HPLC法测定黄藤素栓中盐酸巴马汀的含量

1020 引言本文中所述黄藤素是以小檗碱为原料，通过化学合成法制得的产品，合成品国内尚无批准的原料药，也尚未收载在欧洲药典和美国药典及论坛中，根据工艺研究过程中使用原辅料的情况，研究者以植物提取的黄藤素【1】标准，盐酸小檗碱【2】标准为基础，参照中华人民共和国药典（以下简称“中国药典”）、ICH技术指导原则及相关文献【3-19】，重点对产品含量检测方法、有关物质检测方法，如可能存在的有机杂质，金属离子钡的残留等情况进行研究。

通过系统的方法学考察、验证等制定了相应的检测方法，同时开展了稳定性研究，根据研究结果确定了产品贮存条件和产品有效期。

1 仪器与试药1.1仪器1.2试药盐酸巴马汀对照品，批号为110732-201510；盐酸小檗碱对照品，批号为110713-201212，盐酸药根碱对照品，批号为110733-201108，均购自国家官网；非洲防己碱，批号为151108，成都普菲德生物技术有限公司；黄藤素（编号YFS16001、YFS16002、YFS16003）；乙腈为默克色谱纯试剂，三氯甲烷、甲醇、乙醇、乙醚、盐酸、氢氧化钠、磷酸、磷酸二氢铵、硝酸等均为分析纯试剂；自制超纯水。

2含量检测方法2.1 色谱条件检测柱：安捷伦碳十八柱，直径4.6毫米，长度250毫米，孔径5微米；洗脱液为350mL乙腈与0.2%磷酸溶液650mL混合得到，流速为0.8mL/分钟；测试波长为342纳米；柱温35摄氏度；上样体积为5 微升。

2.2溶液的制备2.2.1稀释液分别量取乙腈350mL、0.2%磷酸溶液650mL，混合，摇匀，超声处理，即得2.2.2空白溶剂取1ml甲醇加稀释液稀释至25ml，摇匀，即得。

2.2.3盐酸巴马汀对照品溶液取盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加“2.2.1”稀释液，制成浓度为0.04mg/mL的溶液，即得。

2.2.4盐酸小檗碱储备液取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加“2.2.1”稀释液，制成浓度为0.1mg/mL的贮备溶液。

ＨＰＬＣ法测定黄藤素栓中盐酸巴马汀的含量目的：建立黄藤素栓中盐酸巴马汀的含量测定方法。

方法：采用高效液相色谱法（HPLC），以C18柱为色谱柱；以乙腈-0.4%磷酸溶液（32:68）为流动相；柱温40℃；检测波长为345nm测定。

结果：盐酸巴马汀在24.74μg/ml～98.96μg/ml 的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999），平均回收率为99.50%，RSD%为0.64%（n=9）。

结论：HPLC法快速、准确、重现性好，能用于黄藤素栓中盐酸巴马汀的含量测定。

标签：盐酸巴马汀黄藤素栓HPLC法含量测定1 仪器与试药仪器：高效液相色谱仪（SPD-10A VP型可见—紫外检测器；SPD-10ATVP 溶剂输送泵），日本岛津制造所。

紫外可见分光光度计（UV-2550），日本岛津制造所。

试药：盐酸巴马汀对照品（中国药品生物制品检定所提供）；黄藤素栓、黄藤素阴性栓（公司制备）；乙腈为色谱纯；水为去离子水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 色谱条件以C18柱（迪马；250mm×4.6mm；5μm）为色谱柱；以乙腈-0.4%磷酸溶液（32:68）为流动相；柱温40℃；检测波长为345nm；流速1.0ml/min。

理论塔板数按盐酸巴马汀峰计算不低于5000。

2.2 测定法取样品切碎，取1.5g，精密称定，置100ml量瓶中，加水适量，置温水浴中使溶解，放置至室温，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl注入色谱仪，记录色谱图；取盐酸巴马汀对照品12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

2.3 检测波长的选择取盐酸巴马汀对照品适量，用水溶解并稀释制成1ml 中约含10μg的溶液，在190～600nm范围内进行紫外扫描。

高效液相色谱法测定黄藤素片中盐酸巴马汀的含量李修善;陈超凤;许振朝【摘要】目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定黄藤素片中盐酸巴马汀的含量.方法色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Cromasil C18柱5 μm,250×4.6 mm).流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(60 ∶40)(每100 ml加0.1 g十二烷基磺酸钠),检测波长345 nm;流速:1.0 ml/min;柱温:25℃.结果盐酸巴马汀在0.040～0.602 μg进样量与峰面积值呈良好线性关系,回归方程Y=4585.7X-56.5989,r=0.99996,平均回收率为97.6%,RSD=1.35%(n=9).结论本法简便、灵敏、准确,可作为该制剂的定量分析方法 .【期刊名称】《广西医学》【年(卷),期】2010(032)001【总页数】3页(P107-109)【关键词】黄藤素片;高效液相色谱法;盐酸巴马汀;含量测定【作者】李修善;陈超凤;许振朝【作者单位】广西万寿堂药业有限公司,工程技术研究中心,南宁市,530219;广西万寿堂药业有限公司,工程技术研究中心,南宁市,530219;广西万寿堂药业有限公司,工程技术研究中心,南宁市,530219【正文语种】中文【中图分类】R927.2;R284.2黄藤素片是由黄藤素原料加适量辅料压制而成，方中黄藤素为从防己科植物黄藤(Fibraurea recisa Pierre)茎中提取得到的一种生物碱盐酸盐，即盐酸巴马汀(又名黄藤素)，具有抗菌作用，临床多用于妇科炎症、菌痢、肠炎、呼吸道及泌尿道感染、外科感染、眼结膜炎等。

黄藤(大黄藤)、黄藤素、黄藤素片及黄藤素注射液均收载于中国药典 1977年版一部，其含量测定方法为重量法。

该方法专属性差，灵敏度低，耗时长，不能很好地控制本品质量。

因此根据国家食品药品监督管理局审评中心对于我厂申报的黄藤素片增加规格补充资料通知的要求，为了更好地控制本品质量，提高质量标准，我们采用高效液相色谱法(HPLC)对黄藤素片中主要有效成分盐酸巴马汀进行含量测定。

HPLC法测定黄藤素中盐酸巴马汀的含量及有关物质孙高磊;王湘妍【摘要】采用岛津LC-2010A高效液相色谱仪,色谱柱为岛津VP-ODS柱,流动相为乙肼-水-冰醋酸-二乙胺(310:690:5:1.5),流速为1.0 mL/min-1,紫外检测波长为274 nm,建立了高效液相色谱法以测定黄藤素中盐酸巴马汀的含量及其有关物质的检查.盐酸巴马汀与个杂质峰完全分离,在11.98～23.96ug范围内,线性关系良好,r=0.9998,高、中、低三浓度下的平均回收率为100.1%,RSD为0.50%(n=9).本方法可快速、准确地测定黄藤素片剂中盐酸巴马汀含量,适用于产品的质量控制.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2010(038)008【总页数】3页(P201-202,216)【关键词】黄藤素;盐酸巴马汀;高效液相色谱法【作者】孙高磊;王湘妍【作者单位】河南省医药学校,河南,开封,475000;河南省医药学校,河南,开封,475000【正文语种】中文黄藤素又名盐酸棕榈碱、巴马汀,由防己科植物黄藤(Fibraurea pierre)的干燥藤茎提取精制再盐酸化而得[1].《本草纲目》记载:"黄藤生岭南,状若防己,俚人常服此藤,纵饮食有毒,亦自然不发……气味甘苦平无毒".现代药理研究证实:黄藤素具有增强白细胞吞噬能力的作用,对多种革兰氏阳性和阴性菌有抑制作用,尤其抗真菌作用佳.对柯氏表皮癣菌等12种真菌有不同程度的抑制作用[2];对白色念珠菌浅部或深部感染,均有良好疗效.另外,实验证明黄藤素腹腔注射,能增强大鼠非特异性免疫、细胞免疫及体液免疫功能,表明其对机体免疫功能的提高有作用.临床多用于妇科炎症、菌痢、肠炎、呼吸道及泌尿道感染、外科感染、眼结膜炎等.黄藤(大黄藤)、黄藤素、黄藤素片及黄藤素注射液均收载于中国药典1977年版一部,其含量测定方法[3]为重量法,(测定总碱含量),该方法不但专属性差,也不适于快速测定.目前,文献有用薄层扫描[4]或紫外分光光度法[5]等方法测定盐酸巴马汀含量的报道,这些方法的准确性和专属性不够好,而HPLC法可以克服以上缺点,可以作为黄藤素质量控制的方法.液相色谱仪(LC一10AD型高效液相色谱仪),日本岛津公司;检测器(SPD-10A型紫外检测器),日本岛津公司;工作站,分析之星色谱工作站;色谱柱,(C18,250mmX4.6mm,5μm);电子天平,瑞士AE-100.对照品:盐酸巴马汀,中国药品生物制品检定所(批号07532 -200502);黄藤素氯化钠注射液,河南帅克制药有限公司(批号:0501281、0501282、0501283);乙腈为色谱纯;冰醋酸,莱阳化工实验厂;二乙胺,天津科密欧化学试剂开发中心;水为二次蒸馏水. 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水-冰醋酸-二乙胺(310∶690∶5∶1.5)作为流动相;检测波长为274nm.柱温30.0℃;流速为1.0mL/min;理论塔板数按盐酸巴马汀峰计算应不低于2000.照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录ⅤD)测定.精密量取本品适量,加流动相稀释成每1mL约含黄藤素20ug的溶液,作为供试液.精密量取供试液1mL置100mL量瓶中,加流动相稀释至刻度摇匀,作为对照液.精密量取对照液20μL注入液相色谱仪,调整检测灵敏度,使主成分峰高约为记录满量程的10%;再精密量取供试品溶液20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍.供试品色谱图中,除溶剂峰外,各杂质峰的峰面积总和不得超过总峰面积的3.0%.取0.9%的氯化钠溶液5mL,置100mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,取20μL注入液相色谱仪,测定吸收面积为零.结果表明:本品辅料氯化钠不干扰黄藤素的检测.精密称取黄藤素40.5mg,置100mL容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,分成二份,分置100mL量瓶中,其中一份加入双氧水0.5mL,放置30分钟,二份分别加流动相定量至100mL,摇匀,再分别精密量取5mL,置50mL容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,分别精密量取20μL注入液相色谱仪,按有关物质检查项下的方法记录色谱图.色谱分离图见图1.结果表明黄藤素在氧化后杂质峰明显增多,杂质峰与主峰的分离良好,该方法可以检测其有关降解物质.取黄藤素14.9mg,加流动相溶解并稀释,当稀释至每1mL含黄藤素59.6ng的溶液时,取20μL进样,其信噪比为3∶1,按照中国药典2000年版二部附录XIX方法计算,最小检出量为1.19ng,其定量限为3.96ng.照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版二部附录ⅤD)测定.精密量取本品5mL,置100mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀.精密量取20μL注入液相色谱仪,记录色谱图.另取盐酸巴马汀对照品适量,精密称定,同法测定.按外标法以峰面积计算,结果再乘以系数1.14即得.含量测定和计算过程中,对照品含量是以盐酸巴马汀的无水物(C21H21NO4.HCl)计算,标示量以盐酸巴马汀三水合物(C21H21NO4.HCl.3H2O)计,故计算结果需用下式换算,乘以系数1.14[分子量(C21H21O4N.HCl.3H2O)/分子量(C21H21O4N.HCl)=(441.908)/(387.86)=1.14].取盐酸巴马汀对照品,用水稀释成约8μg/mL的溶液,另取0.9%的氯化钠溶液,分别用紫外分光光度计扫描,结果8μg/mL的黄藤素溶液在274nm波长处有最大吸收,而0.9%的氯化钠溶液在274nm波长处无吸收,故确定黄藤素的测定波长为274nm.精密称取盐酸巴马汀对照品30.0mg,置100mL容量瓶中,加流动相使溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密量取10mL,置50mL量瓶中,加流动相使溶解并稀释至刻度摇匀,再精密量取该溶3.0mL,置于10mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,量取溶液20μL 注入高效液相色谱仪,连续5次,记录色谱图.结果:5次进样RSD为0.37%.精密称取盐酸巴马汀对照品30.0mg,置100mL容量瓶中,加流动相使溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密量取10mL,置50mL量瓶中,加流动相使溶解并稀释至刻度摇匀,再精密量取该溶3.0mL,置于10mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,量取溶液20μL 注入高效液相色谱仪,分别于0、1、3、5、8h时注入液相色谱仪,记录色谱图.结果:5次进样RSD为:0.19%.精密称取盐酸巴马汀对照品30.0mg,置100mL容量瓶中,加流动相使溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密量取10mL,置50mL量瓶中,加流动相使溶解并稀释至刻度摇匀,再精密量取该溶2.0mL、2.5 mL、3.0mL、3.5 mL、4.0mL分别置于10mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,编号分为①、②、③、④、⑤,各取20μL注入液相色谱仪,记录色谱图,以浓度对峰面积做回归曲线.线性方程为:C(μg/mL)=2.356X10-5XArea;r=0.9998.如图2.由试验结果可见盐酸巴马汀在11.98μg/mL～23.96μg/mL浓度范围内,线性关系良好.分别按黄藤素处方量(40mg)的80%、100%、120%的称取80℃干燥至恒重的黄藤素,9份(14.5 mg、14.6 mg、14.5 mg、18.3 mg、18.2 mg、18.1 mg、21.7 mg、21.9 mg、21.6 mg),分置50mL量瓶中,再分别加入0.9g氯化钠,溶解,并稀释至刻度,摇匀,精密量取5mL置100mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取各溶液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图.另精密称取盐酸巴汀对照品17.8mg 加流动相溶解并稀释制成约17.8 μg/mL的对照品溶液,同法测定按外标法以峰面积计算.结果:平均回收率100.1%;RSD=0.5%.黄藤素及其制剂的含量测定,文献曾报道用双向薄层色谱法进行,但此法准确性欠佳.用紫外分光光度法可以进行快速测定,但方法的专属性受到质疑.张慧等用HPLC-FLU法测定血清中黄藤素的含量,采用了四元流动相,而且要用荧光检测器,对仪器有特殊要求;黄捷等用HPLC测定不同产地功劳木中盐酸巴马亭及盐酸小檗碱的含量,流动相中添加了离子对试剂十二烷基磺酸钠,检测波长为265nm;谭生建等用HPLC 测定黄柏石膏散中盐酸巴马丁和盐酸小檗碱含量,流动相中添加了三乙胺、磷酸,检测波长为343nm;其他测定盐酸巴马汀的文献方法流动相也均较复杂,且多使用了缓冲盐,对仪器维护要求较高,而且检测波长也不统一.黄藤素片配方中以盐酸巴马汀为主,辅料较少,按本研究的方法用高效液相色谱法进行测定,杂质很少,流动相可以适当简化实验证实本HPLC法不但可以检测控制盐酸小檗碱、盐酸药根碱等类似物杂质,还能快速、准确测定盐酸巴马汀含量.【相关文献】[1] 朱任宏,陈锐群.中药黄藤化学成分的研究[J].化学学报,1962 (4):89.[2] 丛克家,信天成,郭尔玲.黄藤生物碱的抗霉菌实验及临床观察[J].中草药,1980,11(12):558-559.[3] 中国药典(一部).1977:521.[4] 李子垫.黄藤素注射液快速含量测定[J].中成药,1995,17(10):36.[5] 沈开春.紫外分光光度法测定黄藤素及其制剂的含量[J].药学通报,1985,20(9):531.。

野生大黄藤中盐酸巴马汀的提取方法及含量初探和静丽(云南省红河学院理学院化学教育Ｂ班蒙自661100)摘要采用冷浸法分别对野生大黄藤的根、藤、表皮及叶中的化学成分盐酸巴马汀进行提取。

同时与传统的提取方法比较.两种方法没有显著差异.该方法工艺流程简单.便于操作,成本低而且从含量的角度讨论，对于同一批次不同部位的大黄藤来说，根中含有的盐酸巴马汀量最多,其次是表皮、藤、叶.也符合传统的方法。

所以该方法是提取巴马汀的有效方法。

关键词野生大黄藤冷浸法盐酸巴马汀1、前言黄藤系云南民族民间习用的一种草药,为防已科植物黄藤的根和茎。

主要的化学成分为生物碱,巴马汀含量大约为3％左右.巴马汀(即掌叶防已碱、盐酸棕榈碱)分子式为C21H22NO4.HCL.大黄藤在我国传统医学史上应用历史悠久,至今仍收载于药典(1997).具有抗菌、降压、致浮肿、增加白细胞吞噬能力等作用。

民间作清热解毒、抗菌消炎方面有显著疗效,常用于疮肿毒、妇科炎症.外伤感染,菌痢.肠炎.呼吸道感染.泌尿系统感染扁桃体炎、咽喉炎、结膜炎、热痢及黄疸等.主要性质：盐酸巴马汀是一种氯化物黄色针状晶体,溶点在198--201 C。

极苦。

易溶于热水。

略溶于水，微溶于乙醇和氯仿。

几乎不溶于乙醚。

2、实验部分2.1仪器及试剂野生大黄藤的根、藤、表皮于2004年12月采集于中国云南红河州屏边、绿春。

1%的醋酸食盐 40%的氢氧化钠 80%的乙醇 6M盐酸(化学试剂都是分析纯)2.2样品的前期处理选择同一批大黄藤的根、藤、表皮及叶先对其进行物理加工。

对根和藤进行直径的称量。

一般情况下，野生的大黄藤的根的直径为（14cm—5.4cm），藤为（4.6cm—0.6cm）。

在称量毕后，将它们分别切碎，以便充分的浸泡，然后将其进行分批的自然凉干。

2.3实验方法2.3.1冷浸取黄藤碎片80克,用1%的醋酸溶液来冷浸24小时,合并冷浸液约会500—600ml左右。

2.3.2盐析和碱化冷浸液过滤后，在滤液中加食盐使PH=7，搅拌使之溶解，再用40%的氢氧化钠溶液调至PH=8，此时溶液变成砖红色，并有黄色不溶物析出。