可以看出pcr扩增的产物；通过RT-PCR获得的目的片段，为连续表达的基因片段，去除了真核基因中的内含子序列，通过重组质粒载体的构建可以直接在宿主大肠杆菌中克隆和表达。

实验一：大肠杆菌5 a和21感受态细胞的制备【实验步骤】1从平板上挑取新活化的大肠杆菌 5 a单菌落，接种到5培养基中，37C振荡培养过夜。

2取1培养物接种到100培，养基（250三角瓶）中，37C振荡培养2~3h。

3将菌液转移到50离心管（2管）中，冰上放置15。

4 4C 4000离心5,弃去上清液，倒置使培养液流尽。

5用20冷2溶液悬浮菌体沉淀合并成一管，在4C 4000离心5,弃去上清液。

6用10冷2溶液悬浮菌体沉淀，冰浴30。

7 4 C 4000 离心5，弃去上清液，用2的冷2溶液悬浮。

8分装到数个管中，每管200，冷冻保存备用。

实验二：目的基因质粒（或218）和表达载体质粒（32或30）的转化及大量提取【实验步骤】一、载体的转化（无菌条件，冰上进行）1、取200新鲜制备的感受态细胞，分别加入质粒 2 （32a, 18），混匀，冰上放置30。

2、将管放到42C保温90s,冰浴2。

3、加入800液体培养基，37 C慢摇复苏1 h。

4、将100的复苏细胞涂布在含有（100）的培养皿中，正置平皿30 （使菌液被培养基吸收）。

5、倒置平皿37C培养16 h，出现菌落。

二、质粒的提取1挑取单菌落接种于100加入50的液体培养基中，振荡培养过夜。

2过夜培养的菌液加入1.5的小指管（20个每组）中，每次1 , 4 C, 12000，离心1 ,4次，弃上清。

3加入150溶液I悬浮细胞，漩涡振荡，室温静置10。

4加入350溶液H （新鲜配制），轻微颠倒混匀20次，冰浴5。

（不能再剧烈震荡）5加入300溶液川（冰上预冷），颠倒混匀20次，不能剧烈震荡，冰浴10。

6 4 C, 12000，离心10，取上清转移至另一离心管中。

7向上清中加入0.6倍异丙醇，轻轻混匀，室温静置20。

8 4 C, 12000，离心10，弃上清，倒扣于吸水纸上，吸净液体。

9用1 70%乙醇洗涤质粒沉淀2次，每次4 C, 12000，离心3，吸去上清。

第1篇一、实验目的1. 掌握基因连接与转化的基本原理和操作方法。

2. 学习目的基因与载体连接的实验操作步骤。

3. 熟悉转化实验的基本流程，包括感受态细胞的制备、转化、涂布培养和筛选等。

4. 了解基因表达载体的构建和鉴定方法。

二、实验原理基因连接转化实验是基因工程中重要的基本操作之一，其原理主要包括以下几个方面：1. 基因克隆：通过酶切、连接等操作，将目的基因与载体连接起来，构建成重组质粒。

2. 转化：将重组质粒导入宿主细胞，使其在宿主细胞内复制、表达。

3. 筛选：通过选择性培养基和分子生物学方法，筛选出含有目的基因的转化子。

4. 鉴定：对筛选出的转化子进行鉴定，确认其是否含有目的基因。

三、实验材料1. 试剂：限制性内切酶、T4连接酶、DNA连接缓冲液、DNA分子量标准、DNA聚合酶、PCR引物等。

2. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、移液器、培养箱、超净工作台等。

3. 细胞：感受态细胞（如大肠杆菌DH5α）。

4. 基因组DNA：目的基因片段和载体DNA。

四、实验步骤1. 目的基因片段的制备：采用PCR技术扩增目的基因片段。

2. 载体DNA的制备：提取载体DNA，进行酶切处理。

3. 基因连接：将酶切后的目的基因片段与载体连接。

4. 转化：将连接产物转化感受态细胞。

5. 涂布培养：将转化后的细胞涂布在选择性培养基上，培养过夜。

6. 筛选：挑选生长良好的单克隆菌落进行PCR检测。

7. 鉴定：对PCR检测阳性的菌落进行酶切和测序鉴定。

五、实验结果与分析1. PCR检测结果：根据PCR检测结果，筛选出含有目的基因的转化子。

2. 酶切鉴定：对PCR检测阳性的菌落进行酶切，观察酶切图谱，确认重组质粒是否构建成功。

3. 序列鉴定：对酶切鉴定阳性的菌落进行测序，与目的基因序列进行比对，验证其是否正确。

六、实验总结1. 通过本次实验，掌握了基因连接与转化的基本原理和操作方法。

2. 成功构建了含有目的基因的重组质粒，并对其进行了鉴定。

基因工程实验报告生命学院生技114班摘要：一、本次试验内容概况如下：（1）准备植物材料：小麦幼苗（2）对基因进行双酶切，准备的载体进行双酶切，转移Top10菌株。

（3）进行PCR检测，查看检测结果是否成功，成功则证明转入了BL21菌株，进行表达过程。

（4）进行电泳。

（目的蛋白的大小会知道，高诱导。

证明符合预期结果。

说明此区域该目的基因大量表达，其他区域目的基因没有大量表达。

）（5）用Weatern杂交去证明。

因为载体是已知的，在相应位置杂交出杂带，证明的该目的基因确实克隆到了载体上，并且蛋白质进一步进行了表达。

二、实验流程：用Trizol 法提取小麦总RNA→用RT-PCR技术扩增GAPDH截短体基因→用琼脂糖凝胶电泳进行片段胶回收→表达载体pGEX4T—1的构建→表达菌株转化→诱导表达→Western杂交关键词：RNA提取、RT-PCR扩增目的基因cDNA、琼脂糖电泳、质粒提取、表达载体的目的片段的酶切、载体和外源DNA的连接、感受态细胞的制备及转化、重组质粒的筛选、鉴定及转化、目的基因诱导表达、Western Blotting检测、DNA的传化与回收、培养基制备和细菌培养具体实验过程：一、<一>小麦总RNA提取1、材料设备：小麦幼苗、高速冷冻离心机、低温冰箱、核酸电泳设备、液氮罐、研体、剪刀、镊子。

2、试剂：（1）0.1％的DEPC H2O（DEPC：焦碳酸二乙酯）（2）器具处理：试剂瓶、量筒、研钵、大小枪头和1.5ml和0.2ml 的EP管等用纱布包裹，在0.1％的DEPC H2O中浸泡过夜（37℃），高压灭菌，80℃烘干备用。

剪刀、镊子和药匙等160℃烘烤6h以上。

（3）无RNA酶灭菌水（DEPC H2O）：用将高温烘烤的玻璃瓶装重蒸馏水，按0.01%的DEPC（体积/体积），处理过后高压灭菌。

（4）Trizol（5）75%乙醇：用新打开的无水乙醇和DEPC处理过的水配制75%乙醇（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。

一、实验目的1. 学习并掌握基因工程的基本原理和操作技术；2. 熟悉基因克隆、表达、检测等实验操作；3. 培养实验操作技能和科学思维能力。

二、实验原理基因工程是利用分子生物学和生物化学原理，通过人工手段对生物的遗传物质进行改造，以达到改变生物特性、提高生物产量、生产新生物制品等目的的技术。

实验中主要涉及以下原理：1. 限制性核酸内切酶（Restriction endonuclease）：能够识别特定的核苷酸序列，并在该序列的特定位置切割DNA链；2. DNA连接酶（DNA ligase）：能够将两个DNA片段连接起来；3. 转化：将外源DNA片段导入受体细胞；4. 转录和翻译：将目的基因转录成mRNA，再翻译成蛋白质。

三、实验材料1. 质粒载体：pET-28a、pUC19等；2. 限制性核酸内切酶：EcoRI、HindIII等；3. DNA连接酶：T4 DNA连接酶；4. 转化试剂：钙离子、转染试剂等；5. 实验试剂：Tris-HCl缓冲液、NaCl、KCl、MgCl2、DNA模板、引物、dNTPs、PCR试剂等；6. 实验仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、移液器、超净工作台等。

四、实验步骤1. 设计实验方案：根据实验目的，设计实验步骤，包括目的基因的克隆、表达、检测等。

2. DNA提取：采用CTAB法提取质粒DNA。

3. 限制性核酸内切酶酶切：将质粒DNA和目的基因片段分别进行EcoRI、HindIII酶切，酶切产物进行电泳鉴定。

4. DNA连接：将酶切后的质粒DNA和目的基因片段进行连接，连接产物进行电泳鉴定。

5. 转化：将连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞中，筛选阳性克隆。

6. 阳性克隆的鉴定：通过PCR、测序等方法对阳性克隆进行鉴定。

7. 重组质粒的提取：提取重组质粒，进行电泳鉴定。

8. 重组质粒的表达：将重组质粒转化到大肠杆菌表达系统中，进行诱导表达。

9. 目的蛋白的纯化：采用离子交换层析、亲和层析等方法对目的蛋白进行纯化。

《基因工程》实验教学教案一、实验背景基因工程是一门应用生物学的分支，通过对基因的操作和重组，实现对生物性状的改良和功能的研究。

本实验教学旨在让学生了解基因工程的基本原理，掌握基因克隆、表达和检测的方法，培养学生动手实践能力和创新思维。

二、实验目标1. 了解基因工程的基本原理及实验步骤；2. 掌握PCR扩增、DNA提取、酶切、连接、转化等实验技术；3. 学会分析实验结果，提高学生解决实际问题的能力；4. 培养学生团队合作精神和创新思维。

三、实验内容1. 基因克隆：利用PCR扩增目的基因，并进行酶切、连接，将目的基因插入到载体中；2. 基因转化：将重组载体导入受体细胞，筛选转化成功的细胞；3. 基因表达：对转化成功的细胞进行诱导表达，检测目的蛋白的表达情况；4. 实验结果分析：分析实验数据，探讨实验过程中可能存在的问题，并提出改进措施；四、实验材料与仪器1. 材料：大肠杆菌、质粒、PCR试剂、酶切酶、连接酶等；2. 仪器：PCR仪器、电泳仪、离心机、恒温培养箱、显微镜等。

五、实验步骤1. 实验前的准备工作：了解实验原理，阅读相关文献，准备实验材料和仪器；2. 基因克隆：设计引物，进行PCR扩增，酶切目的基因和载体，连接目的基因与载体，转化大肠杆菌；3. 基因转化：将重组载体导入受体细胞，筛选转化成功的细胞；4. 基因表达：对转化成功的细胞进行诱导表达，检测目的蛋白的表达情况；5. 实验结果分析：分析实验数据，探讨实验过程中可能存在的问题，并提出改进措施；注意事项：1. 严格遵循实验步骤和操作规范，确保实验安全；2. 实验过程中遇到问题，及时与教师沟通，寻求帮助；3. 注重团队合作，共同完成实验任务。

六、实验教学安排1. 理论讲解：2课时2. 实验操作：4课时3. 实验结果分析与讨论：2课时七、实验评价1. 实验操作的正确性和熟练程度；2. 实验结果的准确性及分析的深度；4. 团队合作与沟通能力的展现。

基因工程实验报告的实验步骤引言基因工程是一种通过改变生物体遗传物质的工艺来改变其性状的技术。

基因工程在医药、农业和环境保护等领域有广泛的应用。

本实验旨在通过简单的基因工程实验，介绍基因工程的基本原理和实验步骤。

材料与方法1.实验材料：-选择性培养基：含有特定抗生素、激素或其它附加物质的培养基，以选择或鉴别特定的细胞。

-质粒：小的DNA分子，通常用来将外源基因导入宿主细胞。

-酶：用于限制性内切酶切割DNA。

-细胞培养物：用于细胞培养和基因转染。

-DNA提取试剂盒：用于提取DNA。

-PCR试剂盒：用于DNA扩增。

-DNA凝胶电泳仪：用于分离DNA。

2.实验步骤：（1）提取DNAa.收集样本，如细菌培养物或植物叶片。

将样本细胞裂解并使用DNA提取试剂盒提取DNA。

b.检测DNA浓度和质量，并分装为合适的体积备用。

（2）DNA限制性酶切割a.根据研究目的选择正确的限制性酶。

将DNA与限制性酶一同加入反应管中，按照供应商说明的条件进行酶切反应。

b.将反应产物进行电泳分离，观察并记录DNA切割情况。

（3）DNA连接a.选择合适的酶切产物进行连接实验。

将DNA和相应酶与连接试剂进行反应，在恰当的温度下进行连接反应。

b.将反应产物进行电泳分离，观察并记录连接后的DNA条带。

（4）DNA扩增a.根据连接后的DNA序列设计引物，在PCR试剂盒中将DNA进行扩增反应。

b.将PCR反应产物进行电泳分离，观察并记录扩增结果。

（5）基因转染a.准备转染细胞，并将质粒导入细胞。

按照转染试剂盒说明进行操作。

b.观察转染细胞的表型变化，并进行相关分析。

结果与讨论在本实验中，我们成功完成了DNA提取、限制性酶切割、DNA连接、DNA扩增和基因转染的操作。

通过电泳分离，我们观察到了DNA切割、连接和扩增的结果。

此外，转染细胞的表型变化也支持基因导入的成功。

实验结论本实验展示了基因工程的基本步骤，并介绍了DNA提取、限制性酶切割、DNA连接、DNA扩增和基因转染等关键技术。

第1篇一、实验目的1. 掌握从细胞中提取目的基因的方法。

2. 了解目的基因提取过程中的原理和操作步骤。

3. 通过电泳检测目的基因的提取效果。

二、实验原理目的基因提取实验主要利用DNA的碱基互补配对特性和分子生物学技术，通过以下步骤实现目的基因的提取：1. 细胞裂解：利用去垢剂（如SDS）和蛋白酶K等试剂，破坏细胞膜，使细胞内的DNA释放出来。

2. 去除蛋白质：通过酚/氯仿抽提法，去除细胞裂解液中蛋白质等杂质。

3. DNA沉淀：通过乙醇或异丙醇等试剂，使DNA沉淀，从而纯化DNA。

4. DNA溶解：将沉淀的DNA溶解于适量的水中，以便后续实验使用。

三、实验材料1. 细胞样本：大肠杆菌或其他细胞株。

2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚/氯仿、乙醇、异丙醇、NaCl、Tris-HCl、EDTA等。

3. 仪器：离心机、电泳仪、紫外分光光度计等。

四、实验步骤1. 细胞裂解：- 将细胞样本加入含有SDS和蛋白酶K的裂解液中，混匀，室温放置30分钟。

- 12,000 rpm离心10分钟，收集上清液。

2. 去除蛋白质：- 将上清液与等体积的酚/氯仿混合，混匀，12,000 rpm离心10分钟。

- 取上清液（即酚/氯仿相）转移至新管中。

3. DNA沉淀：- 向酚/氯仿相中加入1/10体积的3M NaCl和2.5倍体积的乙醇，混匀。

- -20℃放置1小时或过夜。

- 12,000 rpm离心10分钟，收集沉淀。

4. DNA溶解：- 将沉淀溶于适量的Tris-HCl（pH 8.0）缓冲液中，即为提取的目的基因。

5. DNA浓度测定：- 利用紫外分光光度计测定DNA的浓度。

6. 电泳检测：- 将提取的目的基因进行琼脂糖凝胶电泳，观察DNA条带。

五、实验结果1. DNA浓度测定：利用紫外分光光度计测定DNA的浓度为50 ng/μl。

2. 电泳检测：在琼脂糖凝胶电泳中，观察到一条清晰的DNA条带，与目的基因大小相符。

六、实验讨论1. 本实验成功提取了目的基因，说明实验操作步骤正确。

一、实验目的1. 学习并掌握基因工程中常用的酶切技术；2. 掌握DNA酶切实验的基本操作步骤；3. 熟悉DNA酶切反应的原理及影响因素。

二、实验原理DNA酶切实验是基因工程中的重要技术之一，通过限制性核酸内切酶（RE）对DNA 分子进行切割，产生具有特定黏性末端或平末端的DNA片段。

这些DNA片段可用于后续的基因克隆、基因表达等实验。

限制性核酸内切酶（RE）是一种能够识别并切割特定DNA序列的酶，其识别序列通常由4-6个核苷酸组成。

根据酶切位点的不同，RE可分为三类：I类、II类和III 类。

其中，II类RE是最常用的酶切酶，具有高度特异性和稳定性。

三、实验材料1. DNA模板：提取自细菌、动物或植物细胞的总DNA；2. 限制性核酸内切酶（RE）：根据目的基因序列选择合适的酶切酶；3. 10×酶切缓冲液；4. dNTPs（脱氧核糖核苷三磷酸）；5. Taq DNA聚合酶；6. 1×PCR缓冲液；7. 25℃反应体系；8. 灭菌水；9. 1.5%琼脂糖凝胶；10. 电泳仪；11. DNA回收试剂盒。

四、实验步骤1. DNA酶切反应：取2μl DNA模板，加入4μl 10×酶切缓冲液、2μl RE、2μl dNTPs、4μl Taq DNA聚合酶和2μl灭菌水，混匀后置于PCR仪上，进行酶切反应。

反应条件根据酶切酶说明书进行调整。

2. PCR扩增：取酶切反应产物，加入2μl 1×PCR缓冲液、2μl Taq DNA聚合酶、2μl dNTPs、2μl 10×PCR缓冲液和4μl灭菌水，混匀后置于PCR仪上，进行PCR扩增。

扩增条件根据目的基因序列和酶切酶说明书进行调整。

3. 琼脂糖凝胶电泳：将PCR扩增产物加入1.5%琼脂糖凝胶中，进行电泳分离。

根据DNA分子大小，调整电泳电压和时间。

4. DNA回收：将凝胶中的目的DNA片段用DNA回收试剂盒回收，得到纯化的DNA片段。

分子生物学基因工程分子生物学与基因工程实验报告分子生物学与基因工程实验报告绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆和表达背景知识绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。

当受到紫外或蓝光激发时，GFP发射绿色荧光。

它产生荧光无需底物或辅因子发色团是其蛋白质一级序列固有的。

GFP由3 个外显子组成，长2.6kb；GFP 是由238 个氨基酸所组成的单体蛋白,相对分子质量为27.0kMr，其蛋白性质十分稳定，能耐受60℃处理。

1996 年GFP 的晶体结构被解出，蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11 个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的，桶的顶部由3 个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要的生色团则位于大空腔内。

发色团是由其蛋白质内部第65-67位的Ser-Tyr-Gly自身环化和氧化形成.1996 年GFP 的晶体结构被解出，蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11 个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的,桶的顶部由3 个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要的生色团则位于大空腔内。

绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆和表达一、实验目的学习掌握一种最常用的质粒DNA提取方法：碱裂解法。

该法用于从小量培养物中抽提质粒DNA，比较方便、省时，提取的质粒DNA质量较高，可用于DNA的酶切、PCR甚至测序。

学习利用核酸蛋白测定仪测算核酸的浓度和纯度。

掌握一种最常用的分离、鉴定、纯化DNA片段的比较方便、省时的技术：琼脂糖凝胶电泳的基本原理和操作方法。

学习使用限制型内切酶进行DNA酶切的原理和方法。

了解和掌握大肠杆菌感受态细胞的制备方法的原理和操作要点，以及质粒DNA转化大肠杆菌细胞的原理和方法。

第1篇一、实验背景本次实验是在我国某高校生物实验室进行的，旨在探究生物技术在基因工程领域的应用。

通过实验，了解基因工程的基本原理、操作方法以及在实际应用中的优势。

实验过程中，我们学习了DNA提取、PCR扩增、DNA连接、转化等关键技术，并成功构建了基因表达载体。

二、实验目的1. 掌握基因工程的基本原理和操作方法。

2. 熟悉DNA提取、PCR扩增、DNA连接、转化等关键技术。

3. 通过实验，了解基因工程在生物技术领域的应用前景。

三、实验内容1. DNA提取实验采用酚-氯仿法提取大肠杆菌DNA，通过离心、洗涤、溶解等步骤，获得纯净的DNA。

2. PCR扩增以提取的DNA为模板，设计特异性引物，进行PCR扩增。

通过优化反应条件，获得高质量的扩增产物。

3. DNA连接将PCR扩增产物与载体连接，构建基因表达载体。

实验中采用T4 DNA连接酶进行连接反应。

4. 转化将构建好的基因表达载体转化到受体细胞中，通过抗生素筛选，获得阳性克隆。

5. 阳性克隆的鉴定通过PCR、酶切等手段，对阳性克隆进行鉴定，确保基因表达载体构建成功。

四、实验结果与分析1. DNA提取通过酚-氯仿法提取大肠杆菌DNA，电泳结果显示DNA条带清晰，表明DNA提取成功。

2. PCR扩增PCR扩增产物经电泳检测，可见特异性条带，表明扩增成功。

3. DNA连接DNA连接反应产物经电泳检测，可见与载体大小相近的条带，表明连接成功。

4. 转化通过抗生素筛选，获得阳性克隆。

PCR鉴定结果显示，阳性克隆中含有目的基因。

5. 阳性克隆的鉴定通过PCR、酶切等手段，对阳性克隆进行鉴定，结果与预期相符，表明基因表达载体构建成功。

五、实验讨论1. 实验过程中，DNA提取、PCR扩增、DNA连接等步骤对实验结果至关重要。

在操作过程中，应严格按照实验步骤进行，确保实验结果的准确性。

2. 实验过程中，可能存在DNA降解、PCR扩增效率低等问题。

为提高实验成功率，可优化实验条件，如调整反应体系、反应时间等。

分子生物学实验报告(2011 -2012 学年第一学期)实验内容：基因工程综合实验实验时间：2012.10.28-2012.11.2 提交日期：2012 年11 月 5 日实验目的大肠杆菌表达包涵体蛋白的基因工程实验以一个目的基因片段的获得，表达和纯化和活性分析为主线，抓住蛋白和核酸两大主题，建立一个综合型和研究性的大实验教学体系，重视各项技术的衔接。

综合性实验旨在启迪严谨的科学思维和创新意识，提高对实验方法和实验技术的综合运用能力。

具体到每个实验的实验目的如下：1．掌握SDS碱裂解法小量制备质粒的原理和方法。

2．掌握高速离心机、微量移液器等常规仪器的正确使用。

3. 掌握分光光度法估算样品中DNA的浓度和纯度。

4. 熟悉紫外分光光度计的使用方法。

5．学习掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳的原理和方法及其运用。

6.掌握用CTAB法小量制备大肠杆菌基因组DNA7.了解基因组DNA的其它提取方法8.了解酶切原理。

9.掌握酶切体系的建立原则。

10. 熟悉基因工程所用限制性内切酶的特点。

11.学习掌握外源DNA与质粒载体的重组连接技术12.掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法及技术。

13.熟练掌握用重组DNA转化感受态细胞的技术，为基因克隆打好基础14.学习掌握PCR技术的原理及基本操作15.学习考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质浓度的原理和方法。

16.掌握蛋白质的SDS-PAGE电泳原理和操作技术及应用。

实验流程具体每日实验流程1、 10月28日，利用双酶切，DNA 琼脂糖凝胶电泳，胶回收，双酶切目的基因和载体连接过夜。

2、10月29日下午，大肠杆菌感受态细胞的制备与转化，涂平板和培养，先正放置半小时，再倒置培养过夜。

3、10月30日下午，挑阳性（含抗性基因）菌落，菌落PCR ，转板和液体培养菌体。

4、10月31日上午，转接培养，诱导表达，晚上，离心菌体，去上清，冰箱放置保存。

基因工程实验技术实验报告百度ID：龍吟EX炫1 材料和方法1.1 实验材料1.1.1 实验对象实验室提供的小鼠；含pGEX 4T-1质粒的大肠杆菌BL21 (DE3)，大肠杆菌Top10。

1.1.2 试剂LB液体培养基，LB固体培养基，0.1% DEPC水，无水乙醇，氯仿，异丙醇，Trizol，Olig(dT)18，反转录缓冲液，dNTP，M-MULV反转录酶，RNA抑制剂，2×PCR Mix，Olig(dT)18引物，表达引物EB3、EB4，5×TBE缓冲液，10×Loading buffer，核酸染料Super Gel Red，琼脂糖，Bam H I，Sal I，Bam H I buffer，10×ligation缓冲液，T4 DNA连接酶，ddH2O，氨苄青霉素，IPTG，30%丙烯酰胺，1.5mol/L和0.5mol/L Tris-HCl，10% SDS，10%过硫酸铵溶液，染色液，脱色液，TEMED，Tween-20，DAB工作液、显色液，TIANGEN胶回收试剂盒，TIANGEN质粒提取试剂盒。

1.1.3 仪器高速冷冻离心机，核酸电泳设备，PCR扩增仪，恒温水浴锅，凝胶成像系统，蓝光切胶仪，无菌操作台，恒温摇床，蛋白电泳设备，电转移设备，移液枪1.2 方法1.2.1 实验材料的处理对小鼠进行处死，解剖并取出肝脏组织，备用。

1.2.2 Trizol法提取总RNA将组织剪成小块在液氮中磨成粉末，取50～100mg加入已盛有1ml Trizol离心管中，轻轻混合以排除气体，再充分混匀；室温放置5min，然后加入200μl氯仿，盖紧离心管，并剧烈摇荡15秒钟；12,000rpm离心10min，取上层水相到新的离心管中，加入500μl异丙醇，温和颠倒混匀。

室温放置10min后12,000rpm离心10min；小心地弃去上清液，加入1ml DEPC水配制的75%乙醇，颠倒混匀，12,000rpm离心5min，再重复一次上述操作；弃去上清液，室温或真空干燥3～5min，后用30μl DEPC水溶解RNA。

基因工程实验报告指导老师：* * *学号：2007083*****姓名：* * *班级：07生物技术班海南师范大学生命科学学院07级2010-10-25实验一植物总DNA的提取、纯化实验目的：掌握从植物的组织（细胞）中提取DNA的方法实验原理：十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物。

在高盐浓度条件下，核酸以稳定形式与去污剂CTAB络合于溶液中，当降低溶液浓度到一定程度时，CTAB与核酸的复合物从溶液中沉淀下来，通过离心就可将该复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB溶于高盐溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB溶于乙醇中。

仪器、材料与试剂主要仪器：水浴锅、离心机、研钵、涡旋仪主要试剂和材料：CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）裂解液：2%CTAB（W/V）、20 mmol EDTA(pH8.0)、100 mmol Tris-HCl (pH8.0)、1.4 mol NaCl氯仿：异戊醇（24：1）。

异丙醇，无水乙醇。

TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl(pH8.0)、1mmol/L EDTA实验步骤1. 取2g左右的嫩叶子放入预冷的研磨中，第一次加入较多的液氮，开始先慢慢磨开后研磨中待液氮量较少时快速磨动，如发现液氮挥发完迅速加入液氮（加入时动作要轻，防止粉末溅起），重复两次。

2. 将粉末加入预冷1.5mlEP管中（约1/3）后，加入事先700ul65℃水浴的2%CTAB和30ul室温β-巯基乙醇（剧毒），轻轻摇动混匀。

放入65℃水中水浴40min，每10min取出震荡使沉淀散开。

3. 取出后冷却至室温，加入氯仿/异戊醇（24：1，V/V）至满管（加药品千万注意别让药品污染桌面及手上，有必要可带面罩），剧烈震荡后12000rpm离心10min，取上清加入500µl 氯仿/异戊醇12000rpm 离心10min。

4. 取上清至预冷600µl 异丙醇和20µl 3M KAc中置于-20℃冰箱中15-20min。

《基因工程实验》报告姓名学号分院(系)生物与化学工程分院专业班级生物技术08级1班指导教师王进波一、实验项目名称：质粒载体DNA的提取二、实验时间：2011年9月日三、实验目的：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。

（注：格式要求在正式报告中删除）四、实验步骤：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。

（注：格式要求在正式报告中删除）五、实验结果与讨论：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。

本部分内容应当是报告的重点，各位同学在写报告时，一定要将结果写清楚，无论成功还是失败，都必须展开讨论；同组的同学实验结果可以相同，但讨论是绝不可以雷同的！！！（注：格式要求在正式报告中删除）提醒各位同学（正式报告中应当删除该部分提醒内容）：（1）报告必须严格按照格式要求，打印完成。

（2）请各位同学于9月15日前完成报告，由课代表或班长将报告交到NE206办公室。

（3）严禁抄袭，每个人的讨论部分是绝不允许雷同的！一、实验项目名称：目的基因的PCR扩增二、实验时间：2011年9月日三、实验目的：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。

（注：格式要求在正式报告中删除）四、实验步骤：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。

（注：格式要求在正式报告中删除）五、实验结果与讨论：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。

本部分内容应当是报告的重点，各位同学在写报告时，一定要将结果写清楚，无论成功还是失败，都必须展开讨论；同组的同学实验结果可以相同，但讨论是绝不可以雷同的！！！（注：格式要求在正式报告中删除）提醒各位同学（正式报告中应当删除该部分提醒内容）：（1）报告必须严格按照格式要求，打印完成。