培养基适用性检查验证方案

培养基适用性验证方案

编制:

审核:

批准: 1. 验证目的：

本次验证的目的是确认无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基应进行培 养基的 适用性检查，符合灵敏度要求。

2. 参照标准

2010版中国药典二部附录：XII A无菌检查法和XI G微生物限度检查法。

3. 验证项目

无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基的适用性检查。

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•验证小组人员及职责：

小组人员 职务 职责

王志凤

负责验证方案的审批，确认所有的验证项目均已完成，并 按方案执行。

李晨

负责验证日常管理工作，负责验证方案的审核。

郭月

负责验证方案及报告的起草，负责该方案的实施，对实施 过程中资料和数据进行汇总并完成报告。

5.前提条件确认

5. 1所有本次验证实施过程中用到的仪器都已经过计量并且在计量有效期内。

5. 2所有参与本次验证的公司人员均进行相关培训

6. 接受标准

6.1. 液体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生 长良好。

6.2. 液体培养基指示能力桧查：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂 反应等应与对照培养基一致。

6.3. 固体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一 致。

6.4. 固体培养基指示能力检査：被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应 情况等应与对照培养基一致。

6.5. 培养基抑制能力检査：试验菌应不得生长。6.6. 无菌性检查：应不得有菌生长。

6・7・

被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落平均数的

生长的菌落大小、形态特征应一致。

7. 验证实施

7.1 •试验用仪器和物料

所用培养皿、移液管、工器具均应严格按照相关的灭菌程序灭菌；生物安全柜、灭菌器、霉菌培 养箱、生化培养箱、水浴锅、电热鼓风干燥箱等。

72验证用培养基及试剂

名称 批号 配制（称样量一体积） pH

营养琼脂培养基 20150122 32.0g f 1000ml 7.2 ±0.2

营养肉汤培养基 20140826 18. 0g f 1000ml 7.2 ±0.2

改良马丁培养基 20141211 28.5. Og f 1000ml 6.4 ±0.2

大豆酪蛋白琼脂培养基 20150323 40g f 1000ml 7. 3 ±0.2

沙氏匍萄糖琼脂培养基 20151116001 65. lg f 1000ml 5.6 ±0.2

玫瑰红钠琼脂培养基 20140707 31. 5g f 1000ml 6.0 ±0.2

硫乙醇酸盐流体培养基 20150104 29.25g f 1000ml 7. 1 ±0.2

乳糖胆盐发酵培养基 20151105001 35g f 1000ml 7.4 ±0.2

乳糖发酵培养基 20160615-00 30g f 1000ml 7.4 ±0.2

伊红美监琼脂培养基 20151106001 37. 5g f 1000ml 7. 1 ±0.2

SCDLP液体培养基 20151106001 38g f 1000ml 7.2 ±0.2

哥伦比亚血琼脂基础 20151105001 44. Og f 1000ml 7. 3 ±0.2

十八烷一甲基漠化镂培养基 20151102001 38. 3g f 1000ml 7. 52 ±0.2 适用性检查:

70%,且 0. 9%无菌氯化钠溶液

0.9%无菌氯化钠溶液(含

0. 05%聚山梨酯)

7. 3•验证用菌株

名称 CMCC 编 名称 CMCC编弓

大肠埃布困 (B) 44102 生抱梭菌 (B) 64941

金黄色葡萄球菌 (B) 26003 乙型副伤寒沙门菌 (B) 50094

枯草芽抱杆菌 (B) 63501 白色念珠菌 (F) 98001

铜绿假单胞菌 (B) 10104 黑曲霉菌 (F) 98003

74测试菌悬液菌液制备

接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养

物至营养肉汤培养基中，于30〜35 ° C培养18〜24小时。分别取上述新鲜培养 物用

0. 9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50^100cful的菌悬液。

接种生抱梭菌至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35 C培养18〜24小时。上述 新鲜培 养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数lO^lOOcfu的菌悬液。

接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于 23〜28 C培养24〜48

小时。取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数5(T100cfu的菌悬液。

接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于 23〜28 C培养

5〜7天，加入3〜5ml含0. 05% (ml/ml )聚山梨脂80的0. 9%无菌氯化钠溶

液，将抱子洗脱。然后，用适宜方法吸出抱子悬液至无菌试管内，用含 0. 05%

(ml/ml )聚山梨脂80的0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含抱子数50〜

lOOcfu的菌悬液。

备注：控制菌项检查用工作菌液浓度为 10^100cfu/m 1 ,无菌项检查用工作菌

液浓度小于100cfu/ml。

7. 5.检查 液体培养基促生长能力检查：分别接种不大于lOOcfu的试验菌于被检培养基和对照培

养基中，在相应规定的培养温度及最短培养时间下培养。

液体培养基指示能力检查：分别接种不大于lOOcfu的试验菌于被检培养基和对照培养 基中，在相应规定的培养温度和最短时间下培养。

固体培养基促生长能力检查：取0. 1ml （含菌数50〜100cfu/ml ）的试验菌分 别涂布于 被检培养基和对照培养基平板上，在相应规定的培养温度及最短时间下培养。

固体培养基指示能力检查：取不大于lOOcfu的试验菌分别涂布于被检培养基和对照 培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间下培养。培养基抑制能力检 查：接种不大于lOOcfu的试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温 度及最长时间下培养。

无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶）/倾注相应数量的平皿，按规定条 件培养。

适用性检查：取50〜lOOcfu/ml的试验菌lml,分别注入无菌平皿中，立即倾注被检培 养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，按规定条件培养，计数。同时， 用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。空白对照：被检培养基同时做空白 对照，按上述规定条件培养。76各培养基检查信息

8. 结果

被检培养基名称 检杳用菌种 检查能力 培养时间 培养温度

营养琼脂 金黄色葡萄球菌、枯草

牙抱杆菌、大肠埃希菌 适用性检查 不超过3天 30~35 C

营养肉汤培养基 沙门菌 促生长 18~24h 30~35 C

改良马丁培养基 白色念珠石 目、黑曲琴 促生长 5天 20~25 C

无菌 14天

大豆酪蛋白琼脂培养基 金黄色葡萄球菌、枯草芽 抱杆菌、铜绿假单胞菌 适用性检查 不超过3天

30~35 C

白色念珠石 宜、黑曲霉 不超过5天

沙氏匍萄糖琼脂培养基 白色念珠菌 促生长、指示 24 h 30~35 C

匚1色念珠菌、黑曲霉 适用性检查 不超过5天 23~28 C

玫瑰红钠琼脂培养基 白色念珠石 宜、黑曲霉 适用性检查 不超过5天 23~28 C

硫乙醇酸盐流体培养基 金黄色葡萄球菌、枯草 适用性检查 3天

30~35 C 芽抱杆菌、铜绿假单胞

菌、生抱梭菌 无菌检杳 14天

乳糖胆盐发酵培养基 大肠埃布困 促生长 18h 35 ±2 C

金黄色葡萄球菌 抑制 24h

乳糖发酵培养基 大肠埃布困 促生长、指示 24 h 35 ±2 C

伊红美监琼脂培养基 大肠埃布困 促生长、指示 24 h 35 ±2 C

SCDLP液体培养基 金黄色葡萄球菌、大肠

埃希菌、沙门菌、铜绿假

单胞菌 促生长 24 h 35 ±2 C

哥伦比亚血琼脂基础 金黄色葡萄球菌、大肠

埃希菌、沙门菌、铜绿假

单胞困、生抱梭困 促生长 72 h 35 ±2 C

十六烷三甲基漠化鞍培

养基 铜绿假单胞菌 促生长 24 h 35 ±2 C

大肠埃布困 抑制 48h

结果见附表一培养基适用性验证结果、附表二培养基适用性检查通用 9. 结论： ___________________________________________________________________________________

10. 周期：干粉或无菌培养基批号改变时重新验证