【CN109852647A】一种双酶法制备可溶性的酵母葡聚糖寡糖的方法【专利】

(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510159346.0(22)申请日 2015.04.03C08B 37/02(2006.01)(71)申请人中国农业科学院农产品加工研究所地址100193 北京市海淀区圆明园西路2号院(72)发明人王强 刘红芝 刘丽 石爱民胡晖 于淼 林伟静 刘晓永李亚楠(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司 11002代理人王文君(54)发明名称一种提高酵母β-D-葡聚糖水溶性的硫酸酯化方法(57)摘要本发明涉及一种提高酵母β-D-葡聚糖水溶性的硫酸酯化方法，包括如下步骤：1)以酵母β-D-葡聚糖为原料，溶于含有尿素的二甲基亚砜溶液中，搅拌溶解后得到溶液a ；2)所述溶液a置于冰浴中，经过超声处理后，仍置于冰浴中，边搅拌边缓慢滴加含有H 2SO 4的DMSO 溶液得到溶液b ；3)将溶液b 置于油浴恒温振荡器中进行酯化反应，将酯化后的溶液快速冷至室温，并加去离子水，稀释后，过聚酯膜微滤，再依次经超滤处理、浓缩和干燥即得到所述硫酸酯化酵母β-D-葡聚糖。

本发明利用超声联合硫酸酯化方法，制备出的酵母β-D-葡聚糖具有溶解性好、生产安全性高、应用范围广、能有效增强机体免疫功能等优点。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书5页(10)申请公布号CN 104788581 A (43)申请公布日2015.07.22C N 104788581A1.一种提高酵母β-D-葡聚糖水溶性的硫酸酯化方法，包括如下步骤：1)以酵母β-D-葡聚糖为原料，溶于含有尿素的二甲基亚砜溶液中，搅拌溶解后得到溶液a；2)所述溶液a置于冰浴中，经过超声处理后，仍置于冰浴中，边搅拌边缓慢滴加含有H 2SO4的DMSO溶液得到溶液b；3)将溶液b置于油浴恒温振荡器中进行酯化反应，将酯化后的溶液快速冷至室温，并加去离子水，稀释后，过聚酯膜微滤，再依次经超滤处理、浓缩和干燥即得到所述硫酸酯化酵母β-D-葡聚糖。

(10)申请公布号 CN 101897431 A(43)申请公布日 2010.12.01C N 101897431 A*CN101897431A*(21)申请号 201010214448.5(22)申请日 2010.06.21A23L 1/28(2006.01)C08B 37/02(2006.01)(71)申请人中国农业大学地址100193 北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人薛文通 武慧媛 张泽俊 于章龙(74)专利代理机构北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246代理人史双元(54)发明名称一种同时制备酵母抽提物和β-1，3-葡聚糖的方法(57)摘要本发明公开了一种属于酵母抽提物及β-1，3-葡聚糖的制备领域的同时制备酵母抽提物和β-1，3-葡聚糖的方法。

该方法包括啤酒废酵母脱苦除杂，啤酒废酵母的酶解与灭活，酵母抽提物的分离与干燥，β-1，3-葡聚糖的酸碱处理、洗涤及干燥等步骤。

该方法具有原料利用率高、品质好、成本低、易于产业化等特点，实现了啤酒废酵母再利用，并同时生产出酵母抽提物和β-1，3-葡聚糖两种产品的目的。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 4 页CN 101897431 A1/1页1.一种同时制备酵母抽提物和β-1，3-葡聚糖的方法，该方法以啤酒废酵母为原料，其特征在于，按照以下步骤进行：(1)采用NaHCO3对啤酒废酵母进行脱苦除杂预处理，所述预处理方法如下：用水将啤酒废酵母配制成悬浮液，以啤酒废酵母干重计悬浮液的重量百分数为5～20％，然后向悬浮液中加入NaHCO3，其中，NaHCO3与啤酒废酵母干重的质量百分比为0.2～1.0％，搅拌处理0.5～2h，过滤、离心得到的沉淀物为备用酵母泥；(2)用水将步骤(1)所得酵母泥配制成悬浮液，以啤酒废酵母干重计悬浮液的重量百分数为6～16％，调节pH至4～7，然后向悬浮液中加入木瓜蛋白酶，其中，木瓜蛋白酶与啤酒废酵母干重的质量百分比为0.2～1.0％，在40～65℃下作用16～24h，灭酶活，离心得到上清液和沉淀物；(3)将步骤(2)得到的上清液进行喷雾干燥，热空气进口温度控制在150～250℃，出口温度控制在70～100℃，从而得到粉状酵母抽提物；(4)向步骤(2)得到的沉淀物中加入1～4倍沉淀物重量的碱溶液，其中，碱溶液重量百分浓度为1～5％，在60～90℃下作用2～4h，冷却至室温后离心，去上清，保留沉淀物；(5)向步骤(4)得到的沉淀物中加入0.5mol/L的乙酸溶液进行悬浮，其中，沉淀物与乙酸溶液的质量体积比为1∶5，75℃处理1h，冷却至室温后离心，洗涤沉淀，得到泥状β-1，3-葡聚糖；(6)将步骤(5)得到的泥状β-1，3-葡聚糖采用真空冷冻干燥处理20～30h，得到粉状β-1，3-葡聚糖。

可溶性酵母葡聚糖的制备及其活性研究1.D2半乳糖;2.L2阿拉伯糖1.D2galact ose;2.L2arabinose图2 HP LC2E LS D法测定阿拉伯胶酶解液的色谱图Fig.2 HP LC Chr omat ogra m of sa mp le fr om arabic gu m hydr ol2 ysated with enzy me能有效改善色谱峰形,利于各种糖组分的基线分离,但不利于糖的溶解,分析时间也会显著延长。

综合考虑分离效果、分析时间等因素,本实验采取乙腈2水(80∶20)作为流动相。

实验中首先保持载气流速为2L/m in不变,改变漂移管温度(60,70,80,90,100,110℃),观察信号基线水平和噪音。

在100℃时色谱图基线平稳,峰形好,各色谱峰相互之间分离度较好,故漂移管温度确定为100℃。

然后固定漂移管温度为100℃,观察不同载气流速时各种糖组分的信号强度,2.5 L/m in为在较小噪音且是普遍产生较大检测响应值的最低气速。

故选定漂移管温度为100℃,氮气流速为2.5L/m in。

阿拉伯胶完全水解后可获得D2半乳糖、L2阿拉伯糖、L2鼠李糖和D2葡萄糖醛酸。

实验中使用的色谱柱为氨基柱,与D2葡萄糖醛酸的结合作用较强,在以乙腈2水作流动相时,未被洗脱,因而不出峰;当改用乙腈为流动相,D2葡萄糖醛酸即可洗脱下来。

这并不影响L2阿拉伯糖的检测,对实验结果无影响。

本文建立的HP LC2ELS D法对L2阿拉伯糖的检测较为理想,无须进行衍生化而直接将样品进行分析,方法简便快速、分析的灵敏度高,结果重复性好,可对阿拉伯胶水解过程中L2阿拉伯糖的含量进行实时检测,同时也适用于其他通过水解多糖制备单糖、寡糖过程中对产物含量的分析。

参考文献:[1]H ir om i,Genichi,Kat,et al.Pr ocess for p r oducing L2arabinose,L2arabinose2containing enzy matically p r ocessed p r ouducts,dietf oods,diabetic diet f oods and fruit or vegetable juices and p r ocessf or p r oducing the sa me:US,6632448[P].2003210214.[2] 冯亚青,刘燕,张晓东,等.从L2阿拉伯胶提取L2阿拉伯糖[J].精细化工,2003,20(5):2882290.[3] 梁蔚阳,冯炜菁.高效液相色谱—示差折光检测法测定注射用转化糖中果糖与葡萄糖的含量[J].中国生化药物杂志,2007,28(2):1162117.可溶性酵母葡聚糖的制备及其活性研究余奕珂,白雪芳,杜昱光(中国科学院大连化学物理研究所,辽宁大连116023)摘要:目的改善酵母葡聚糖的溶解性能,探讨增溶后酵母葡聚糖的生物学活性。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910228013.7(22)申请日 2019.03.25(71)申请人 江南大学地址 214000 江苏省无锡市蠡湖大道1800号(72)发明人 高敏杰　詹晓北　朱莉　蒋芸　吴剑荣　张洪涛　刘丽萍　李志涛　(74)专利代理机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211代理人 林娟(51)Int.Cl.C12N 9/24(2006.01)C12N 1/19(2006.01)C12R 1/84(2006.01)(54)发明名称一种以杂多糖为碳源生产内切β-1,3-葡聚糖酶的方法(57)摘要本发明公开了本发明涉及一种以杂多糖为碳源生产内切β-1,3-葡聚糖酶的方法，属于发酵工程技术领域。

本发明采用高果糖浆废液杂多糖代替葡萄糖利用毕赤酵母工程菌PGAP9K -BGN13.1生产内切β-1,3-葡聚糖酶，为高果糖浆废液杂多糖提供了其在生物工程领域的价值，与葡萄糖做碳源相比，本发明的所述杂多糖做碳源发酵效果在相差无几的同时，发酵成本显著降低。

权利要求书1页 说明书4页CN 109897841 A 2019.06.18C N 109897841A权　利　要　求　书1/1页CN 109897841 A1.一种生产内切β-1,3-葡聚糖酶的方法，其特征在于，以杂多糖或含有杂多糖的组合物为碳源，以毕赤酵母为发酵微生物，生产内切β-1,3-葡聚糖酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有杂多糖的组合物为高果糖浆废液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述高果糖浆废液含有聚合度2～17的线性葡聚糖，单糖部分包括葡萄糖和果糖；其中总糖含量为902.3g/L±50g/L，葡萄糖含量为480g/L±30g/L，果糖含量为292g/L±20g/L，麦芽糖含量为103.6g/L±10g/L。

专利名称：β－葡聚糖和甘露聚糖的制备专利类型：发明专利
发明人：J·J·塞德马克
申请号：CN200680015026.7
申请日：20060505
公开号：CN101184780A
公开日：
20080521
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了制备酵母&bgr，－葡聚糖和甘露聚糖制备物的方法。

所述方法使用：自溶处理，然后用高PH蛋白酶进行酶处理，或者用高PH蛋白酶进行酶处理后，继之以包括淀粉酶、脂肪酶其组合中的至少一种酶进行处理。

申请人：森馨香料公司
地址：美国印第安纳
国籍：US
代理机构：永新专利商标代理有限公司
代理人：林晓红
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810920301.4(22)申请日 2018.08.14(71)申请人 江南大学地址 214000 江苏省无锡市蠡湖大道1800号(72)发明人 康振　何静　黄浩　陈坚　堵国成　(74)专利代理机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211代理人 张勇(51)Int.Cl.C12P 19/04(2006.01)C12P 19/00(2006.01)(54)发明名称一种双酶水解制备透明质酸奇数寡糖的方法(57)摘要本发明公开了一种水解制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，属于生物工程技术领域。

本发明以大分子透明质酸为底物，通过控制水蛭型透明质酸酶(LHase )和牛睾丸型透明质酸酶(BTH )两种透明质酸水解酶的添加量和反应时间，同时制备得到两种不同结构的奇数聚合度透明质酸寡糖(三、五、七糖)。

本发明提出来一种新的、简单易行的制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，为奇数聚合度透明质酸寡糖的功能及特性研究奠定了基础。

权利要求书1页 说明书5页 附图3页CN 109097421 A 2018.12.28C N 109097421A1.一种制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)大分子透明质酸水解：使用水蛭型透明质酸酶LHase与牛睾丸型透明质酸酶BTH两种透明质酸水解酶分别作用于分子量为105～106Da的大分子透明质酸得到一系列奇数聚合度透明质酸寡糖；(2)不同聚合度透明质酸寡糖的分离：利用凝胶填充的离子交换柱将步骤(1)得到的透明质酸寡糖进行分离纯化，用平衡液和洗脱液洗脱，按照洗脱峰收集产物，经过浓缩、脱盐即可得到产物中的奇数聚合度透明质酸寡糖；其中，所述两种酶的水解顺序不限。

2.根据权利要求1所述的一种制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，其特征在于，所述大分子透明质酸的浓度为10～20mg/mL，其溶剂为水。

专利名称：一种从双孢菇子实体中提取水溶性β葡聚糖的方法专利类型：发明专利
发明人：陈喜军
申请号：CN201510948157.1
申请日：20151217
公开号：CN105384838A
公开日：
20160309
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种从双孢菇子实体中提取水溶性β葡聚糖的方法，通过制备双孢菇粗多糖，制备双孢菇β葡聚糖，制备水溶性β葡聚糖等步骤制成；本发明提取方法所得到双孢菇子实体多糖是除去了α构型多糖的β葡聚糖，并且种β葡聚糖具有良好的水溶性。

红外光谱显示本发明产物为β葡聚糖，硫酸苯酚法检测多糖含量大于50%，多糖平均分子量2000-200000道尔顿不等。

有技术中虽然有对双孢菇的某一种构型进行了分离并且进一步纯化得到了高纯度多糖，但是其分离方法与本发明有本质区别，本发明通过酸水解，水复溶的方法控制双孢菇多糖的分子量在一定范围内增强了双孢菇多糖的水溶性，提高了双孢菇多糖大分子量段的收率，有利于工业化生产双孢菇β水溶性多糖。

申请人：黑龙江众生生物工程有限公司
地址：150046 黑龙江省哈尔滨市高新区科技创新城企业加速器11号楼智谷二街4158号2单元一层
国籍：CN
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