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高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量摘要：在医学领域当中，孢氨苄胶囊属于一种半合成的抗生素，在临床治疗过程中具有突出的疗效，由于其具有良好的稳定性，而且内部不含有过多的毒性成分，在治疗过程中，病人也不会有副作用产生，因此得到了广泛的应用，该药品蛋白结合率较低，可以稳定葡萄球菌产生的青霉素酶，同时可以忍受革兰氏阳性菌产生的内酰胺酶。
以往经常使用碘量法测量药品的成分，但该方法操作繁琐，而且费时费力，检验过程中容易受到外在因素的影响，因此在药品检测过程中很少使用这种方法，而是使用高效液相色谱法。
关键词：高效液相色谱法；头孢氨苄胶囊；药品检测复方头孢氨苄胶囊主要有头孢氨苄和甲氧苄啶两种成分组成，由于该药品是通过化学加工过的方式制成，因此传统方法在检验的过程中会受到外在因素的影响。
头孢氨苄和甲氧苄啶共同使用可以起到断细菌在生长繁殖的作用而且可具有良好的抗菌作用，其抗菌性能要远远优于头孢氨苄。
为了能够了解该药品内部组成结构以及详细成分，本文采用高效液相色谱法，以乙酰苯胺为内标测定其含量，这种检测方法不仅操作便捷，检测结果的准确性能够得到保证，而且可以对其进行重复检测。
1仪器与试药1.1仪器由于该药品属于化学产物，仅仅依靠人力无法分辨其内部成分，因此必须使用相关的检测仪器才能够保证检测结果的准确性，常用的检测仪器有DIONEX P680AISO型高效液相色谱仪、UVD17OU型HPLC检测器、XS 225A分析天平。
除了检测仪器之外，还需要用到一些试剂以及药品，例如色谱纯，分析过程中用到的甲醇以及双蒸水，为了保证检测结果具有说服力，因此需要选取某些药物作为对照品，最后需要头孢氨苄胶囊，以上所述的药品以及检测器械其规格和质量必须与有关机构指定的标准相符合。
2方法与结果2.1色谱条件与系统适应性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂水-甲醇-3.85%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500；2.2对照品储备液的制备根据检测要求，选取适量的头孢氨苄对照液，记录其重量放置于专门的容器当中，向其中加入流动液体，达到稀释对照液的目的，摇匀，将稀释过后的对照液储存起来。
实验一差示分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量一、目的要求1.掌握差示分光光度法消除复方制剂干扰组分的原理。
2.熟悉差示分光光度法的基本测定方法。
二、基本原理差示分光光度法（简称ΔA法）是利用在两种不同pH介质中或经适当的化学反应后，供试品中待测组分发生了特征性的光谱变化，而干扰组分不受这些变化的影响，光谱行为不发生改变。
取两份相等的供试溶液，用两种不同pH的介质处理或经适当化学反应后，稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一分置参比池中，由于样品池和参比池中干扰物浓度相等，因此干扰物吸收度的差值为零（即ΔA＝0），供试溶液的吸收度差值（ΔA值）只与被测物浓度成正比，从而消除了干扰。
可以用标准曲线法或标准对比法计算出待测组分的含量。
分光光度法既保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无须事先分离，并能消除干扰。
复方头孢氨苄胶囊由头孢氨苄与甲氧苄啶组成，在酸性溶液和碱性溶液中，甲氧苄啶的紫外吸收光谱发生改变，而头孢氨苄的吸收光谱基本不变，因此不经分离可用差示分光光度法直接测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量。
三、仪器与试剂紫外－可见分光光度计，50mL量瓶，100mL量瓶；甲氧苄啶对照品，头孢氨苄对照品，复方头孢氨苄胶囊，醋酸，0.01mol/L氢氧化钠液。
四、操作步骤1. 对照品溶液的配制分别取甲氧苄啶对照品约25mg ，头孢氨苄对照品约125mg ，精密称定，分别置于50mL 量瓶中，加稀醋酸2mL 溶解后加水稀释至刻度，摇匀，各精密吸取5mL ，2份，分别置于100mL 量瓶中，一份用水稀释至刻度，另一份用0.01mol ／L 氢氧化钠稀释至刻度。
2. 差示吸收曲线的绘制将两种不同介质的头孢氨苄溶液和甲氧苄啶溶液分别以相应 为空白，在200～350nm 波长范围扫描，绘制吸收光谱。
将上述用水稀释的对照品溶液置于参比池中，用0.01mol/L 氢氧化钠稀释的溶液置样品池中，绘制甲氧苄啶和头孢氨苄的差示光谱。
实验一差示分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量一、目的要求1.掌握差示分光光度法消除复方制剂干扰组分的原理。
2.熟悉差示分光光度法的基本测定方法。
二、基本原理差示分光光度法（简称ΔA法）是利用在两种不同pH介质中或经适当的化学反应后，供试品中待测组分发生了特征性的光谱变化，而干扰组分不受这些变化的影响，光谱行为不发生改变。
取两份相等的供试溶液，用两种不同pH的介质处理或经适当化学反应后，稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一分置参比池中，由于样品池和参比池中干扰物浓度相等，因此干扰物吸收度的差值为零（即ΔA＝0），供试溶液的吸收度差值（ΔA值）只与被测物浓度成正比，从而消除了干扰。
可以用标准曲线法或标准对比法计算出待测组分的含量。
分光光度法既保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无须事先分离，并能消除干扰。
复方头孢氨苄胶囊由头孢氨苄与甲氧苄啶组成，在酸性溶液和碱性溶液中，甲氧苄啶的紫外吸收光谱发生改变，而头孢氨苄的吸收光谱基本不变，因此不经分离可用差示分光光度法直接测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量。
三、仪器与试剂紫外－可见分光光度计，50mL量瓶，100mL量瓶；甲氧苄啶对照品，头孢氨苄对照品，复方头孢氨苄胶囊，醋酸，0.01mol/L氢氧化钠液。
四、操作步骤1. 对照品溶液的配制分别取甲氧苄啶对照品约25mg ，头孢氨苄对照品约125mg ，精密称定，分别置于50mL 量瓶中，加稀醋酸2mL 溶解后加水稀释至刻度，摇匀，各精密吸取5mL ，2份，分别置于100mL 量瓶中，一份用水稀释至刻度，另一份用0.01mol ／L 氢氧化钠稀释至刻度。
2. 差示吸收曲线的绘制将两种不同介质的头孢氨苄溶液和甲氧苄啶溶液分别以相应 为空白，在200～350nm 波长范围扫描，绘制吸收光谱。
将上述用水稀释的对照品溶液置于参比池中，用0.01mol/L 氢氧化钠稀释的溶液置样品池中，绘制甲氧苄啶和头孢氨苄的差示光谱。
第一作者简介：唐秋菊，工程师；研究方向：药物质量。
Ｔｅｌ：１３６５８３７２２８５：Ｅ ｍａｉｌ：９８０６３６２１７＠ｑｑ ｃｏｍＨＰＬＣ法测定头孢氨苄胶囊杂质Ｆ的研究唐秋菊，夏晟（重庆科瑞制药（集团）有限公司，重庆４０００００）摘要 目的：建立测定头孢氨苄胶囊中杂质Δ２ 头孢氨苄（杂质Ｆ）含量的方法。
方法：采用ＨＰＬＣ法，色谱条件为：采用手性柱ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＲＡＤ Ｈ柱；以０ ７８％磷酸二氢钠溶液（７ ８ｇ磷酸二氢钠溶于１Ｌ水中，用磷酸调ｐＨ至４ ０）为流动相Ａ和０ ７８％磷酸二氢钠（ｐＨ４ ０） 乙腈＝５５∶４５为流动相Ｂ；采用梯度洗脱，流速为１ ０ｍＬ·ｍｉｎ－１；于２２０ｎｍ处检测。
结果：头孢氨苄和杂质Ｆ在此条件下分离度良好，分离度大于１０ ０。
结论：经方法学验证，本法可用于对头孢氨苄原料及胶囊中杂质Ｆ的质量控制。
关键词：ＨＰＬＣ；头孢氨苄；手性；杂质；质量中图分类号：Ｒ９２１ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－３６５６（２０２０）－２－０１２４－６ｄｏｉ：１０ １９７７８／ｊ ｃｈｐ ２０２０ ０２ ００７ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｉｍｐｕｒｉｔｙＦｉｎＣｅｆａｌｅｘｉｎＣａｐｓｕｌｅｓｂｙＨＰＬＣＴＡＮＧＱｉｕｊｕ，ＸＩＡＳｈｅｎｇ（ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＫｅｒｕｉＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ ，Ｌｔｄ ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆΔ２ ｃｅｆａｌｅｘｉｎ（ｉｍｐｕｒｉｔｙＦ）ｉｎＣｅｆａｌｅｘｉｎＣａｐｓｕｌｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｔｅｓｔｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎａＣＨＩＲＡＬＰＡＫＲＡＤ Ｈｃｏｌｕｍｎ ０ ７８％ｓｏｄｉｕｍｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓ ｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ（ｄｉｓｓｏｌｖｅ７ ８ｇｓｏｄｉｕｍｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔｅｗｉｔｈ１Ｌｗａｔｅｒ，ｔｈｅｎａｄｊｕｓｔｐＨａｓ４ ０ｗｉｔｈｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ）ｗａｓｕｓｅｄａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＡ，ａｎｄ０ ７８％ｓｏｄｉｕｍｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ｐＨ４ ０） ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（５５∶４５）ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＢ Ｔｈｅｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅｗａｓｕｓｅｄ Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１ ０ｍＬ·ｍｉｎ－１，ａｎｄｔｈｅＵＶｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓａｔ２２０ｎｍ Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＣｅｆａｌｅｘｉｎａｎｄｉｍｐｕｒｉｔｙＦｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｗｅｌｌｕｎｄｅｒｔｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓｍｏｒｅｔｈａｎ１０ ０ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙｖａｌｉｄａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｅｓ ｔａｂｌｉｓｈｅｄｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌｏｆｉｍｐｕｒｉｔｙＦｉｎｄｒｕｇｓｕｂｓｔａｎｃｅｃｅｆａｌｅｘｉｎａｎｄＣｅｆａｌｅｘｉｎＣａｐｓｕｌｅｓ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ｃｅｆａｌｅｘｉｎ；ｃｈｉｒａｌｉｔｙ；ｉｍｐｕｒｉｔｙ；ｑｕａｌｉｔｙ 头孢氨苄（Ｃｅｆａｌｅｘｉｎ）为β 内酰胺类抗生素。
HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度评定目的：对HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度进行分析和评定。
方法：取适量头孢氨苄制成溶液，将其作为本次研究对照品；与此同时，取适量头孢氨苄胶囊（巢湖中辰药业有限公司，国药准字：H34021123）制成溶液，将其作为本次研究观察品。
样本制备完成后，建立HPLC法测定数学模型，根据数学模型寻找影响不确定度的因素并对相关不确定度分量进行评定。
结果：通过对各分量的相对标准不确定度进行分析后可以得出，HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的合成不确定度以及扩展不确定度（P=95%，K=2）。
结论：本次研究所建立的不确定度计算方法在测定HPLC法判断头孢氨苄胶囊含量的不确定度的效果方面有较高使用价值，值得推广。
标签：HPLC法；头孢氨苄胶囊；不确定度；评定头孢氨苄胶囊属于抗生素复方制剂的一种，常被临床用于耐青霉素的葡萄球菌、链球菌等感染的治疗[1]。
在对头孢氨节胶囊的质量和临床治疗效果进行评价时，对其含量的测定是前提和关键，大量研究叼证实，头孢氨苄胶囊含量测定准确性的高低，不仅将直接影响到药品质量的评定，同时还将直接关系到患者用药安全性的高低。
基于此，本文以相关文献为参考，对HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量过程中的相关不确定因素进行了分析和合成，以评定其含量的不确定度。
现报告如下。
1 方法制备对照品溶液：将适量（24-25mg）的头孢氨苄（中国药品生物制品检定所提供，批号：1300408-200209，纯度：94.2%）放置在容量为25mL的量瓶中，静置片刻后，将适量流动相（水-3.86%醋酸钠溶液一甲醇一4%醋酸溶液，比例分别为742：15：240：3）加入量瓶之中，然后对量瓶内液体进行超声处理，时长控制在5-8min之间，至液体溶解且全部混合均匀即可；将溶解完成的量瓶于室温内放置保存，与此同时，在其中加入适量流动相至液体稀释至刻度，摇匀；从量瓶中精密量取10mL溶液至容量为50mL的量瓶之中，继续加入适量流动相稀释至刻度，摇匀，制备完成。
实验十四 头孢氨苄胶囊的含量测定
一．实验目的：
1、掌握高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊含量的原理及操作技术
2、熟悉外标法计算药物含量的方法及结果判断
3、了解高效液相色谱法在药物定量分析中的应用 二．实验原理：
《中国药典》现行版采用外标法测定头孢氨苄胶囊的含量。
标示量（%）%100⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯=
-
S
m A W
D V A C R X R
本品含头孢氨苄应为标示量的90.0%~110.0% 三．实验仪器和试剂 1. 仪器
高效液相色谱仪、分析天平、量瓶、滤纸、漏斗、移液管、10微升进样器、铁架台、 2. 试剂
色谱纯甲醇、醋酸、醋酸钠 四、实验内容
取本品10粒，精密称定，除去内容物后，精密称定胶囊壳的重量，计算平均装量。
取内容物混合均匀，精密称取适量（约相当于头孢氨苄0.1g ），置100ml 量瓶中，加流动相适量，充分振摇，使头孢氨苄溶解，再加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml ，置50ml 量瓶中，再加流动相稀释至刻度，摇匀，取10微升注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密量取头孢氨苄对照品适量（约0.1g ），同法测定。
按外标法以峰面积计算供试品头孢氨苄标示量的百分含量。
五、结果与分析
六、注意事项
1. 流动相及试液均应脱气和过滤。
2. 对照品溶液与供试品溶液每份至少重复进样2次，有全部结果求得平均值，RSD一般不应大于1.5%。
七、思考题
1. 头孢菌素类抗生素除用高效液相色谱法测定含量外，还可用其他哪些方法？各方法有何优缺点。
2. 简述外标法定量的原理、方法及特点。
