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早孕期母血循环中胎儿细胞的检测
于萍;刘沂训;周宁
【期刊名称】《中国优生与遗传杂志》
【年(卷),期】1999(7)3
【摘要】自行设计引物并建立早孕妇女外周血中胎儿细胞检测的巢式ＰＣＲ方法、计算机辅助设计的两对引物位于Ｙ染色体ＺＰＹ基因保守区内，扩增产物分别是３５４ｂｐ和３０７ｂｐ，该引物具有高度的特异性和敏感性。
应用该引物对３１例６１４周的早孕妇女连续采血基因扩增，１９例妊娠男性胎儿妇女外周血中孕６周即有胎儿细胞检出１／１９（５３％），ＺＰＹ基因检出率随孕周增加而增高，而到孕１２周则达到１８／１９（９４７％），总有效率可达９６８％。
提示该方法检测胎儿细胞ＤＮＡ是可行的、且胎儿细胞最早进入母血循环的时间存在明显的个体差异，利用母血中胎儿细胞进行产前诊断的最佳采血时间以孕１２周以后为宜，并应注意假阳性结果的判断。
【总页数】2页(P49-50)
【关键词】PCR;产前检查;DNA;胎儿细胞
【作者】于萍;刘沂训;周宁
【作者单位】山东医科大学基础医学院生理学教研室;济南军区总医院妇产科
【正文语种】中文
【中图分类】R714.5
【相关文献】
1.母血循环胎儿DNA在无创性产前诊断中的应用 [J], 刘娜;景茹草;吕晓莉
2.用聚合酶链反应技术产前诊断早中孕期胎儿宫内巨细胞病毒感染 [J], 覃靖;陈荔丽
3.母血循环中胎儿细胞的研究进展 [J], 邵方怡;孔桂英
4.母血循环中胎儿细胞的研究进展 [J], 阳豫
5.母血循环中胎儿细胞出现频率及其孕期的影响 [J], 李智; 夏铁安
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・６３２・生堡翅芒社盘圭；嫂！生！旦筮！！鲞筮！翅堡！也』Ｑ！！丝亟塑！！：△！耻！！！鲤！：ｙ丛鱼：盟垒§胎母输血综合征对围产儿影响的研究进展赵友萍黄醒华胎母输血综合征是一种少见的产科疾病，即胎儿红细胞由胎盘绒毛间隙进入母体血液循环，引起胎儿不同程度的失血及母体溶血性输血反应的一组症候群，也是胎儿非免疫性水肿的主要病因之一。
１９５４年由Ｃｈｏｗ首次报道，其后，相继有文献报道，但至今无大样本、多中心的研究成果。
由于本病发病隐蔽，在多数情况下不易做出早期诊断，故一旦发生，围产儿死亡率较高。
为进一步提高对本病的认识，降低该病引起的围产儿并发症发生率及死亡率，本文对胎母输血综合征的发病情况及临床表现等综述如下。
一、发病情况及影响因素１９５４年ｃｈｏｗ首先报道了大量的胎母输血可引起新生儿严重贫血。
其后，又相继有胎母输血导致围产儿死亡的报道。
胎儿血液漏出可以发生在绒毛形成后妊娠期的任何阶段或分娩时。
９３％的胎母输血综合征患者其失血量＜Ｏ．５ＩＩＩｌ，约０．３％的患者其失血量＞３０ＩＩｌｌ…。
胎母输血综合征患者中的大量胎母输血的定义尚不够明确。
一些作者认为，胎儿从胎盘流失到母体的血量为１５０ＩＩｌｌ即为大量胎母输血；但也有作者认为，漏失血量超过８０ＩＩｌｌ即可定义为大量胎母输血。
胎母输血综合征患者的围产期胎儿死亡率为３３％一５０％【２Ｊ，而发生率为Ｏ．１％一０．３％¨１。
胎母输血综合征病因不清，目前认为是脐动脉和绒毛间隙存在压力差，胎儿代谢产物可进入母体。
因此，胎儿血细胞也可循此途径，特别是绒毛有破损时，血细胞可直接进入到绒毛间隙的母血中。
胎母输血综合征的发生常与产前出血（前置胎盘及胎盘早剥）Ｈｊ、剖宫产、人工剥离胎盘、子痫前期、母体创伤、外转胎位术、脐带穿刺、羊膜腔穿刺、脐静脉血栓及绒毛膜血管瘤等”１有关，８２％的患者原因不明№Ｊ，可发生于妊娠各个时期，多发生于产前及产时。
二、临床表现胎母输血综合征起病隐匿，缺乏特异性的诊断标准。
胎母输血综合征检测方法与相关疾病的研究进展
王国美;杨佶军;刘铁梅
【期刊名称】《临床输血与检验》
【年(卷),期】2024(26)3
【摘要】胎母输血综合征(fetomaternal hemorrhage,FMH)是指分娩前或分娩过程中,胎儿红细胞进入母体循环,母亲产生针对胎儿红细胞表面抗原的抗体,结合红细胞表面抗原使胎儿红细胞发生不同程度溶血的一系列反应。
准确定量胎母出血的量对预防包括新生儿溶血病在内的新生儿出生缺陷至关重要。
本文基于国内外最新相关文献,分析了FMH的新型和传统检测方法,阐明了各种检测方法的优势及不足之处,同时对FMH和各种围产期胎儿临床疾病的相关性作出了简要概述,为胎母输血综合征检测技术的标准规范化以及进一步预防诊治相关疾病提供依据。
【总页数】7页(P426-432)
【作者】王国美;杨佶军;刘铁梅
【作者单位】吉林大学中日联谊医院
【正文语种】中文
【中图分类】R714.2
【相关文献】
1.宫内感染与胎母输血综合征及炎症相关细胞因子的相关性
2.胎母输血综合征的研究进展
3.联合检测母血HbF、AFP值在预测胎母输血综合征中的应用价值
4.胎母输血综合征临床研究进展
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母胎免疫耐受相关因素的研究进展发表时间：2012-11-21T15:03:53.297Z 来源：《医药前沿》2012年第22期供稿作者：孙岩1 赵静2 张佰玲3[导读] 从免疫学角度看，胎儿具有一般基因来自父方，对母体无疑为一种同种异体移植物，理应受到母体免疫排斥。
孙岩1 赵静2 张佰玲3（1山东省即墨市疾病预防与控制中心山东即墨266200）（2山东省即墨市人民医院山东即墨266200）（3中国人民解放军第二一一医院黑龙江哈尔滨150080）【摘要】胎儿携带二分之一父方基因和二分之一母方基因在母体宫内，可视为移入母体内的半异体移植物，但成功妊娠的胎儿却不被母体排斥，这是由于妊娠期的母体存在免疫耐受。
其中胎盘的滋养层和底蜕膜上有许多免疫因子可使胎儿得以逃避母体的免疫攻击:胎盘自身的机械性屏障作用也起重要作用，HLA-G，E可抑制妊娠时T细胞及NK细胞的表达。
【关键词】胎盘妊娠母胎免疫免疫耐受【中图分类号】R392 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）22-0096-011 母胎免疫耐受机理的研究概况从免疫学角度看，胎儿具有一般基因来自父方，对母体无疑为一种同种异体移植物，理应受到母体免疫排斥。
然而事实上，胎儿并不被母体排斥，而是产生免疫耐受。
这一明显与移植排斥反应相矛盾的现象引起了许多学者的兴趣，并提出许多学说。
包括：妊娠母体免疫功能低下；子宫为免疫赦免器官；胎盘无抗原性等。
然而进一步的研究发现：孕期母体免疫细胞计数及功能均无异常，免疫应答力完整；子宫对异体的其他组织如皮肤等仍产生排斥反应，且胚胎不仅在子宫内而在宫外也同样能存活，如腹腔妊娠；在小鼠孕体移植实验中，将胚胎与胎盘组织分别植入预先对父亲品系组织抗原致敏的母体内，结果胚胎迅速遭到排斥，而胎盘滋养组织生长良好。
由于胎盘滋养层是母胎直接接触的界面，且具有不被母体免疫系统排斥的特点，一直视为研究的热点。
认为滋养层具有保护胎儿免受母体免疫系统攻击的作用。
胎母输血综合征临床研究进展杨玉芳;叶红;罗飞;惠燕;朱文静【摘要】胎母输血综合征(FMH)是产科比较少见的严重并发症,由于起病隐匿、发病率低、缺乏特异性临床表现,早期诊断较困难,但可引起胎儿贫血、水肿、围产儿死亡等严重的不良后果.现病因、发病机制不明,可能与胎盘绒毛间隙的局部压力差、感染等相关.临床关于FMH胎盘病理学的研究较少,FMH的胎盘病理检查发现其中绒毛发育不良、不成熟,绒毛血管和间质中有核红细胞(nRBCs),胎盘颜色苍白,间质性血栓(IVT)形成与FMH有较显著关系,目前还没有特异性胎盘病理特征,但结合症状体征、实验室检查,有助于明确FMH的诊断,便于及时对新生儿行有效的相关治疗,改善新生儿预后.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2018(029)021【总页数】3页(P3100-3102)【关键词】胎母输血综合征;病因;胎盘病理生理【作者】杨玉芳;叶红;罗飞;惠燕;朱文静【作者单位】三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院妇产科,湖北宜昌443000;三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院妇产科,湖北宜昌 443000;三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院妇产科,湖北宜昌 443000;三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院妇产科,湖北宜昌 443000;三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院妇产科,湖北宜昌 443000【正文语种】中文【中图分类】R442.8胎母输血是指胎儿血液进入到母体血液循环系统的一种生理现象，发生在50%～70%的妊娠中，在妊娠期或分娩时都有可能发生，通常母体血液循环中可见少量的胎儿血红细胞(RBC)，而并没有产生明显的胎儿和母体不良影响。
但是当胎儿失血量超过一定阈值时，胎儿的大量血液进入母体内就会引起严重的临床症候群即为胎母输血综合征(fetomaternal hemorrhage syndrome，FMH)。
现有不少病例报道，临床医生对FMH的认识增加，且关于FMH的研究越来越多。
母血中胎儿mRNA用于无创伤性产前诊断的研究进展杨和军综述 杨利丽审校（潍坊医学院遗传学教研室 山东 潍坊 261042）摘要 无创伤性产前诊断（Noninvasive Prenatal Diagnosis, NIPD）是目前产科学研究的热点之一。
近年来，母血中胎儿游离核苷酸的发现为遗传病的无创伤性产前诊断开辟了一个新的途径。
与DNA相比，胎儿游离mRNA主要优势在于其潜在的疾病特异性，适用群体广泛,不受胎儿性别和母体胎儿间遗传多态性的限制以及本身固有的扩增过程，这使之成为最有希望的无创伤性产前诊断生物标记物。
这篇综述主要介绍了母血中游离胎儿mRNA的来源、特点及其在无创伤性产前诊断中的应用。
关键词：无创伤性产前诊断；胎儿游离RNA；孕妇血浆Advances of Noninvasive Prenatal Diagnosis Using Cell-free FetalmRNA in Maternal BloodYANG He-jun ，YANG Li-lyWeifang Medical College ，Weifang 261042，ChinaAbstract Noninvasive prenatal diagnosis is one of the most fascinating areas of obstetrics care today. In rencent years the discovery of circulating cell-free fetal nucleic acids in maternal plasma offered new avenues for noninvasive prenatal diagnosis of fetal genetic diseases. Compared to DNA，the main advantages of the plasma RNA approach include its potential disease specificity and broad population coverage，irrespective of fetal gender and polymorphisms as well as an intrinsic amplification process in which a gene is transcribed into multiple mRNA copies, which make it the most promising biomarkers for noninvasive prenatal diagnosis. This review mainly introduced the origin, characteristics and clinical application of circulating cell-free fetal RNA in maternal blood in noninvasive prenatal diagnosis.Keywords Noninvasive prenatal diagnosis；Cell-free fetal RNA；Maternal blood约4％的新生儿受一种或多种先天性疾病的影响，而其中35％是遗传性疾病。
孕妇外周血中分离胎儿细胞及应用
李小波;秦蓁子;丁显平
【期刊名称】《国际检验医学杂志》
【年(卷),期】2005(026)007
【摘要】在每年出生的新生儿中,大约有2%的带有严重的身体、智力障碍,而其中遗传因素所致的占25%(基因因素20%、染色体因素5%).目前,由于高龄孕妇比例的不断增加和环境污染引起的胎儿畸形的发生率不断升高.产前诊断有利于降低非正常胎儿的发生率,因此受到广泛的关注.特别是近年来发展起来的用母血中的胎儿细胞进行的产前诊断因其非侵入性、对胎儿损伤小等特点成为研究的热点.
【总页数】2页(P479-480)
【作者】李小波;秦蓁子;丁显平
【作者单位】610045,成都,四川大学生命科学院遗传医学研究所;400020,重庆市江北区妇幼保健院;610045,成都,四川大学生命科学院遗传医学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R71
【相关文献】
1.孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离和富集 [J], 高松;蒋刈;戴朴
2.孕妇外周血中胎儿有核红细胞分离和应用研究 [J], 肖克林;王辉林
3.基于纳米技术从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞并进行无创性产前诊断的可行性 [J], 高海侠;刘晓华;岳洁
4.孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离、分析技术及其产前诊断应用的研究进展
[J], 朱剑文;邹丽
5.孕妇外周血中胎儿有核红细胞富集分离鉴别及应用的研究进展 [J], 靳廷丽;游雪云;黄健;匡渤海
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单细胞测序和临床应用单细胞测序技术从转录组到染色质可及性，从DNA突变到组蛋白修饰，从基因组到多组学，从动态到空间变化，多维度揭示了单细胞的分子特征，成为探索疾病发病和进展的分子机制的新型武器，在疾病预防、诊断、治疗中均有广泛的应用空间。
1、单细胞测序技术在疾病预防中的应用谈到疾病预防，疫苗可以说是历史上最有效的干预措施之一，在预防感染性疾病发生和死亡方面非常成功[1]。
这一成功主要归因于致病因子的发现和/或如何培养相应病原体以大规模生产减毒疫苗。
虽然有效的疫苗会诱导保护性免疫记忆，但人们通常对这种表现的确切机制知之甚少。
目前使用的技术，如 ELISA、ELISpots、流式细胞术和生长抑制测定，只能广泛测量疫苗接种后T细胞的反应，无法不可知地测量单个免疫细胞之间的反应差异。
单细胞测序技术则提供了一种以无偏见的方式了解单个细胞对疫苗接种反应的方法。
通过单细胞测序技术分析天然和人工病原体暴露下的免疫反应，提高了我们识别有利免疫学特征的能力。
COVID-19疫苗的研发展示了单细胞测序技术在疫苗研发中的应用潜力。
单细胞测序技术可以帮助我们快速发现中和病毒的抗体，对于预防新发或大流行性感染性疾病至关重要。
谢晓亮教授团队[2]利用高通量单细胞技术，从新冠病毒康复期病人中成功筛选出高活性的中和抗体BD-368-2。
在假病毒实验中的半抑制浓度（IC50）达到1.2ng/mL（8pM），在真病毒实验中，IC50达到15 ng/mL（100pM）。
中和抗体体内抗病毒实验进一步证实，注射BD-368-2后可完全抑制小鼠的病毒感染，达到预防效果。
此外，单细胞测序技术也可以用作研究疫苗的工具，预测疫苗的安全性和可靠性。
如登革热病毒疫苗、荚膜B组脑膜炎球菌四组分疫苗。
除了感染性疾病，在癌症研究中，通过单细胞技术对肿瘤免疫细胞及微环境研究，可了解关键T细胞的动态变化，有助于癌症疫苗的开发。
2、单细胞测序技术在产前筛查中的应用产前筛查是单细胞技术的一个主要临床应用领域。
人体血液循环系统的研究进展人体是一个复杂而神奇的系统，其中包括许多组织和器官，必须协调和相互作用才能正常运作。
血液循环系统是这个复杂系统的重要组成部分，它将氧、营养和荷尔蒙输送到身体各部位，同时也从身体中的细胞中排除二氧化碳等废物。
近年来，随着科技进步和对健康的日益重视，人体血液循环系统的研究也得到了越来越多的关注。
心血管疾病是人们非常关注的一类疾病，同时也是血液循环系统研究领域中的重点研究对象。
心血管疾病的发病原因往往与心血管系统内部的变化有关。
研究人员发现，钙调素信号转导途径是心血管系统中一个重要的分子通讯通路，不仅参与了正常的心血管生理功能，还涉及了一系列心血管疾病的发病机制。
目前，研究人员已经开发出了一系列针对钙调素信号转导途径的治疗药物，使得心血管疾病的治疗迈出了重要的一步。
另外一个研究领域是关于血细胞的研究。
血液由红细胞、白细胞和血小板等各种血细胞组成。
其中，血小板是一种关键的细胞类型，对于凝血和止血等生理作用至关重要。
当血小板数量过多时，会引发血栓疾病；相反，当血小板数量不足时，会增加出血的风险。
因此，如何控制血小板数量成为了一个热门的研究问题。
针对这一问题，许多研究人员致力于研究血小板的生成机制和细胞信号通路，并针对这些机制开发出了针对性的治疗药物，如血小板减少药和抗血小板药等，使人们对血小板疾病的治疗更加有信心。
此外，人们还对血管内皮细胞进行了广泛的研究。
血管内皮细胞是血管壁内最靠近血流的一层细胞，其功能对血管内环境和血液循环有着十分重要的作用。
研究表明，血管内皮细胞对于血脂代谢和抗炎反应的调节起着至关重要的作用。
近年来，针对血管内皮细胞的研究不断深入，研究人员发现了越来越多的与健康和疾病相关的内皮细胞分子调控机制。
这些机制包括管腔侧（luminal）和基底侧（abluminal）信号通路、内皮细胞间质量调控、内皮机械力学和刺激等，这些认识为随后的细胞及疾病治疗等方面的研究提供了新的思路和技术手段。
综述IGFBP-1与人类妊娠母体变化和胎儿生长发育相关性的研究进展马淑红石家庄平安医院河北050021IGFBP-1是一种分子量为25的蛋白质，在人体内由蜕膜细胞、肝脏、卵巢颗粒细胞核成并分泌，胰岛素样生长因子一1(IGF-1)介导生长激素的促进生长作用。
调节IGF-1作用的因子统称为胰岛素样生长因子结合蛋白(IGF-BPa)。
IGFBP家族按发现的先后分别命名为IGFBPI-6和IGFBP超家族;IGFBP相关蛋白IGFBPrp[1]。
各种IGFBP 同源性较高，都能与IGF-1结合，具有某些相同的生物学特性，在人体组织器官分布的不同，则产生不尽相同的生物学作用.IGFBP-1在IGFBP中的作用显得尤为重要，对人体的多种不同细胞、组织和器官都产生重要的生理作用。
IGFBP-1主要的生物学意义是运输和调节IGF-1与受体结合。
在IGF-1不存在的条件下，也可以独立发挥生物学作用，对血管、平滑肌、生殖器官等产生很大影响，尤其对一些内分泌疾病及生殖系统疾病的发生发展起重要作用。
近年来研究发现，IGFBP-1与妊娠后母体和胎儿生长发育等有密切关系，分述如下。
与妊娠及妊娠期疾病滋养层侵入子宫内膜受多种因素的精确调控,尤其是在母胎界面的某些局部调节因子对调节滋养层的增殖扩展和侵入发挥更重要的作用，IGF-2与IGFBP-1的相互作用尤为突出[2]。
妊娠期母血清IGFBP-1的来源包括两部分:肝脏和蜕膜化子宫内膜[2]。
IGFBP-1一方面通过抑制IGF-2的生物活性，另一方面IGFBP-1可能通过与滋养层细胞表面整合素相互作用，发挥其对滋养层侵入的阻碍作用，使胚胎着床浅易于流产Shin JC报道，轻重度子痫前期患者IGF-2mRNA表达水平显著低于正常胎盘，而平均IGFBP-1mRNA水平却高于正常胎盘，重度者IGFBP-1mRNA水平又明显高于轻度者。
由此证明，IGFBP-1的高表达与胎盘滋养层侵入过浅相关，可导致子痫前期的发生，并且IGFBP-1的表达与子痫严重程度相关。
无创DNA产前检测技术无创DNA产前检测，又称为无创产前DNA检测、无创胎儿染色体非整倍体检测等。
根据国际权威学术组织美国妇产科医师学院委员会，无创产前DNA检测（Non-invasive Prenatal Testing）是应用最广泛的技术名称。
无创DNA产前检测技术仅需采取孕妇静脉血，利用新一代DNA测序技术对母体外周血浆中的游离DNA 片段（包含胎儿游离DNA）进行测序，并将测序结果进行生物信息分析，可以从中得到胎儿的遗传信息，从而检测胎儿是否患三大染色体疾病。
一、理论依据母体血浆中含有胎儿游离DNA，为该项目提供现实依据。
胎儿染色体异常会带来母体中DNA含量微量变化，通过深度测序及生物信息可分析检测到该变化，为项目提供理论依据。
新一代高通量测序、信息分析平台为深度挖掘母体血浆中胎儿游离DNA信息提供技术依据。
二、研究进展作为一种对胎儿染色体非整倍体筛查手段，无创产前DNA测试，使用来自于孕妇血浆的无细胞胎儿DNA进行检测。
这些DNA 学术上也被称为循环游离胎儿DNA，浓度约3-13%，被认为主要来自胎盘，并在分娩后数小时内从母体血液中清除。
无创产前DNA 分析已在临床上用于胎儿非整倍体风险检测。
1969年首次报道发现母体外周血中存在胎儿细胞，经过几十年研究发现其含量极低且存在时间较长，这些特点使其在产前诊断领域的应用受到较大的限制。
1997年香港中文大学卢煜明 (Dennis Lo) 教授发现母体外周血浆中存在游离胎儿DNA ，随孕周增加稳定存在，且随孕妇分娩快速消失，可以作为非创伤性产前诊断的理想材料。
母体外周血浆中胎儿游离DNA含量大概占全部游离DNA的3-13%，也有不同研究认为其含量稍高。
由于大量来源于母体背景的游离DNA影响，需要选择超级灵敏的新一代分子生物学技术才可以在大数据量水平上对胎儿游离DNA的碱基序列做出准确判断。
早期的研究中，无创产前DNA分析对三体胎儿检测需要多个胎盘DNA或RNA标记，这使得试验非常耗时和昂贵[2]。
HDFN的诊断方法研究进展Hemolytic disease of the fetus and newborn (HDFN)是指胎儿和新生儿因先天性溶血性疾病引起的溶血反应。
HDFN是由于母体血清中存在抗胎儿红细胞抗体，这些抗体可以通过胎盘传递给胎儿，并导致胎儿红细胞在胎盘循环中溶解，最终导致溶血反应和有时产生严重的并发症。
目前，针对HDFN的诊断方法取得了一些研究进展，主要包括以下几个方面。
基于抗体筛查的方法。
抗体筛查可以检测母体血清中是否存在与红细胞无关的抗体，从而预测出可能导致HDFN的风险。
目前常用的抗体筛查方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、流式细胞术和凝集试验等。
这些方法可以快速、准确地检测出具体的抗体类型，并为进一步的诊断和治疗提供指导。
基于胎儿红细胞的检测方法。
为了直接检测胎儿红细胞中是否存在溶血现象，一些研究者提出了一些新的方法。
基于流式细胞术的胎儿红细胞检测技术可以通过检测胎儿红细胞的表面标记物来判断溶血的程度。
还有一些研究着重于利用胎儿红细胞DNA中的特定序列进行溶血性疾病的早期诊断。
基于胎儿脐血的检测方法也是HDFN诊断的研究热点之一。
近年来，随着分子生物学技术的发展，人们发现可以在胎儿脐血中检测到胎盘转录本和胎盘DNA。
通过检测这些标记物，可以识别出可能存在的溶血病变和其他致病因子，进而提前预测HDFN的风险。
基于胎盘组织的检测方法也值得关注。
胎盘组织通过胎盘穿刺或剖腹产后收集，并通过病理学检查和免疫组化等方法进行分析。
这种方法可以直接观察到溶血反应的过程和结果，有助于更准确地诊断HDFN。
HDFN的诊断方法研究目前主要集中在抗体筛查、胎儿红细胞检测、胎儿脐血检测和胎盘组织检测等方面。
这些新的诊断方法为HDFN的早期诊断和有效干预提供了更多的可能性，有助于减少HDFN对胎儿和新生儿的危害，提高其生存率和生活质量。
HDFN的诊断方法研究进展
HDFN（Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn）是指由母体血液中与胎儿血
型不同的抗体对胎儿红细胞进行破坏而引起的溶血性疾病。
该疾病的诊断对及早干预胎儿、新生儿的治疗，防止并发症的发生至关重要。
本文将总结HDFN诊断方法的研究进展。
直接试验法
直接试验法是最常用的HDFN诊断方法之一。
该方法通过检测胎儿或新生儿的血清中是否存在抗胎儿红细胞抗体，以评估溶血风险的严重程度。
常用的直接试验法包括直接凝集
试验和直接免疫荧光试验。
直接凝集试验是一种简单、快速的诊断方法，主要是通过观察
血液样本的凝集状态来确定溶血风险。
而直接免疫荧光试验则是利用荧光标记的抗人类免
疫球蛋白，检测胎儿或新生儿血清中是否存在特异性的免疫球蛋白。
胎盘穿刺法
胎盘穿刺法是一种HDFN诊断方法，它通过对胎儿体内的血液进行采样，来确定胎儿的血型和溶血风险。
另外，还可以进行胎儿DNA分析和胎免试验。
胎盘穿刺法具有高度准确
性和针对性，但有一定的风险，需要在医生的指导下进行。
基因诊断法
基因诊断法是一种新兴的HDFN诊断方法。
它可以通过分析胎儿和母体的基因，来预测胎儿是否患有HDFN。
此外，现在还有一些医学技术可以在孕早期筛查孕妇的血液，以检测是否存在HDFN的风险。
总结
HDFN诊断方法的研究已经取得了很大的进展，目前常见的方法包括直接试验法、间接试验法、胎盘穿刺法和基因诊断法。
尽管这些方法各有优缺点，但综合运用这些方法仍可
以提高HDFN的诊断准确性和减少并发症的发生。
母血循环中胎儿细胞的研究进展
摘要: 已经证明早在妊娠5周母血循环中就可监测出胎儿细胞，分离、纯化这些细胞可用于早期胎儿遗传学诊断。
常用的胎儿细胞类型为滋养细胞和有核红细胞。
目前从母血中分离、纯化胎儿细胞在技术和临床研究上取得了很大的进展，作为一种无创性产前诊断方法其有着一定的临床应用价值，但仍存在一些问题有待解决。
目前，获取胎儿细胞进行产前诊断的方法主要有羊膜腔穿刺、绒毛活检和脐血管穿刺。
这些手段对胎儿有一定的风险，有可能造成流产。
从母血中成功分离出胎儿细胞预示着只需通过简单的静脉穿刺途径即可获得胎儿DNA来源。
如果这些细胞的确来自胎儿，临床应用将包括早期诊断胎儿染色体或基因异常。
一、分娩后胎儿细胞在母血中持续存在的时间
了解分娩后胎儿细胞在母血中持续时间非常重要，因为此次妊娠诊断结果有可能源自前次妊娠的胎儿细胞，得出错误的结论。
早在前就有证实分娩男性胎儿后1～母血中仍能检测出男性淋巴细胞。
近年由于新方法的出现，发现妊娠结束后胎儿细胞能长期存留于母血。
最近一项研究采用敏感的流式分选纯化技术，在娩后长达的母血中检测到胎儿细胞。
这些细胞几乎均为一种特异性细胞类型，表达分化抗原CD34和CD38，故被认为属于淋巴样或髓样干细胞。
由于其在母血中有可能分化出免疫反应细胞，有人提出母血中持续存在的胎儿细胞与某些自身免疫病的发生有关。
自身免疫性疾病的发生率在女性人群高于男性，且多出现于生育几年之后。
Nelson等发现，患硬皮病妇女（末次分娩男婴平均时间为18.）外周血中男性胎儿细胞含量（11.1个/16ml）较正常对照组（0.38个/16ml）显著
增高，并且母子间人白细胞抗原（HLA）-II抗原相容性增高，提示妊娠或分娩过程所造成的微嵌合性（microchimerism）可能在硬皮病的发生中起一定作用。
二、选择作为无创性产前诊断的细胞类型
妊娠期母血中胎儿细胞类型均为分化末期的细胞，主要包括滋养细胞和有核红细胞。
滋养细胞的优势在于它的特殊形式，容易辨认。
如果在母血中获得如此形态的滋养细胞，其胎源性不容置疑。
在正常妊娠早期，胎盘滋养细胞已广泛脱落进入母血循环，但这些细胞又几乎以同样的速度被母亲肺循环所清除。
目前分离滋养细胞遇到两个不易克服的困难：①相对缺乏针对滋养细胞表面抗原的单克隆抗体。
②正常妊娠时母亲外周血滋养细胞数量不足。
但先兆子痫孕妇外周血中滋养细胞数量增多。
推测是由于胎盘缺氧，绒毛局部有坏死和脱落所致。
且有些染色体核型异常只见于胎盘细胞，而胎儿体细胞核型正常。
这种局限于绒毛的嵌合性在所有绒毛活检病例中占1%。
∶1。
因此母血中有更多的胎儿红细胞可被分离。
另外，在妊娠早期红细胞的发生远早于白细胞。
有核红细胞属于分化最后阶段的细胞类型，其最终结局是丢失细胞核并丧失增殖能力。
迄今还没有人观察到有核红细胞能持续存在至下次妊娠。
但有核红细胞有可能起源自母体本身。
人们熟知常规血液学检查如血细胞计数都曾偶见过有核红细胞，现在更新更敏感实验技术已证明母亲外周血中有核红细胞来源于母体和胎儿。
在有些情况下如先兆子痫，母体循环中双向来源的有核红细胞比例均增多。
有学者从母血中分离出胎儿淋巴细胞并进行了产前诊断，但胎儿淋巴细胞发生相对较晚，孕早期胎儿淋巴细胞尚未大量生成，进入母血循环中的数目更少。
即往的胎儿淋细胞在母血
中长期存在，影响诊断的准确性。
因此，胎儿淋巴细胞难以用于产前诊断。
三、胎儿细胞进入母血的时间
近来随着方法学的进步，许多学者在妊娠第6周就从母血中检测Y染色体DNA。
Thomas等最早在妊娠4周加5d的母血中测出Y染色体DNA。
他们的研究对象均为体外受精孕妇，孕期时间计算精确。
所有孕妇在7周都可检测到胎儿遗传物质。
虽然没有进一步探究男性胎儿DNA的细胞类型，但在妊娠5～8周滋养细胞的可能性最大。
四、母血循环中究竟有多少胎儿细胞
人们希望知道到底有多少胎儿细胞混入母血循环。
从一些流式分选方法结果所得出的结论是母血中胎儿细胞数量很少。
为了澄清这种结论是妊娠本身生理状态还是继发于细胞分离纯化实验过程中的细胞丢失，Bianchi等从母亲全血中测定了胎儿细胞的数量。
他们避开细胞分离步骤，抽提出全血细胞DNA，利用针对Y染色体长臂特异性序列作引物行聚合酶链反应（PCR）扩增。
这也是最简单的区分母亲细胞和胎儿细胞的方法，而且目前尚无一种标记能区别开女性胎儿细胞和母体细胞。
最后再确定胎儿的性别和核型。
这项研究包括230例中期妊娠妇女，抽取母血量为16ml。
199例胎儿核型正常，31例核型异常。
结果发现，90例正常男胎的妇女16ml血中胎儿细胞数平均为19（0.1～91），109例正常女胎的妇女检测到的胎儿细胞数平均为2（0～24），显然这些循环中的男性胎儿细胞源于前次妊娠男性胎儿。
一个意外的发现是，18例男性Down综合征的妇女母血中胎儿细胞的数量是正常男胎妇女的6倍，平均为110。
对于正常男胎的妇女母血中胎儿细胞数量也不一致：25%母血为30～91，25%为10～30，25%为5～10，25%为0～5。
这种分布差异的原因不明。
如果怀非整倍体胎儿
的妊娠允许更多的胎儿非整倍体细胞渗透到母血循环中去，对于产前遗传学诊断是十分有利的。
五、胎儿细胞的分离方法
目前设计了好几种分离胎儿细胞的实验方法。
其原理是根据其独特性阳性选择胎儿细胞或阴性选择即除掉母体特性的细胞。
由于母血中胎儿细胞数量甚少，评价一种分离技术主要考察其收获胎儿细胞数量和纯度，是否混有母体细胞。
这些方法包括：密度梯度离心法、荧光激活的细胞分选法（flourescence activated cell sorting）、磁场激活的细胞分选法（magnetic activated cell soring）、免疫磁珠法（immunomagnetic beads）、单个细胞微处理法（micromanipulation of individual cells）以及生物素蛋白柱结合法（the use of avidin-conjugated columns）等。
六、单克隆抗体
用于选择胎儿细胞的单抗也很多，识别胎儿细胞表面或胞浆内蛋白质。
当然这些蛋白的表达与胎龄有关。
包括：CD71，转铁蛋白受体，CD36，血小板反应素（thrombospondin）受体，血型糖蛋白A（glycophorinA），血型抗原i，血红蛋白F的γ链。
用来排除母体细胞的单抗识别：CD45，CD3和
CD4，CD19（B淋巴细胞），CD13和CD32（粒细胞），CD14（单核细胞）。
当分离的胎儿细胞纯度很低时可使用胎儿细胞识别器。
这种装置能在掺有许多母体细胞的涂片上自动、快速地找到胎儿细胞。
胎儿细胞识别器根据识别不同的胎儿细胞或胚胎细胞球蛋白分为好几种，例如γ球蛋白，ε球蛋白，ζ球蛋白，Hash2蛋白（滋养细胞特异性蛋白）和HLA-G。
七、临床应用
Down综合征的发生率约为0.1%，其中有20%其母亲年龄＞35岁，而80%母亲在孕期并无作侵入性诊断的指征。
目前，孕中期母血清甲胎蛋白（AFP）、人绒毛膜促性腺激素（hCG）和雌二醇（E2）浓度的测定已被联合用作21三体征产前无创性检测指标。
但这只能作为筛查实验，30%～40%阳性病例被漏诊，且有5%的假阳性。
从母血中分离出胎儿细胞是一种新的产前非创性诊断方法，或作为继发性诊断手段证实血清筛查试验阳性者，以减少侵入性产前诊断的人数。
血清学诊断对于其他遗传性疾病的诊断作用不大。
几乎所有的胎儿染色体异常都可通过胎儿细胞得出诊断，包括
21、16三体征等，性染色体异常，三倍体，甚至一些蛋白基因突变，如β地中海贫血。
母血胎儿细胞还能用于早期诊断血液因子（Rh）母儿血型不合。
这对于RhD阴性但体内抗RhD 抗体阳性的孕妇来说，若其丈夫为RhD阳性杂合体，则确定胎儿Rh将十分有利，因为如果胎儿细胞为RhD阴性，将可绕开伴随整个孕期的一系列监测和治疗措施，避免不必要的损失。
