培养基适用性检查方法的验证
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. 培养基适用性检查方法的验证
验证目的：确认所采用的方法适合于供试品的无菌检查。即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除到可以忽略不计，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。 KHCa23ypw
2. 验证时机 [4SP | AFz
2.1. 建立药品的无菌检查法时 D 3jPp4h
2.2. 修订检验方法时 ^y B:+ -S4
2.3. 供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时 9C~R=l[
3. 验证要求 17|Y l
3.1. 验证时，按“供试品的无菌检查”的规定要求进行操作试验。 agi; @ PI
3.2. 对每一试验菌应逐一进行验证。 *^kczYifAK
3.3. 硫乙醇酸盐流体培养基—金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌。 V20@ m@+OD
3.4. 改良马丁琼脂培养基—白色念珠菌、黑曲霉。 WuQ} >^BQ*
3.5. 验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 3#~20 I/
3.6. 验证试验可在供试品的无菌检查之前或与供试品的无菌检查同时进行。当同时进行时，若验证试验失败，则供试品的无菌检查结果是不成立的。 + 9 bN7=
4. 验证程序 =y 5Q|v ;
4.1. 验证准备：准备验证所需的供试品、培养基、试药试剂、仪器设备和菌种。
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4.1.1. 培养基 gj$/ B-_E<
硫乙醇酸盐流体培养基；改良马丁琼脂培养基；营养琼脂培养基；血琼脂培养基
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备注： 1c1W _X W
a) 培养基应注明来源；如采用市售干粉培养基，应按说明配制。 q4X"U! 9
b) 配制后的培养基应按照中国药典附录“无菌检查法”中“培养基的适用性检查”项下检验无菌性和灵敏度。 q;k b .]k
4.1.2. 仪器设备 4 `pi_
4.1.2.1. 净化工作台 U:Z`At9Z2_
4.1.2.2. 生物洁净安全柜 2Z: 7y0+ m
4.1.2.3. 集菌仪 =HwM H 0j
4.1.2.4. 生化培养箱 W &-B51w^
4.1.2.5. 霉菌培养箱 y _\ - *
4.1.2.6. 高温试验箱 _t0a`Y T9y
4.1.2.7. 台式灭菌器 O Plk%5=8~
4.1.2.8. 医药品冷藏柜 A[ Qj:^v
4.1.2.9. 微波炉 &:3 T
备注： 以上仪器设备需要验证的均应已按要求验证过。 ,hA2d 9wV
4.1.3. 菌种 g4 ELl"
4.1.3.1. 金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26003〕 _ #_RJ cud
4.1.3.2. 枯草芽孢杆菌〔CMCC（B）63501〕 oz h:tA&
4.1.3.3. 白色念珠菌〔CMCC（F）98001〕 9 ,Tzd *
4.1.3.4. 黑曲霉〔CMCC（F）98003〕 .Q[A / ci
4.1.3.5. 铜绿假单胞菌〔CMCC（B）10104〕 4.1.3.6. 生孢梭菌〔CMCC（B）64941〕 ?^Bi -.17[ 4.2. 供试液制备：按照中国药典附录“无菌检查法”中“批出厂产品最少检验数量”一表确定取样量。供试品的稀释按品种项下的规定确定稀释液（可根据供试品特性调整稀释液用量），如品种项下无规定，则按中国药典附录“无菌检查法”中“稀释液、冲洗液及其制备方法”项下的规定确定稀释液。 [ Hi( C 4.3. 菌液制备 ].I8@}= C 按中国药典附录“无菌检查法”中“灵敏度检查”项下的菌液制备。 U VudX:G m 备注： 65=qRd .Da a) 对于同一份培养物，采用相同的测定方法，不同的试验人员的测定结果可能有很大的误差。所以在操作过程中，应特别注意能造成误差的各个环节。 s| og'U b) 当采用固体培养基上的培养物制备菌悬液时，应尽量使菌苔成单个菌体分散于稀释液中。 T" FTFuN~ c) 为保证每次菌数测定能在预计的范围内，在对菌液做10倍系列稀释时，要求稀释每个浓度的菌液均应换灭菌吸管。 DdO&m dlt d) 液体培养物直接稀释法较比浊法造成误差小，基本保证每次菌数能控制在要求的范围内。 na>3o ) \ e) 最终制得的菌悬液应为小于100CFU/ml。 F' 5"N? gN f) 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌采用营养琼脂培养基；生孢梭菌采用血琼脂培养基；白色念珠菌、黑曲霉采用改良马丁琼脂培养基。 #[{ "FLp 4.4. 验证方法 'V ( p8-k 4.4.1. 将规定量的供试品按薄膜过滤法过滤，用定量的冲洗液冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100CFU的试验菌，过滤。 c0 ZH ^&g 4.4.2. 取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁琼脂培养基中，或将培养基加至滤筒内。 :.[lrOX9sN 4.4.3. 另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。按规定温度培养3~5天。 3 p/ ] 9wc 4.5. 结果判断 ? Ei5 4.5.1. 如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，供试品可照此检查法和检查条件进行供试品的无菌检查法检查。 t?,zgp(@h 4.5.2. 如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢或不生长，可采用增加冲洗量，增加培养基用量，使用中和剂或灭菌剂；更换滤膜品种等方法，并重新进行方法验证。
