RP-HPLC内标法测定牡丹皮中丹皮酚的含量

RP-HPLC内标法测定牡丹皮中丹皮酚的含量齐齐哈尔医学院学报2008年第3O卷第3期RP—HPIC内标法测定牡丹皮中丹皮酚的含量张琪蔡德富【摘要】目的建立一种测定牡丹皮原药材中主要成分丹皮酚含量的新方法,在新方法中以醋酸地塞米松为内标准确测定了牡丹皮药材中的丹皮酚.方法采用Welehrom—C18柱(250mm×4.6mm,5m),甲醇一1%冰醋酸(45:55)为流动相,检测波长254nm,流速1ml/min,柱温为室温.结果当丹皮酚的浓度在25.4O～250.40"g/ml范围时,其峰面积与浓度的线性关系良好(r一0.9999);平均回收率100.2,RSD=2.5.结论该方法准确,可靠,可作为牡丹皮药材或舍有牡丹皮的中成药建立对丹皮酚含量测定方法时应用.【关键词】反相高效液相色谱法内标法牡丹皮丹皮酚牡丹皮为毛莨科植物牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr)的干燥根皮,具有清热凉血,活血化瘀的作用,是一种常用的传统中药[1_].丹皮酚(paeono1)是牡丹皮中的最主要有效成分,现代药理研究表明具有抗动脉粥样硬化,加强对缺血组织的保护,促进微循环,增强免疫力,抗肿瘤,抗菌以及抑制皮肤色素生成等多种药理作用,现已被广泛应用于心绞痛,冠心病以及湿疹,荨麻疹,牛皮癣,银屑病等多种常见的皮肤疾病的治疗,疗效确切l2】.为了提高中药牡丹皮及其制剂质量控制的技术和水平,本文首次以醋酸地塞米松为内标测定了牡丹皮药材中的丹皮酚含量.1材料与方法1.1仪器与试药Shimadzu高效液相色谱仪(IC一10ATVP液相泵,SPD一10AVP紫外检测器),N2010色谱工作站.丹皮酚,醋酸地塞米松对照品由中国药品生物制品检定所提供,牡丹皮药材为市售,流动相所用甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯,实验用水为二次重蒸水.1.2方法1.2.1色谱条件色谱柱:Welchrom—C18(4.6mm×250 mm,5"m)由上海月旭公司提供;流动相:甲醇一1冰醋酸(45:55);检测波长:254rim;流速:1ml/min;柱温:室温;进样量:10/,1.1.2.2溶液配制1.2.2.1内标溶液精密称取醋酸地塞米松适量,加流动相配制成0.988mg/ml的溶液,作为内标储备液.1.2.2.2对照品溶液精密称取丹皮酚对照品适量,加流动相配制成0.508mg/ml的溶液,作为对照品储备液.精密吸取1ml置10ml量瓶中,加内标溶液1ml,用流动相定容,即得对照溶液.1.2.2.3牡丹皮供试品溶液取牡丹皮粗粉1.5g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇5On1l,密塞,摇匀,称定重量,超声处理1.5h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液1ml,置1oml容量瓶中,加内标溶液1ml,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得.1.2.3系统适应性试验取上述对照品,牡丹皮药材溶液,照1.2.1项下的色谱条件注入高效液相色谱仪,记录色谱图, 作者单位:齐齐哈尔医学院:邮编161006收稿日期2008 (1219)315见图1.从图中可见,牡丹皮药材中无特殊干扰成分存在,主峰位置与对照品的色谱图基本一致.i尺i.1^/\』UL04812160481216A.对照品;B.牡丹皮药材;1.丹皮酚;2.醋酸地塞米松图1高效液相色谱图1.2.4校正因子测定取1.2.2.2项下的对照品溶液注入高效液相色谱仪,平行测定5次,按校正因子计算公式计算校正因子为0.5451,RSD为0.2.1.2.5线性试验分别取2.2.2项下对照品储备液0.5,1,2,3,4,5ml于10ml量瓶,各加内标溶液1ml,加入流动相稀释成浓度分别为25.4O,5O.80,100.16,】5O.24,200.32,250. 40>g/ml的系列溶液,进样.以丹皮酚峰面积与醋酸地塞米松峰面积的比值作为纵坐标(A),以丹皮酚浓度(/,g/m1)为横坐标(c)绘制标准曲线,进行回归计算,得回归方程:A一0. 01860C--0.0051,r一0.9999,结果表明丹皮酚在25.4O～250.40~g/ml浓度范围内线性关系良好.1.2.6回收率试验取已知含量的同批样品6份,分别加入对照品适量,按样品溶液制备项下制备,测定含量,计算回收率和RSD,结果见表】.从表中可以看出,各组平均回收率为】0O.2,RSD为2.5(一6),表明本方法有良好的回收率.表1回收率试验结果("一_6)】.2.7精密度试验取1.2.2.2项下对照品溶液1O,l注入高效液相色谱仪,连续测定6次,计算RSD为0.4,表明本法精密度较好.1.2.8重复性试验照2.2.3项下方法制备牡丹皮样品溶液5份,各取1Ol注入高效液相色谱仪,计算RSD为1.5%, 表明本法重复性较好.316JournalofQiqiharMedicalCollege,2009,V o1.30,No.3预防医学?2002~2006年烧伤感染创面菌群分布及其药物敏感性分析钟书强朴宏鹰于景臣【摘要】分析烧伤感染创面菌群分布及细菌耐药性变迁,针对我院烧伤病人创面分泌物作细菌培养与鉴定,同时进行体外药物敏感试验,本文对我院2002～2006年间收住的250例住院病人烧伤创面进行了细菌学检验及抗茵药物敏感性分析.【关键词】烧伤感染耐药敏感性烧伤后创面及全身感染是病人致死的主要原因,控制感染是烧伤治疗过程中极其重要的环节.近年来,由于新型抗菌药物的广泛使用,耐药菌株不断增加,创面菌种分布及细菌对抗菌药物的敏感性亦发生了很大变化.1材料与方法1.1临床资料2002～2006年间Ⅱ,Ⅲ.烧伤3O以上住院病人250例,其中男150例,女100例;年龄最大67岁,最小1岁,平均32.1岁;烧伤面积平均52.5,Ⅲ.烧伤面积平均25.2%.1.2检测方法所有病人均分别于住院不同阶段用无菌棉拭子在创面采集标本,应用美国BD公司BACTEC912细菌培养仪做细菌培养,同时用该公司autosecptor全自动细菌鉴定仪及相配套的反应板做细菌鉴定和药敏试验,共选用抗生素22种.2结果2.1烧伤创面感染茵的菌种分布及变化2.1.1菌群检出情况送检标本700份,阳性生长572株(81.7),共计21种菌种,菌群分布见表1.2.1.2主要分离菌种构成变化1998～2002年间,我院烧伤住院病人创面主要分离菌种包括金黄色葡萄球菌,铜绿假单孢菌,大肠埃氏菌,粪链球菌,克雷伯氏菌及念株菌等,五年来上述分离菌种的构成比发生了明显的变化.2.2药敏情况在进行创面细菌培养和菌种鉴定的同时,先后选用22种抗菌药物作体外药敏试验及耐药菌株筛查.结果发现,病原菌对临床常用药物的敏感性发生了显着变化,耐药菌株亦不断增加,其中MRSA占94.7,大肠埃希氏菌及作者单位:黑龙江省大庆市油田总医院烧伤整形科邮编163000收稿日期2008—11—12肺炎克雷伯菌ESBIS阳性菌株出现率分别为18.95及27. 4.革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌主要分离菌种对临床常用药物的敏感性见表2～3.表1572株烧伤创面分离菌的菌群分布3讨论3.1菌种分布变化近五年来,烧伤创面感染的类型和感染细菌的均有明显的变化.本文资料显示的烧伤创面感染菌共21菌种572株中,革兰阳性球菌245株,占42.8;革兰阴性杆菌249株,占43.5,两者大致持平,与此前曹国洲等报道的革兰阳性球菌占31.7的结果相比,革兰阳性球菌在烧伤创面分离菌种中的构成比有了明显上升.金黄色葡萄球菌为各分离菌之首,占33.7,已经超过了铜绿假单孢菌,且有逐年上升的趋势;铜绿假单孢菌居第二位,占18.7.造成上述结果的原因可能与近年来广泛使用对铜绿单孢等革兰阴性杆菌相对敏感的第三代头孢及碳青霉烯类抗生素有关,同时,也反映出临床对烧伤后期残余创面处理的重视,此时创面1.2.9稳定性试验照1.2.2.3项下方法制备牡丹皮样品溶液1份,在0,2,4,6,8,1O,24h进样,计算RSD为2.0,表明样品溶液在24h内稳定.2样品测定精密量取按"1.2.2.3"项下制备的三批供试品溶液和"1.2.2.2"项下制备的对照品溶液各10.0l,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定,内标法计算三批牡丹皮样品中丹皮酚含量,依次为1.51,1.42,1.42.3讨论3.1以上RP—HPIC法应用醋酸地塞米松为内标对丹皮酚进行含量测定,准确度较高,重现性好.本研究在国内尚属首次,未见其他文献报道.3.2通过扫描丹皮酚和醋酸地塞米松的紫外吸收光谱,二者最大吸收波长分别为274nm和240nm,经过反复试验,最后确定以254nm作为本法的检测波长.参考文献El3中国药典EM3.05版.北京:化学工业出版社,2005:119E23孙言才,沈玉先,孙国平.丹皮酚的主要药理活性研究进展EJ3. 中成药,2004,26(7):579—582。

牡丹皮中丹皮酚的测定方法综述摘要：本文主要对丹皮中丹皮酚的测定方法进行详细综述。

牡丹皮中含有的丹皮酚具有镇痛、消炎、抗菌等作用，对现代医药研究与应用有着重大意义。

随着中药现代化的进展,对中药有效成分的分离提取、含量测定已成为新的热点课题。

关键词：牡丹皮丹皮酚定性和含量测定牡丹皮为毛茛科植物牡丹的干燥根皮, 有清热凉血、活血化瘀的作用。

用于湿热发斑、吐血衄血、夜热早凉,经闭痛经、痈肿疮毒、跌打伤痛等。

其主要有效成分为丹皮酚[1]。

丹皮酚又名牡丹酚、芍药酚,化学名为“2-羟基-4-甲氧基苯乙酮”，为白色或微黄色有光泽的针状结晶，无色针状结晶（乙醇），熔点49℃-51℃，气味特殊，味微辣，易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，在热水中溶解，不溶于冷水，能随水蒸汽挥发。

丹皮酚可随水蒸气蒸馏，且在紫外光区有强烈吸收，在274nm波长处E（1% 1cm）为862，利用此性质可用紫外分光光度计进行测定。

现代药理研究证明丹皮酚具有抗炎、镇静、降压、抗氧化、保护心肌细胞及抑制血小板凝集等作用。

丹皮酚的含量高低是作为衡量牡丹皮品质优劣的一种重要指标，其含量的高低直接影响药品的疗效。

目前，丹皮酚的定性含量测定有高效液相色谱法（HPLC）、分光光度法、薄层扫描法等。

以下是对薄层扫描法，高效液相色谱法（HPLC）的简要介绍。

一、丹皮酚提取分离方法1.蒸馏－煎煮法蒸馏-煎煮法蒸馏－煎煮法蒸馏-煎煮法是指先蒸馏提取挥发性成分，药渣再加水提取的方法，适用于含挥发性成分药材的提取。

丹皮酚随蒸气馏出后，在冷藏状态下大量析出，滤过干燥即可用于成型，保存方便且转移率较高[2]，但其提取率远低于醇提法[3]；提取过程中选择适宜的pH范围使丹皮酚溶解，并确保溶液贮存过程中的稳定已成为丹皮酚提取液体制备过程中的关键，在蒸馏过程中可以加盐、先加碱后加酸等提高提取率，研究认为加盐蒸馏法是丹皮酚提取的最优方法；为了提高其在水中溶解度，通常采用有机溶剂、助溶剂、表面活性剂等途径来解决问题，有文献报道将其制成β-环糊精包合物来提高其稳定性和生物利用度，能降低其挥发性，增加其溶解度[4]2 醇提法醇提法以无水乙醇为溶剂，40℃温度下回流提取，即可将丹皮酚提取出来。

高效液相色谱法测定牡丹皮丹皮酚的含量一、目的与要求1.掌握高效液相色谱法测定含量的原理与应用。

2.了解高效液相色谱在中药分析中的应用。

二、实验原理1.理论塔板数和理论塔板高度是色谱柱效的参数，而分离度是色谱的分离参数，是从色谱峰判断相邻二组分在色谱柱中总分离效能的指标，用R表示，均是衡量色谱柱效能的重要参数。

理论塔板数（n）：n=5.54（tR ／W1／2）2=16（tR／W）2理论塔板高度（H）：H= n／L分离度的计算R R=2（tRA - tRB）／1.699（W1／2A+ W1／2B）2.外表一点法三、仪器与试剂1、仪器液相色谱仪（紫外检测器），微量注射器，C18反相色谱柱，移液管（2ml），具塞锥形瓶，电子分析天平，超声提取器2、试剂甲醇（色谱纯），重蒸馏水3、试药牡丹皮药材，丹皮酚对照品四、实验内容与步骤1.色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（45:55）为流动相；检测波长为274nm；流速为1．0 ml/min；理论塔板数按丹皮酚峰计算应该不低于5000，分离度>1．5。

2.对照品溶液的制备去丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

3.供试品溶液的制备取牡丹皮粉末约0.5g。

精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml,密塞，称重定量，超声处理（功率300W，频率50kHz）30min，放冷，在称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，虑过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。

4.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μg，注入液相色谱仪，测定。

五、注意事项开机时先打开工作站，排气泡后再连接泵，最后连接检测器，关闭顺序与开机相反。

六、数据处理按干燥品计算，含丹皮酚不得少于1.2%。

丹皮酚的含量测定及其分析方法的验证李超中药学 2015201225004摘要：丹皮酚是常用中药牡丹皮、徐长卿、芍药等中药中的主要挥发性成分之一，是衡量牡丹皮、徐长卿等中药材及其组方的多种制剂质量控制的重要指标。

为评价丹皮酚药材及其复方制剂的质量，人们对丹皮酚的测定方法进行了许多研究。

该文就丹皮酚的含量测定及分析方法进行了评述与探讨。

关键词：丹皮酚；含量测定；分析方法丹皮酚(paeonol)为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的根皮及萝摩科植物徐长卿Cynanchum paniculatum(Bunge)Kitagawa.的根或全草中的挥发性成分之一。

为小分子酚类化合物，白色或微黄色有光泽的针状结晶，化学名称为2-轻基-4-甲氧基苯乙酮（如图1，分子式为C9H10O3；分子量166.18）。

气味微辣，极性较低，熔点49℃-51℃，易溶于乙醇和甲醇，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，不溶于冷水，在热水中可溶解，能随水蒸气挥发[1]。

丹皮酚味苦、辛，丹皮酚具有抗心律失常、抗动脉粥样硬化、抗血栓形成、扩张管、降血压、降血糖等，还具有抗炎、抗菌抗病毒及调节免疫功能等作用[2]。

丹皮酚是衡量牡丹皮、徐长卿等中药材及以其组方的多种制剂质量控制的重要指标。

2015版药典规定牡丹皮按干燥品计算，含丹皮酚不得少于1.2%，徐长卿按干燥品计算，含丹皮酚不得少于 1.3%[3]。

为评价含丹皮酚药材及其复方制剂的质量，人们对丹皮酚的测定方法进行了许多研究。

本文就丹皮酚的含量测定的分析方法作一概述。

1薄层扫描法薄层扫描法准确、灵敏，重现性好，专属性强，可作为其质量控制标准。

章睿[4]等以丹皮酚为对照品，建立了牡丹皮药材及其饮片的薄层扫描特征图谱，该方法简便、设备价廉、分析速度快等，易于使用，尤其适合对大批原料药材进行分析。

宋飞[5]用硅胶G薄层板以双波长薄层扫描测定六味地黄丸中丹皮酚含量，展开剂为环乙烷:氯仿:无水乙醇(7：3：1),显色剂为5%酸性FeCl3,扫描条件为λs =400nm,λR=700nm,反射法锯齿扫描精密度试验结果平均值为16926.6,RSD=2.8%(n=6)；稳定性实验结果表明在1h内稳定。

丹皮酚的含量测定及其分析方法的验证李超中药学 2015201225004摘要：丹皮酚是常用中药牡丹皮、徐长卿、芍药等中药中的主要挥发性成分之一，是衡量牡丹皮、徐长卿等中药材及其组方的多种制剂质量控制的重要指标。

为评价丹皮酚药材及其复方制剂的质量，人们对丹皮酚的测定方法进行了许多研究。

该文就丹皮酚的含量测定及分析方法进行了评述与探讨。

关键词：丹皮酚；含量测定；分析方法丹皮酚(paeonol)为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的根皮及萝摩科植物徐长卿Cynanchum paniculatum(Bunge)Kitagawa.的根或全草中的挥发性成分之一。

为小分子酚类化合物，白色或微黄色有光泽的针状结晶，化学名称为2-轻基-4-甲氧基苯乙酮（如图1，分子式为C9H10O3；分子量166.18）。

气味微辣，极性较低，熔点49℃-51℃，易溶于乙醇和甲醇，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，不溶于冷水，在热水中可溶解，能随水蒸气挥发[1]。

丹皮酚味苦、辛，丹皮酚具有抗心律失常、抗动脉粥样硬化、抗血栓形成、扩张管、降血压、降血糖等，还具有抗炎、抗菌抗病毒及调节免疫功能等作用[2]。

丹皮酚是衡量牡丹皮、徐长卿等中药材及以其组方的多种制剂质量控制的重要指标。

2015版药典规定牡丹皮按干燥品计算，含丹皮酚不得少于1.2%，徐长卿按干燥品计算，含丹皮酚不得少于 1.3%[3]。

为评价含丹皮酚药材及其复方制剂的质量，人们对丹皮酚的测定方法进行了许多研究。

本文就丹皮酚的含量测定的分析方法作一概述。

1薄层扫描法薄层扫描法准确、灵敏，重现性好，专属性强，可作为其质量控制标准。

章睿[4]等以丹皮酚为对照品，建立了牡丹皮药材及其饮片的薄层扫描特征图谱，该方法简便、设备价廉、分析速度快等，易于使用，尤其适合对大批原料药材进行分析。

宋飞[5]用硅胶G薄层板以双波长薄层扫描测定六味地黄丸中丹皮酚含量，展开剂为环乙烷:氯仿:无水乙醇(7：3：1),显色剂为5%酸性FeCl3,扫描条件为λs =400nm,λR=700nm,反射法锯齿扫描精密度试验结果平均值为16926.6,RSD=2.8%(n=6)；稳定性实验结果表明在1h内稳定。

丹皮酚的含量测定及其分析方法的验证李超中药学 2015201225004摘要：丹皮酚是常用中药牡丹皮、徐长卿、芍药等中药中的主要挥发性成分之一，是衡量牡丹皮、徐长卿等中药材及其组方的多种制剂质量控制的重要指标。

为评价丹皮酚药材及其复方制剂的质量，人们对丹皮酚的测定方法进行了许多研究。

该文就丹皮酚的含量测定及分析方法进行了评述与探讨。

关键词：丹皮酚；含量测定；分析方法丹皮酚(paeonol)为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的根皮及萝摩科植物徐长卿Cynanchum paniculatum(Bunge)Kitagawa.的根或全草中的挥发性成分之一。

为小分子酚类化合物，白色或微黄色有光泽的针状结晶，化学名称为2-轻基-4-甲氧基苯乙酮（如图1，分子式为C9H10O3；分子量166.18）。

气味微辣，极性较低，熔点49℃-51℃，易溶于乙醇和甲醇，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，不溶于冷水，在热水中可溶解，能随水蒸气挥发[1]。

丹皮酚味苦、辛，丹皮酚具有抗心律失常、抗动脉粥样硬化、抗血栓形成、扩张管、降血压、降血糖等，还具有抗炎、抗菌抗病毒及调节免疫功能等作用[2]。

丹皮酚是衡量牡丹皮、徐长卿等中药材及以其组方的多种制剂质量控制的重要指标。

2015版药典规定牡丹皮按干燥品计算，含丹皮酚不得少于1.2%，徐长卿按干燥品计算，含丹皮酚不得少于 1.3%[3]。

为评价含丹皮酚药材及其复方制剂的质量，人们对丹皮酚的测定方法进行了许多研究。

本文就丹皮酚的含量测定的分析方法作一概述。

1薄层扫描法薄层扫描法准确、灵敏，重现性好，专属性强，可作为其质量控制标准。

章睿[4]等以丹皮酚为对照品，建立了牡丹皮药材及其饮片的薄层扫描特征图谱，该方法简便、设备价廉、分析速度快等，易于使用，尤其适合对大批原料药材进行分析。

宋飞[5]用硅胶G薄层板以双波长薄层扫描测定六味地黄丸中丹皮酚含量，展开剂为环乙烷:氯仿:无水乙醇(7：3：1),显色剂为5%酸性FeCl3,扫描条件为λs =400nm,λR=700nm,反射法锯齿扫描精密度试验结果平均值为16926.6,RSD=2.8%(n=6)；稳定性实验结果表明在1h内稳定。