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改良扩增前引物延伸技术检测痕量DNA

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进 行探 讨 。
１ 材料 和 方法
循环 条 件为 ９ ℃ １ ｉ ，７Ｃ ２ ｎ ３ ｉ 至 ５ ℃ ， ４ ｎ ３ ｏ ｍｉ， ｍ ｎ升 ｍ ５ ５ ℃ ４ｍ ｎ 循环 ５ ５ ｉ， Ｏ次 ；８ ５ｍ ｎ ４ ６ ℃ ｉ ；℃保 温 。
１４ 全 基 因组扩 增 产物 的检 测 ．
２ ２ Ｐｏ ｌｒ ｌｓ 剂 盒 对全 基 因组 扩 增 产物 进 行 ． ｒ ｅ ｕ 试 ｉ ｆ Ｐ
Ｄ Ａ分 型 的结 果 Ｎ
如 表 ２所示 。
表 １ 不 同模 板 量 Ｄ Ａ 经 全 基 因组 扩 增 后 的 定 量 结 果 Ｎ
Ｔａ ｌ Ｔ ｅ ｑ ａ ｔ ｙ ｏ ｒ ｄ ｃ ｆ ｖ ｒ ｉ ｇ ａ ｕ ｔ ｏ ｅ ｌ ｔ ｂｅ １ ｈ ｕ ｎ ｉ ｆｐ ｏ ｕ ｔｏ ａｙ ｎ ｍｏ ｎ ｆｔ ｍｐ ａｅ ｔ ＤＮＡ ｂ ｈ ｌ ｅ ｏ ｐ ｉ ｃ ｔ ｎ ｙ ｗ ｏｅ ｇ ｎ ｍｅ ａ ｌ ａ ｉ ｍ ｉ ｆ ｏ
・
论著 摘 要
・
改 良扩 增 前 引物 延 伸技 术检 测 痕 量 Ｄ Ａ Ｎ
陈 玲 王 慧 君 刘 超 ， ，
（ ． 方 医科 大学法 医学 研究 所 ， １南 广州 ５ ０ １ ２ 广州 市刑 事科 学技 术研 究所 ， 州 ５ ０ ３ ） １５ ５； ． 广 １００
Ｎ 关 键 词 ： 改 良的 扩 增 前 引 物 延 伸 反 应 ； 全 基 因组 扩 增 ； 痕 量 Ｄ Ａ检 测 中 图分 类 号 ： Ｄ ８ ７ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： １０ —１９ ２０ ）４０ ４ －１ ０ ８８９ （０ ７ ０ －４ ２０
２ 结 果
１１ 主 要 仪 器 和 试 剂 Ｐ ９０ ． Ｅ ６ ０扩 增 仪 ； Ｂ７ ０ Ａ Ｉ５ ０ 实时荧 光定 量 Ｐ Ｒ仪 ； Ｂ ３ ０ Ｃ Ａ Ｉ１０型 基 因分 析 仪 ；５ １Ｎ 随机 引物 （ 上海 生工公 司） Ｅ ｐ ｎ ｉ ｉ ｌｙＥ — ； ｘ ａ ｄＨ ｇ Ｆｄ ｉ ｎ ｈ ｅｔ ｚ ｌ ｘ（ ｏｈ ｉ ｎ ｓｃ ； ｕ ｔ ｌ Ｔ人类 Ｄ Ａ ｙｌ Ｍｉ Ｒ ｃ ｅＤａ ｏｔ ） Ｑ ａ ｉ ｅＭ ｌｅ ｇ ｉ ｎ ｆｒ ｉ Ｎ 定量试 剂 盒及 Ｐｏ ｌｒ ｌｓ 剂盒 （ 国 Ａ Ｉ 。 ｒｆｅ ｕ 试 ｉ Ｐ 美 Ｂ ） １２ 样品 准备 ｃｎ ｏ Ｄ Ｉ９４ Ａ（ ． ｇ ， 国 ． ｏｔ ｌ ｂ ９ ７ ０ １ ／ 美 ｒ Ａ ｎ Ａ Ｉ 品） 消 毒 双 蒸 水 稀 释 ， 得 四种 浓 度 ：． 、 Ｂ产 用 获 ０ １ ０ ０ 、． １ ０ ０ ５ ｇ ， 种浓 度均 取 ２份进 行平 ．５０ ０ 和 ．０ ／ 各 ｎ
维普资讯 ７ ｒ２ ０
第２ Ｏ卷
第 ４期
医 学 研 究 生 学 报
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｄｃ ｌＰ ｓｇ ａ ｕ ｔ ｓ ｏ ｒ ａ ｆＭｅ ｉａ ｏ ｔｒ ｄ ａｅ
２０ ０ ７年 ４月
痕 量 Ｄ Ａ又 称 低 拷 贝模 板 （ｏ ｏ ｙｎ ｍ ｅ ， Ｎ １ｗ ｃｐ ｕ ｂ ｒ Ｌ Ｎ） ｉ 等 最 初 对 其 定 义 为 少 于 １０Ｐ Ｃ 。Ｇｌ ｌ ０ ｇ的 Ｄ Ａ模 板 。现 有 的 Ｐ Ｒ Ｓ Ｒ方 法 ， 从 一 定 程 度 Ｎ Ｃ —Ｔ 虽 上解 决 了微 量 模 板 Ｄ Ａ 分 析 的 难 题 ， 对 于 痕 量 Ｎ 但 Ｄ Ａ仍很 难 检 测 成 功 。 由 于 痕量 生 物 检 材 是 法 医 Ｎ 学上 巨 大 的潜 在 的 生 物 物 证 来 源 ， 何 提 高 痕 量 如 Ｄ Ａ 的检 测 水 平 ， 目前 法 医 Ｄ Ａ检 验 迫 切 需 要 Ｎ 是 Ｎ 解决 的难 题 。全基 因组 扩增 技术 被认 为是 目前 解决 这一 难题 的一 种 基本 方 法 。经 十余 年 的探 索 ， 全 基 因组 扩增技 术 不 断发 展 与 完 善 ， 已被 广 泛 用 于 遗 传病 的产前诊 断 、 疾病 基 因的研 究等 ， 取得 良好 的 并 效 果 。本研 究 参 照 Ｈ ｎｏ ａ ｓｎ建 立 的 改 良 的扩 增 前 引物 延 伸 反 应 （ｍ ｒｖｄ ｐｉｅ ｘ ｎｉ ｒａ ｉｐｏｅ ｒ ｒｅｔ ｓ ｎｐｅｍ— ｍ ｅ ｏ ｐｉｅｔ ｎ Ｉ Ｅ ）Ｓ ， 痕 量 Ｄ Ａ样 本 的 检 测 方 法 ｌ ａｉ ， Ｐ Ｐ Ｉ 对 ｉ ｆ ｏ － ］ Ｎ
行实验 。
２ １ 全基 因组 扩 增 产 物 定量 结 果 模 板 量 分 别 为 ． Ｏ １ Ｏ Ｏ 、 ． １和 Ｏ ０ ５ ｇ的 ｃ ｎｒ Ｎ ９ ４ Ａ， ． 、 ．５ Ｏ Ｏ ．０ ｎ ｏ ｔ ｌ Ａ ９ ７ 经 ｏＤ 全基 因组 扩增后 ， 扩增 产物 的定 量结 果见 表 １ 。
１４ １ 扩增 效 率 检 测 按 Ｑ ａｔ ｌｒ ．． ｕ ｎｉ ｅ 人类 Ｄ Ａ定 ｉ ｆ Ｎ 量试 剂 盒使用 手 册 ， Ａ Ｉ ５ ０实 时荧 光 定 量 Ｐ Ｒ 在 Ｂ７ ０ Ｃ 仪上 测得 全基 因组扩增 产 物 的浓度 ， 对模 板 Ｄ Ａ 的 Ｎ 放 大倍 数计 算产 物量 和扩 增效 率 。 １ ４ ２ Ｐｏ ｌｒ ｌｓ 剂盒 扩增 和 基 因型检 测 扩 ． ． ｒ ｅ ｕ 试 ｉ ｆ Ｐ 增 体 系 ２ ， 中 Ｐ Ｒ Ｒ ａｔｎ Ｍｉ １ ， ｒ ｅ ５ 其 Ｃ ｅｃｉ ｘ ０ ｏ Ｐｉ ｒ ｍ ｓｔ ｌ Ａ ｐｉ ａ ｏｄＤ Ａ聚 合酶 Ｏ ５ ， 基 因 ｅ５ｔ ， ｍ ｌＴ ｑＧ ｌ Ｎ ｒ ． 全 组 扩增 产物 １ ｌ Ｏ 。热 循 环 反 应 按 试 剂 盒 说 明 书进 行 。扩 增 后 的产 物 用 ３ ０ １ ０型基 因分 析仪 进 行 Ｄ Ａ Ｎ 分 型 ， ｅ ｅｅ ｎ３ ７和 Ｇ ｎ ｔ ｅ ． Ｇ ｎ ｓａ ． ｅｅｙ ｒ ７软件 分析 结果 。 ｐ ３

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改良酚_氯仿法结合miniSTR分型技术检验陈旧骨痕量DNA

改良酚_氯仿法结合miniSTR分型技术检验陈旧骨痕量DNA

·法医学·改良酚/氯仿法结合miniSTＲ分型技术检验陈旧骨痕量DNA徐凯1，徐国昌2，张玥3，任甫4摘要：目的建立5个miniSTＲ基因座的复合扩增系统，提高STＲ基因座对陈旧骨检材的个体识别效能。

方法新设5个STＲ基因座的引物，分别用FAM、TAMＲA、TET标记D3S3053、D18S853、D12ATA63、D6S474、D9S1122，通过PCＲ扩增，利用ABI3100xL遗传分析仪进行片段长度分析，对84份河南汉族无关个体血样，以及25例陈旧骨检材进行检测。

结果5个基因座均得到有效扩增，在河南汉族人群中5个miniSTＲ基因座个体识别能力DP为0．8768 0．9623，杂合度H为0．7454 0．8934，多态信息含量PIC为0．7145 0．8214。

5个miniSTＲ基因座总DP值为0．99999672。

用Identifil试剂盒及miniSTＲ技术对25份陈旧骨检材的位点检出率分别为60．25%和84．80%。

结论上述5个miniSTＲ基因座在河南汉族人群中等位基因分布较好，个体识别能力高，适用于个人识别和亲权鉴定，同时为陈旧骨痕量DNA样本分型提供了一种新的检测方法。

关键词：miniSTＲ；遗传多态性；陈旧骨中图分类号：Q987文献标志码：A文章编号：1672－688X（2014）01－0057－04Analysis on Trace DNA from Obsolete Bones by Phenol-chloroformCoupled with MiniSTＲTechnical MethodXU Kai，XU Guo-chang，ZHANG Yue，et al（Henan Province People’s Procuratorate，Zhengzhou453000，China）Abstract：Objective To establish five loci multiplex amplification miniSTＲsystems，and to improve forensic detection performance of the obsolete bone samples with the STＲloci．Methods The new five STＲloci（D3S3053，D18S853，D12ATA63，D6S474，D9S1122）primers were designed and marked by FAM，TAMＲA，TET，amplified by PCＲand analysized using the ABI3100xL genetic analyzer for fragment length analysis．84Henan Han Nationality blood samples of unrelated individuals，and25cases of obsolete bone samples were collected for testing．Ｒesults5loci were effectively amplified，the5miniSTＲrecognition rate（DP）of individual loci in the Han Nationality population was0．8768 0．9623，the heterozygosity（H）was0．7454 0.8934，and the polymorphism information content（PIC）is0．7145 0．8214．The total5 miniSTＲloci DP was0．99999672．The detection rate of remaining genetic locus of the25obsolete bones was84．80%by Identifiler kit，and60．25%by miniSTＲmethod．Conclusion The five miniSTＲloci in Han Nationality population in Henan Province is better distributed and easily recognized as a individual identification and paternity testing，and provides a new detection method for DNA samples typing of obsolete bones．Key words：miniSTＲ；genetic polymorphisms；obsolete bones基金项目：河南省科技厅基础与前沿技术研究项目（132300410088）辽宁省百千万人才工程培养经费资助项目（2010921042）收稿日期：2013－11－20作者单位：1．河南省人民检察院，河南郑州4530002．南阳理工学院生物人类学研究所，河南南阳4730043．重庆市公安局，重庆4000004．辽宁医学院人类学研究所，辽宁锦州121000作者简介：徐凯（1974－），男，河南驻马店人，法医师，从事法医病理学研究。

一种用于定量检测CHO宿主细胞DNA残留量的引物对及检测方法[发明专利]

一种用于定量检测CHO宿主细胞DNA残留量的引物对及检测方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810259308.6(22)申请日 2018.03.27(71)申请人 天士力生物医药股份有限公司地址 201203 上海市浦东新区中国（上海）自由贸易试验区居里路280号1、2幢(72)发明人 徐丽娟　袁婀娜　陶铜静　韩进　(74)专利代理机构 北京华科联合专利事务所(普通合伙) 11130代理人 王为(51)Int.Cl.C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称一种用于定量检测CHO宿主细胞DNA残留量的引物对及检测方法(57)摘要本发明涉及一种用于定量检测CHO宿主细胞DNA残留量的引物对及检测方法，本发明利用特异性引物对参与荧光定量PCR检测反应并检测生物制品中残留CHO细胞DNA。

荧光定量PCR是通过荧光染料，对PCR产物进行标记跟踪，并计算待测样品模板的初始浓度，其中，所述特异性引物对，正向引物序列见SEQ ID NO:15，反向引物序列见SEQ IDNO:16。

权利要求书1页 说明书16页序列表6页 附图8页CN 110305938 A 2019.10.08C N 110305938A1.一种用于定量检测CHO宿主细胞DNA残留量的引物对，包括正向引物和反向引物，其特征在于，其中正向引物结合于测试序列的第130-146位；其中反向引物结合于测试序列的第266-282位，并且所述引物对所扩增获得的扩增产物的长度为153bp。

2.根据权利要求1的引物对，其特征在于，其中所述测试序列为与SEQ ID NO:1所示序列有85％以上序列相似性的核苷酸序列。

3.根据权利要求1的引物对，其特征在于，其中所述测试序列与SEQ ID NO:1所示序列有98％的序列相似性。

4.根据权利要求1的引物对，其特征在于，其中所述测试序列如SEQ ID NO:4所示。

dna扩增荧光测序技术

dna扩增荧光测序技术

dna扩增荧光测序技术DNA扩增荧光测序技术，简称DNA测序技术，是一种重要的生物技术方法，它可以揭示DNA分子的结构、功能和遗传信息。

通过DNA扩增和荧光标记，科学家们可以准确地测定DNA序列，从而深入研究生命的奥秘。

DNA扩增荧光测序技术的原理是基于聚合酶链式反应（PCR）和荧光标记的碱基配对原则。

首先，将待测DNA样品进行PCR扩增，使其增加到足够数量。

然后，将PCR产物与荧光标记的末端引物一起反应，使其在测序过程中发出荧光信号。

接下来，将PCR产物分离，并通过荧光检测仪器进行测序。

根据不同的荧光信号，可以准确地确定每个碱基的序列。

DNA扩增荧光测序技术的应用非常广泛。

它可以用于基因组测序、基因突变检测、疾病诊断和药物研发等领域。

通过测定DNA序列，科学家们可以揭示生物体内的基因组结构和功能，进而研究基因与疾病的关系。

同时，DNA测序技术还可以帮助药物研发人员快速筛选候选药物，为新药的研发提供重要依据。

DNA扩增荧光测序技术的发展也带来了许多创新和突破。

随着测序仪器的不断升级和改进，测序速度和准确度得到了极大提高。

同时，新的测序方法和算法的引入，也使得大规模测序和全基因组测序成为可能。

这些进步不仅加速了科学研究的进程，也为临床诊断和个性化治疗提供了更多可能性。

DNA扩增荧光测序技术的发展离不开科学家们的不懈努力和创新精神。

他们不断改进实验方法和测序仪器，提高测序效率和准确性。

同时，他们也在不断探索新的应用领域，使得DNA测序技术在医学、农业和环境保护等领域发挥更大的作用。

DNA扩增荧光测序技术是一项重要的生物技术方法，它通过测定DNA序列，揭示了生命的奥秘。

随着技术的不断发展，DNA测序技术在基础研究和应用领域发挥着重要作用。

相信在科学家们的努力下，DNA测序技术将继续取得突破，为人类的健康和生活质量带来更多的改变。

迟钝爱德华氏菌RNA提取及痕量基因组DNA去除方法探究

迟钝爱德华氏菌RNA提取及痕量基因组DNA去除方法探究

迟钝爱德华氏菌RNA提取及痕量基因组DNA去除方法探究王克平;叶江;张惠展【摘要】迟钝爱德华氏菌EIB202是一类细胞壁结构特殊的革兰氏阴性菌,离质量RNA提取相对较难.为了从转录组水平研究这类致病菌的致病机理,需要摸索有效的RNA提取及RNA样品中痕量基因组DNA去除方法.对常规RNA提取步骤进行改进,增加PBS清洗、反复冻融及较高浓度溶菌酶处理等步骤；另外,利用小体系基因组DNA去除系统,Mg2+与Mn2+协同激活DNase (I)去除RNA样品中基因组DNA污染.利用优化方法提取的RNA在质量及浓度(1 740 ng/μL)方面均有了显著改善,并建立了一套完全去除RNA样品中痕量基因组DNA污染的程序.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2012(000)006【总页数】4页(P179-182)【关键词】迟钝爱德华氏菌;RNA;基因组DNA;DNaseI;RT-PCR【作者】王克平;叶江;张惠展【作者单位】华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室,上海200237;华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室,上海200237;华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室,上海200237【正文语种】中文随着生物技术的发展，Northern blot、RT-PCR、RT-qPCR、基于转录谱分析的DD-RTPCR及基因芯片等技术得到了广泛应用。

然而，这些技术可靠性的关键在于高质量RNA的获取，涉及RNA浓度与分子完整性、基因组DNA、蛋白、糖类及有机试剂污染等方面。

对于一般的革兰氏阴性菌，利用常规的RNA试剂盒提取到的RNA便能符合基本试验要求，但是对于像迟钝爱德华氏菌这类有着特殊细胞壁结构的革兰氏阴性菌［1］，获得高质量的RNA有一定难度。

目前，对于细胞壁较难破碎菌体的RNA提取一般采用液氮研磨、酸洗玻璃珠破壁以及超声波处理等方法［2］，但是这类方法操作过于剧烈，不仅容易造成污染，而且在操作过程中很可能造成菌体转录谱发生变化，给后续试验带来假象。