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水产动物益生菌的筛选及应用韩卓然;孙敬锋【期刊名称】《水产科学》【年(卷),期】2016(035)001【总页数】6页(P93-98)【关键词】水产动物;益生菌;筛选;应用【作者】韩卓然;孙敬锋【作者单位】天津农学院水产学院,天津市水产生态及养殖重点实验室,天津300384;天津农学院水产学院,天津市水产生态及养殖重点实验室,天津300384【正文语种】中文【中图分类】S917.4随着水产养殖业的发展和养殖强度的增加，水产动物病害爆发频繁。
传统的抗生素药物虽然对治疗疾病有积极效用，但长期使用会产生巨大的负面效应：病原菌产生耐药性，效力下降[1]；药物残留干扰水产动物肠道内有益微生物菌群的生长和繁殖，影响水产动物的健康；残留在水体中的抗生素破坏养殖生态环境，水产品质量下降。
近年来，我国水产品因药物残留而出口受阻的事件屡见不鲜，给我国水产业造成巨大损失。
1974年Parker[2]首创益生菌一词，最早提出益生菌有利于肠道微生态平衡。
目前普遍认为，益生菌的作用主要是改善动物新陈代谢、提高营养物质吸收利用率和免疫力、减少环境污染等[3]。
益生菌因具有无毒、无残留、无抗药性、无污染等特点，逐渐被广泛应用。
益生菌菌群与病原菌竞争黏膜附着位点和营养方式，降低病原菌活性，阻止病原菌黏附，使养殖动物获得稳定适宜的微生物环境[4]。
1.1.1 竞争黏附位点益生菌黏附定殖于宿主体内是发挥作用的前提。
益生菌进入机体后，最先发挥的作用就是与病原菌竞争附着位点[5]。
有研究表明，黏附力强的植物乳酸菌ST-Ⅲ(Lactobacillus plantarum CGMCC)与致病菌共同作用于肠细胞时，通过竞争性占位效应形成生物膜，抑制致病菌的黏附和侵入，保护了细胞膜的完整性，使宿主细胞免受损伤[6]。
益生菌和病原菌的黏附机制相似，益生菌分泌一种以蛋白为主要成分的黏附素，介导其黏附至肠黏膜上皮细胞，所以益生菌易于与病原菌竞争附着位点。
拮抗筛选实验是微生物学中常用的一种实验方法，旨在从自然界中筛选出对特定病原菌具有拮抗作用的微生物。
这种实验对于开发新型生物防治剂、提高作物抗病能力以及保护生态环境具有重要意义。
本实验旨在从土壤样品中筛选出对某种病原菌具有拮抗作用的微生物，并对其进行鉴定。
二、实验目的1. 筛选出对特定病原菌具有拮抗作用的微生物。
2. 对筛选出的拮抗微生物进行鉴定。
3. 探讨拮抗微生物的生物学特性。
三、实验材料1. 土壤样品：采集自农田、公园等环境。
2. 病原菌：实验室保存的已知病原菌。
3. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、伊红美蓝培养基、改良马丁培养基等。
4. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、离心机等。
四、实验方法1. 病原菌活化：将病原菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24小时，活化备用。
2. 土壤样品处理：将采集的土壤样品进行研磨、过筛，取适量土壤样品接种于改良马丁培养基中，37℃培养48小时，观察菌落生长情况。
3. 拮抗筛选：将活化后的病原菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24小时。
取活化后的拮抗微生物接种于同一培养基中，37℃培养24小时。
观察病原菌和拮抗微生物的生长情况，记录抑菌圈直径。
4. 拮抗微生物鉴定：对筛选出的拮抗微生物进行菌落形态、生理生化特性及分子生物学鉴定。
5. 生物学特性研究：研究拮抗微生物的生长条件、代谢产物、抗菌谱等生物学特性。
1. 拮抗筛选：在土壤样品中筛选出5株对病原菌具有拮抗作用的微生物，编号分别为A、B、C、D、E。
2. 拮抗微生物鉴定：通过菌落形态、生理生化特性及分子生物学鉴定，确定A为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens），B为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium），C为海恩西芽孢杆菌（Bacillus haynesii），D为罗氏芽孢杆菌（Bacillus rossii），E为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。
黄颡鱼仔稚鱼胃肠发育的显微和超微结构研究杨瑞斌;谢从新;樊启学;高超;方礼豹【期刊名称】《水生生物学报》【年(卷),期】2009(33)6【摘要】Yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco) is an important commercial freshwater species in China. Due to its high market value, the culture of this species has increased rapidly in recent years. However, larvae rearing became a major bottleneck because of its high mortality. In order to enhance the success of larvae rearing of P. fulvidraco, we need to know the ontogeny of its digestive system thoroughly. The purpose of this study was to understand the morphological structure and the ultrastructure of digestive tract during the ontogeny of P. fulvidraco. We hope that this information would provide fundamental knowledge for larvae rearing management for this species. The histological and ultrastructural characteristic studies of the stomach and intestine of yellow catfish were carried out from hatching ( Od after hatching ( DAH ) ) until 35 DAH. Larvae were hatched from artificially spawned broodstock and maintained in the laboratory ( water temperature was 23 -25℃). They were fed with zooplankton from 3 to 17 DAH, adding zoobenthos from 10 DAH, and only zoobenthos from 18 to 35 DAH. Development of the digestive tract in yellow catfish followed the general pattern described for other species. At hatching, it consisted of an undifferentiated straight tube layingover the yolk sac. The digestive tract was differentiated into buccopharynx, esophagus, initial stomach, and intestine by 2 DAH. The intestine became differentiated into anterior and posterior regions separated by a valve at 3 DAH. The gastric gland in cardiac stomach appeared at 3 DAH, the same time at the first feeding. In ultrastructure, oxynticopeptic cell contained pepsinogenic granules and abundant tubu-lovesicular systems at 3 DAH. The abundant visible tubulovesicular systems suggested that oxynticopeptic cell was still in rest phase with little hydrogen chloride ( HCl) secreted at the first appearance time. As larvae grew, more pepsinogenic granules but less tubulovesicular systems were found in oxynticopeptic cell. There were abundant pepsinogenic granules but little tubulovesicular systems in gastric gland cell at 25 DAH. The epithelial absorptive cell of the anterior and posterior intestinal segment showed electron-opaque lipid droplets and heavy pinocytosis at 3 DAH. Heavy pinocytosis was observed in the posterior intestine between 3 and 25 DAH. The results of this study suggested that the development of digestive tract of yellow catfish larva was functional rapidly, but incomplete. Pinocytotic absorption and intracellular digestion of proteins can compensate for this incomplete extracellular digestion. It is suggested feeding management strategy inline with the physiological function development process in order to effectively increase the survival rate of larva and juvenile of yellow catfish.%利用光学显微技术和透射电镜技术,观察和研究了出膜后1-35日龄黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)仔稚鱼的胃肠发育.水温为23-25℃时,2日龄仔稚鱼的消化道分化出口咽腔、食道、胃、肠;3日龄肠道分化为前肠、中肠、后肠.3日龄黄颡鱼开口摄食时其胃贲门部黏膜层下出现胃腺,为已有鱼类研究报道中胃腺最早出现的日龄.超微结构显示3日龄胃腺细胞中可见胃蛋白酶原颗粒和丰富的管泡系统,为典型的泌酸胃酶细胞;随日龄增加,胃蛋白酶原颗粒越来越丰富而管泡系统越来越不明显.3日龄时前肠吸收细胞胞质中可见脂肪泡,后肠吸收细胞胞质中可见蛋白质胞饮体.直到25日龄后肠吸收细胞胞质中尚可见蛋白质胞饮体.以七结果表明黄颡鱼在3日龄开口摄食时消化道具备细胞外消化功能,但此功能不完善,期间继续通过胞饮作用等细胞内消化来弥补胞外消化的不足,直到25-30日龄后细胞外消化功能发育完善.采用符合其生理机能发育过程的投喂管理策略可以有效提高大规格苗种培育的成活率.【总页数】10页(P1068-1077)【作者】杨瑞斌;谢从新;樊启学;高超;方礼豹【作者单位】华中农业大学水产学院,武汉,430070;华中农业大学水产学院,武汉,430070;华中农业大学水产学院,武汉,430070;华中农业大学水产学院,武汉,430070;华中农业大学水产学院,武汉,430070【正文语种】中文【中图分类】Q174【相关文献】1.黄颡鱼仔稚鱼发育和摄食习性研究 [J], 王志强;庞守忠2.黄颡鱼仔稚鱼发育过程中蛋白酶活性变化研究 [J], 刘铭;高杨3.瓦氏黄颡鱼仔稚鱼发育过程中消化酶活性变化研究 [J], 李芹;龙勇;屈波;罗莉;刁晓明4.玉米胚乳传递细胞发育的显微和超微结构研究 [J], 高荣岐;王群瑛5.黄颡鱼仔稚鱼发育过程中的胰蛋白酶原基因表达 [J], 高超;杨瑞斌;胡文彪;范锦桧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
短小芽孢杆菌X93及胞外产物抑菌活性的研究郭婧;王娟;宋增福;贾亮;张永华;范斌;张庆华【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2013(037)010【摘要】从健康养殖大黄鱼肠道中筛选出对病原弧菌有拮抗作用的潜在益生菌株X93,利用细菌快速鉴定系统和16S rDNA方法进行细菌种类鉴定；通过点种法对其抗菌谱进行测定；采用平板扩散法,研究了培养时间、温度、盐度、蛋白酶K和Fe3+等因素对其胞外产物抑菌活性的影响.结果显示:该菌株为短小芽孢杆菌(GenBank accession No.HM137033)；对20株病原指示菌中的13株均产生不同程度的抑制作用,抗菌谱较广；菌株培养48 h后的胞外产物抑菌作用最强；在pH为7时,抑菌活性最大；达到最大抑菌活性的温度和盐度分别为28℃、5；蛋白酶K和不同浓度的FeCl3均会降低其抑菌活性.该菌对病原弧菌、迟缓爱德华菌和嗜水气单胞菌等水产上常见主要致病菌有良好的拮抗效果,且具有抑菌作用的胞外产物对温度、盐度和Fe3+有一定的适应范围,适宜作为益生菌株,有望在实际养殖环境中得到应用.【总页数】8页(P1564-1571)【作者】郭婧;王娟;宋增福;贾亮;张永华;范斌;张庆华【作者单位】上海海洋大学水产与生命学院,省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海201306;阜阳师范学院生命科学学院,安徽阜阳236037;上海海洋大学水产与生命学院,省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海201306;上海海洋大学水产与生命学院,省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海201306;上海海洋大学水产与生命学院,省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海201306;上海海洋大学水产与生命学院,省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海201306;上海海洋大学水产与生命学院,省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海201306【正文语种】中文【中图分类】Q937.8;S965【相关文献】1.短小芽孢肝杆菌(Bacillus pumilus)X93胞外产物对病原弧菌抑制效果的研究 [J], 王娟;封永辉;张庆华2.嗜麦芽寡养单胞菌胞外产物对斑点叉尾鲴损伤的病理学研究 [J], 耿毅;汪开毓;肖丹;陈德芳;黄锦炉3.Bacillus amyloliquefaciens C-1胞外发酵产物对食源性致病菌抑菌活性的初步研究 [J], 周文杰;杨建;张瑞娟;万茵;韩蓓4.枯草芽孢杆菌CS16抑菌活性与胞外产物成分分析 [J], 李占飞;林陈强;张慧;李昱;林新坚;陈济琛5.猪霍乱沙门菌胞外产物的核酸酶活性及其对巨噬细胞胞外诱捕网形成的影响 [J], 李琦;牛俊辉;王晓利;毛静;全映颖;刘桂坤;雷显前;朱鹏瑶;廖成水因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
1株黄颡鱼肠道益生菌的筛选与鉴定1株黄颡鱼肠道益生菌的筛选与鉴定从正常养殖的黄颡鱼肠道中分离得到218株细菌,通过产酶能力测试,对常见病原菌体外拮抗作用以及对抗生素敏感性试验筛选出1株益生菌HS140菌株.通过测定HS140菌株对黄颡鱼的致病性,并结合形态观察、生理生化试验和16S rRNA部分序列分析,对HS140菌株进行了分类鉴定.结果显示:HS140菌株具有很强的分泌蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的能力,能够抑制温和气单胞菌、迟缓爱德华菌和鳗弧菌的生长.HS140菌株对氨苄青霉素、磺胺异恶唑、先锋霉素VI等3种抗生素产生耐药性,对另外13种抗生素均敏感或中度敏感.急性毒性试验表明,浓度为1.0×10~8 cfu/mL的HS140菌悬液对黄颡鱼没有致病性.HS140菌株为革兰氏阳性可动杆菌,16S rRNA的部分序列分析显示HS140菌株与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)具有99.3%的相似性,系统发育树上HS140菌株与地衣芽孢杆菌(FJ435674)聚为同一分支,结合形态观察和生理生化试验结果最终鉴定HS140菌株为B.licheniformis.作者：孟小亮陈昌福高宇贺中华田甜刘振兴 MENG Xiao-liang CHEN Chang-fu GAO Yu HE Zhong-hua TIAN Tian LIU Zhen-xing 作者单位：华中农业大学水产学院,武汉,430070 刊名：华中农业大学学报ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2010 29(2) 分类号：Q959.46 关键词：黄颡鱼地衣芽孢杆菌筛选鉴定 Pelteobagrus fulvidraco Bacillus licheniformis screening identification。
带鱼肠道中芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵液抗菌性质研究许本宏;林俊芳;叶志伟;郭丽琼;陆雅琴;林金德【期刊名称】《水产科学》【年(卷),期】2018(037)002【摘要】从带鱼肠道中分离筛选到1株具有广谱抗菌活性的菌株JFL15,其发酵液对嗜水气单胞菌、美人鱼发光杆菌、哈维氏弧菌、溶藻弧菌、大肠杆菌、迟钝爱德华氏菌、铜绿假单胞菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、查氏弧菌均有较强抑菌作用.通过形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列分析以及系统发育进化分析,菌株JFL15与暹罗芽孢杆菌的同源性最高,达98.05%,初步鉴定为暹罗芽孢杆菌.对暹罗芽孢杆菌JFL15的发酵液进行研究发现,暹罗芽孢杆菌JFL15的发酵液对酶、温度、酸碱度和紫外线均不敏感,且发酵产物储存较长时间后仍具有较强抑菌活性.%A strain with broad -spectrum antimicrobial activity,named JFL15,was isolated from the gas-trointestinal tract of hairtail(Trichiurus haumela)in Guangzhou,China,whose fermented liquids showed strong antimicrobial activities against 15 pathogens in aquaculture including Aeromonas hydrophila,Esch-erichia coli,Edw ardsiella tarda,Pseudomonas aeruginosa,Photobacterium damsela,V ibrio alginolytic-us,V.harveyi,V.parahaemolyticus,V.vulnif icus and V.chagasii.The strainJFL15 was identified as Bacillus siamensis base on the morphological,and physiological biochemical characteristics together with similarity analysisof 16S rDNA sequences.The fermentation liquor of strain JFL15 was foundto be stable to enzymatic hydrolysis,high temperature(up to 100 ℃),pHrange from 3 to 9 and ultraviolet radiation, and the antimicrobial activity was maintained in the liquor stored for 28 days at 4 ℃.【总页数】8页(P193-200)【作者】许本宏;林俊芳;叶志伟;郭丽琼;陆雅琴;林金德【作者单位】华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640;华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640;华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640;华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640;华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640;华南农业大学食品学院,食品生物技术研究所,广东省微生态制剂工程技术研究中心,广东广州510640【正文语种】中文【中图分类】S917.1【相关文献】1.真菌广谱拮抗菌GQ-17的鉴定、发酵液性质研究及发酵条件优化 [J], 闫建芳;刘秋;赵柏霞;刘志恒;齐小辉;刘长建;周济廷2.侧孢短芽孢杆菌B8发酵液中抑菌物质理化性质研究 [J], 赵秀香;张春波;赵柏霞;李晓菲;吴元华3.一株具有抗菌活性耐盐芽孢杆菌B-11的分离鉴定及发酵工艺优化 [J], 张帅;邱鹏;龙秀锋;侯燕燕;鲁凤娟;张鹤铭;田永强4.解淀粉芽孢杆菌AF1发酵液的抗菌活性与抗菌机理 [J], 杨艳红;余瑛;胡永强;余溪;李青青5.蜡样芽孢杆菌拮抗菌株的筛选鉴定及其发酵液抗菌活性分析 [J], 王洁;龚国利;闵建红;李慧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
黄颡鱼细胞培养研究的开题报告
标题：黄颡鱼细胞培养研究
摘要：
黄颡鱼（Larimichthys crocea）是我国渔业生产中重要的经济鱼类之一。
黄颡鱼细胞培养技术的应用在疫苗研发和药物筛选中有着广泛的应
用前景。
本文旨在通过对黄颡鱼鳃组织或肝脏组织的分离、培养和鉴定，建立黄颡鱼细胞株，为研究黄颡鱼的细胞生物学特性提供基础数据。
研究内容及方法：
1.黄颡鱼细胞分离：选择新鲜的黄颡鱼鳃组织或肝脏组织，将其用0.25%胰酶消化，离心获得细胞上清液，移至含有10%胎牛血清的DMEM培养基中进行培养。
2.黄颡鱼细胞培养：采用细胞学技术，保证细胞培养环境合适，合
理设置培养液成分和培养条件，如CO2浓度、温度、湿度等，定期更换
培养液并观察细胞生长情况。
3.黄颡鱼细胞鉴定：通过细胞形态学、染色体分析、细胞标记等方法，对细胞的种类、特性和稳定性进行鉴定并建立细胞库。
预期结果：
本研究通过培养鉴定黄颡鱼细胞，建立相应的细胞库，对黄颡鱼的
发育、生理生化特性和致病机理等方面的研究提供了基础数据。
同时，
也为黄颡鱼的疫苗研发和药物筛选提供了可靠的细胞模型，具有重要应
用前景。
关键字：细胞培养；黄颡鱼；鉴定；细胞库。
