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２０１０ ＮＯ．２３S c i enc e a nd T ech n ol o gy I nno v at i on Her a l d研 究 报 告1 黄曲霉毒素B t测定原理与步骤方法在食品中黄曲霉毒素B1检测方法很多,有些样品如薯类及部分酱料、油类样品受样品杂质干扰的影响,因而使方法的灵敏度降低。
目前通常采用双向展开法,可以提高了检测方法的灵敏度,如测定了一份薯类样品,按灵敏度由原法的25ppb提高到5ppb,同时测定了含杂质较多的花生油、酱油及曲种等样品,情况亦是如此。
而原法灵敏度为5ppb的样品(如花生及部分花生油样品等)用双向展开法展开,其灵敏度亦可以进一步提高,有的可提高到1.25ppb。
今将双向展开法的原理及操作步骤介绍如下。
1.1原理因无水乙醚不能推动黄曲霉毒素B-(以下简称B。
)。
在用乙醚将薄层板横展时,可以把干扰的杂质推到样品点的旁边,而不像用乙醚纵展时,有时在样品的过道中留有部分杂质的底色。
在乙醚横展后再用丙酮:氯仿纵展,可以使样品在B1标准点相应处的杂质底色大量的减少.从而提高了原有方法的灵敏度。
1.2试剂(补充的)无水乙醚,分析纯,在无水乙醚中加入少许无水硫酸钠贮存。
1.3操作步骤主要补充双向展开法的操作步骤,其它参照B1测定法。
1.3.1滴加方法由于在具体测定条件下,用无水乙醚展开后Bt仍有很少的移动(因无水乙醚中含微量的水或醇以及空气中的湿度太大等均可以使B,移动),因此在滴加时必需同时滴加两块层析板。
在一块5×20cm的薄层板上距下端3cm的基线上滴加以下两个点:第1个点离左边边距0.8～1cm处滴加B。
标准液Ⅲ(0.04微克/毫升)10微升;第2个点离第一个点的间隔距离约1.8～2.0cm处滴加样液20微升。
在另一块上的滴加样式完全与第一块相同,祗在第二个样品点上再滴加B1标准液Ⅲ0.04(微克/毫升)10毫升。
1.3.2展开方法①横展:在展开槽内的长边放置玻璃支架一个,再加无水乙醚10毫升。
实验六食品中黄曲霉毒素B1的测定一、实验目的与要求学习薄层层析法测定粮食中黄曲霉毒素B1原理及步骤。
二、实验原理样品中AFT B1经有机溶剂提取、净化、浓缩并经薄层色谱分离后,在波长365nm紫外光下产生荧光,根据其在薄层板上显示荧光的强度与标准品AFT B1最低检出量产生的荧光强度比较来测定样品中AFT B1的含量。
三、实验仪器与试剂仪器:玻璃板:5×20cm;涂布器;色谱展开槽(25×6×4cm);紫外光灯: 100-125W,带有波长365nm滤光片;微量注射器:20uL,10uL各一支试剂:三氯甲烷(AR);正己烷(AR 沸程30-60)或石油醚(沸程60-90);甲醇(AR);苯(AR);乙腈(AR);无水乙醚(AR);丙酮(AR)。
(以上试剂应重蒸,并应经检验对薄层色谱测定无干扰)苯-乙腈(98:2)混合溶液;甲醇-水(55:45)混合溶液;三氟乙酸(AR);氯化钠(AR);无水硫酸钠(AR);硅胶G(薄层色谱用)。
5%次氯酸钠溶液:称取100g漂白精,加入500mL水,搅匀。
另将80g工业用碳酸钠(Na2CO3.10H2O)溶于500mL温水中,倒入上述溶液中,搅匀,澄清过滤后贮存于带橡皮塞的玻璃瓶中,用作消毒剂。
黄曲霉毒素B1标准贮备液:用百万分之一的微量分析天平精密称取1-1.2mgAFT B1标准品,先加入2mL乙腈溶解后,再用苯稀释至100mL,避光置于4℃冰箱中保存。
使用前用紫外分光光度计测定其浓度,再用苯-乙腈混合溶液调整其浓度为10ug/mL。
(在350nm测定AFT B1的苯-乙腈溶液的吸光度,其摩尔消光系数为19800,可根据朗伯-比尔定律求出其浓度)。
黄曲霉毒素B1标准应用液I(1ug/mL):吸取1.0mL10ug/mL的黄曲霉毒素B1标准贮备液于10mL容量瓶中,加苯-乙腈混合溶液定容。
黄曲霉毒素B1标准应用液II(0.2ug/mL):吸取1.0mL 1ug/mL的黄曲霉毒素B1标准应用液I于5mL容量瓶中,加苯-乙腈混合溶液定容。
金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的方法1.引言黄曲霉毒素B1是一种广泛存在于食品、饲料中的毒素，对人体和动物健康造成严重威胁。
对黄曲霉毒素B1进行有效的检测至关重要。
金标免疫层析法作为一种快速、准确并且易于使用的检测方法，被广泛应用于食品安全和质量控制领域。
本文将就金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的方法进行探讨，并提供深度和广度兼具的分析，以期帮助您更全面地了解这一检测技术。
2.金标免疫层析法的原理金标免疫层析法是一种基于抗体和抗原之间特异性识别和结合原理的检测方法。
简单来说，它利用了抗体对特定分子的高度特异性识别能力，通过在复杂样品中将目标分子与标记有金纳米颗粒的抗体结合，从而实现对目标分子的定量和定性检测。
金标免疫层析法具有操作简便、快速灵敏、不需要仪器设备等特点，因此在食品安全领域得到了广泛的应用。
3.黄曲霉毒素B1的特性和对人体健康的危害黄曲霉毒素B1是一种热稳定性很强的毒素，它容易在食品和饲料中积累。
长期摄入受污染的食品或饲料会导致人类和动物出现急性或慢性中毒，表现为呕吐、腹泻、免疫抑制等严重症状，甚至可能导致肝癌等疾病的发生。
对黄曲霉毒素B1的检测至关重要，金标免疫层析法作为一种快速、敏感的检测方法，能够有效地帮助人们及时发现并控制食品中的黄曲霉毒素B1污染。
4.金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的步骤金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的步骤通常包括样品制备、抗体标记金纳米颗粒、检测纸条制备和数据读取等。
将样品进行处理，提取其中的黄曲霉毒素B1，并将其与标记有金纳米颗粒的抗体结合。
将混合物加载到检测纸条上，金标免疫层析法会在纸条上形成不同程度的色带，根据色带浓度的变化可以判断出样品中黄曲霉毒素B1的含量。
通过专门的读取设备或者肉眼观察检测纸条上色带的变化来获得测试结果。
5.金标免疫层析法的优势金标免疫层析法作为一种快速、准确、便捷的检测方法，具有以下几点优势。
它无需昂贵的仪器设备，操作简便，使用者无需专业的技术背景即可进行检测。
分析检测高效液相色谱法检测农产品中黄曲霉毒素B1的含量韩 宇（四川省甘孜藏族自治州食品药品检验所，四川康定 626000）摘 要：目的：建立高效液相色谱法联合免疫磁固相萃取法测定农产品食品中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）含量的分析方法。
方法：采用70%乙腈溶液提取花生、玉米、大豆、小麦、豌豆和绿豆样品中的AFB1，然后利用免疫磁珠净化、萃取和富集提取液中的AFB1，采用高效液相色谱法进行定量分析。
结果：方法的检出限为0.03～0.92 μg·kg-1，回收率为79.52%～97.53%。
利用该方法对市场上购买的20份花生、玉米、大豆、小麦、豌豆、绿豆样品中的AFB1进行检测，除了玉米和绿豆中未检测出AFB1外，其余实验样品中均检测出一定含量的AFB1。
结论：该方法简便、快速、准确，适用于复杂样品中黄曲霉毒素B1的测定。
关键词：高效液相色谱法；免疫磁固相萃取；黄曲霉毒素B1Determination of Aspergillus Flavus B1 in Agricultural Products by High-Performance Liquid ChromatographyHAN Yu(Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture Institute for Food and Drug Control, Kangding 626000, China)Abstract: Objective: To establish a method for the determination of Aflatoxin B1 (AFB1) in agricultural products by high performance liquid chromatography combined with immunomagnetic solid phase extraction. Method: AFB1 was extracted from samples of peanuts, corn, soybeans, wheat, peas, and mung beans using a 70% acetonitrile solution, and then AFB1 was purified, extracted and enriched by immunomagnetic beads, and quantitative analysis was performed by HPLC. Result: The limits of detection were 0.03～0.92 μg·kg-1, and the recoveries were 79.52%～97.53%. AFB1 in 20 samples of peanut, corn, soybean, wheat, pea and mung bean purchased from the market was detected by this method. AFB1 content was detected in all the other samples except corn and mung bean. Conclusion: The method is simple, rapid, accurate and suitable for the determination of aflatoxin B1 in complex samples.Keywords: high-performance liquid chromatography; immunomagnetic solid-phase extraction; aspergillus flavus B1黄曲霉毒素是一种由黄曲霉菌产生的有毒代谢产物，在自然界中分布广泛，在粮食和饲料等农产品中广泛存在。
生鲜乳中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定液相色谱-柱后光化学衍生法警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行。
该区域应避光(阳光)，具备相对独立的操作台和废弃物存放装置。
在整个实验过程中，操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施。
1 范围本标准规定了测定生鲜乳中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2含量的液相色谱-柱后光化学衍生测定方法。
本标准适用于生鲜乳中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的定量测定。
本标准方法的检出限：黄曲霉毒素B1为0.002 μg/kg，黄曲霉毒素B2为0.002 μg/kg，黄曲霉毒素G2为0.002 μg/kg，黄曲霉毒素G1为0.002 μg/kg，黄曲霉毒素M1为0.005 μg/kg，黄曲霉毒素M2为0.002 μg/kg；本标准方法的定量限：黄曲霉毒素B1为0.006 μg/kg，黄曲霉毒素B2为0.005 μg/kg，黄曲霉毒素G2为0.005 μg/kg，黄曲霉毒素G1为0.006 μg/kg，黄曲霉毒素M1为0.015 μg/kg，黄曲霉毒素M2为0.006 μg/kg。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理试样中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2用甲醇溶液提取，提取液经黄曲霉素毒素免疫亲和柱净化、富集，用高效液相色谱分离后经柱后光化学衍生，荧光检测器检测，外标法定量。
4 试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水为GB/T 6682中规定的一级水。
4.1 甲醇：色谱纯。
4.2 乙腈：色谱纯。
4.3 甲醇水溶液：取50 mL甲醇，加入50 mL纯水，混合均匀。
4.4 流动相：乙腈+水=20+80。
123食品安全黄曲霉毒素毒性强，且不易分解，能损伤人的肝脏，临床表现有胃部不适、食欲减退、恶心呕吐、腹胀及肝区触痛等。
本文详述了目前我国各类粮食中黄曲霉毒素B1的污染情况及其对人们的危害，并就目前世界上检测黄曲霉毒素B1的方法进行了总结。
一、黄曲霉毒素概述及产生条件黄曲霉毒素（AFT）是黄曲霉和寄生曲霉等某些菌株产生的双呋喃环类毒素，在其20多种衍生物中，黄曲霉毒素B1的毒性最大、致癌性最强。
黄曲霉毒素及其产生菌在自然界中分布广泛，有些菌株产生不止一种类型的黄曲霉毒素，在黄曲霉中也有不产生任何类型黄曲霉毒素的菌株。
人类健康受黄曲霉毒素的危害主要是由于人们食用被黄曲霉毒素污染的食物。
黄曲霉毒素的产生需要特定的条件，不同的玉米植株产毒能力差异很大，除基质以外，温度、湿度、空气均是黄曲霉毒素生长繁殖及产毒的必要条件。
据文献记载，黄曲霉毒素最佳生长条件为33-38℃、pH为5.0、Aw（水分活性）为0.99，其中，温度在24-28℃之间、相对湿度在80%以上，黄曲霉菌产毒量最高。
所以南方及温湿地区在春夏两季极易发生黄曲霉毒素中毒事件，甚至粮食在收获前或收获期就可能已经被黄曲霉毒素污染。
二、粮食中黄曲霉毒素的污染情况1.稻谷中黄曲霉毒素的污染情况。
作为我国人民的第一大口粮作物，稻谷在储存过程中由于储备条件不理想，可能导致黄曲霉毒素的滋生。
笔者对辽宁境内某粮库100份入库时未检测出黄曲霉毒素的储备了两年的稻谷进行了筛查，其中有13份样品检测出黄曲霉毒素。
2.玉米中黄曲霉毒素的污染情况。
玉米是我国第二大作物，也是目前饲料产品的最主要原料。
我国南方高温高湿的天气极易造成黄曲霉毒素污染，尤其梅雨季节更为黄曲霉毒素提供了滋生的温床。
相反北方低温、干燥的天气，更适宜玉米的储存。
3.小麦中黄曲霉毒素的污染情况。
小麦鲜叶中一般不我国粮食中黄曲霉毒素B1的污染情况及检测方法研究含黄曲霉毒素。
针对国标规定，小麦、面粉、发酵食品（酱油、食用醋、豆豉、腐乳制品）等的黄曲霉毒素含量应小于等于5μg/kg。
Science &Technology Vision 科技视界操作次序加入量孔号123456789150微升50微升A 00.10.250.512……DCCC C C CCC混匀23孔号234567891.890 1.548 1.2410.9190.6700.509 1.586 1.5400引言黄曲霉毒素B 1是一种高毒性、高致癌性的物质,除可引发肝癌外,也可引起其他部位如肾、胃、支气管、腺体和皮下组织的癌肿,是食品卫生部门常规的检测项目之一。
之前的方法都不能更好的检测出粮食作物、饲料和发酵食品中黄曲霉毒素的含量,今用酶联免疫吸附法能更灵敏准确的检出。
该法是把抗原抗体免疫反应和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种新型检测技术,其主要依据有三点:第一,抗原(抗体)能结合到固相载体的表面并仍保持其免疫活性;第二,抗体(抗原)与酶结合所形成的结合物仍保持免疫活性和酶的活性;第三,结合物与相应的抗原(抗体)反应后,结合的酶仍能催化底物生成有色物质,而颜色的深浅可定量抗体(抗原)的含量。
酶联免疫吸附分析法主要有三种测定方法:即间接法、抗体夹心法和竞争法。
前两种主要用于测定抗体和大分子抗原,适用于临床诊断上;而竞争法是测定小分子抗原的方法,因而尤其适用于食品卫生分析,该法主要有四步:1)将人工抗原吸附于固相载体,温育后清洗;2)加入含有抗原的待测液和抗体,温育后洗涤;3)加入酶标抗体,温育后清洗;4)加酶底物,温育后显色,并进行检测和结果判断。
图1黄曲霉毒素化学结构1实验部分1.1酶联免疫吸附法的原理利用固相酶联免疫吸附原理,将AFB 1特异性抗体包被与聚苯乙烯微量反应板的空穴中,再加入样品提取液(未加抗原)及酶标AFB 1抗原(已知抗原),使两者与抗体之间进行免疫竞争及应,然后加酶底物显色,颜色的深浅取决于抗体和酶标AFB 1抗原结合的量,即样品中AFB 1多,则被抗体结合酶标AFB 1抗原少,颜色浅,反之则深。
酶联免疫法检测食品中黄曲霉毒素B1导致假阳性结果的影响因素分析摘要：随着人们生活水平的不断提高，人们对日常所需的食品质量也有了更好的要求，为了确保食品的安全性，因此我们需要对食品的安全进行检测，但在对大众所需的食品进行检测环节中，发现食品在进行黄曲霉毒素B1的检测时会出现假阳性结果。
因此本文对酶联免疫法在食品检测过程的检测原理及特点进行了阐述，分析了检测中黄曲霉毒素B1导致假阳性结果的影响，并探究了酶联免疫法检测食品中的具体应用。
关键词：食品；酶联免疫法；黄曲霉毒素B1；假阳性结果引言：食物是人们在日常生活中不可或缺的一部分，食品具有需求大、使用量大的特点，一旦食物发生了质量问题，不但对消费者的身体健康造成了严重的危害，而且还会对社会的稳定与和谐产生严重的影响。
而在对食品进行检测过程中容易出现黄曲霉毒B1导致的假阳性结果，这种假阳性食品一旦被投入市场将会产生很大的影响。
因此本文利用酶联免疫法对食品的检测进行了研究。
一、酶联免疫法的原理及特点酶联免疫法是一种固相酶免疫分析法，它的基本原理是：利用抗原与抗体之间的特异结合，首先将抗原与固相载体结合，之后制备酶标抗体，将样本和酶标抗体，通过与目标分子的竞争结合，使目标分子与目标分子之间的相互作用产生变色，从而实现对目标分子的定性和定量分析。
在图1中示出了酶联免疫法的工作原理。
酶联免疫法按其测定方式可划分为夹心法、间接竞争法、直接竞争法等。
酶联免疫法是一种无需大型仪器设备，其检测过程操作简便，检测速度快，是一种基于抗原和抗体的特异结合而形成的显色法，具有选择性强，样品预处理简便等优点［1］。
图1酶联免疫法的检测原理二、食品出现假阳性结果的影响使用酶联免疫法检测食品中黄曲霉毒素B1，时常会出现假阳性结果，假阳性的结果，会让我们产生错误的判断，检验结果与真实状况不符，从而做出错误的抉择。
出现此现象的原因有多种，如：测试方式不适合，仪器误差，样品处理与处理不当，测试条件与人为干扰等。
