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2020我国药典1101无菌检查法1.引言2020年版的我国药典1101中的无菌检查法作为药品质量管理中的重要内容，对药品的无菌状态进行了详细规定，是保障药品质量和安全的重要手段。
在本文中，我们将深入探讨2020我国药典1101中的无菌检查法，从简单到复杂，由浅入深地介绍这一内容，帮助读者更深入地理解和应用这一法规。
2.基本概念在开始深入探讨2020我国药典1101中的无菌检查法之前，我们需要了解一些基本概念。
无菌状态指的是物品不含有任何微生物，无菌检查法则是用来确定药品无菌状态的方法和程序。
在我国药典1101中，对无菌检查法进行了全面的规定，包括检查方法、检查设备等内容。
3.无菌检查法的基本原理无菌检查法的基本原理是通过器械和培养基的接触，判断药品是否含有微生物。
这一原理在药典中得到了详细的阐述，包括了各种不同的检查方法，如滤膜法、均板法等。
针对不同的药品和环境条件，药典中也做出了相应的规定，以确保检查结果的准确性和可靠性。
4.2020我国药典1101对无菌检查法的规定在2020年版的我国药典1101中，对无菌检查法进行了全面的规定，包括了检查方法的选择、操作程序的要求、结果的判定等方面。
药典中还对各种检查方法的具体操作步骤和注意事项进行了详细的规定，帮助人们在实际操作中能够准确地进行无菌检查，确保检查结果的准确性和可靠性。
5.个人观点和理解作为文章的作者，对于2020我国药典1101中的无菌检查法，我认为这一法规的出台对于药品质量的保障具有非常重要的意义。
无菌状态是药品质量的基本要求之一，而无菌检查法则是确保药品无菌状态的重要手段。
通过学习和理解药典中对无菌检查法的规定，我们能够更好地保障药品质量和安全，为人们的健康保驾护航。
6.总结通过本文的介绍，我们对2020我国药典1101中的无菌检查法有了更深入的了解。
药典中对无菌检查法进行了全面的规定，包括了基本原理、操作程序、结果判定等各个方面。
中国药典2020无菌检查法
中国药典2020年版中关于无菌药品的检查方法包括以下几个
方面：
1. 外观检查：检查药品外包装是否完整，标签和印刷是否清晰，无异常颜色或异物等。
2. pH值测试：通过使用pH计来测定药品溶液的酸碱度，以
确认药品的稳定性和适用性。
3. 细菌限度检查：采用适当的培养基，通过培养和计数细菌来检测药品中的细菌污染情况。
4. 眼用制剂颗粒度检查：使用粒度分析仪来测定眼用制剂中颗粒的大小分布情况，以确保药品的质量和安全性。
5. 质量控制检测：包括含量测定、稳定性检测、微生物检测等，以确保药品的质量符合规定的标准。
这些检查方法是为了确保无菌药品的质量和安全性，以保护患者的用药安全。
需要根据具体药品的特点和使用要求进行不同的检验分析。
USP <71>无菌检查法本章的部分内容已与欧洲药典和/或日本药典的对应部分进行了协调。
那些不一致的部分用符号(* *)标出，以说明这一事实。
按药典规定的无菌检验本身并不能确保一批产品是无菌的或者已经灭菌。
这主要是通过对灭菌工艺或无菌处理程序的验证来实现的。
该试验适用于检查药典要求无菌的药物、制剂产品或其他物品是否无菌的一种方法。
若产品检测结果符合要求，仅表明在该试验条件下样品中未发现微生物污染。
预防微生物污染的措施无菌检查应在无菌条件下进行。
为了达到该条件，试验环境必须达到无菌检查的要求。
防止污染采取的措施应确保不会影响供试品中微生物的检出。
通过对工作区域进行适当取样并进行适当控制，来定期监控进行试验的工作条件。
培养基和培养温度用于试验的培养基可按如下所述制备，或可使用等效的商业培养基，只要它们符合需氧菌、厌氧菌和真菌的生长促进试验的要求。
以下培养基已被证实适用于无菌检查。
硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养。
但其也可用于需氧菌培养。
大豆-酪蛋白培养基适用于真菌和需氧菌的培养。
成分重量L-胱氨酸0.5g氯化钠 2.5g水合葡萄糖/无水 5.5/5.0g琼脂0.75g酵母提取物(水溶性) 5.0g胰酶消化酪蛋白胨15.0g硫乙醇酸钠0.5g或硫乙醇酸0.3mL新配制的刃天青钠溶液(1:1000) 1.0mL纯水1000mL注：灭菌后的pH值:7.1±0.2将L-胱氨酸、琼脂、氯化钠、葡萄糖、酵母提取物和酪蛋白的胰腺消化物与纯水混合，并加热至溶解。
将硫乙醇酸钠或硫乙醇酸溶解于该溶液，如果需要可加入1mol/L 氢氧化钠溶液，以便在灭菌后该溶液呈pH值7.1±0.2。
如需要过滤，再次加热该溶液但不得煮沸，并趁热以湿润滤纸将该溶液过滤。
加入刃天青钠溶液，混匀，并将该培养基置于适当容器中，该容器应为培养基提供特定的面积/深度比，以使在培养期结束后能明确显示氧气摄入的变色部分不超过培养基的上半部分。
无菌检查法-2015版中国药典无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨(胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸0.5g 新配制的0.1% 刃天青溶液1.0ml硫乙醇酸钠0.5g 琼脂0.75g(或硫乙醇酸) （0.3 ml) 纯化水1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
无菌检查法-2015版中国药典无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨(胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸0.5g 新配制的0.1% 刃天青溶液1.0ml硫乙醇酸钠0.5g 琼脂0.75g(或硫乙醇酸) （0.3 ml) 纯化水1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
无菌检查法Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】无菌检查法：系指检查药品、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否无菌的一种方法。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室温控18℃~26℃，相对湿度45%～65%，操作室或工作台应保持空气正压。
无菌室的清洁与消毒应符合《质保部洁净室清洁消毒规程》（10-G-07404）的规定。
无菌室无菌程度的检查应符合规定：见《洁净区沉降菌监测规程》（10-G-09113）、《洁净区尘埃粒子监测规程》（10-G-09114）。
实验设备及用具：电热干燥箱、电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热恒温培养箱、试管、注射器、针头、试管架、刻度吸管、手术剪、手术镊、砂轮、注射器盒、搪瓷托盘、双碟、75%酒精棉球、碘酒棉、无菌工作服（衣、裤、帽、口罩等）。
微孔滤膜：直径50mm、孔径μm～μm，应符合规定。
除菌滤器所有进入无菌室的物品必须经过消毒或灭菌，应严格按照《物品进入质保部洁净室清洁消毒规程》（10-G-07403）进行操作。
稀释剂：灭菌注射用水。
培养基：需气菌、厌气菌培养基（流体硫乙醇酸盐培养基）；真菌培养基。
培养基的使用，配制、管理及灵敏度检查应按照《培养基管理规程》（10-G-07406）、《培养基灵敏度检查规程》（10-G-07408）、《培养基配制规程》（10-G-07407）进行操作。
在使用前，细菌培养基须经30~35℃培养不少于14天，真菌培养基经20~25℃培养不少于14天，证明无菌后方可使用。
本检查可与供试品的无菌检查同时进行。
对照用菌液：金黄色葡萄球菌（Staphyoccus sureus）菌液：取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30~35℃培养16~18小时后，用%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。
附录Ⅻ A 无菌检查法无菌检查法系用于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度10 000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基培养基的制备培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2℃～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨(胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸0.5g 新配制的0.1% 刃天青溶液 1.0 ml硫乙醇酸钠0.5g 琼脂0.75g(或硫乙醇酸) （0.3 ml) 水1000 ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1 ±0.2 。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2 ，灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5 ，否则，须经100 ℃水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
2.改良马丁培养基胨 5.0g 磷酸氢二钾 1.0g酵母浸出粉 2.0g 硫酸镁0.5g葡萄糖20.0g 水1000 ml除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 值约为6.8 ，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH 值使灭菌后为6.4 ±0.2 ，分装，灭菌。
无菌检查法-2015版中国药典无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.75g(或硫乙醇酸) （ 0.3 ml) 纯化水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养。
2. 胰酪大豆胨液体培养基胰酪胨 17.0g 氯化钠 5.0g 大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0g 磷酸氢二钾 2.5g葡萄糖（一水合/无水） 2.5g （2.3g）纯化水 1000mL除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH 值使灭菌后在25℃的pH 值为7.3±0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。
胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃培养。
3. 选择性培养基按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。
4.0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）胨 10.0g 氯化钠 5.0g葡萄糖 5.0g 水 1000 ml牛肉浸出粉 3.0g除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调节 pH 为弱碱性，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节 pH 值使灭菌后在25℃的pH 值为7.2±0.2，分装，灭菌。
5.胰酪大豆胨琼脂培养基胰酪胨 15.0g 氯化钠 5.0g大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g 琼脂 15.0g纯化水 1000ml除琼脂外，取上述成分，混合。
微温溶解，调节pH 值使灭菌后在25℃的pH 值为7. 3±0.2，加入琼脂，加热溶化后，摇匀，分装，灭菌。
6.沙氏葡萄糖液体培养基动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g葡萄糖 20.0g 纯化水 1000mL除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH 值使灭菌后在25℃的pH 值为5.6±0.2，加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。
7.沙氏葡萄糖琼脂培养基动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g葡萄糖 40.0g 纯化水 1000mL琼脂 15.0g除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后在25℃的p H值为5.6±0.2，加入琼脂,加热溶化后, 再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。
培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。
本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。
无菌性检查每批培养基随机取不少于5 支（瓶），置各培养基规定的温度培养14 天，应无菌生长。
灵敏度检查菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5 代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64 941〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98 003〕菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48 小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于100CFU（菌落形成单位）的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养5～7 天，加入3～5ml 含0.0 5％（v/v）聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％（v/v）聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1 ml 含孢子数小于100CFU 的孢子悬液。
菌悬液在室温下放置应在2 小时内使用，若保存在2～8℃可在24 小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
培养基接种取每管装量为12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基7 支，分别接种小于100CFU 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2 支，另1 支不接种作为空白对照，培养3 天；取每管装量为9ml 的胰酪大豆胨液体培养基7 支,分别接种小于100CFU 的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 支，另1 支不接种作为空白对照，培养5 天。
逐日观察结果。
结果判定空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。
稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
1.0.1%蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH 值至7.1±0.2，分装，灭菌。
2．pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。
3. 根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液(如0.9%无菌氯化钠溶液)。
如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
方法适用性试验当进行产品无菌检查法时，应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验。
方法适用性试验按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。
对每一试验菌应逐一进行方法确认。
菌种及菌液制备除大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 4 4102〕外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。
大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。
薄膜过滤法取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100CFU 的试验菌，过滤。
加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内。
另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。
置规定温度培养3～5 天，各试验菌同法操作。
直接接种法取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基6 管，分别接入小于100CFU 的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌各2 管，取符合直接接种法培养基用量要求的胰酪大豆胨液体培养基6 管，分别接入小于100CFU 的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 管。
其中1 管接入每支培养基规定的供试品接种量，另1 管作为对照，置规定的温度培养3～5 天。
结果判断与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。
如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，应采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法适用性试验。
方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行。
供试品的无菌检查无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。
只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。
供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适用性试验确认的方法相同。
无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
检验数量检验数量是指一次试验所用供试品最小包装容器的数量。
除另有规定外，出厂产品按表1 规定；上市产品监督检验按表2 规定。
表1、表2中最少检验数量不包括阳性对照试验的供试品用量。
检验量是指供试品每个最小包装接种至每份培养基的最小量（g 或ml）。
除另有规定外,供试品检验量按表3 规定。
若每支（瓶）供试品的装量按规定足够接种两种培养基，则应分别接种硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基。
采用薄膜过滤法时，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
阳性对照应根据供试品特性选择阳性对照菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。
阳性对照试验的菌液制备同方法适用性试验，加菌量小于100CFU，供试品用量同供试品无菌检查时每份培养基接种的样品量。
