下载文档原格式
反胶束萃取技术在蛋白质分离和酶固定化上的应用和发展The application and development of Reversed micelle technology in protein separation and enzyme immobilization2011年10月6日反胶束萃取技术在蛋白质分离和酶固定化上的应用和发展摘要：反胶束是表面活性剂在有机溶剂中自发形成的与正常胶束结构相反的纳米尺度的一种聚合体。
反胶束可用于蛋白质的分离、酶的固定化等生物上的物质的分离，是一种新型的生物分离技术，本文就该技术的原理、方法、在以上物质分离上的应用及其最新研究进展进行介绍。
关键词：反胶束；萃取；蛋白质分离；酶固定化The application and development of reversed micelle technology in protein separation and enzymeimmobilizationAbstract: Reversed micelle is surfactants in organic solvents spontaneously formed with normal glue beam structure of the opposite of a kind of nanometer scale polymers. Reverse micelle can be used for protein separation, such as enzyme immobilization of the separation of biological material, a new type of biological separation technology, this paper the principle and method of this technology in the application of more substances separation, and the latest research on progress into introduction.Keywords:reversed micelle; extraction ; protein separation; enzyme immobilization1 引言传统的液-液萃取分离技术成本低，易于操作，已广泛用于多组分物质的分离。
反胶束萃取技术及其在植物蛋白质提取中的应用研究进展郭珍;陈复生;李彦磊;李润洁【摘要】Reverse micelle extraction is a new separation technique suitable for macromolecular separation and purification, and has broad application prospect in the extraction of biological active substances . In this paper, the meaning,reaction mechanism and the domestic and foreign research progress of reverse micelle extraction applied to plant protein extraction are summarized, the existing problems are reviewed.%反胶束萃取是一种适合生物大分子分离纯化的新型技术,在生物活性物质的萃取上有着广泛的应用前景.文章阐述反胶束萃取的含义、反胶束萃取蛋白质机理,并对近年来国内外有关反胶束萃取在植物蛋白质提取中的应用研究进行综述,对该领域目前存在的问题进行评述和展望.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2013(029)001【总页数】3页(P240-242)【关键词】反胶束;植物蛋白;萃取;注入法;固溶法;相转移法【作者】郭珍;陈复生;李彦磊;李润洁【作者单位】河南工业大学,河南郑州 450001;河南工业大学,河南郑州 450001;河南工业大学,河南郑州 450001;河南工业大学,河南郑州 450001【正文语种】中文反胶束萃取技术是继双水相萃取之后的一种适合生物大分子分离纯化的新型分离技术，该技术已经在食品工业、医药行业［1］，甚至纳米材料［2，3］的制备上得到了广泛的研究。
实验五用反胶束萃取技术提取胰蛋白酶目录1前言2 实验I3 实验II4 结论5 参考文献1 前言反胶束是表面活性剂在有机溶剂中自发形成的纳米尺度的一种聚集体。
表面活性剂是由亲水的极性头和疏水的非极性尾两部分组成的分子。
在反胶束系统中，表面活性剂的非极性尾端指向有机溶剂，极性头向内排列形成一个极性核，溶解水后形成“水池”(waterp001)。
此“水池”可以增溶蛋白质等大分子。
上世纪70年代开始，瑞士的Luisi等首次提出了用反胶束萃取蛋白质。
反胶束萃取具有成本低，可以重复利用的优点，所以具有广阔的工业应用前景。
目前，国内外对反胶束技术的研究取得了很大的进展。
Cortez等用CTAB反胶束体系从季也蒙假丝酵母组织中分离提取木糖还原酶，回收率近100％。
Su等从牛乳清中分离得到90％纯度的IgG。
FerreimMJ使用反胶束萃取技术成功地从黑曲霉中提取葡萄糖氧化酶。
2 实验I 反胶束萃取法提取胰蛋白酶的工艺研究2.1 实验目的和要求2.2 实验原理2.3 实验器材与试剂2.4 操作步骤2.4.1 反胶束相系统的萃取操作1不同pH值对萃取的影响（1）萃取。
分别吸取不同pH值的酶溶液和等体积含15%.............胰蛋白酶充分转移至反胶束团中。
（2）离心并测定酶活。
将充分混合的……………………….按下式计算萃取率：萃取率（E）=2不同KCl离子强度对萃取的影响（1）萃取。
分别吸取不同KCl浓度的酶溶液和等体积含15%.............胰蛋白酶充分转移至反胶束团中。
（2）离心并测定酶活。
方法同上。
2.4.2 反胶束相系统的反萃取操作（1）反萃取。
在萃取离心后的上层有机相………….使胰蛋白酶转入水相。
（2）离心并测定反萃液酶活。
按下式计算反萃率：反萃率(E’)=2.5 结果与讨论2.5.2 pH值对萃取和反萃取的影响在通常情况下，pH值对反胶束的萃取和反萃皆有很显著的影响，研究者们也经常通过pH值的调节以达到提高萃取率和反萃取率的目的。
大豆分离蛋白提取方法总结作者：丽水天工环保1、酸沉碱提法。
这是一种传统的分离提取方法。
该法是利用大豆中大多数蛋白质在等电点(pH415) 时沉淀的特性,与其他成分分离,沉淀的蛋白质经调节pH 后溶解,因此称之为酸沉碱提法。
酸沉碱提的缺陷是: 耗酸、耗碱量大,废水处理费用高,产品收率低。
该分离提取方法有待改进。
但目前仍然是工业化生产的基本方法。
2、膜分离法。
根据大豆蛋白的分子量大小、形状及膜与大豆蛋白的适应性,选择膜材料和不同截留分子量的膜,对大豆蛋白提取液超滤分离,超滤净化,使非截留组分排除,达到符合标准的分离大豆蛋白液,接着将净化后的大豆蛋白提取液超滤浓缩到所需的浓度后出料,喷雾干燥成粉状大豆分离蛋白。
3、反胶束萃取分离法。
反胶束是表面活性剂在有机溶剂中形成的一种聚集体,其中表面活性剂的非极性尾在外,与有机溶剂接触,极性头在内,形成极性核,该核具有包含水溶液和溶解蛋白质的能力,因而可以用此含有反胶束的有机溶剂从水相中萃取蛋白质。
利用反胶束技术从全脂豆粉萃取大豆蛋白,可一次萃取50 %左右。
大豆蛋白萃取过程非常快,用非扩散模型解释较为合理。
该法需要的主要仪器有:自动水分测定仪、气浴恒温震荡器、离心机、凯氏定氮仪、分析天平、恒温磁力搅拌器和微量进样棒等。
影响反胶束萃取过程的主要因素有表面活性剂的种类及浓度、水相的pH 值、离子强度、温度等。
反胶束萃取技术的优点是:选择性高、操作方便、放大容易、萃取剂(反胶束) 相可循环利用、分离和浓缩同步进行。
其缺点是:蛋白质在现有反胶束体系中稳定性不高,导致萃取前后蛋白质的活性损失较大,因而制约其工业化应用。
4、反相高效液相色谱法这是对大豆蛋白中7 S 和11 S 球蛋白进行快速分离的一种方法。
在分离条件为40 ℃、流速1mL/ min 的条件下,9 min 可完成相应球蛋白的分离。
具体方法为:（1）试剂与试样。
乙腈(CAN) (HPLC 级) 、三氟乙酸( TFA) (HPLC 级) 、HPLC 级水用于移动相的制备。
