磷的测量方法

二、磷含量的测定（HG 2636-2000）

——磷钼酸喹啉重量法

1、方法原理

在酸性介质中，正磷酸根与喹钼柠酮试剂反应生成磷钼酸喹啉沉淀，经过滤、洗涤、干燥、称量测定其磷含量。

2、试剂

2.1 硝酸（HNO3）：1+1水溶液(V/V)；

2.2 钼酸钠Na2MoO4；

2.3 柠檬酸(C6H8O7·H2O)；

2.4 丙酮(CH3COCH3)；

2.5 喹啉(C9H7N)(Ouin oline)

2.6 喹钼柠酮试剂：

溶液1：溶解70g钼酸钠于150ml水中；

溶液2：溶解60g柠檬酸于150ml水和85ml硝酸的混合液中；

溶液3：搅拌下将溶液1缓慢加入溶液2中；

溶液4：加5ml喹啉于25mL硝酸和100ml水的混合液中；

溶液5：将溶液4加入溶液3中，摇匀，放置24小时，过滤，滤液中加入280ml丙酮(4.4)，用水稀释至1000ml，混匀。置于带塞聚乙烯瓶中，存入于暗处。

3、仪器

3.1 坩埚式过滤器：孔径15μm；

3.2 电烘箱：能控温180±5℃

4、分析步骤

准确移取溶液A10.0ml置于300ml烧杯中，加入10ml硝酸(2.1)，用水稀释至100ml，加热煮沸，加入50ml喹钼柠酮试剂，盖上表面皿，在水浴或电热板上加热煮沸1min取下，冷却至室温，冷却过程中搅拌3-4次。

用预先在180±5℃干燥至恒重的坩埚式过滤器过滤上层清液，用倾泻法洗涤沉淀6次，将沉淀转移至坩埚中，继续用水洗涤烧杯及沉淀3-4次。将坩埚置于180±5℃的烘箱中干燥45min，取出，于干燥器中冷却至室温后称量。

2楼

同时作空白试验。

5、结果计算：

P%={(m1-m2) ×0.01400×250/m×10} ×100…………（2） 式中：m1……试液生成沉淀的质量，g；

m2……空白溶液试验生成沉淀的质量，g；

m……试样质量，g；

0.01400……磷钼酸喹啉沉淀与P的转换系数。

6、允许差

取平行测定结果的算术平均值为测定结果，平行测定结果的绝对差值不大于0.2%。

食品 中磷的测定

GB／T 5009．87—2003

1范围

本标准规定了用分光光度法测定食品中的磷含量。

本标准第一法、第二法适用于各类食品中总磷的测定，第三法适用于西式蒸煮、烟熏火腿中复合磷

酸盐(以磷酸盐计)的测定。

本方法第一法、第二法检出限均为2 pg，线性范围：第一法分光光度法为5 Pg～50 pg，第二法分子吸收光谱法为2 pg～10 pg。

第一法分光光度法

2原理

食物中的有机物经酸氧化，使磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸镀。此化合物被对苯二酚、

亚硫酸钠还原成蓝色化合物——钼蓝。用分光光度计在波长660

am处测定钼蓝的吸收光值，以定量

分析磷含量。

3试剂

3．1硫酸：相对密度1．84。

3．2高氯酸一硝酸消化液；1+4混合液。

3．3 15％硫酸溶液：取15 mL硫酸徐徐加入到80 ml，水中混匀。冷却后用水稀释至100 mL。

3．4钼酸铵溶液：称取O．5 g钼酸铵[(NH。)。Mo，O：。·4H。O]用15％硫酸稀释至100 ml。。

3．5对苯二酚溶液：称取0．5 g对苯二酚于100 ml，水中，使其溶解，并加人一滴浓硫酸(减缓氧化作

用)。

3．6亚硫酸钠溶液：称取20 g无水亚硫酸钠于100 m1．水中，使其溶解。此溶液需于实验前临时配制，

否则可使钼蓝溶液发生混浊。

3．7磷标准储备液(100 pg／mL)：精确称取在105"(：下干燥的磷酸二氢钾(优级纯)O．一439 4 g，置于

1 000 mI。容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。此溶液每毫升含100 pg磷。

3．8磷标准使用液(10 pg／mL)：准确吸取10 mL磷标准储备液，置于100 ml，容量瓶中，加水稀释至

刻度，混匀。此溶液每毫升含磷10 pg。

4仪器

4．1实验室常用设备。

4．2分光光度计。

5分析步骤

5．1试样处理

5．1．1称取各类食物的均匀干试样0．1 g～0．5 g或湿样2 g～5 g于’[00 mL凯氏烧瓶中，加人3 m1． 硫酸、3 mL高氯酸一硝酸消化液，置于消化炉上。瓶中液体初为棕黑色，待溶液变成无色或微带黄色清

亮液体时，即消化完全将溶液放冷，加20 mL水，赶酸。冷却，转移至100 mL容量瓶中，用水多次洗涤

凯氏烧瓶，洗液合并倒入容量瓶内，加水至刻度，混匀。此溶液为试样测定液。

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GB／T 5009．87—2003

5．1．2取与消化试样同量的硫酸、高氯酸一硝酸消化液，按同一方法做空白溶液。

5．2磷标准曲线

准确吸取磷标准使用液O、O．5、1．o、2．O、3．0、4．O、5．O mL(相当于含磷量0、5、10、20、30、40、50

pg)，分别置于20 mI。具塞试管中，依次加入2 mL钼酸溶液摇匀，静置几秒钟。加入1 mI．亚硫酸钠溶

液，1 mI．对苯二酚溶液，摇匀。加水至刻度，混匀。静置0．5h以后，在分光光度计660 nm波长处测定

吸光度。以测出的吸光度对磷含量绘制标准曲线。

5．3测定

准确吸取试样测定液2 m1．及同量的空白溶液(5．1．2)，分别置于20 mI。具塞试管中，以下操作步

骤同标准曲线(5．2)。以测出的吸光度在标准曲线上查得试样液中的磷含量。

5．4结果计算

见式(1)。

x一堕×娶×

优 V。

式中：

x——试样中磷含量，单位为毫克每百克(mg／100 g)；

m。——由标准曲线查得或回归方程算得试样测定液中磷的质量，单位为毫克(mg)

v，——试样消化液定容总体积，单位为毫升(mL)；

v：——测定用试样消化液的体积。单位为毫升(mL．)；

m——试样的质量，单位为克(g)。

计算结果保留两位有效数字。

6精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5％。

第二法分子吸收光谱法

7原理

食品中的有机物经酸破坏以后，磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。用氯化亚锡、硫酸肼

还原磷钼酸铵成蓝色化合物——铜蓝。蓝色强度与磷含量成正比，可进行比色定量。

8试剂

8．1硝酸。

8．2硫酸：相对密度1．84。

8．3高氯酸。

8．4 15％硫酸溶液：取15 mL，硫酸，加入到80 mL水中，混匀。放冷以后用水稀释至100 mI。。

8．5 5％硫酸溶液：取5 m1。硫酸，加入到90 mL水中，混匀。放冷以后用水稀释至100 mL。

8．6 3％硫酸溶液：取3 mI，硫酸，加入到90 mL水中，混匀。放冷以后用水稀释至100 mI．。

8．7钼酸铵溶液：同3．4。

8．8氯化亚锡一硫酸肼混合液：称取0．1 g氯化亚锡(Sn(：l。·2Hz0)，o．2 g硫酸肼(NHzNHz·

H。sO．)，加3％硫酸溶液并用其稀释至100 mL。此溶液置棕色瓶中，贮冰箱至少可保存一个月。

8．9磷标准储备液：精确称取在105℃干燥至恒量的磷酸二氢钾(优级纯)0．439 4 g，用水溶解于

‘100 mL容量瓶中，并加水至刻度，混匀。此溶液每毫升含1 mg磷。置聚乙烯瓶贮于冰箱中保存。

8．10磷标准使用液：准确吸取磷标准储备液1．00 mL于100 mL，容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

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此溶液每毫升含10 pg磷。

9仪器

分光光度计。

10分析步骤

GB／T 5009．87—2003

10．1试样处理

称取各类食品的均匀干样0．1 g～0．5 g，湿样5 g左右于100 mL三角瓶中，加硝酸15 rag,高氯酸

2 mL，硫酸2 mL，混匀。于电热板或电炉上小火加热消化，瓶中液体开始变棕黑色时，不断沿瓶壁补加

硝酸至有机质分解完全；加大火力，至消化液产生浓密的白烟，溶液澄明或微带黄色。消化液放冷，加水

20 mL。放冷以后转移奎100 mI，容量瓶中，用水多次洗涤三角瓶，合并洗液于容量瓶中，加水至刻度，

混匀。作为试样测定溶液。

取与消化试样同量的硝酸、高氯酸、硫酸，按同一方法做试剂空白溶液。 10．2标准曲线绘制

取磷标准使用液O、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0 mL(相当于磷0、2．o、4．O、6．O、8．O、10．0 vg)，分别置于

25 mL比色管中，各加水约15 mL，5％硫酸溶液2．5 mL，钼酸铵溶液2 mL，氯化亚锡一硫酸肼混合液

0．5 mL，各备均补加水至25 mL，混匀。在室温放置20 rain以后，用2 cm比色杯，在660 111"J~波长处，

以零管作参比，在分光光度计上分别测定其吸光度，以吸光度对磷含量绘制标准曲线。

10．3测定

准确吸取试样测定溶液1 mL～2 mL及同量的试剂空白液，分别置于25 mL比色管中，各加水约

15。L，5％硫酸溶液2．5 mL，铝酸铵溶液2 mL，氯化亚锡一硫酸肼混合液0．5 mL。各管均补加水至

25 mL，混匀。在室温放置20 rain以后，用2 cm比色杯，在660 nm波长处，用水作参比，在分光光度计

上分别测定其吸光度。以测出的吸光度在标准曲线上查得试样液的磷含量。

11结果计算

见式(2)。

x：堕警×揣

式中：

X——试样中磷含量，单位为毫克每百克(mg／100 g)；

。，——由标准曲线上查得试样测定溶液中磷的质量，单位为微克(pg)

m。——空白溶液中磷的质量，单位为微克(pg)；

m——试样的质量，单位为克(g)；

v，——试样消化的总体积，单位为毫升(mL)；

U——测定用试样消化液的体积，单位为毫升(mL)。

计算结果保留两位有效数字。

12精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5％。

第三法食品中磷酸盐的测定

13原理

试样中的磷酸盐与酸性钼酸铵作用，生成淡黄色的磷钼酸盐，此盐可经还原呈显蓝色，一般称为铝

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GB／T 5009_87—2003

蓝。蓝色的深浅，与磷酸盐含量成正比。

{4试剂