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多年操作的一些感受薄层色谱实验的规范化1合格的仪器设备，可减少由于仪器设备的不规范引起的误差。
2薄层板最好使用商品预制板，2005年版药典要求强制性使用商品预制板，以避免由于手工铺板的技巧不同制备的薄层板质量不同造成的重现性差，同时应使用规范的点样、展开、扫描及成像设备，以提高时效，。
点样应注意下列事项1避免劣质的点样毛细管或样品溶液的过载造成原点（条点）的扩散。
2避免毛细管对版面原点部位的机械损伤。
3避免由于粘稠的生物样品供试液或含有太多的杂质造成原点部位局部样品浓度过高而形成粘结。
4避免使用粘度过大或沸点太高或太低或比重大的溶剂溶解样品，如乙醚、氯仿、丁醇等溶剂。
推荐使用合格的点样仪，有条件的实验室可使用电脑控制的半自动或全自动的点样仪，以提高重现性和准确度。
采用半自动和全自动点样仪的优点1点样头不直接接触薄层板涂层，避免对版面原点部位的机械损伤。
2减少扩散，提高分离度。
3减少人为误差，提高重现性和准确度。
1展开剂的选择展开溶剂在色谱展开起着关键作用，至今薄层展开剂的优化基本上还是依靠经验。
试错法仍然是分析实验室在选择展开剂时最常用的方法。
1对展开剂的要求，视目的而有所不同，对鉴别而言，全色谱的分离度越高越好，斑点越多，可供鉴别判断的信息越多。
2对含量测定而言，欲测定的物质斑点与相邻的物质斑点分离应符合定量的要求，而其他斑点的分离度可以忽略。
环境因素的影向作为“开放系统”的薄层色谱，环境因素往往明显地影响色谱的层析行为。
1湿度对薄层色谱行为的影响：对于如硅胶、氧化铝这类亲水性吸附剂，以及对蔬水性展开溶剂，环境的相对湿度对其影响是明显的。
2温度对薄层色谱行为的影响，温度对层析行为最明显的影响是分离度和RF值。
经常遇到的一种情况是同样的实验需要在夏天做，或者在南方和北方的实验室重复实验，这就遇到温度不同造成的影响，而使结果不易重现。
最基本要求是在记录时的温度和相对湿度。
3溶剂蒸气对色谱行为的影响：薄层版面上负载的溶剂蒸气参与了色谱的分离，因而极性溶剂蒸气容易被硅胶颗粒吸附，即使非极性溶剂中微量的极性溶剂也可能改变色谱的分离情况。
中药薄层色谱影响因素分析及应用李向军;王超;王永;安军永;王世华;李晓燕;秦拢;王猛【摘要】This paper compared TLC have a greater impact on the temperature, humidity and other factors, TLC, Discusses solution, and examples. TLC of many factors, but the analysis of thin - layer chromatography is widely used in traditional Chinese medicine classical method, With the thin layer plate, point - like technology, expand the technology to view the technical aspects of the development. TLC. the standardization and improvement of the degree of operating equipment, comhined with a simple, convenient and economic sensitivity, high efficiency, will in the traditional Chinese medicine and its preparations quality control and inspection play an increasing role.%该文分析了对薄层色谱有较大影响的温度、湿度等因素,探讨解决方案,并举例说明.薄层色谱的影响因素较多,但薄层色谱法仍是中药分析中广泛应用的经典方法.随着薄层板、点样技术、展开技术、检视技术等方面的发展,薄层色谱的规范化,操作仪器化程度的提高,加之其简单、便捷、经济、灵敏、高效,薄层色谱法必将在中药及其制剂的质量控制及检验中发挥越来越大的作用.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2011(020)014【总页数】3页(P13-15)【关键词】中药;薄层色谱;分离原理;点样;展开【作者】李向军;王超;王永;安军永;王世华;李晓燕;秦拢;王猛【作者单位】河北以岭医药研究院有限公司,河北石家庄050035;河北以岭医药研究院有限公司,河北石家庄050035;河北以岭医药研究院有限公司,河北石家庄050035;河北以岭医药研究院有限公司,河北石家庄050035;河北以岭医药研究院有限公司,河北石家庄050035;河北以岭医药研究院有限公司,河北石家庄050035;河北以岭医药研究院有限公司,河北石家庄050035;河北以岭医药研究院有限公司,河北石家庄050035【正文语种】中文【中图分类】R284.1薄层色谱是中药鉴别、中药成方制剂质量标准主要的研究和控制手段之一，其研究质量对中药成方制剂新药项目的质量标准意义十分重要。
薄层色谱分析步调及注意事项之青柳念文创作薄层色谱法(thin layer chromatography简写TLC)是物理化学的分离技术，常常使用于药物的分离与分析现对此方法的分析步调及注意事项提点建议.薄层色谱分析步调完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操纵.⑴制板在一平面支持物(通常玻璃)上，平均地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上停止.一般选用适当规格的概况光滑平整的玻璃板.常常使用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20 cm等.称取适量硅胶，加入0.2％～0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na），充分搅拌平均，停止制板.一般来讲10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅胶/块；硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1：2～1：4.制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘.在空气中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放凉，并将其放于紫外光灯(254nm)下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用.⑵点样用微量进样器停止点样.点样，先用铅笔在层析上距结尾lcm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样，一定要等前一次点样残存的溶剂挥发后再点样，以免点样黑点过.一般黑点直径大于2mm，不宜超出5mm.底线距基线1～2．5cm，点间间隔为lcm左右，样点与玻璃边沿间隔至少lcm，为防止边沿效应，可将薄层板双方刮去1～2cm，再停止点样.⑶展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定间隔后，取出薄层板，样品组分固移动速度分歧而彼此分离.①展开室应预饱和.为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖.②展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，而且临用时新配为宜.③薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开.④展开应密闭，展距一般为8～15cm.薄层板放入展开室时，展开剂不克不及没过样点.一般情况下，展开剂浸入薄层下端的高度不宜超出0.5cm.⑤展开剂每次展开后，都需要换，不克不及重复使用.⑥展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后停止检视.⑦ Rf值一般节制在0.3～0.8，当Rf值很大或很小时，应适当改变活动相的比例.⑷黑点的检出展开后的薄层板颠末干燥后，常常使用紫外光灯照射或用显色剂显色检出黑点.对于无色组分，在用显色剂时，显色剂喷洒要平均，量要适度.紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出效果就越好.展开分离后，化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf值)来暗示.化合物黑点中心至原点的间隔与溶剂前沿至原点的间隔的比值就是该化合物的Rf值.注意事项铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板概况较粗糙匀浆配比般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2.研磨匀浆的时间，根据经历来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来断定，越稠越难下滴.匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量.涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那末分明.通常，板的质量对薄层鉴此外影响不是很，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和.点样尽可能用小的点样管.如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管.样，点的黑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明.样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样黑点分散大.样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯.点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干.展开剂配制选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作展开剂.相对不该该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂.混合不平均和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败.各组成溶剂的比例准确度对分歧的分析任务有分歧的要求，尽可能达到实验室仪器的最高切确度，比方：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，虽然时候这不是必须的.展开系统的饱和一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另外一槽可加入氨水或硫酸.把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子.让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半小时左右.展开时不免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽可能轻、快.温湿度的节制温湿度对薄层影响都很大.不冻结的提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷.湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附才能，导致选择性（容量因子）的变更，湿度应根据实际情况确定.温度节制使用空调器或冰柜，湿度节制是通过在另外一展开槽放置相应浓度的硫酸.显色喷显色剂显色最重要是有好的雾化器.。
薄层色谱法的操作要点及影响因素李杨姜慧莹陈嘉兴杨爽黄帅*（吉林职业技术学院延边133400）摘要：目的：对薄层色谱法操作步骤中的影响因素进行分析，并以实验过程中实际案例说明薄层色谱法在实际操作中的主要影响因素。
方法：分别从供试品溶液的制备、选择吸附剂、点样、展开、显色与检视六个方面对薄层色谱法的影响因素加以阐述。
结果：薄层色谱法操作中供试品溶液的制备、对照品或对照药材溶液的制备、选择吸附剂、点样、展开、显色与检视对药物检测均有影响。
结论：对薄层色谱法的操作影响因素进行分析，对于药物检测具有指导意义。
关键词：薄层色谱影响因素操作要点中图分类号：R286.0文献标识码：A文章编号：1672-8351（2020）06-0001-02Key points and influencing factors of TLCLi Yang Jiang Huiying Chen Jiaxing Yang Shuang Huang Shuai（Jilin Polytechnic Yanbian133400）Abstract：Objective：This study analyzes the influencing factors in the operation steps of TLC，and illustrates the main influencing factors in actual operation by the actual case in the experimental process.Methods：The influencing factors of thin-layer chromatography were studied in detail from six aspects：preparation of test solution，selection of adsorbent，spotting，unfolding，color development and inspection.Results：The preparation of the test solution in the TLC operation，the preparation of the reference or control drug solution，the selection of the adsorbent，the spotting，the development，the color development and the inspection were all affected by the drug detection. Conclusion：The analysis of the factors affecting the operation of TLC is of guiding significance for the operation of drug detection. Keywords:Thin layer chromatography Influencing factors Operational points薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比[1，2]。
薄层色谱法操作技术控制要点分析【摘要】2015年版《中国药典》一部中，有4088项采用TLC法进行中药鉴别，可见薄层色谱法技术操作的普遍性。
但很多药学人员常常会由于操作技术不够规范而导致结果的不准确性，尽管其具有操作简便、结果直观的优势。
本文将对薄层色谱法操作技术控制要点进行概括分析，旨在为实际鉴别应用提供参考。
【关键词】薄层色谱法；操作技术；控制要点【中图分类号】TF724.5【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-09-089-01薄层色谱（Thin-layer Chromatography，TLC）法自开始作为色谱法的一个分支应用以来，以其操作简便、结果直观的优势被广泛应用于中药鉴别和分析中[1]。
最为直观的证明就是在2015年版《中国药典》一部中，就有4088项采用TLC法进行中药鉴别。
尽管如此，仍有许多人由于操作技术不够规范而导致结果的不准确性。
本文将对薄层色谱法操作技术控制要点进行概括分析，旨在为实际鉴别应用提供参考。
1 TLC操作方法及其注意事项TLC的操作过程主要包括五个步骤：选择薄层板、点样、展开、显色、检视与记录[2]。
其中，薄层板上斑点的清晰度、分离度和重现性是判断薄层色谱效果的关键。
由于薄层色谱容易受外界环境的干扰，因此，需要严格对待操作过程中的每一个步骤。
1.1选择薄层板目前实验室多数采用市售硅胶G型薄层板或自制薄层板，前者的分离效果更优。
实验操作中对薄层板的要求是厚度均匀，表面平整光滑，无麻点气泡和破损污染等。
硅胶G薄层板适用于分离酸性和中性物质，因其表面pH值约为 5；分离碱性物质时可稀碱溶液自制薄层板，或用碱性展开剂展开，从而得到理想的图谱。
市售薄层板保存于阴凉干燥处，可直接使用；自制薄层板使用前一般应于110℃下活化 30 min，并置干燥器中备用。
不同批次的薄层板可能会影响试验的重新性，需注意。
1.2点样点样方式主要有自动点样和手动点样两种，后者以其灵活方便的优势应用较为普遍。
薄层色谱操作注意事项影响薄层色谱分析的因素有很多，比如样品处理方法、薄层板制备技巧、点样方法、展开剂的遴选、温湿度的掌控等等很多方面，在这里对其操作要点作一下简单介绍:1铺制薄层板：铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。
匀浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。
研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。
匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。
涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。
通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。
2点样：尽量用小的点样管。
如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。
这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。
样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。
样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。
点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。
薄层色谱用于定量时，点样是最主要的误差来源。
供试液的溶剂均有不同程度的洗脱力，所以在点样的同时，样品在原点就可是成环形展开，原点直径的扩散促进了这种展开，Kaiser称之为“上样环形色谱效应”。
如果样品在溶剂中的溶解度很大，原点将变成空心环。
这种效应对随后的先行展开造成很不利的影响。
供试液的溶剂在原点的残留，也会改变展开的选择性，特别是供试液的溶剂与展开剂的极性相差较大时更明显。
再者，亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分（特别在高湿度环境）对色谱的影响也不可低估。
因此点样时的同步干燥或继后干燥以除去原点残存的溶剂是需要的。
但应尽可能避免高温加热，如用吹风筒加热，样品变为固态后，部分或全部强烈的吸附在吸附剂的颗粒上，而促进了硅胶的有催化作用的活性表面故态化学反应，导致样品的变性（尤其热不稳定物质），至少移动相在展开时对这部分样品的溶解速度比移动速度慢得多而形成拖尾（斑点拖尾的原因之一）。
薄层色谱注意事项
薄层色谱是一种常用的分离和分析技术，但在使用过程中需要注意以下几点：
1. 薄层板的选择：不同的薄层板材料和厚度适用于不同的分析目的，应根据实验要求选择适当的薄层板。
2. 样品的制备：样品的制备要求纯度高、溶解度适宜、浓度适中，样品沉淀或悬浮物应去除。
3. 样品施加量：样品施加量不宜过多，一般为2-5μL，避免施加过量导致结果失真。
4. 开始实验前的预处理：薄层板应先蒸发干燥，同时保持操作环境干燥，以避免水汽和污染物对实验结果的干扰。
5. 显色剂的使用：显色剂的选择应与样品性质匹配，显色后应立即照相或测量和记录扫描结果。
6. 扫描条件的选择：扫描条件的选择应根据样品性质、显色剂和仪器的特点选择适当的条件，以获得最佳的扫描结果。
- 1 -。
关于薄层色谱的一点体会总结：薄层层析和纸色谱操作注意事项一、应用：薄层色谱是一种微量、快速、简便的分析方法。
适用于微量样品的分离、鉴定和制备。
在中药制剂制备过程中，经适宜的工艺来取舍处方中各药材的各类成分，从而达到保持或改变药物作用性质或降低其毒副作用的目的。
而薄层色谱法具有分离与鉴定的双重功能，通过薄层图谱与对照品、对照药材的图谱相比较，除了能鉴出有效成分或特征成分外，还以完整的色谱图作为一个整体对制剂加以鉴别，提高了鉴别的准确性，尤其当有效成分尚不确切时，更显示出薄层色谱法的实用性。
薄层色谱分析法由于适合国情、简便、快速，能有效地、直观地反映药品地真实性、稳定性，现已成为中药制剂的鉴别和质量控制的行之有效的方法之一。
操作二、操作要点：（一）薄层层析1、铺制薄层板：将吸附剂1份和水2.5-3.0份（或加入黏合剂的水溶液）在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后，进行涂布（厚度为0.2～0.3mm）,颠板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透视光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于100-110℃烘30分钟,冷却后立即使用或置干燥箱中备用。
2、点样：用点样器点样于薄层板上,一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。
若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。
点样时必须注意勿损伤薄层表面。
注：在薄层色谱中，样品的用量对物质的分离效果有很大影响，所需样品的量与显色剂的灵敏度、吸附剂的种类、薄层的厚度均有关系。
样品太少，斑点不清楚，难以观察，但样品量太多时往往出现斑点太大或拖尾现象，以至不易分开。
3、展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离（一般为8～15cm），取出薄层板，晾干，待检测。
Part Ⅰ
薄层色谱分析的主要影响
因素
一、样品的预处理及供试液的制备
样品供试液净化的方法
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二、薄层色谱的上样技术
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三、吸附剂活性与相对湿度对薄层色
谱的影响
相对湿度的控制方法w
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四、溶剂蒸气在薄层色谱中的作用
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黄连中生物碱的薄层鉴别w
黄连中生物碱的薄层鉴别
人参及西洋参的薄层鉴别
五、关于薄层色谱的优化
及溶剂系统(展开剂)的选择w
目前主要方法：
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单一溶剂极性顺序
黄连中生物碱的薄层鉴别
不同展开剂对人参皂苷的分离效果
六、温度对薄层色谱的影响w
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不同温度下人参中人参皂苷的薄层层析行为（氯仿-甲醇-水65：35：10，
下层溶液）
三七总皂苷的薄层鉴别
七、影响蒲层色谱的其他因素
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不合格的手铺自制板
新鲜溶剂与多次开瓶使用后的溶剂
参考书目
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w。
实验室中的薄层色谱正确操作薄层色谱仪器的注意事项实验室中的薄层色谱：正确操作薄层色谱仪器的注意事项薄层色谱是一种广泛应用于实验室分析的技术，它通过将待测物质与移动相沿着一层固定相上进行分离，实现对化合物的定性和定量分析。
在进行薄层色谱实验时，正确操作薄层色谱仪器是确保实验成功的关键。
本文将介绍薄层色谱仪器的正确操作注意事项。
一、样品处理和施加样斑在进行薄层色谱实验之前，首先需要将待测样品进行准备和处理。
样品应当经过充分的提纯和浓缩，以保证实验结果的准确性。
在处理样品时，应注意避免样品与皮肤直接接触，并注意合理使用个人防护措施，如实验手套等。
处理好样品后，可使用微量注射器或玻璃毛细管将样品滴在薄层色谱板的样品点处。
二、适当的上样量和样斑位置在进行薄层色谱实验时，选择适当的上样量对于实验结果的准确性至关重要。
上样量过多或过少都可能导致色斑不清晰，影响分离效果。
一般来说，对于常规薄层色谱板，上样量应控制在1-2微升左右。
此外，样斑位置的选择也是重要的。
应将样斑施加在离色谱板底部约1.5厘米处，以避免样斑扩散到上部分离系统。
三、色谱板的放置和开展色谱在将样斑施加在色谱板上后，需要将色谱板放置在色谱槽或色谱缸中，用适当的溶剂进行溶剂移动相的插入。
为了保证色谱的准确性，在放置色谱板时应确保色谱板的底部与移动相不接触，通常采用满料装填等方式来保持适当的距离。
此外，溶剂前处理也是至关重要的一步，可采用对称浸润法或双向浸润法，以保证溶剂在色谱板上均匀分布。
四、色谱结果的显现和分析完成色谱过程后，需要将色谱板取出，并根据需要对其进行显现。
显现方法包括紫外灯照射法、荧光染料显现法、化学显现法等。
选择适当的显现方法可以提高实验结果的清晰度和可读性。
完成显现后，可以使用扫描仪或色谱仪进行色谱图的分析和解读。
根据样斑的迁移距离和相对位置，可以准确确定各组分的相对含量和对应化合物的鉴定。
五、安全措施和仪器检查在进行薄层色谱实验时，安全措施必不可少。
