抗酸染色液(改良Kinyoun冷染法)说明书

夹层杯抗酸染色制片法概要一：标本的预处理：消化和离心1.将标本至于夹层杯中加消化液消化至液体清亮（2~5分钟可灭活细菌）（若是其它容器取痰的，可小心的在痰上加些许消化液，待痰不再粘附其上后转入夹层杯）（夹层杯可装液体不超过杯身三分之二）（非痰类标本亦须加适量消化液消化）。

2.将本杯置于离心机内对称平衡放稳，以4500转/分钟转速离心5分钟，弃去液体（轻快的倒掉），放在干片机内烘烤（干片机提前开启至60度）。

二：染色：初染和洗脱和复染1.加A液在60度温度下染色5分钟。

2.B液脱色（尽量将红色脱净）。

3.C液复染一分钟。

（每次弃去染色液后需以缓慢小水流沿杯壁将杯中剩余液体洗清沥干）。

（加染液液量以可覆盖膜片为适量）三：制片：取片和阅片1.将染色后的片子烘干。

2.用取片针顶起杯底纳米膜片，用镊子夹出，轻轻印干水分，用中性胶倒封于玻片上，弃去保护膜。

（水分将会影响胶水对膜片的粘附）3.阅片。

（可利用“红十字”找寻视野）四：注意事项1.膜片上的细菌的保护：本制片法的原理为通过离心沉降并烘烤将目标菌粘附在膜片上后进行染色，在操作过程中必须避免直接冲刷、液体剧烈振荡、大力印擦等而将膜上已粘附的细菌冲走，这些失误会严重影响阳性率。

2.各标本间的交叉污染：标记混淆、杯中液体互溅、液体转移等将会使结果严重不可靠。

3.脱色的程度：脱色不完全将导致膜上非抗酸菌或其它物质也呈现红色，脱色过久过重会影响抗酸杆菌所着色，二者都将影响后续镜检。

4.B液：其重要成分为酒精盐酸，易挥发，用完务必盖好盖子。

5.操作时间段的把握：请有效利用机器与时间间隔，避免标本堆积。

抗酸染色液使用说明抗酸染色液是一种常用于细胞和组织样本染色的试剂，可以用于观察细胞核和染色体的形态与分布。

它通过特殊的染色剂和酸性条件，将细胞核和染色体显色出来，使其能够被显微镜观察和分析。

以下是抗酸染色液的使用说明。

1.准备工作(1)检查抗酸染色液的保存条件和有效期，确保试剂的质量良好。

(2)清洁工作台，并准备好所需的实验器皿和试管。

(3)准备样本，如细胞悬液或固定的组织切片。

2.染色液配制(1)根据试剂的说明书，准备抗酸染色液的工作浓度。

通常情况下，抗酸染色液是浓缩的，需要根据实验的要求进行适当的稀释。

(2)将适量的抗酸染色液加入到一支干净的试管或玻璃瓶中。

3.样本处理(1)如果使用细胞悬液，可以直接将细胞悬液加入到试管中。

如果使用组织切片，需要先将组织切片放置在适量的生理盐水或缓冲液中，洗去固定液和脱水剂，并将其转移到试管中。

(2)确保样本充分润湿，避免气泡和样本堆积。

4.染色过程(1)将试管放置在恒温水浴中，设置适当的温度和时间。

一般来说，使用42°C的水浴，对细胞进行染色12-15分钟，对组织切片进行染色15-20分钟。

(2)在染色过程中，每隔一段时间（如2-3分钟）轻轻摇动试管，以确保样本均匀接触染色液。

5.染色液去除(1)在染色结束后，将试管从水浴中取出，并将液体倒掉。

(2)用生理盐水或缓冲液轻轻冲洗试管中的样本，去除多余的染色液。

(3)重复冲洗2-3次，确保样本的清洁。

6.样本固定(1)根据实验要求，将样本固定在载玻片上。

固定方法可以是使用适当的固定剂，如甲醛或乙醛溶液，将样本浸泡或喷洒在固定剂中，然后将其转移到载玻片上。

(2)对于组织切片，可以使用热解固定的方法，将载玻片和组织切片一起加热。

7.盖片和观察(1)在固定样本上滴加一滴适当的复盖剂。

(2)将一张玻璃盖片轻轻压在载玻片上，使其紧密贴合。

(3)将载玻片放置在显微镜上，通过目镜和物镜观察样本。

注意事项：-在染色过程中，保持试管的温度和时间的一致性，以保证染色效果的稳定性和准确性。

抗酸染色液数量：85套技术指标要求：1、每套包括：初染液（石炭酸复红液）：500ml*1瓶复染液（0.06%亚甲兰）：500ml*1瓶脱色液（5%盐酸乙醇）：500ml*1瓶油镜油：20ml*1瓶2、石炭酸复红液要求：a)碱性复红（分子式C19H18NCL）：必须使用最低含量超过88%的生物染色剂b)石炭酸（分子式C6H6O）：必须使用熔点为40.5℃的分析纯试剂c)配置的染色液必须无染料沉渣，在有效期内不产生沉渣d)石炭酸复红染液的最大吸收峰的吸光度是0.35±0.5，测定波长为545nm3、0.06%亚甲兰要求：a)碱性复红（分子式C16H18CLN3S）：必须使用最低含量超过82%的生物染色剂b)配置的染色液必须无染料沉渣，在有效期内不产生沉渣4、染色法：热染法5、包装要求：硬质塑料瓶包装，每瓶配有滴盖6、有效期：不少于2年，可分次供货改良罗氏培养基数量：10000支技术指标要求：1、培养管：无裂纹；2、分枝杆菌培养基容量：7ml±0.5ml；3、培养基：表面无裂纹、气泡或斑点；4、污染试验：培养基放入35℃孵育箱内孵育24～48小时，应无细菌生长；5、生长试验：接种H37Ra结核分枝杆菌（25177）至21天可见菌落生长；6、稳定性：在产品有效期结束当日，培养基仍应符合无菌的使用性能要求。

改良罗氏药敏培养基（比例法）数量：700套（16支/套）技术指标要求：1、每套药敏培养基包括：对照管 2支；利福平2支；异烟肼2支；链霉素2支；乙胺丁醇2支；卡那霉素2支；氧氟沙星2支；PNB 1支；TCH 1支2、培养管：无裂纹；3、分枝杆菌培养基容量：7ml±0.5ml；4、培养基：表面无裂纹、气泡或斑点；5、污染试验：培养基放入35℃孵育箱内孵育24～48小时，应无细菌生长；6、生长试验：接种H37Ra结核分枝杆菌（25177）至21天可见菌落生长；7、稳定性：在产品有效期结束当日，培养基仍应符合无菌的使用性能要求。

抗酸染色法实验报告抗酸染色法实验报告引言：细胞与组织的染色是生物学和医学研究中常用的技术手段之一。

抗酸染色法是一种常见的细胞和组织染色方法，其原理是在酸性条件下，利用染色剂与细胞或组织中的特定成分发生化学反应，从而使其显色。

本实验旨在通过抗酸染色法观察细胞和组织的结构，以及研究其功能和特性。

实验材料与方法：实验所需材料包括：细胞或组织样本、酸性染色剂、显微镜、玻璃片、显微镜载玻片、显微镜盖玻片等。

实验步骤如下：1. 准备细胞或组织样本：选择合适的细胞或组织样本，如植物叶片、动物组织切片等。

将样本切割成适当大小，并保持其新鲜。

2. 固定样本：将样本浸泡在适当的固定液中，如福尔马林或乙醛溶液中，以保持其形态和结构。

3. 抗酸处理：将固定的样本经过脱水和透明化处理后，放入抗酸剂溶液中浸泡一段时间。

抗酸剂的选择应根据实验目的和样本特性来确定。

4. 染色处理：将抗酸处理后的样本放入酸性染色剂溶液中，浸泡一定时间，使其与样本中的特定成分发生反应。

5. 清洗与固定：将染色后的样本用去离子水或适当的缓冲液进行清洗，以去除多余的染色剂。

然后，用适当的固定剂固定样本。

6. 制片与观察：将固定的样本切割成薄片，并放置在显微镜载玻片上。

然后，用显微镜盖玻片覆盖在样本上，以便观察。

实验结果与讨论：通过抗酸染色法，我们成功地染色了细胞或组织样本，并观察到了其结构和特性。

染色后的样本在显微镜下呈现出明亮的颜色，使我们能够清晰地观察到细胞和组织的细节。

在染色过程中，染色剂与样本中的特定成分发生反应，从而使其显色。

不同的染色剂对不同的细胞和组织成分有选择性，因此可以通过不同的染色剂来观察不同的结构和功能。

例如，我们可以使用伊红染色剂来染色细胞核，使其呈现红色。

细胞核是细胞的控制中心，其中包含着遗传物质DNA。

通过观察细胞核的形态和数量，我们可以了解细胞的增殖能力和功能状态。

此外，我们还可以使用嗜酸性染色剂来染色细胞质中的酸性成分，如染色体和核糖体。

（一）试剂的配制1 ．石炭酸复红染液：（1 ）储存液①碱性复红液：碱性复红8g，加95% 乙醇至100ml ，充分振荡使复红溶解。

碱性复红乙醇储存液应避光保存，为保证染液的质量，建议储存液保存不超过6 个月。

②5% 石炭酸水溶液：40～50℃水浴加热石炭酸使之融解，取液态石炭酸5g 溶于90ml热蒸馏水中，待溶液冷却至室温时，补充蒸馏水至100ml 。

（2 ）石炭酸复红工作液：经定性滤纸过滤的碱性复红储存液10ml与5%石炭酸水溶液90ml 充分振荡、混合均匀后，用定性滤纸过滤。

碱性复红（或称为碱性品红，basic fuchsin，or pararosaniline chloride，分子式为C 19 H18NCl）用于AFB 染色时，必须使用染料最低含量超过88% 的生物染色剂，合格产品一般在试剂包装上注明相应含量。

如果标注的染料含量低于88% ，则在配制时需调整称取量。

例如，染料含量标注为75% 的产品，配制100ml 储存液时实际的称取量应是8/0.75=10.7g。

石炭酸（苯酚，phenol ，分子式为C 6 H6 O）:应使用熔点为40.5 ℃的分析纯试剂。

2 ．5%盐酸乙醇脱色液：35% 浓盐酸5ml 与95% 乙醇95ml混合。

3 ．亚甲蓝复染液：（1 ）储存液：亚甲蓝0.3g 溶于95% 乙醇50ml中，完全溶解后加蒸馏水至终体积100ml 。

（2 ）亚甲蓝复染液：以蒸馏水5 倍稀释0.3%亚甲蓝储存液，经充分振荡、混合均匀后，亚甲蓝的终浓度为0.06% ，使用定性滤纸过滤，即得亚甲蓝染液。

亚甲蓝（methylene blue chloride，or methylthionine chloride ，分子式为C 16 H18 ClN3S）：染色时必须使用染料含量超过82% 的生物染色剂。

4 ．萋－尼氏染色步骤：1. 涂片自然干燥后，放置在染色架上，玻片间距保持10mm 以上的距离；火焰固定（在5秒钟内将玻片置于火焰上烤4 次）。

抗酸染色液冷染法一、引言抗酸染色液冷染法是一种常用的组织学染色技术，用于观察细胞和组织的结构和组成。

本文将介绍抗酸染色液冷染法的原理、步骤和应用。

二、原理抗酸染色液冷染法是一种无需加热的染色方法，其原理是利用染色液中的酸性成分与细胞或组织中的碱性成分发生化学反应，形成颜色的沉淀物。

抗酸染色液中的染料具有亲和力，能够选择性地与特定的细胞或组织成分结合，从而使其显色。

三、步骤1. 取得待染细胞或组织的标本。

2. 用生理盐水或磷酸盐缓冲液洗涤标本，去除多余的组织液和血液。

3. 用抗酸染色液将标本浸泡，一般需要数分钟至数十分钟的时间，具体时间根据染色物质的性质和染色结果而定。

4. 将标本用蒸馏水洗涤，去除多余的染色液。

5. 用酒精脱水，逐渐将标本转为透明状态。

6. 用透明剂浸泡标本，使其变得更加透明。

7. 将标本置于显微镜下观察，可以使用油浸镜头进行高倍观察。

四、应用抗酸染色液冷染法广泛应用于组织学和病理学的研究中，可用于观察细胞的形态、结构和功能。

具体应用包括：1. 组织切片染色：可以用于观察组织器官中不同类型的细胞和细胞组织的排列和结构。

2. 细胞染色：可以用于观察细胞内的细胞器、染色质和细胞膜等结构。

3. 病理学研究：可以用于观察疾病引起的组织和细胞变化，帮助诊断和治疗疾病。

五、优缺点抗酸染色液冷染法相比于其他染色方法具有以下优点：1. 无需加热：相比于热染色方法，冷染法更加简便和快速。

2. 显色效果好：抗酸染色液具有较好的亲和力，可以选择性地染色目标结构。

3. 适用范围广：可以应用于多种类型的细胞和组织，具有较高的适应性。

4. 结果稳定：抗酸染色液染色结果相对稳定，不易褪色。

然而，抗酸染色液冷染法也存在一些缺点：1. 需要经验：染色条件和时间需要经验积累，染色结果可能受到操作者技术水平的影响。

2. 不能应用于活体标本：冷染法需要对标本进行固定和处理，无法直接应用于活体标本的观察。

六、总结抗酸染色液冷染法是一种常用的组织学染色技术，具有简便、快速和选择性染色等优点。

改良萋－尼抗酸染色液
Modified Ziehl-Neelsen Stain
产品编码产品名称规格
GC082917改良萋－尼抗酸染色液100ml，250ml
改良萋－尼抗酸染色液用途：
供抗酸性细菌的染色，包括弱抗酸菌的染色。

改良萋－尼抗酸染色液原理：
由于抗酸性细菌具有抗酸性，在被含石炭酸的复红液染色后结合牢固，不易被酸性脱色液脱色，最终染色为红色。

而非抗酸性细菌在被含石炭酸的复红液染色后结合不牢，容易被酸性脱色液脱色，经复染后最终显微镜下显示为蓝色或无色。

改良萋－尼抗酸染色液使用方法：
1.将标本直接制成涂片，自然干燥或火焰固定；
2.滴加初染液（A液）覆盖涂片染色5～8分钟，水洗，溘去多余的水；
3.滴加脱色液（B液）覆盖涂片，脱色，脱掉涂片上的红色（通常5~10秒），隐约残留的红色应忽略不计，脱色时间的长短因涂片的厚薄而不同，防止脱色过度。

水洗，溘去多余的水；
4.滴加对比复染液（C液）覆盖涂片染色，染色20～30秒，水洗，溘去多余的水；
5.晾干或轻轻烤干后后，显微镜下油镜检查，背景淡蓝色或无色。

适用仪器：
光学显微镜
样本要求：
选择能反映活动病程有临床价值的标本或培养物。

实验结果：
阳性为光学显微镜油镜（10×100）下见有红色杆状菌，反之为阴性。

实验九-抗酸染色教程文件一、实验目的：通过本实验，掌握抗酸染色技术的概念、方法、原理和操作步骤，巩固和提高学生的实验操作和技能，培养学生认真细致的实验态度，增强实验室安全意识。

二、实验原理：抗酸染色技术是现代生物学和医学科学的基础之一，是经典的细胞学染色技术之一。

抗酸染色技术是利用酸及其盐类的特殊作用，使染色剂能与细胞核染色质、特定细胞器和其他细胞成分结合，从而使其在显微镜下形成自然而美观的图像。

抗酸染色技术是病理学诊断中常用的技术之一，用于检测病理细胞变异和细胞形态学及分子生物学研究中。

三、实验材料及方法：1、实验所需试剂：1）透明丙酮（Xylene）；2）96%乙醇；3）50%酸性酒精（HCl in 95% ethanol）；4）1%枚举胶液（Mayer's hematoxylin）；5）1%酸性酒红溶液（0.05% acid fuchsin in distilled water）；8）85%甲醛；1）显微镜；2）蜡刀；3）染色架；4）玻片；5）移液器；6）玻璃棒。

3、实验步骤：1）石蜡切片的脱脂和再脱蜡：a.将石蜡切片放入透明丙酮中，浸泡10~15分钟；b.将切片转移到96%乙醇溶液中，浸泡2~3分钟；d.将切片放入50%酸性酒精中浸泡2~3分钟，用水漂洗3~4次，每次时间30~60秒；2）抗酸染色：b.用水漂洗3~4次，每次时间30~60秒，直至溶液清澈无色；g.将切片置于盛有1:1比例的绝对酒精和85%甲醛中，浸泡5~10分钟，直至细胞没有氧化痕迹，将切片转移到正确的显微镜载玻片上并拍照。

四、实验结果：经过抗酸染色后，在显微镜下，细胞核染色质和细胞质中的特定结构都能显现出来，从而可以形成美观而自然的图像。

通过比较观察和分析不同样本组织的抗酸染色图像，可以了解细胞结构和组分的形态学变化，进而研究细胞功能和病理生理。

五、注意事项：1、操作时应注意安全，化学试剂避免直接接触皮肤和吸入粉尘，切片时应戴手套；2、试剂的浓度和配制方式必须严格按照操作说明书执行，不可随意更改；3、操作中应注意卫生，保持实验室清洁；4、实验结束后应及时处理废弃物，如有需要可循环利用；5、实验室毒性、易燃、易爆等安全标识牌应贴在显眼的地方，以保证实验室安全。