生物素化抗体使用说明

生物素标记抗体的原理应用引言生物素标记抗体是一种常用于生物学实验和生物化学研究的工具。

它可以通过结合生物素和抗体来标记目标蛋白，从而实现对目标蛋白的检测和定位。

本文将介绍生物素标记抗体的原理和常见的应用。

生物素标记抗体的原理生物素标记抗体是通过将生物素分子与抗体共价结合来实现标记的。

生物素是一种天然存在于生物体中的小分子，其与生物素受体（如亲和素或亲和力很强的亲和素结合蛋白）之间具有高度的亲和力。

生物素标记抗体的原理基于生物素与生物素受体之间的高亲和力，通过标记抗体即可实现对目标蛋白的检测和定位。

生物素标记抗体的应用生物素标记抗体在生物学实验和生物化学研究中有着广泛的应用。

下面列举了一些常见的应用：1.免疫组化生物素标记抗体可以用于免疫组化实验中的抗原检测和定位。

通过将生物素标记的抗体与目标抗原结合，再将其与亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）复合物结合，可以实现对抗原的检测和可视化。

2.流式细胞术生物素标记抗体可以在流式细胞术中用于细胞表面标记。

通过将生物素标记的抗体与目标细胞结合，再与荧光素-生物素-蛋白（如荧光素结合蛋白）复合物结合，可以实现对目标细胞的检测和定位。

3.免疫沉淀生物素标记抗体在免疫沉淀实验中广泛应用。

通过将生物素标记的抗体与目标蛋白结合，再与琼脂糖颗粒（如琼脂糖颗粒A/G）结合，可以实现对目标蛋白的沉淀和富集。

4.西方印迹生物素标记抗体在西方印迹实验中也起着重要的作用。

通过将生物素标记的抗体与目标蛋白结合，再与亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）复合物结合，可以实现对目标蛋白的检测和定量。

结论生物素标记抗体是一种常用的生物学实验和生物化学研究工具，其原理基于生物素与生物素受体之间的高亲和力。

通过将生物素标记抗体与目标蛋白结合，可以实现对目标蛋白的检测和定位。

生物素标记抗体在免疫组化、流式细胞术、免疫沉淀和西方印迹等实验中有着广泛的应用。

在将来的研究中，生物素标记抗体将继续发挥重要的作用，并为研究人员提供更多的实验选择和研究手段。

664中文 – 2001- 07 –03045838 １００　人份2176718001 01 02用途：用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的ＣＡ１５－３ＩＩ。

辅助乳腺癌病人的治疗监测。

与其它临床和诊断措施相结合，ＣＡ１５－３ＩＩ系列动态测定有助于ＩＩ期和ＩＩＩ期乳腺癌病人治疗后再复发的早期发现；监测乳腺癌转移病人对治疗的反应性。

电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Ｅｌｅｃｓｙｓ１０１０、２０１０和Ｅ１７０免疫测定分析仪。

概述：ＣＡ１５－３测定值由夹心法中所用的二种单克隆抗体（ＭＡｂ）１１５Ｄ８和ＤＦ３决定。

１１５Ｄ８特异性针对人乳脂球膜，而ＤＦ３特异性针对人转移性乳腺癌的膜提取成份。

能与１１５Ｄ８和ＤＦ３反应的决定簇存在于一种称为ＭＡＭ－６的糖蛋白分子上，该种抗原属于唾液酸化的糖蛋白亚类，又称多态性上皮粘蛋白（ＰＥＭ）。

正常情况下，ＰＥＭ只存在于腺体细胞腔的分泌物中，不出现在血循环中。

当细胞恶变时，基底细胞膜渗透性增强，ＰＥＭ可在血清中由ＣＡ１５－３方法检测出来。

原理：采用双抗体夹心法原理，整个过程１８分钟完成。

·　第１步：２０ｍｌ预先用Ｅｌｅｃｓｙｓ通用稀释液作１：１０稀释的标本、生物素化的抗ＣＡ１５－３单克隆抗体和钌（Ｒｕ）标记的抗ＣＡ１５－３单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。

·　第２步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。

·　第３步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。

·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。

此曲线由仪器通过２点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。

试剂：Ｍ：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），１瓶，６．５ｍｌ。

粒子浓度０．７２ｍｇ／ｍｌ，生物素结合能力：　４７０ｎｇ生物素／ｍｇ粒子。

生物素标记试剂盒使用说明书货号: EBLK0002产品介绍：Elabscience生物素标记试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂，用于含有氨基（NH2-）抗体的标记。

生物素已经活化，可直接使用，每个试剂盒足以完成3次标记，每次可标记0.2-2mg。

试剂盒中包括6个用于抗体标记脱盐的Filtration tube，不用透析，操作简便，熟练操作90min可完成整个标记过程。

产品特点：试剂全面:本试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂。

快速:整个过程仅需90min。

方便:通过Filtration tube即可脱盐，无需透析或者凝胶过滤。

使用灵活:既可用于微量标记又可大量标记，每次可标记0.2-2mg。

理想的标记效果:已经优化确定了最适的标记比例，降低标记不足或由于过度标记而失活的可能性。

产品组成：标记过程需要仪器：1. 10ul，50ul，200ul，1000ul可调高精度移液器2. 恒温箱（37℃）3. 离心机（离心力可达到12,000×g）储存条件：本试剂盒未开封前在2-8℃可稳定保存一年生物素标记反应原理：NH2-Reactive Biotin专一地与伯胺反应（N-末端及赖氨酸残基侧链）形成稳定的酰胺键生物素标记NH2-Reactive Biotin使用量的计算：每个反应中生物素试剂的使用量取决于待标记蛋白质的量和浓度。

通过优化，我们确定了标记2mg/ml的抗体（IgG ，150KD），使用生物素和抗体的分子比为20:1能达到较理想的标记效果。

1、标记2mg/ml的抗体，使用生物素和抗体的分子比为20:1时，应加入生物素量的计算方法：ml蛋白×2mg蛋白ml蛋白×1mmolIgG150,000mgIgG×20mmol生物素mmol蛋白= mmol生物素2、对于10mmol的生物素溶液，应加入反应中该生物素体积的计算方法：mmol生物素×1,000,000μLL ×L10mmol= ul生物素计算示例：对于0.5ml 2mg/ml的IgG（分子量为150,000）溶液，需加入10mM的生物素溶液13.3ul。

生物素标记抗体步骤
生物素标记抗体是一种常用的实验技术，能够在细胞、组织和蛋白质水平上检测目标分子的表达和定位。

以下是生物素标记抗体的步骤：
1. 预处理样本：将样本适当处理（如细胞培养、组织切片等），使其适合于抗体检测。

2. 抗原修复：对于一些抗原易于损伤或失活的样本（如石蜡包埋组织），需要进行抗原修复。

通常采用高压加热或酶消化等方法。

3. 抗体处理：加入适当浓度的生物素标记抗体，将其与目标分子结合。

4. 洗涤：用PBS等缓冲液对样本进行洗涤，去除非特异性结合的抗体。

5. 酶标记物处理：加入标记有辣根过氧化物酶（HRP）等酶标记物的检测抗体，使其与生物素标记抗体结合。

6. 洗涤：同样进行洗涤。

7. 显色：加入酶底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基苯丁二酸二乙酯）或DAB（3,3'-二氨基联苯）等，使样本呈现可见的颜色反应。

8. 停止反应：加入酸性溶液，停止反应。

9. 显微镜观察：在显微镜下观察样本，记录结果。

生物素标记抗体技术可以应用于免疫组化、免疫印迹等多种实验中，是一种方便、快速、准确的检测方法。

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Human YTH domain-containing family protein1ELISA Kit (YTHDF1)Catalog NO.:RK04130version:2.0*使用产品前，请务必阅读产品包装内说明书产品简介本试剂盒产品使用夹心法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它生物体液中YTHDF1的含量。

产品检测原理本实验采用双抗夹心ELISA法。

将抗YTHDF1抗体预先包被在酶标板上，向微孔中分别加入标准品和样品，样本中YTHDF1与固相载体上的抗体结合。

孵育后，未结合的样品在洗涤过程中会被洗去，加入抗YTHDF1的检测抗体，形成双抗体夹心。

洗去未结合的检测抗体，然后向微孔中加入酶结合物。

孵育和洗涤后，加入底物TMB。

样品中YTHDF1的含量与TMB反应的颜色深浅呈正相关，加入酸终止反应并测量吸光值。

根据梯度稀释的YTHDF1标准品的吸光值绘制标准曲线并求出样品的浓度。

试剂盒组分及保存条件未拆封的试剂盒可在2-8°C保存1年，已拆封的产品须在1个月内使用完。

组分规格货号拆封后保存条件抗体预包被酶标板Antibody Coated Plate 8×12RM17545将未使用的板条放回装有干燥剂的铝箔袋中，并重新密封，可在2-8°C存储1个月。

冻干标准品Standard Lyophilized 2支RM17546复溶后不建议再次使用。

浓缩生物素化抗体（100×）Concentrated Biotin Conjugate Antibody(100×)1×120ul RM17547可在2-8°C存储1个月。

浓缩链霉亲和素-HRP（100x）Streptavidin-HRP Concentrated(100×)1×120ul RM17548可在2-8°C存储1个月。

标准品/样本稀释液（R1）Standard/Sample Diluent (R1)1×20mLRM00023可在2-8°C 存储1个月。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-168-3301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************碧云天网站微信公众号网址：Human Angiogenin ELISA Kit产品编号产品名称包装PA023 Human Angiogenin ELISA Kit 96次产品简介：碧云天的Human Angiogenin ELISA Kit (Human Angiogenin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人血管生成素酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Angiogenin的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。

多次重复检测结果表明，最小检出量为4.75pg/ml，与EGF、GM-CSF、MIP-1α、MIP-1β、TGF-α、TGF-β1，小鼠 EGF、GM-CSF、MIP-1α等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

人血管生成素(Angiogenin, ANG)是一种分子量为14kDa的单链非糖基化蛋白，属于核糖核酸酶中RISBASE家族。

该家族成员不仅具有核糖核酸酶活性，还具有一些特殊的生物学功能。

ANG氨基酸长度为123，包括3个链内二硫键。

人ANG与小鼠ANG具有75%的氨基酸同源性，且具有一定的种间交叉反应。

能够表达ANG的细胞主要有血管内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、结肠柱状上皮细胞、淋巴细胞和部分肿瘤细胞。

ANG主要参与血管的形成过程。

基底膜的降解是血管新生过程中内皮细胞发生迁移的先决条件。

ANG首先与肌动蛋白结合，随后肌动蛋白-ANG复合物发生裂解，激活组织血纤维蛋白溶酶原。

这一过程产生的血纤维蛋白溶酶会降解基底膜中的层粘连蛋白和纤连蛋白。

生物素化免疫印迹法的原理生物素化免疫印迹法（Biotinylated Immunoblotting）是一种常用的蛋白质检测技术，广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。

该方法利用生物素（Biotin）标记的抗体与特定蛋白质结合，再通过酶标记的亲生素（Streptavidin）结合生物素，通过酶催化反应使目标蛋白质产生可视化的信号。

本文将详细介绍生物素化免疫印迹法的原理及其应用。

生物素化免疫印迹法的原理基于特异性抗原与抗体的结合反应。

首先，待检样品经过蛋白质分离技术（如SDS-PAGE）将蛋白质分离并定位在聚丙烯酰胺凝胶上。

然后，将聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质转移到固体膜上，例如聚偏氟乙烯（PVDF）或硝酸纤维素膜。

这个过程称为电转印（Electrotransfer）。

接下来，将转印膜中的非特异性结合位点（例如未被蛋白质占据的空白位点）阻断，以防止后续步骤中的非特异性结合。

通常使用的阻断剂有非脂型乳清蛋白（非脂型BSA）或牛血清白蛋白（BSA）。

这样可以减少背景信号，提高检测的特异性。

然后，在转印膜上加入经生物素标记的一抗抗体，这种抗体能与待检测蛋白特异性结合。

生物素是一种小分子化合物，其分子量较小，与蛋白质结合不会影响其性质。

生物素标记的抗体与待检测蛋白特异性结合后，形成抗原-抗体复合物。

为了可视化待检测蛋白，将转印膜与酶标记的亲生素（通常是辣根过氧化物酶-HRP）结合。

亲生素是一种能与生物素非常紧密结合的蛋白质。

亲生素与生物素结合后，形成稳定的复合物。

然后，在转印膜上加入适当的底物，如4-氨基联苯二酚（4-chloro-1-naphthol），使HRP催化底物产生可视化的颜色反应。

产生的颜色与待检测蛋白的含量成正比。

生物素化免疫印迹法具有许多优点。

首先，该方法对待检测蛋白的特异性非常高，可以检测到非常低浓度的蛋白。

其次，由于生物素与亲生素结合稳定，可以进行长时间的信号增强，从而提高检测的灵敏度。

此外，生物素化免疫印迹法还可以同时检测多个蛋白，通过使用不同生物素标记的抗体，可以在同一转印膜上检测多个目标蛋白。