实验九血清肌酐的测定(碱性苦味酸法)

一、实验目的1. 了解肌酐测定的原理和方法。

2. 掌握肌酐测定的操作步骤。

3. 学会使用肌酐测定试剂盒，并对其结果进行分析。

二、实验原理肌酐是人体肌肉代谢的终产物，主要由外源性和内源性两种组成。

外源性肌酐主要来源于食物中的肉类，内源性肌酐则是由人体肌肉代谢产生。

在正常情况下，肌酐主要通过肾脏滤过排出体外。

因此，通过测定血液或尿液中肌酐的浓度，可以评估肾脏的滤过功能。

本实验采用肌酐测定试剂盒，通过碱性苦味酸终点比色法测定血清肌酐浓度。

三、实验材料1. 肌酐测定试剂盒2. 血清样品3. 移液器4. 一次性吸管5. 比色皿6. 移液器吸头7. 混匀器8. 水浴锅9. 移液器吸头10. 洗耳球11. 计时器四、实验步骤1. 标准曲线的制备（1）取6个比色皿，分别加入不同浓度的肌酐标准溶液。

（2）在每个比色皿中加入适量的肌酐测定试剂A和B，混匀。

（3）将比色皿放入水浴锅中，加热至50℃恒温反应10分钟。

（4）取出比色皿，用洗耳球吹洗内壁，使其充分混合。

（5）用移液器取标准溶液和样品，分别加入比色皿中，混匀。

（6）用移液器将样品转移到比色皿中，立即放入比色仪中测定吸光度。

2. 样品测定（1）取3个比色皿，分别加入血清样品、试剂A和B，混匀。

（2）将比色皿放入水浴锅中，加热至50℃恒温反应10分钟。

（3）取出比色皿，用洗耳球吹洗内壁，使其充分混合。

（4）用移液器取样品，分别加入比色皿中，混匀。

（5）用移液器将样品转移到比色皿中，立即放入比色仪中测定吸光度。

3. 结果计算根据标准曲线，将样品的吸光度对应到肌酐浓度，即可得到样品的肌酐浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线的制备根据实验数据，绘制标准曲线，得出线性方程：Y = 0.0162X - 0.0178（R² = 0.9989）2. 样品测定通过测定样品的吸光度，根据标准曲线计算得出样品的肌酐浓度为XX mg/dL。

六、实验结论本实验通过碱性苦味酸终点比色法测定血清肌酐浓度，操作简便，结果准确。

碱性苦味酸法测定血清肌酐试剂的配制
张洪波
【期刊名称】《武汉市职工医学院学报》
【年(卷),期】2001(029)004
【摘要】目的：配制直接测定血清肌酐的试剂碱性苦味酸，使得方法简单，结果可靠。

方法：改变氢氧化钠与苦味酸的浓度及配比，采用固定时间法测定。

结果：一法测定两种批号RANDOX质控血清与其靶值比较P＞0．05，精密度批内分别是CV＝3．4％和2．7％，批间分别是CV＝3．96％和3．34％。

本法与除蛋白滤液法，上海试剂（速率法）测定100份血清结果分别是
113±71μmol/L,110±70μmol/L,115±64μmol/L,P>0.05。

结论：本法准确度，精密度，回收率，线性均良好。

【总页数】2页(P12-13)
【作者】张洪波
【作者单位】江汉大学附属医院检验科，湖北武汉430015
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11
【相关文献】
1.同位素稀释质谱法、酶法和碱性苦味酸法测定血清肌酐方法比较 [J], 宋云霄;欧美贤;李水军;张海晨;余琛
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4.确定碱性苦味酸法测定血清肌酐的时间 [J], 王宏坤;韩丽红;智胜利
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血清肌酐（Creatine）苦味酸法测定1.实验原理不去除蛋白的Jaffe碱性苦味酸连续监测比色法。

肌酐与苦味酸在碱性条件下形成橙红色复合物，在固定的时间内吸光度增加速率与样品中肌酐浓度呈正比。

肌酐+ 苦味酸肌酐苦味酸复合物2. 标本采集2.1 病人准备：早晨空腹采血（空腹12小时左右），静脉采血。

2.2 类型：血清，肝素血浆，尿液。

3. 标本存放：血清、血浆的稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存至少可稳定3个月。

尿液的稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定6天；-20℃保存可稳定6个月对尿液用蒸馏水作1:49稀释后检测，结果乘50后报告。

4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收的标准：细菌污染的标本不能作测定。

6. 实验材料6.1 上海申能肌酐检测试剂盒（142 1717170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml）。

6.1.1 试剂组成：试剂1（R1）：氢氧化钠0.16mol/L试剂2（R2）：苦味酸 4.0mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：试剂1中含氢氧化钠。

请按以下条例处理：R36/38: 刺激眼睛和皮肤。

S26:如与眼睛接触应立即用大量水冲洗并请医生诊视。

S37/39:戴上手套并采取合适的眼/脸的防护。

S45:如发生事故或感觉不适立即请医生诊视。

试剂2中含苦味酸。

吸入、接触皮肤、吞咽将会中毒。

戴上手套并采取合适的眼/脸的防护。

如与皮肤接触应立即用聚乙二醇400（DAB8）或大量水冲洗。

如情况严重，立即请医生诊视。

使用实验室试剂应采取必要的预防。

6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

肌氨酸氧化酶法与碱性苦昧酸法测定血清肌酐的实验比对[摘要] 目的评价肌氨酸氧化酶法（简称酶法）、碱性苦味酸法（简称苦味酸法）测定血清肌酐的可靠性。

方法分别采用两种方法测定血肌酐值进行精密度试验，并按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP9-A文件进行评估，将测定结果进行相关回归分析，计算两种方法间的偏倚。

结果酶法3个水平的定值质控血清CV日间%分别为3.77%、2.53%、1.23%；苦味酸法3个水平的定值质控血清CV日间%分别为5.23%、4.05%、2.46%。

两种方法测定的血清肌酐浓度，经组内、组间离群值检验后得线性回归方程：Y（苦味酸）=0.9772X（酶法）+5.1911，r2 = 0.9910。

两种方法间各有明显恒定偏倚。

结论苦味酸法特异性不高，易产生交叉污染，但成本低廉，操作简便；肌氨酸氧化酶法特异性高、线性范围宽，抗干扰能力强，是比较理想的方法。

【关键词】肌氨酸氧化酶法；碱性苦味酸法；肌酐1 材料与方法1.1材料与仪器试剂和校准品由浙江伊利康生物技术有限公司提供，定值质控血清由美国贝克曼一库尔特试剂公司提供。

血清样本均来自当日临床病人新鲜血清。

仪器：凯美雅S3600全自动生化分析仪，参数均按厂家要求设置。

1.2方法1.2.1精密度测定按NCCLS精密度评价方法[1]，取低、中、高值3份定值质控血清，白天跟随样本作双份检测，连续20天，对结果作统计学分析。

1.2.2线性回归方程采用酶法和碱性苦味酸法分别测定50例患者血清肌酐含量，两种方法测定肌酐浓度经组内、组间离群值检验后得线性回归方程。

1.2.3结果偏倚估计根据酶法测定值分组：I组（0～94μmol/L）24例，Ⅱ组（95～800μmol/L）17例，Ⅲ组（801～1200μmol/L）9例。

2 结果2.1精密度结果见表1。

表1 日间精密度测定结果（单位：μmol/L ，n=20）2.2两种方法相关性方程为：Y（苦味酸）=0.9772X（酶法）+5.1911，r2 = 0.9910。

肌氨酸氧化酶法、碱性苦味酸法、干化学法测定血清肌酐结果
的分析
张守柱
【期刊名称】《现代中西医结合杂志》
【年(卷),期】2009(018)010
【摘要】目的分析碱性苦味酸法、肌氨酸氧化酶法、干化学法测定血清肌酐的一致性,对3种方法进行平行对比和偏倚评估.方法按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A文件进行评估,将测定结果进行相关回归分析,计算3种方法间的偏倚.结果 3种方法测定的血清肌酐浓度,经组内、组间离群值检验后得线性回归方程:Y苦味酸=0.982X酶法+16.52,Y干化学＝1.016X酶法+9.52.3种方法间各有明显恒定偏倚.结论碱性苦味酸法特异性不高,易产生交叉污染,但成本低廉,操作简便;干式化学法操作简便、快速、准确度好、抗干扰能力强;肌氨酸氧化酶法特异性高、线性范围宽,抗干扰能力强,是比较理想的方法.
【总页数】2页(P1159-1160)
【作者】张守柱
【作者单位】安徽省合肥市第一人民医院,安徽,合肥,230061
【正文语种】中文
【中图分类】R0446.112
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1.肌氨酸氧化酶法与碱性苦昧酸法测定血清肌酐的实验比对 [J], 冯乔健
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4.肌氨酸氧化酶法和苦味酸法测定血清肌酐的比较 [J], 肖刚;董杰明;朱远航
5.肌氨酸氧化酶法和碱性苦味酸法测定血清肌酐的比较 [J], 席云;肖刚;朱远航;刘延科
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肌氨酸氧化酶法和苦味酸法测定血清肌酐的比较【关键词】肌酐；肌氨酸氧化酶法；苦味酸法；方式比较［摘要］目的：评测肌氨酸氧化酶法和苦味酸法测定血清样本肌酐(Cre)的偏倚。

方式：依据美国国家临床实验室标准协会EP9A 文件，天天取临床样本8份，别离用两种方式测定血清样本Cre含量，共测定5 d，记录结果，去除离群点，计算线性回归方程和相关系数，进行偏倚估量。

结果:在测定患者新鲜非黄疸血清样本Cre时，肌氨酸氧化酶法和苦味酸法测定结果的预期相对偏倚在Cre浓度<100 μmol/L时，两种方式的预期偏倚≤-1.8%，酶法的测定结果低于苦味酸法; 当Cre浓度>200 μmol/L时，两种方式的预期偏倚≥11.9%，酶法的测定结果高于苦味酸法，当Cre浓度>500 μmol/L时，两种方式的预期偏倚≥20.1%。

结论：随血清Cre浓度上升，酶法和苦味酸法的测定结果的预期偏倚增加，临床实验室在换用不同仪器或试剂时必需对肌酐测定的不同方式成立不同的参考值范围。

［关键词］肌酐；肌氨酸氧化酶法；苦味酸法；方式比较Measurement of Serum Creatinine by Sarcosine Oxidase and Picric Acid MethodsComparison between Two MethodsAbstract: Objective To determine the bias between two methods for measuring the serum creatinine (CRE). Methods Following the protocol described by the NCCL approved guideline (method comparison and bias estimation using patient samples)，40 patient samples were analyzed in 5 operating days， each sample was analyzed in duplicate by both enzymatic assay and Jaffe kinetic assay. The duplicates were assessed for each method within the same run. The coefficient of correlation was calculated and the bias between the two methods was calculated accordingly. Results The bias between the enzymatic assay and Jaffe kinetic assay were -1.8% at 100 μmol/L， 11.9% at 200 μmol/L and 20.1% at 500 μmol/L for creatinine. Conclusion The bias between the two methods increases as the concentration of the serum creatinine increases. New reference range for creatinine should be established when new instrument or new reagent is applied.Key words：Creatinine；Sarcosine oxidase；Picric acid methods； Method comparison血中的肌酐(Cre)由外源性和内源性两类组成，要紧由肾小球滤过，肾小管大体不重吸收。

肌酐生化方法学
肌酐（Creatinine）是一种由肌肉代谢产生的废物，通常通过肾脏排出体外。

肌酐生化方法学是用于测定血清或血浆中肌酐浓度的实验方法。

1. 碱性苦味酸法：这是最常用的肌酐测定方法之一。

在碱性条件下，肌酐与苦味酸反应生成红色化合物，通过比色法或分光光度法测定其吸光度，进而计算肌酐浓度。

2. 酶法：利用肌酐酶将肌酐转化为氨和肌酸，然后通过测定氨或肌酸的生成量来计算肌酐浓度。

酶法具有较好的特异性和准确性。

3. 干化学法：使用纸片或试纸等干式试剂，通过颜色变化或比色法来测定肌酐浓度。

这种方法通常用于快速检测，但准确性可能稍低。

4. 高效液相色谱法（HPLC）：这是一种分离和分析化合物的技术，可以用于肌酐的定量测定。

HPLC 法具有高分辨率和准确性，但设备和操作相对复杂。

5. 质谱法：利用质谱仪对肌酐进行分析，通过检测肌酐的特定离子或碎片来确定其浓度。

质谱法具有高灵敏度和准确性，但设备昂贵。

在选择肌酐生化方法时，需要考虑实验要求、设备条件和准确性等因素。

不同方法可能在灵敏度、特异性、操作简便性和成本等方面有所差异，因此应根据具体情况进行选择。

无论使用哪种方法，都应遵循标准操作程序，并进行质量控制以确保结果的准确性和可靠性。

肌酐操作规程用途本试剂适用于人血清、血浆或尿液中肌酐的体外定量分析。

临床意义在肾脏疾病发生的初期，血清肌酐含量一般不高；至肾脏实质性损害时，血清肌酐值才会增高。

在正常肾血流条件下，肌酐值升高至170—340umol/L时，标志中度至严重的肾损害，故血清肌酐测定对晚期肾脏病临床意义较大。

方法学原理肌酐与苦味酸反应生成红色复合物，在492nm处有特异性吸收。

这种复合物的生成速率与肌酐含量成正比。

试剂组成试剂1（R1）NaOH 300mmol/L试剂2（R2）苦味酸0.5mol/L标准液132.6umol/L试剂贮存及稳定性2—8℃避光保存，稳定12个月以上。

标本要求血清、肝素钠/EDTA抗凝血浆或新鲜尿液，标本在4℃可保存2周。

测定方法1. 试剂准备若双试剂检测，可直接使用；若单试剂操作，将R1与R2按4:1比例混合，2—8℃避光存放稳定2周。

2. 基本参数测定模式两点法样品量25ul延迟时间20秒R1200ul测定时间20秒R250ul温度室温或37℃主波长492nm副波长600nm3. 测定a. 手工、半自动及单一试剂的全自动测定按需要量配制工作液，并平衡至测定温度。

混匀，37℃延迟时间20秒，测定时间20秒，测△A/分。

b. 双试剂全自动生化仪测定混匀，37℃延迟时间20秒，测定时间20秒，测△A/分。

4. 结果计算ΔA标本Cre（umol/L）= —————×标准液浓度ΔA标准试剂性能1. 线性范围：0-1500umol/L。

2. 精密度：批内瓶间差CV≤4.5%批间差CV≤5.7%3. 准确度：以国际公认的质控血清（如Roche公司生产的质控血清）为检测样本时，测定值在质控血清规定的可接受范围内。

4. 空白吸光度：应小于0.600A。

注意事项1. 可根据仪器要求按比例改变标本、试剂用量。

2. 尿标本测定时先用生理盐水稀释：标本0.1ml+生理盐水5ml，测定结果乘以51。

3. 若试剂空白吸光度大于0.600A，说明试剂失效，请勿使用。

苦味酸法测肌酐实验报告实验目的：通过苦味酸法测定尿液中肌酐的含量，了解肾功能的状况。

实验原理：苦味酸法是利用肌酐与苦味酸在酸性条件下发生化学反应，生成苦味酸肌酐，其红色产物具有可见吸收波长，利用分光光度计测定其吸光度，从而计算出尿液中肌酐的含量。

实验仪器和试剂：分光光度计、离心机、量筒、离心管、试管、吸管、移液枪、苦味酸试剂盒等。

实验步骤：1.收集早晨首次排尿的尿液样本，并进行标号。

2.将尿液离心5分钟，分离出上清液并转移到干净的试管中。

3. 使用移液枪分别取出1ml上清液，分装到两个试管中。

4.分别向两个试管中加入适量的苦味酸试剂，摇匀混合。

5.置于室温下反应15分钟。

6.使用分光光度计设置红色滤光片，将两个试管的吸光度读数记录下来。

7.根据标准曲线，计算出两个试管中肌酐的浓度。

8.比较两个试管中肌酐的浓度，并结合标准值，评估肾功能的状况。

实验结果：样本A：吸光度为0.2样本B：吸光度为0.4实验数据处理：根据标准曲线，对应吸光度0.2的肌酐浓度为10mg/dL对应吸光度0.4的肌酐浓度为20mg/dL。

样本A的肌酐浓度为10mg/dL样本B的肌酐浓度为20mg/dL。

实验结论：根据实验结果，可以得出样本B的肌酐浓度高于样本A，说明样本B 中的肌酐含量较高。

根据肌酐浓度判断，样本A的肾功能正常，而样本B 的肾功能可能存在问题。

进一步的分析还需要参考其他临床指标来评估。

实验注意事项：1.实验中使用的尿液样本需要新鲜、干净。

2.操作过程中避免交叉污染，使用吸管和试管时要小心。

3.实验中的试剂使用前需要根据说明书正确稀释。

4.操作过程中要注意安全，避免试剂溅入眼睛或皮肤。

5.所有仪器和试剂使用完毕后要进行清洗，保持实验环境整洁。

实验改进：1.在实验过程中可以增加对照组，使用已知肌酐浓度的尿液样本，以验证实验结果的准确性。

2.可以进行多次实验重复检测，以提高结果的可靠性。

3.对实验过程中的操作细节和操作顺序进行反复检查和核实，确保实验的精确性和可重复性。

肌酐的测定(速率法1:概述肌酐(creatinine,Cr是肌肉在人体内代谢的产物,每20g肌肉代谢可产生1mg 肌酐。

肌酐主要由肾小球滤过排出体外。

血中肌酐来自外源性和内源性两种,外源性肌酐是肉类食物在体内代谢后的产物;内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。

内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。

在肉类食物摄入量稳定时.身体的肌肉代谢又没有大的变化,肌酐的生成就会比较恒定。

2 样本收集新鲜无溶血标本,血清或血浆样本均不溶血。

血浆样本只能采用肝素或EDTA 抗凝。

样本在4摄氏度可稳定7天。

采血前病人应禁食12小时,采集静脉3ml,待凝固后(最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。

3000r/min 离心5-10分钟,分离出血清备用。

不建议采用血浆标本。

3:方法原理样品中的肌酐与碱性苦味酸反应生成红色复合物,该反应为特异性反应,可与其他物质发生作用。

本试剂采用速率法,增强了反应的特性,反应过程中形成的红色复合物与杨品中肌酐的浓度成正比,可在波长500-520nm 处进行测定。

4剂来源,配置及储存试剂来源:试剂配置:试剂一和试剂二均为液体试剂,可直接使用。

启用后在2-8度可稳定30天。

若试剂混浊,或以蒸馏水为空白在510nm处的光吸收值低于1.0A,应予丢弃。

试剂储存:试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。

5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪6计算方法肌酐(=( A/min*Tv*1000(6.3*Sv*P式中Tv=总反应体积Sv=样本体积6.3=NADH在510nm处的毫摩尔消光系数P=比色杯光径(cm7 线性范围:本实验的线性范围:0----2mmol/L8 参考范围:男性;62---115女性53--979 失控控理1:立即重测同一质控品,如重测后结果仍不再允许范围,请进行下一步。

2:新开一瓶质控品,重测失控项目,如新开的质控血清结果正常,那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质,如结果仍不再允许范围,则进行下一步。

肌氨酸氧化酶法和碱性苦味酸法测定血清肌酐的比较
席云;肖刚;朱远航;刘延科
【期刊名称】《现代医学仪器与应用》
【年(卷),期】2003(015)003
【摘要】目的:比较碱性苦味酸法与肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐的不同及黄疸标本对测定方法的影响.方法:用自动生化分析仪AU640检测正常标本和病人标本,将测得的结果进行统计分析.结果肌氨酸氧化酶法和碱性苦味酸测定血清肌酐相关性较好,其直线回归方程为:Y=29.78+0.490X(X为苦味酸法,Y为肌氨酸氧化酶法),相关系数:r=0.81.结论:在非黄疸标本中两种方法的测定结果有较好的相关性,但有恒定的偏差,建议对不同方法测定血清肌酐的值建立不同的参考值范围.两种方法受黄疸影响的程度并无明显差别.
【总页数】2页(P7-8)
【作者】席云;肖刚;朱远航;刘延科
【作者单位】510630,中山大学附属第三医院检验科;510630,中山大学附属第三医院检验科;510630,中山大学附属第三医院检验科;510630,广州市天河区妇幼保健院【正文语种】中文
【中图分类】R4
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1.肌氨酸氧化酶法、碱性苦味酸法、干化学法测定血清肌酐结果的分析 [J], 张守柱
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5.肌氨酸氧化酶法和碱性苦味酸法测定血清肌酐的比较 [J], 席云;肖刚;朱远航;刘延科
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