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革兰氏染色法
1 染色液
1.1 结晶紫溶液：结晶紫乙醇饱和溶液（取结晶紫约4~8g，溶于95%乙醇100ml中）20ml，1%草酸铵溶液80ml，将上述两溶液混合，过滤。
结晶紫不可用龙胆紫代替。
前者是纯品，后者不是单一成分，易出假阳性。
结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。
1.2 助染剂
碘1g
碘化钾2g
蒸馏水300ml
将碘与碘化钾先行混合，加入少许蒸馏水，充分振荡。
待完全溶解后再加入其余的蒸馏水。
当溶液由棕黄色变为淡黄色时应弃去。
为易于储备，可将上列碘与碘化钾溶于30ml蒸馏水中，用前稀释。
1.3 脱色剂
95%乙醇。
1.4 复染剂
沙黄0.25g
95%乙醇10ml
蒸馏水90ml
将沙黄溶于乙醇中，待完全溶解后加入蒸馏水。
2 染色步骤
2.1 将培养18~24h的培养物涂片，要涂得薄些。
2.2 将涂片在火焰上加温固定，待冷却后滴加结晶紫溶液，1min后水洗。
2.3 滴加助染剂，1min后水洗。
2.4 滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止（约20~30s）水洗。
2.5 滴加复染剂，1min后水洗，晾干，镜检。
呈紫色者为革兰氏阳性菌，红色者为阴性菌。
![结晶紫的配制和相干信息[指南]](https://img.taocdn.com/s1/m/0e4fcc1b854769eae009581b6bd97f192279bfe5.png)
结晶紫的配制和相关信息分子式为：C25H30ClN3变色范围pH6.0～7.0～9.0(黄→紫→紫红)。
...取间甲酚紫0.1g,加0.01mol/L氢氧化钠溶液10ml使溶解,再加水稀释至100ml,即得。
...取结晶紫0.5g,加冰醋酸100ml使溶解,即得。
...结晶紫的变色范围较复杂，颜色变化有紫、蓝、蓝绿、黄绿、黄，突跃点附近指示剂的颜色变化不明显，而显著的变色点明显早于滴定终点。
色范围pH6.0～7.0～9.0(黄→紫→紫红)。
...取间甲酚紫0.1g,加0.01mol/L氢氧化钠溶液10ml 使溶解,再加水稀释至100ml,即得。
...取结晶紫0.5g,加冰醋酸100ml使溶解,即得。
...结晶紫就是甲基紫，龙胆紫（1）0.13-0.5 黄色→绿色（2）1.0-1.5 绿色→蓝色(3) 2.0-3.0 蓝色→紫色好像是这样的: 结晶紫染色液：结晶紫 1 g95％乙醇20 mL1％草酸铵水溶液80 mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
结晶紫染液、番红染液如何配制？这个是革兰氏染色液的两种主要试剂，常规配法如下，如果用量少可以订购现成的，用量大自己配合算。
(1)结晶紫(crystal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。
(4)番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。
PH试剂有甲基红、溴甲酚绿、百里酚蓝这三种指示剂酸碱指示剂用于酸碱滴定的指示剂，称为酸碱指示剂。
（acid-base indicator)。
这是一类结构较复杂的有机弱酸或有机弱碱，它们在溶液中能部分电离成指示剂的离子和氢离子（或氢氧根离子），并且由于结构上的变化，它们的分子和离子具有不同的颜色，因而在pH不同的溶液中呈现不同的颜色。
结晶紫水溶液(0.1%)简介：结晶紫(Crystal violet)又称甲紫，分子式为C25H30N3Cl·9H2O，分子量为407.98，CAS 号为548-62-9。
结晶紫属于碱性染料，能溶于水、乙醇，可以把组织和细胞核染成紫色。
结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。
组成：编号DZ0055 Storage名称结晶紫水溶液(0.1%)100ml RT 避光使用说明书1份操作步骤(仅供参考)：1、样品处理①对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5～10min。
换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5～10min。
无水乙醇5min。
蒸馏水2min。
②对于冰冻切片：蒸馏水2min。
③对于培养细胞：用多聚甲醛固定10min以上。
蒸馏水洗涤2分钟。
更换新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。
2、结晶紫染色①结晶紫染色液染色10min(可以根据染色结果和要求调整时间)。
②用蒸馏水或自来水充分洗涤，进行观察和拍照。
染色结果：组织或细胞深紫色注意事项：1、结晶紫对人体有害，请注意适当防护。
2、第一次使用本试剂时建议先取1～2个样品做预实验。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：编号名称DC0032 Masson三色染色液DJ0001 普鲁士蓝染色液(核固红法)DM0002 姬姆萨染色液(1:9)DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液DZ0010 詹纳斯绿B染色液(0.2%)PW0053Western抗体洗脱液(碱性)TO1013丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。
第1页，共1页草酸铵结晶紫染色液(2.5%)
货号：G1061
规格：10ml/100ml/500ml
保存：2-8℃保存，有效期1年。
产品说明：
草酸铵结晶紫染色液是革兰氏染色法中的一种成分。
革兰阳性菌染色中，细胞经草酸铵结晶紫染色后再经Gram碘液处理，形成不溶性复合物，该复合物不能通过细胞壁，不易被脱色，所以保持紫色。
染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。
操作步骤(仅供参考)：
1、按实验具体要求操作或参考下列革兰氏染色的方法。
2、涂片：取待检细菌，于载玻片中央涂成薄层或者在载玻片上滴加少许无菌水，取菌与水混合均匀，涂
成薄层。
3、干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥。
4、固定：手持载玻片一端，标本面朝上，在酒精灯的火焰外侧快速来回移动。
5、初染：滴加结晶紫染色液染色，清水冲洗去染色液。
6、媒染：滴加Gram碘液，并覆盖载玻片室温放置，水洗。
7、脱色：滴加脱色液摇动，直至流下的脱色液不出现紫色为止，立即用水冲去脱色液，终止反应。
8、复染：滴加沙黄染色液染色，水洗。
9、干燥。
镜检：置油镜观察。
染色结果：
革兰氏阳性菌：蓝色至紫色；革兰氏阴性菌：红色。
注意事项：
1、涂片之前，应事先在背面做好圆圈标记，以便判断后续试验的位置。
2、待检细菌培养时间会影响染色，阳性菌培养时间过长或已死亡或细菌溶解，常呈阴性。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
结晶紫染液配置
结晶紫染液是一种常用的染液，可以用于染色生物组织或细胞，使其呈现紫色的结晶状。
以下是一种常见的结晶紫染液配置方法：
材料：
- 结晶紫
- 乙酸铜
- 酒精
- 甘油
- 水
步骤：
1. 取一定量的水（例如100 mL），加热至80°C。
2. 逐渐加入结晶紫（例如0.5 g），搅拌以溶解。
3. 加入乙酸铜（例如1 mL），继续搅拌均匀。
4. 将染液冷却至室温。
5. 加入一定量的酒精（例如10 mL），搅拌均匀。
6. 最后加入甘油（例如10 mL），再次搅拌均匀。
注意事项：
1. 染液中的结晶紫是一种有毒物质，操作时应注意防护，避免吸入或接触。
2. 在配置染液时，应使用无菌材料和纯净水，以确保染液的质量。
3. 酒精和甘油的加入可以提高染液的浸透性和染色效果，但过多的酒精会导致细胞脱水，影响染色结果。
4. 染液的浓度可以根据需要进行调整，一般情况下，0.1% - 0.5% 的结晶紫染液效果较好。
请注意，不同实验室可能会有稍微不同的配置方法，以上是一种常见的方法，具体配置比例和步骤可以根据实际需要进行相应的调整。
结晶紫水溶液(0.1%)操作说明及注意事项
货号：G1064
规格：100ml
保存：室温，避光，6个月。
产品说明：
结晶紫(Crystal violet)又称甲紫，属于碱性染料，可以和细胞核中的DNA结合，产生细胞核染色，从而将细胞核染成紫色。
结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。
操作说明：（仅供参考）
1、样品处理
1对于石蜡切片：
二甲苯中脱蜡5～10min。
换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5～10min。
无水乙醇5min。
90%乙醇2min。
70%乙醇2min。
蒸馏水2min。
2对于冰冻切片：
蒸馏水2min。
③对于培养细胞：
用4%多聚甲醛固定。
蒸馏水洗涤2分钟。
更换新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。
2、结晶紫染色：
①结晶紫染色液染色。
②用蒸馏水或自来水充分洗涤，进行观察和拍照。
染色结果：
组织或细胞深紫色
注意事项：
1、结晶紫对人体有害，请注意适当防护。
2、第一次使用本试剂时建议先取1～2个样品做预实验。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
结晶紫染色液( 1 %)编码品名规格单位北京华越洋生物结晶紫染色液 (1%) 10ml 瓶GT79031-10ml北京华越洋生物结晶紫染色液 (1%) 100ml 瓶GT79032-100ml北京华越洋生物结晶紫染色液 (1%) 500ml 瓶GT79033-500ml产品说明：结晶紫染色液 (Crystal Violet Staining Solution) 是一种组织或细胞染色经常用的能够把细胞核染成深紫色的染色液。
结晶紫是一种碱性染料，能够和细胞核中的 DNA 联合，进而产生细胞核染色。
产地：国产提示：本品仅用于科研实验，不可以用作医疗及临床诊疗。
储藏条件：阴凉处保留重点词：结晶紫染色液 , 结晶紫染色液 (1%)结晶紫染色液(1%)有关染色产品 :货物名称规格货物名称规格中性红染色液 %）500ml 结晶紫水溶液 %) 100ml 中性红染色液 %）500ml 核固红染色液 %) 100ml 中性红染色液 % 惯例染色 ) 100ml 天狼星红染色试剂盒2*50mLTTC染色液（ %）500ml %伊文斯蓝 / 埃文斯蓝溶液100mL Masson三色染色试剂盒7×50ml 茜素红 S 染色液 (1%, 100mL 普鲁士蓝染色试剂盒2*50ml %核固红染色液100ml 尼氏染色液 ( 焦油紫法 ) 2*100ml 改进 Lillie-Mayer 苏木素100ml染色液吕氏碱性美蓝染色液（%）100ml 改进 Lillie-Mayer 苏木素500ml染色液亮绿 SF 染色液100ml Ehrlich 苏木素染色液100ml 溴甲酚绿 - 甲基红指示剂溶液100ml Ehrlich 苏木素染色液500ml 饱和油红 O染色液100ml 苏木素伊红混淆染色液( 一100ml步法 )Van Gieson 染色液50ml 苏木素伊红混淆染色液( 一500ml步法 )Van Gieson 染色试剂盒3×50ml 改进 Harris 苏木素染色液100ml Schiff 试剂50ml 改进 Harris 苏木素染色液500ml 茜素红 S 染色液（ %）100ml Mayer 苏木素染色液100ml 煌焦油蓝染色液100ml Mayer 苏木素染色液500ml 2% TTC染色液100ml 苏木素伊红 (HE) 染色液2×100ml 革兰氏染色液试剂盒4×10ml 苏木素伊红 (HE) 染色液2×500ml 醋酸洋红染色液100ml Core 苏木素染色液100ml姬姆萨原液100ml Core 苏木素染色液500ml 姬姆萨工作液100ml Carazzi 苏木素染色液100ml 瑞氏 - 姬姆萨复合染液100ml Carazzi 苏木素染色液500ml 瑞氏染液50ml Delafield 苏木素染色液100ml 结晶紫染色液 %) 10ml Delafield 苏木素染色液500ml 结晶紫染色液 (1%) 10ml Gill 苏木素染色液 (Gill 100ml 结晶紫染色液 %) 10ml Gill 苏木素染色液 (Gill 500ml 荚膜染色液（试剂盒）50ml×2 Gill 苏木素染色液 (Gill 100ml 芽孢染色液（试剂盒）50ml×2 Gill 苏木素染色液 (Gill 500ml 鞭毛染色液（试剂盒）100ml Gill 苏木素染色液 (Gill 100ml 石炭酸复红染液 ( 苯酚品红染液 ) 100ml Gill 苏木素染色液 (Gill 500ml 改进型石炭酸复红染液( 苯酚品红100ml Heidenhain 铁苏木素染色3×染液 ) 液100ml 抗酸染色液（试剂盒）50ml×3 天青石蓝苏木素染色液2× 50ml 吕氏碱性美蓝染色液（%）100ml 改进 MacConaill 铅苏木素140ml染色液卢戈碘液（革兰氏染色）10ml 苏木素无水乙醇溶液 (5%) 100ml 番红染色液（沙黄）10ml 苏木素无水乙醇溶液 (10%) 100ml 卢戈碘液（标准碘液）100ml 伊红染色液 ( 入口水溶 ) 100ml Mayer' 苏木素染液 ( 免疫组化 ) 10ml 伊红染色液 ( 入口水溶 ) 500ml HE染色液 ( 试剂盒 ) 3×10ml 伊红染色液 ( 水溶 ) 100ml Cole 氏苏木素染色液 ( 惯例染色 ) 100ml 伊红染色液 ( 水溶 ) 500mlWeigert 苏木素染色液2×50ml 伊红染色液 ( 水溶 ,5%) 100ml AB-PAS染色试剂盒50ml*6 伊红染色液 ( 醇溶 ) 100ml 糖原 PAS染色液（过碘酸 - 雪夫染50ml×2 伊红染色液 ( 醇溶 ) 500ml 色液）糖原 PAS染色液试剂盒（过碘酸 - 50ml×4 Scott 蓝化液500ml 雪夫染色液）伊红染色液100ml 氨水溶液 %) 500ml 标准阿利新蓝染色液3×50ml 氨水溶液 %) 500ml 阿利新蓝染色液100ml 氨水溶液 %) 500ml 阿利新蓝染色液 (pH=（试剂盒）3×50ml 氨水溶液 (1%) 500ml 碱性品红乙醇溶液 (5%) 100ml 天青石蓝 B 染色液50ml 碱性品红水溶液 (1%) 100ml 天青石蓝 B 染色液100ml。
1 目的
建立微生物实验室细菌形态和主要构造检验方法，以鉴定菌种。
2 范围
本规程适用于我司革兰氏染色测试实验。
3 职责
质量部微生物实验员负责按此规程进行革兰氏染色测试。
4 染液的配制
4.1 0.5%结晶紫染色液
称取1g结晶紫，放入250ml试剂瓶中，加95%乙醇2ml,溶解后加入200ml蒸馏水摇匀即可。
4.2 革兰氏碘液
分别称取碘 1g和碘化钾2g放入蒸馏水300ml中，溶解摇匀即可。
4.3 脱色剂
95%乙醇
4.4 复染液（番红染液）
称取番红0.25g，加入10ml 95%乙醇内，然后用90ml蒸馏水稀释，摇匀即可。
5 革兰氏染色程序
5.1 涂片
用纱布擦净载玻片，以无菌接种环取一小滴无菌生理盐水，然后用无菌接种环挑取少数菌苔（菌落）或液体培养物（不必加生理盐水），在玻璃片中央涂成一薄膜。
5.2 干燥
涂片后放室温中自然干燥。
5.3 固定
将载玻片迅速通过火焰三次（其目的是杀死细菌），使菌体与载玻片粘附牢固，以及改变对染料的通透性。
5.4 初染
滴加结晶紫染液于已固定的载玻片上，染1min，水洗。
细菌生物膜结晶紫染色具体步骤
细菌生物膜结晶紫染色是一种常用的染色方法，用于观察和研究细菌生物膜的形态和结构。
下面我将介绍细菌生物膜结晶紫染色的具体步骤：
1. 准备材料和试剂：包括结晶紫染色溶液、96%乙醇、蒸馏水、细菌培养液、玻片、载玻片等。
2. 制备玻片：将玻片放在95%乙醇中清洗，并在烘箱中烘干。
3. 制备细菌涂片：取适量的细菌培养液在玻片上滴液，用无菌镊子夹住另一块玻片，将液体均匀涂抹在玻片上，然后在空气中晾干。
4. 固定细菌：将涂片放入95%乙醇中浸泡5分钟，固定细菌。
5. 洗涤：将固定后的玻片在蒸馏水中洗涤一次。
6. 添加结晶紫染色溶液：将染色溶液滴在涂片上，使之完全覆盖细菌。
7. 染色：将涂片放置在染色盘中，静置15-30分钟。
8. 洗涤：将染色涂片放入蒸馏水中洗涤，直至洗涤液不再有颜色。
9. 去水：将涂片放入96%乙醇中固定染色。
10. 干燥和观察：将涂片放入烘箱中干燥，然后在显微镜下观察细菌生物膜的结晶紫染色效果。
细菌生物膜结晶紫染色的步骤相对简单，但需要注意的是各个步骤操作时要细心，保持无菌操作，以确保实验结果的准确性。
通过细菌生物膜结晶紫染色，可以清晰地观察到细菌生物膜的形态和结构，为细菌生物膜的研究提供了重要的实验方法。
Website: Email:******************ECOTOP SCIENTIFIC (Guangzhou)Biotechnology Co.,Ltd.
结晶紫/龙胆紫水溶液(1%)使用说明书
【包装规格】产品编号
产品名称包装ES-8116Crystal violet solution,1%50ml/100ml
使用说明书
1份【保存条件】
室温避光储存，有效期1年
【概述】
结晶紫(Crystal violet)又称甲紫、龙胆紫，属于碱性染料，可以和细胞核中的DNA 结合，产生细胞核染色，从而将细胞核染成紫色。
结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。
【使用建议】
如用作细胞核染色，请根据需要使用PBS 将本产品稀释使用，细胞核染色建议浓度0.1%，染色时间一般为10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。
建议使用1-2个样品进行预实验。
【注意事项】
1.仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。
2.为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3.结晶紫对人体有害，请注意适当防护。
