HPLC法测定橘红片中橙皮苷和柚皮苷的含量
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HPLC法测定橘红片中橙皮苷和柚皮苷的含量
张瑞
【摘 要】目的 建立用高效液相色谱法测定橙皮苷和柚皮苷含量的方法,控制橘红片中化橘红和陈皮的含量.方法 采用C18反相色谱柱,流动相为甲醇-水-醋酸(35:61:4),检测波长为283 nm,流速为1 mL·min-1.结果 橙皮苷在0.1～1 μg范围内,其峰面积与浓度呈良好的线形关系Y=2 177.7X+4.868(r=0.999 9),平均回收率为100.1%,RSD为1.8%(n=7).柚皮苷在0.03～0.35 μg范围内,其峰面积与浓度呈良好的线形关系Y=1 681.2X-2.767 4(r=0.999 9),平均回收率为99.8%,RSD为1.3%(n=7).结论 该方法快速、准确、重复性好,可用于测定橘红片中橙皮苷和柚皮苷的含量.
【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2013(017)003
【总页数】2页(P401-402)
【关键词】高效液相色谱法;橘红片;橙皮苷;柚皮苷;含量测定
【作 者】张瑞
【作者单位】安徽省马鞍山市食品药品检验所,安徽,马鞍山,243000
【正文语种】中 文
橘红片具有清肺、化痰、止咳的功效。多用于咳嗽痰多，痰不易出，胸闷口干等症，是橘红方系列中的剂型之一(橘红胶囊，橘红颗粒，橘红丸，橘红片)。现已纳入基本药物目录中，处方中有化橘红、陈皮、半夏等15味药材，其中化橘红和陈皮为方中的主药，橘红系列其他制剂中均收入含量测定方法控制化橘红(柚皮苷)或陈皮(橙皮苷)的量［1］，但是唯独橘红片到目前为止是部颁标准，没有含量测定项。本文通过建立对橙皮苷和柚皮苷的含量测定方法来控制基本药物橘红片的质量，通过高效液相色谱法能同时测定两个组分的含量，本方法快速、准确，重复性好，可用于橘红片的质量控制。
1 仪器与试药
Agilent1200自动进样高效液相色谱仪(美国安捷伦);SB3200型超声波清洗器(上海必能超声有限公司);NewClassicMS电子天平(梅特勒0.01 mg);橙皮苷对照品(110721-201014供含量测定用，含量以95.1%计，使用前无需处理，中国药品生物制品检定所提供);柚皮苷对照品(110722-201111供含量测定用，含量以93.2%计，使用前无需处理，中国药品生物制品检定所提供);所用甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。橘红片(批号为0126469、1121775、120311)，标示片重为每片0.6 g，为马鞍山市食品药品检验所中药室提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent ZORBAX Extend-C18反相色谱柱;柱温30℃;流动相:甲醇—水—醋酸(35∶61∶4);流速:1 mL·min-1;检测波长:283 nm［2-4］。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品和柚皮苷对照品适量，分别加甲醇适量使溶解，摇匀，制成每1 mL各含0.090 0 mg和0.023 0 mg的混合溶液，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，取约2.5 g，精密称定。精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理30 min［5-7］，放冷后，称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，滤过(0.22 μm)，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备 制成缺化橘红和陈皮药材的阴性对照样品。按照供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液。
分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液按“2.1”色谱条件下进行样品分析，色谱图见图1。橙皮苷保留时间为21.78 min，柚皮苷保留时间为25.16 min，两色谱峰的分离度为 2.4，见图 1。
图1 液相色谱图
2.5 线形关系考察 取混合对照品进样，分别精密吸取1、2、4、8、16 μL，注入液相色谱仪，以橙皮苷峰面积积分值为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)，进行线形回归，得回归方程:Y=2 177.7X+4.868，r=0.999 9。以柚皮苷峰面积积分值为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)，进行线形回归，得回归方程:Y=1 681.2X-2.767 4，r=0.999 9。结果表明，橙皮苷在0.1 ～1.4 μg，柚皮苷在0.05 ～0.35 μg范围内，其峰面积与进样量呈良好的线形关系。
2.6 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液10 μL，按相同色谱条件重复进样7次，测定其峰面积，结果橙皮苷对照品(RSD=0.6%，n=7);柚皮苷对照品(RSD=0.5%，n=7)。表明仪器精密度良好。
2.7 稳定性试验 取同一对照品溶液，分别在0、2、4、8、24 h精密吸取10 μL进样测定，记录峰面积，结果表明橙皮苷对照品溶液在24 h内稳定，RSD=0.7%。柚皮苷对照品溶液在24 h 内稳定，RSD=0.8%。
2.8 重复性试验 取同一批样品5份，按“2.3”制备供试品溶液，分别进样10 μL，按上述色谱条件，计算橙皮苷的含量，RSD=1.1%;柚皮苷的含量 RSD=1.7%。
2.9 回收率试验 精密称取已知含量(每片含橙皮苷0.509 mg，含柚皮苷0.136 mg)的样品1.5 g，分别精密加入橙皮苷对照品和柚皮苷对照品适量，按供试品溶液的制备项方法操作，依上述色谱条件进行测定，计算加样回收率，结果见表1，2。
表1 加样回收率(橙皮苷)测定结果序号 原有含量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%平均值/%RSD/%1 1.273 0.900 2.195 102.4 2 1.273 0.900 2.191 102.0 3 1.273 0.900 2.153 97.8 4 1.273 0.900 2.167 99.3 5 1.273 0.900 2.157 98.2 6
1.273 0.900 2.181 100.9 100.1 1.8 7 1.273 0.900 2.175 100.2
表2 加样回收率(柚皮苷)测定结果序号 原有含量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%平均值/%RSD/%1 0.340 0.230 0.574 101.7 2 0.340 0.230 0.566 98.3 3
0.340 0.230 0.566 98.3 4 0.340 0.230 0.570 100.0 5 0.340 0.230 0.570 100.0
6 0.340 0.230 0.568 99.1 99.8 1.3 7 0.340 0.230 0.572 100.9
表3 样品含量测定结果(mg/片)批号 橙皮苷含量柚皮苷含量橙皮苷平均值柚皮苷平均值0126469 0.509 0.136 1121775 0.511 0.1370.50 0.13 120311 0.482
0.119
2.10 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液与各供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，分别计算得橙皮苷和柚皮苷的含量，结果见表3。
3 讨论
橘红片同系列的橘红胶囊、橘红颗粒和橘红丸等都已收入2011年基本药物目录中。本方法能简单、有效、快速、准确的测定其处方中橙皮苷和柚皮苷的量，这样也能更好的控制橘红片的质量。在实际测定中发现，供试品中橙皮苷和柚皮苷的峰面积相差较大，约为4倍，所以配制对照品时，橙皮苷对照品的浓度基本上是柚皮苷对照品的4倍，力求测定结果更为准确。
参考文献:
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