显色培养基在微生物检测中的优势

B群链球菌显色培养基性能评价王晓娜，丛桂敏，曹作伟（沈阳市妇婴医院检验科，辽宁沈阳110011）摘要：目的评价B群链球菌（group B Streptococcus，GBS）显色培养基在孕产妇围产期GBS筛查中的敏感性、特异性和选择性能。

方法选取2019年1月至2019年6月在本院产科门诊就诊的35～37周孕妇阴道拭子标本1500例，已知GBS菌株10例，采用三区划线直接接种于血琼脂培养基（bood agar plate，BAP）和GBS显色培养基（chromogenic medium chromID Strepto B agar，STRB），记录鉴定结果。

比较直接接种血琼脂培养基和显色培养基筛查GBS的敏感性、特异性及选择性能。

结果在BAP和STRB上接种的已知10例GBS菌株全部检出，检出率为100.0%。

孕产妇标本共筛查出125例GBS，阳性率为8.3%（125/1500）。

其中培养24h后，BAP与STRB阳性率分别为6.2%（94/1500）和8.1%（122/1500）；培养48h后，BAP与STRB阳性率均为8.3%（125/1500），高于24h阳性率。

STRB筛查GBS敏感性为97.60%，特异性为99.35%。

STRB与BAP筛查GBS阳性率比较差异有统计学意义（c2=3.911，P＜0.05）。

BAP上接种24h及48h后，分别有32.3%及31.8%的非目标菌群被完全抑制。

STRB上接种24h及48h后，分别有72.6%及70.9%的非目标菌群被完全抑制。

孵育24h后，BAP与STRB非目标菌群生长密度比较差异有统计学意义（c2=32.684，P＜0.05）。

结论B群链球菌显色培养基对于临床GBS筛查有良好的敏感性和特异性，可较好的抑制非目标菌群，选择性能良好，结果易于判断，与直接使用普通血琼脂培养基相比可降低漏检率，值得临床推广运用。

关键词：B群链球菌；显色培养基；性能评价Performance evaluation of colour medium for group BStreptococcusWANG Xiaona,CONG Guimin,CAO Zuowei(Department of Clinical Laboratory,Shenyang Women and Children Hospital,Shenyang,Liaoning,110011,China) Abstract:Objective To evaluate the sensitivity,specificity and selectivity of group B Streptococcus(GBS)colour medium for screening GBS during perinatal period.Methods1500vaginal swab specimens were collected from late pregnant women and10GBS strains were selected.The three zoning lines were directly inoculated into blood agar plate(BAP)and GBS chromogenic medium chromID Strepto B agar(STRB)to record the identification results.To compare the sensitivity,specificity and selectivity of GBS screening by direct inoculation of blood agar medium and chromo-genic medium.Results All the10cases known GBS strains inoculated on BAP and STRB were detected,and the detection rate was100.0%.125 cases of GBS were screened out from maternal specimens,the positive rate was8.3%(125/1500).After24h of culture,the positive rates of BAP and STRB were6.2%(94/1500)and8.1%(122/1500),respectively.The positive rates of BAP and STRB were8.3%(125/1500)after48h of culture, which was higher than that of24h.The sensitivity and specificity of STRB screening for GBS were97.60%and99.35%.There was significant differ-ence in GBS positive rate between STRB and BAP screening(c2=3.911,P＜0.05).After24hours and48hours of inoculation,32.3%and31.8%of non-target bacteria were completely inhibited,respectively.After24hours and48hours of STRB inoculation,72.6%and70.9%of non-target bacte-ria were completely inhibited,respectively.After24hours of incubation,the growth densities of BAP and STRB non-target flora were significantly difference(c2=32.684,P＜0.05).Conclusion The colour medium of group B Streptococcus has good sensitivity and specificity for clinical GBS screening.It can inhibit non-target bacteria better and has good selectivity.The results are easy to pared with the normal blood agar medi-um,it can reduce the rate of missed detection and it is worthly of application and promotion in the work.Key words:Group B Streptococcus;Chromogenic Medium;Performance EvaluationB群链球菌（group B streptococcus，GBS）又称无乳链球菌，可引起新生儿败血症、脑膜炎，甚至导致新生儿死亡[1]。

微生物化验方法
微生物化验的方法有很多，以下为您推荐：
１．琼脂平板培养法：因培养基不同，琼脂平板法分为选择性培养基检测法和显色培养基检测法。

选择性培养基是在培养基中加入选择性抑制剂来抑制非目标微生物生长；显色培养基是在培养基中加入细菌特异性酶的显色底物，以菌落颜色区分目的菌落与非目的菌落。

２．显微镜镜检法：将待测样品中的微生物富集后，于油镜下直接计数。

显微镜镜检法通常与琼脂平板培养法结合使用，通过琼脂平板培养法对菌落进行定性分析，再用显微镜进行定量计数。

３．微生物测试片检测技术：一般情况下，微生物测试片由印有网格的聚丙烯薄膜和覆盖有培养基和显色物质的聚乙烯薄膜组成。

待测样品经过处理后可直接接种在微生物测试片上，然后放置在适宜的温度下培养——使固定在测试片上的显色物质与待检微生物生长产生的特异性酶发生显色反应，形成有颜色的菌落，通过对这些菌落进行计数便可实现检测。

微生物检验在临床上有哪些用途？大家都知道，微生物具有分布广泛、生长繁殖能力强、种类繁多、易培养、易变异及代谢能力、适应能力强等特点，在临床疾病监测中也有着广泛的应用：一、常见的检测方法1、重量检测法重量检测法也就是通过称重的方式来进行，利用离心或过滤法测定。

一般情况下，干重是湿重的百分之十五左右，这种方式比较繁琐。

若是微生物为菌体，大部分都会采取这种方式，如活性干酵母这种，以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。

2、体积测量法体积测量法也就是平时所说的测菌丝浓度法，这种检测方法是通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况，这种类型的检测方式比较简单、快捷、粗放，由于离心沉淀物中会夹杂各种固体营养物，在检测之前需要设定一致的处理条件，不然会导致结果有很大的偏差，该检测方式目前已成为大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。

二、临床应用1、重视显微镜检查对于留取标本进行革兰染色，一方面可以掌握标本质量以确定进行培养或重新留取标本;另一方面通过镜检对某些细菌可以作出初步分类。

对于脓性分泌物或穿刺液进行革兰染色镜检亦可作出大致分类或初步诊断。

对泌尿系男性尿道和女性分泌物涂片革兰染色镜检，查到白细胞内或外有革兰阴性双球菌，是诊断淋病的重要依据。

脑脊液墨汁染色检查新型隐球菌，对于临床诊断隐球菌性脑膜炎有重要价值。

痰、胸水涂片抗酸染色查抗酸杆菌，对于诊断肺结核有重要意义。

粪便球杆菌比例检查，对于肠道菌群失调的诊断有重要帮助。

粪便暗视野检测弧菌的运动情况，对于霍乱的诊断有意义。

2、用显色培养基对微生物快速鉴定在分离培养基中加入检测某些细菌特异性酶的底物（由产色基团和微生物代谢物如糖苷类，氨基酸或肽类两部分组成，通常为无色），在特异性酶作用下游离出产色基团并产生荧光或显示一定颜色，用紫外灯观察菌落产生的荧光或直接观察菌落颜色即可对细菌做出鉴定。

如CHRO真菌培养基:白色念珠菌（绿色），热带念珠菌（蓝色），克柔念珠菌（粉红色）。

065食品检测近年来，随着食品安全问题的频发，人们对于食品的安全问题越来越关注。

所谓“病从口入”，食用有安全问题的食品将可能导致疾病的发生（食源性疾病），影响人们的身体健康。

食源性疾病通常是由于食用了食源性致病菌而引起的出现腹泻、头晕、恶心、神经性头疼等症状的疾病，严重者可导致患者死亡。

肉制品由于其本身营养价值高，富含蛋白质和脂肪，导致肉制品极易成为食源性致病菌生长繁殖的温床。

突发食源性疾病案例中，肉禽类制品引起的疾病大约为23%，其中有10%的肉制品和5%的禽制品会导致人们突发性死亡。

肉制品中的食源性致病菌主要有单核细胞增生性李斯特氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、志贺氏菌等，因此加大对肉制品的检测十分必要。

随着科技的不断发展，肉制品的各项检测技术不断改革、创新。

目前，微生物的检测技术主要有荧光定量PCR法、酶联免疫吸附法、显色培养基法、快速检测纸片法等。

本文选取其中重要的检测方法进行研究，以期为肉制品的检测技术提供一定的理论指导。

一、荧光定量PCR 法荧光定量PCR的原理是在PCR反应中加入荧光基团，通过观察累积的荧光信号来监测PCR反应的整个过程，然后通过标准曲线来分析未知模板的技术方法。

此方法具有准确度高、不易被污染、自动化程度高、灵敏度高与特异性好的特点，被广泛应用于检测各类传染性疾病的临床诊断和效果判断，禽流感、口蹄疫以及猪瘟等动物疫病病原菌和抗体，食源微生物、食品过敏源、转基因研究等领域。

南文龙等人利用荧光定量PCR法测量七类消毒剂对非洲猪瘟病毒的影响，为科学防控猪瘟病毒、客观评价分析消毒效果提供了一定的技术指导。

二、酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法是在免疫酶技术上兴起的一项新兴检测技术，其原理是抗原或抗体与某种固向载体先结合肉制品微生物检测技术综述（需保持抗原或抗体的活性），然后让抗体或抗原和某种酶结合（保持活性），通过洗涤使抗原或抗体复合物与标本中受检物质形成一定的比例关系，最后再加入酶反应底物后，产生有色产物完成检测。

86·FOOD INDUSTRY分析 检测　陈文财 惠州市食品药品检验所食品中沙门氏菌的快速检验方法泛用于遗传病诊断和微生物检验中。

（我个人认为沙门不会用）荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ检验法基于沙门氏菌ｆｉｍＹ基因序列，进行引物和探针的设计，利用基因重组技术对检测的定量标准品进行构建，可借助荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ法对沙门氏菌进行检测。

该方法操作简单、检验快速、适用范围广，在临床诊断、商品检验、食品卫生监管等领域均有运用。

多重ＰＣＲ快速检验法多重ＰＣＲ快速检验法基于质粒毒力基因ｓｐｖＣ、１６Ｓ　ｒＲＮＡ、ｆｉｍＡ、致病基因ｉｎｖＢ序列设计引物，多重ＰＣＲ检测沙门氏菌株基因组ＤＮＡ，以此实现对沙门氏菌的快速检验。

多重ＰＣＲ快速检验法可对沙门氏菌的多种毒力因子进行鉴定，是沙门氏菌株检验和鉴定的新方法。

变性高效液相色谱检测法　变性高效液相色谱结合多重ＰＣＲ反应技术可对食品中的沙门氏菌进行快速检测。

该方法以ｆｉｍＹ基因为靶基因，选择引物可实现对多重ＰＣＲ体系的优化，由此可对沙门氏菌进行快速鉴别。

该方法的特异性、灵敏性较高，其扩增产物为２８４ｂｐ，可对沙门氏菌进行快速检验，并能进一步验证多重ＰＣＲ的特异性。

沙门氏菌是食物常见的病原菌，具有传播媒介多、途径繁复等特点，容易污染食品而危害人体健康。

另外，沙门氏菌是多种有紧密联系细菌的泛指，包括导致伤寒、胃肠及引起食物中毒的众多细菌。

文中提到的几种快速检验法与传统检验法相比，具有操作简单、特异性强、灵敏度高等特点。

但这些方法也存在各自缺陷，试纸快速检验法检验纯菌时，若目菌＞１０３ｃｆｕ／ｍｌ时，纸片菌斑密集，可导致假阴性反应的发生。

ＰＣＲ检验的特异型取决于所选扩增的靶序列，若为保守的特异片段，所选引物就会显示出特异型。

ＬＡＭＰ技术的产物复杂多样，引物设计要求较高，目标单链ＤＮＡ的分离困难，无法对扩增产物的序列进行分析；其在同一温度条件下采用多条引物扩增非特异性条带，可能会出现假阳性结果。

微生物实验室如何确认快速检测方法微生物检验是临床常用的技术手段，其在保障水质饮用、食品安全、疾病诊断、环境质量监测等方面均起到积极作用。

但既往针对微生物所应用的检验技术较为单一，虽然检验结果具有有效性，但仍存在不同程度的弊端，包括费用高、耗时长等，已经难以满足新时代微生物实验室检验的高需求和高标准。

如何有效确认快速检测方法、提高检测效率是目前临床中的关注重点。

1.什么是快速检测方法？快速检测方法并非是一种标准的分类方法，而是一类对于方便快速方法的统称，这类方法也不归于标准方法。

其来源主要为著名的书籍和刊物、技术组织、生产商等所发布的学术报告、说明书、实验室自定等。

近年来，新型检验技术在检测领域中的应用日趋增长，其与常规方法相比，其运用范围得到了进一步拓展，并具有良好速度及更高的灵敏性。

部分非标准方法通过长期大量使用，已逐步向标准方法进行过渡。

2.微生物快速检验有哪些方法？2.1显色培养基技术显色培养基微生物快速检验技术主要是利用微生物所对应的种属特异酶，于培养基中将相应的显色酶底物加入，在微生物生长代谢时形成酶，以起到对底物的水解作用，继而着色于培养物，有利于对目标微生物进行分析和判断。

国外首次对显色培养基进行开发时，将其运用至大肠杆菌的临床诊断中，后期应用领域逐步延伸，临床价值显现。

有关研究分析提出，显色培养基技术在微生物检验中可显著提高目标微生物着色后的颜色对比，便于检验人员在环节中实现直接检检验，同时对多类微生物样本也可发挥明显的快速检验效果，其在水体、食品、临床中的样本微生物种类检验中有着良好的发展前景。

2.2 PCR技术聚合酶链式技术PCR技术聚合酶链式技术是在特定条件下，针对特定DNA片段予以体外酶促反应快速扩增处理，以监测特异扩增产物形式，达到迅速检出目标微生物的目的。

有文献报道提出，在微生物检验中应用PCR技术，可体现数据检测灵敏度良好、检验时间短、诊断过程方便快捷等特点，同时PCR技术在突发性公共卫生事件的有关微生物检测也获得了广泛运用。