猪源荚膜D型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定
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猪巴氏杆菌病的流行病学实验室检查及防控措施猪巴氏杆菌病是一种由布氏杆菌引起的猪类传染病,也称为布氏杆菌病。
其流行病学实验室检查及防控措施非常重要,下面将详细介绍。
流行病学实验室检查是确定猪巴氏杆菌病病情和流行程度的关键。
常用的实验室检查方法包括病原菌分离与鉴定、血清学检测、组织病理学检查和分子生物学检测等。
1. 病原菌分离与鉴定在怀疑猪巴氏杆菌病的疫区或养殖场,可以进行病原菌的分离与鉴定。
常用的方法有细菌培养、生化试验和荧光抗体染色等。
分离出的细菌可以通过形态学特征、生化试验和鉴定试剂盒检测等进行鉴定,确诊是否为猪巴氏杆菌。
2. 血清学检测通过血清学检测可以检测感染猪血清中的抗体水平。
常用的方法有血凝试验、补体结合试验和酶联免疫吸附测定法等。
检测抗体水平有助于了解猪群的感染情况和免疫状况。
3. 组织病理学检查组织病理学检查是通过对感染猪的组织和器官进行显微镜下的观察来确定猪是否感染猪巴氏杆菌病。
常用的方法包括组织取样、组织切片和染色等。
组织病理学检查可以直接观察到细菌在组织中的分布情况和病变程度。
4. 分子生物学检测分子生物学检测是最新的猪巴氏杆菌病实验室检查方法,其主要基于病原菌的DNA或RNA的检测。
常用的方法有PCR、实时荧光定量PCR和蛋白质芯片等。
分子生物学检测具有灵敏度高、特异性强和快速的优点,能够准确、迅速地检测出病原菌。
针对猪巴氏杆菌病的防控措施包括疫苗接种和环境卫生管理。
1. 疫苗接种疫苗接种是预防猪巴氏杆菌病最有效的手段之一。
目前市场上已经存在多种猪巴氏杆菌病疫苗,可选择根据疫情情况对养殖猪实施群体或个体免疫接种。
疫苗接种需要根据猪的生长阶段、免疫程序和相关的养殖管理规定来进行执行。
2. 环境卫生管理环境卫生管理是猪巴氏杆菌病防控的重要环节。
包括保持饲养环境清洁和卫生,定期清理猪舍、饮水设施和粪便等,防止细菌的扩散和传播。
要注意对猪场员工的卫生和训练,加强猪场内外的生物安全管理,避免外界的污染和病原菌的入侵。
DOI:10.16174/j.issn.1673-4645.2023.05.024收稿日期:2023-01-16作者简介:乔晓光(1984-),男,河南长垣人,大专,畜牧师,主要从事畜禽疫病防治工作猪源多杀性巴氏杆菌荚膜血清PCR 分型鉴定乔晓光(河南省长垣市农业农村局,河南新乡453400)摘要:本研究旨在了解河南省长垣市猪源多杀性巴氏杆菌的流行情况,采集不同猪场127份疑似多杀性巴氏杆菌病的鼻咽拭子,应用细菌分离纯培养、生化反应试验、16S rRNA PCR 扩增和测序、荚膜血清分型和动物致病性试验对分离菌株进行鉴定。
结果鉴定出10株多杀性巴氏杆菌,检出率为7.87%,其中1株为荚膜血清型基因B 型(capB ),3株为荚膜血清型基因D 型(capD ),6株为荚膜血清型基因A 型(capA )。
动物致病性试验结果显示,有34只小鼠在接种该菌后36h 内死亡,表明该分离菌致病力较强。
长垣市多杀性巴氏杆菌的主要流行菌株为荚膜血清型A 型和D 型,本研究为猪多杀性巴氏杆菌病防治和疫苗的研发提供了基础依据。
关键词:生猪;多杀性巴氏杆菌;分离鉴定;荚膜血清;PCR 中图分类号:S828,S852.61+2文献标识码:A文章编号:1673-4645(2023)05-0111-04开放科学(资源服务)标识码(OSID ),扫一扫,了解文章更多内容多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm )是巴氏杆菌科巴氏杆菌属成员,革兰氏染色阴性,球杆菌或短杆状菌,需氧或兼性厌氧,无鞭毛、无芽胞、无运动性,能够引起多种畜禽出血性败血症或传染性肺炎[1]。
多杀性巴氏杆菌的血清型较多,根据其荚膜抗原差异,多杀性巴氏杆菌可分为A 、B 、D 、E 、F 等5种血清型[2]。
不同血清型对宿主有不同的易感性,如多杀性巴氏杆菌血清型A 和D 型通常与猪的肺炎和胸膜炎有关,血清型B 和E 型菌株与牛出血性败血病有关[3,4],此外多杀性巴氏杆菌血清型不同,其交叉免疫保护力较差,因此,对病原鉴定时有必要鉴定其血清型。
猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及oppA基因遗传进化分析李红婕;董紫凡;车勇良;周伦江;王隆柏;白丁平【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2022(49)12【摘要】【目的】了解福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的流行及oppA基因遗传进化情况。
【方法】本研究采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR扩增测序、PCR荚膜分型、oppA基因克隆及相似性分析、动物回归试验等方法对分离菌株进行鉴定和分析。
【结果】本研究共分离到10株菌,分离菌在血平板上形成淡灰白色、湿润光滑、奶油露珠状菌落;分离菌株能酵解蔗糖、果糖、麦芽糖和甘露醇,不能分解葡萄糖、枸橼酸盐、乳糖、硫化氢等,与多杀性巴氏杆菌生化特性基本一致;分离菌株16S rRNA序列与GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌相似性达99.9%以上,10株分离菌均为多杀性巴氏杆菌;PCR荚膜分型显示,6株分离菌为荚膜A型,4株为荚膜D型;基于oppA基因的遗传进化树显示,10株分离菌均位于同一分支内;动物回归试验结果显示,在24 h内攻毒小鼠死亡率较高(21/30),分离菌有较强的致病力。
【结论】福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌流行菌株的荚膜血清型主要是A和D型,且大部分菌株都来源于共同的祖先,本研究结果丰富了猪多杀性巴氏杆菌的流行病学资料,并为该病的防控奠定基础。
【总页数】9页(P1686-1694)【作者】李红婕;董紫凡;车勇良;周伦江;王隆柏;白丁平【作者单位】福建农林大学动物科学学院(蜂学学院);福建省农业科学院畜牧兽医研究所【正文语种】中文【中图分类】S852.612【相关文献】1.猪萎缩性鼻炎多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及抗性分析2.猪源荚膜血清F型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定、毒力基因检测与致病性研究3.猪产气巴氏杆菌广东株的分离鉴定\r及其16S rDNA基因序列遗传进化分析4.多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其系统进化分析5.牛源多杀性巴氏杆菌Oma87基因的分子特征、抗原性及遗传进化分析因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
2023年第11期(总第414期)畜禽业试验研究猪源多杀性巴氏杆菌分离鉴定及药敏试验其美拉姆1,胡洹圆2,曾南方3,陈弟诗4通信作者,李 晏3,颜其贵21.西藏自治区林芝市察隅县上察隅镇农牧综合服务中心,西藏察隅8606142.四川农业大学动物医学院,四川成都6111303.巨星农牧有限公司,四川乐山6148994.四川省动物疫病预防控制中心,四川成都610041摘 要 试验从四川地区某猪场病死猪肺脏组织中分离细菌,并对其进行形态学观察、16SrRNA序列比对、菌种特异性与荚膜血清型鉴定、毒力基因检测、药敏试验以及动物回归试验。
结果显示:在病猪肺脏组织中分离得到的细菌菌落形态呈现表面光滑、细小透明的露滴状菌落;革兰染色镜检显示为革兰阴性短杆菌;16SrRNA测序结果显示,该分离菌与多杀性巴氏杆菌同源性大于99.6%;细菌种特异性KMT1基因和荚膜血清型分型鉴定,表示该分离菌为多杀性巴氏杆菌且与荚膜血清A型相符;毒力基因检测显示该分离菌携带了6种主要毒力基因(ptfA、pfhA、sodA、plpB、tonB、nanH);药敏试验结果显示,该分离菌对22种试验药物中的10种抗菌药物敏感,对7种抗菌药物耐药;动物回归试验显示该菌株能导致试验猪肺脏出血、气管有血性泡沫;且发现肝组织中存在两端钝圆小杆菌,表明该株分离菌具有较强的致病性。
试验从四川地区成功分离得到1株猪源荚膜血清为A型的多杀性巴氏杆菌,对其进行了细菌生物学特性研究,同时复制了多杀性巴氏杆菌的发病模型,为防治该病提供依据。
关键词 多杀性巴氏杆菌;分离鉴定;毒力基因;药敏试验;动物回归Isolation,identificationanddrugsensitivityanalysisofporcinePasteurellamultocidaQimeiLamu1,HUHuanyuan2,ZENGNanfang3,CHENDishi4correspondingauthor,LIYan3,YANQigui21.ShangchayuTownAgricultureandAnimalHusbandryComprehensiveServiceCenter,Chayu860614,China2.CollegeofVeterinaryMedicine,SichuanAgriculturalUniversity,Chengdu611130,China3.GiantstarFarming&HusbandryCompanyLimited,Leshan614899,China4.CenterforAnimalDiseaseControlandPreventionofSichuanProvince,Chengdu610041,ChinaAbstract ThisexperimentwastoIsolatebacteriafromthelungorgansofdiseasedanddeadpigsinapigfarminSichuan,whichweresubjectedtomorphologicalobservation,16SrRNAsequencing,identificationofbacterialspeciesspecificityandcapsuleserotypes,virulencegenedetection,drugsensitivitytest,andregressiontestingonanimals.Themorphologyofthebacterialcoloniesisolatedfromthelungtissuesofthediseasedpigspresentedsmoothsurfacesandsmalltransparentdewdrop-shapedcolonies;GramstainingmicroscopyshowedthattheyweresmallGram negativerod shapedbacteria;16SrRNAse quencingresultsshowedthattheisolatewas99.6%homologoustoPasteurellamultocida;theidentificationofbacterialspe cies specificKMT1geneandcapsuleserotypingindicatedthattheisolatewasPasteurellamultocidaandwascompatiblewithcapsuleserotypeA.Virulencegenedetectionshowedthatthebacteriacarriessixmajorvirulencegenes(ptfA,pfhA,sodA,plpB,tonB,nanH);drugsensitivitytestsshowedthatthebacteriawassensitiveto10antimicrobialdrugsandresistantto7antimicrobialdrugsoutof22testdrugs.Theanimalregressiontestshowedthatthebacteriacouldleadtohemorrhageinthelungsoftheexperimentalpigsandbloodyfoaminthetrachea;andtherewerebluntlyroundedbacilliatbothendsintheliv ertissues,whichsuggeststhattheisolatehasastrongpathogenicity.Inthisexperiment,aporcinecapsuleserotypeAPasteu rellamultocidafromSichuanwassuccessfullyisolatedanditsbacterialbiologicalcharacteristicswereinvestigated,whilethepathogenicmodelofPasteurellamultocidawasreplicatedtocontrolthediseaseinthefuture.基金项目:四川省科技计划项目(重点研发项目)(2022YFN0007)1试验研究LIVESTOCKANDPOULTRYINDUSTRYNo.11,2023Keywords Pasteurellamultocida;isolationandidentification;virulencegene;drugsensitivitytest;animalregressiondoi:10.19567/j.cnki.1008 0414.2023.11.001 引言多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida,Pm)是两端钝圆的革兰阴性小杆菌或小球菌,为条件致病菌常存在于动物和人的呼吸道中,当宿主抵抗力下降时或受到其他影响便会引发感染,感染的宿主有广泛性,包括牲畜、家禽和野生动物等。
猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验林跃华【摘要】从福建省某猪场发生以呼吸道病为主要特征的病死猪脏器中分离到1株可疑菌,通过细菌分离和纯培养、涂片镜检、生化试验、小鼠致死性试验、药敏试验,并设计1对检测猪多杀性巴氏杆菌的引物,对可疑菌做PCR检测。
结果表明,可疑菌对小鼠有致死毒力;PCR检测结果与生化鉴定结果符合,可疑菌为猪多杀性巴氏杆菌;药敏试验检测结果显示,该菌对先锋霉素Ⅴ、阿米卡星、氟哌酸、氯霉素和庆大霉素高度敏感。
【期刊名称】《养猪》【年(卷),期】2016(000)002【总页数】3页(P94-96)【关键词】多杀性巴氏杆菌;分离鉴定;PCR;药敏试验【作者】林跃华【作者单位】福建省漳州市农业局漳州市动物疫病预防控制中心,福建漳州363000【正文语种】中文【中图分类】S858.28多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)对多种动物均有致病性,属于巴氏杆菌科,主要使动物发生传染性肺炎或出血性败血症,感染猪后引起猪肺疫和猪传染性萎缩性鼻炎,是诱发猪呼吸道病综合征的重要致病因子之一,猪传染性萎缩性鼻炎主要是由产毒素多杀性巴氏杆菌或支气管败血波氏杆菌(主要是D型)引起的,而猪肺疫一般是由非产毒素多杀性巴氏杆菌引起的。
该菌正常存在于多种动物的口腔和咽部黏膜,当动物处于应激状态和机体抵抗力下降时细菌大量繁殖并致病,发生内源性感染[1],可与猪伪狂犬病、猪传染性胸膜肺炎、猪链球菌病、猪喘气病等发生混合感染或继发感染[2]。
近年来,福建地区部分规模养殖场受多杀性巴氏杆菌与其他病毒和细菌混合感染和继发感染的侵害呈逐年上升趋势,为此,本次对福建地区的多杀性巴氏杆菌进行了分离鉴定、PCR检测及药物敏感性等试验,为该区域的猪群体感染多杀性巴氏杆菌病的治疗和预防提供参考。
1.1 病料来源及试验时间、地点2015年10月份,福建省某猪场的临床患病小猪,以10%甘油生理盐水浸润棉签采集鼻腔深部的分泌物,解剖病危小猪,采集肺脏、气管和淋巴结做病原诊断。
猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素基因的原核表达江涛;谭春萍;任灵芝;黄百花;刘文娟;陆芹章【摘要】参照GenBank收录的产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因序列(AF240778),设计一对引物,从猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌中扩增出toxA编码区3 858 bp的片段,将其克隆至原核表达载体PET-32a,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行融合表达多杀性巴氏杆菌毒素.SDS-PAGE和Western blot分析证实,该表达产物以包涵体形式存在,大小约175 ku.动物试验结果表明,重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性.通过间接ELISA方法检测抗毒素的猪阳性血清,表达重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性,为多杀性巴氏杆菌毒素进一步应用奠定了基础.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2010(031)012【总页数】5页(P64-68)【关键词】猪源D-型产毒素多杀巴氏杆菌;毒素基因;原核表达【作者】江涛;谭春萍;任灵芝;黄百花;刘文娟;陆芹章【作者单位】广西大学动物科学技术学院,广西南宁,530005;固始县动物疫病预防控制中心,河南固始,465200;广西大学动物科学技术学院,广西南宁,530005;固始县动物疫病预防控制中心,河南固始,465200;广西大学动物科学技术学院,广西南宁,530005;广西大学动物科学技术学院,广西南宁,530005;广西大学动物科学技术学院,广西南宁,530005【正文语种】中文【中图分类】S852.612;Q786产毒素多杀性巴氏杆菌(Toxingenic Pasteurella multocida,T+Pm)是猪进行性萎缩性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis,PAR)的主要病原之一[1-2]。
该菌与支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)感染猪后损害其呼吸道,使机体抵抗力下降,并可继发感染支原体、嗜血杆菌、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒,增加了猪的病死率[3]。